人胆囊收缩素CCK试剂盒使用方法
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人胆囊收缩素(CCK)试剂盒使用方法检测范围:8pg/ml-200pg/ml 使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中胆囊收缩素 (CCK)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胆囊收缩素(CCK)水平。
用纯化的人胆囊收缩素(CCK)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胆囊收缩素(CCK),再与HRP 标记的胆囊收缩素(CCK)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗 涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终 的黄色。
颜色的深浅和样品中的胆囊收缩素 (CCK)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定 吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人胆囊收缩素 (CCK)浓度。
试剂盒组成1. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于 -20 C 保存,但应避免反复冻融 2. 不能检测含 NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤 1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支, 用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂, 其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样 50此待测样品孔中先加样品稀释液 40此 然后再加待测样品10 U (样品最终稀释度为 5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37 C 温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸储水 30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此96T重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50 4,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50 4,再加入显色剂B50U,轻轻震荡混匀,37 C避光显色15分钟.10. 终止:每孔加终止液50 pl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
胆囊收缩素在畜禽生产中的应用
李勇
【期刊名称】《饲料研究》
【年(卷),期】2008()3
【摘要】胆囊收缩素(CCK)是一种具有广泛生物学活性的脑肠肽,它存在于体内许多部位并通过受体介导多种重要的生理功能。
作为一种饱感因子,CCK具有抑制动物摄食的功能。
在畜禽生产上,CCK受体颉颃剂、CCK免疫及CCK抗体已有应用并取得了较好的效果。
【总页数】3页(P11-13)
【关键词】胆囊收缩素;摄食;应用
【作者】李勇
【作者单位】四川农业大学动物营养研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S852.2
【相关文献】
1.益生素在畜禽生产中的应用进展 [J], 李阳友;刘亮;苏畅;吴大鹏;屈元元;陈守云;谢秀兰
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3.胆囊收缩素抗体在畜禽生产中的应用 [J], Hogg.,DM;张伟
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5.浅谈益生素在畜禽生产中的应用 [J], 曹颖;常洪;吕芳;韩玉娟
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人胆囊收缩素(CCK)试剂盒使用方法检测范围:96T8pg/ml-200pg/ml使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中胆囊收缩素(CCK)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胆囊收缩素(CCK)水平。
用纯化的人胆囊收缩素(CCK)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胆囊收缩素(CCK),再与HRP标记的胆囊收缩素(CCK)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胆囊收缩素(CCK)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人胆囊收缩素(CCK)浓度。
标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
乙酸激酶(ACK )活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC3170规格:50T/48S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体50 mL×1瓶4℃保存试剂一液体30 mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶4℃保存试剂三粉剂×2瓶-20℃保存试剂四粉剂×2瓶-20℃保存试剂五粉剂×1支-20℃保存试剂六液体95 μL×1瓶4℃保存试剂七液体110 μL×1瓶-20℃保存试剂八粉剂×1瓶4℃保存试剂九粉剂×1支4℃保存溶液的配制:1、提取液:临用前将试剂九加入到提取液中,并于4℃保存;2、试剂二:临用前每瓶加入4 mL 双蒸水,充分溶解待用。
用不完的试剂仍4℃保存;3、试剂三:临用前每瓶加入3 mL 双蒸水,充分溶解待用;用不完的试剂-20℃保存;4、试剂四:临用前每瓶加入2 mL 双蒸水,充分溶解待用;用不完的试剂-20℃保存;5、试剂五:临用前每支加入1 mL 双蒸水,充分溶解待用;用不完的试剂-20℃保存;6、试剂六:液体置于试剂瓶内EP 管中。
临用前根据样本量将试剂六、蒸馏水按43:457(V:V )的比例配制备用,现用现配;7、试剂七:液体置于试剂瓶内EP 管中。
临用前根据样本量将试剂七、蒸馏水按1:9(V:V )的比例配制备用,现用现配;8、试剂八:临用前加入5 mL 双蒸水,充分溶解待用。
用不完的试剂仍4℃保存;9、工作液:吸取0.3 mL 试剂二、1 mL 试剂三、0.65 mL 试剂四、0.2 mL 试剂五、0.2 mL 试剂六、0.2 mL试剂七、1 mL 试剂八混匀,也可根据比例现用现配,于冰上备用。
产品说明:ACK 广泛存在于生物体内,催化乙酸和ATP 生成乙酰磷酸和ADP ,是细菌碳代谢和能量代谢的关键酶,尤其是在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。
CCK操作说明与检测步骤CCK(Cell Counting Kit)是一种常用的细胞计数试剂,用于细胞活力和细胞增殖的测定。
下面将详细介绍CCK操作说明及检测步骤。
操作说明:1.实验前准备:-将CCK试剂保持在-20℃保存,使用前将其充分解冻。
-准备好细胞培养液、细胞离心管、96孔板、吸管、无菌量筒等试剂和工具。
-卫生条件下操作,保持实验环境的洁净。
2.细胞处理:-收取培养中的细胞并离心以去除培养液。
-用细胞培养液洗涤细胞,避免细胞间的交叉污染。
-计算细胞浓度,使细胞悬液的浓度约为1×10^4-1×10^6个/毫升。
-按照实验需求,将细胞悬液均匀地分配到96孔板的每个孔中。
-将96孔板放入孵化器中培养适当的时间,使细胞附着并增殖。
K试剂添加:-取出已培养的96孔板,将培养液小心地倒掉。
-每个孔中加入100-200μL的细胞培养液,使其悬液浓度保持在约1×10^4-1×10^6个/毫升。
-根据实验需求,向每个孔中加入10μL-20μL的CCK试剂。
-轻轻摇晃孔板,确保CCK试剂充分与细胞混合。
4.反应时间:-将96孔板放回孵化器中,让细胞与CCK试剂反应适当的时间,通常为1-4小时。
-在反应期间,细胞的代谢活性将使CCK试剂转化为可发色的产物。
5.吸光度测定:-使用多功能微板阅读器或酶标仪,将反应孔板取出。
-使用吸管将孔板中的液体小心地转移到透明的96孔板上。
- 使用多功能微板阅读器或酶标仪,设置光学参数为450nm。
-读取每个孔的吸光度值,并记录下来。
6.结果分析:-根据吸光度值计算细胞活力或细胞增殖率。
- 可以使用以下公式计算细胞的活力或增殖率:Percent cell viability or proliferation = (实验孔中的吸光度-背景吸光度)/(对照孔中的吸光度-背景吸光度) × 100。
-将得到的结果进行统计分析和图形展示。
焦虑障碍焦虑是一种情感表现,是伴有生理激活升高的恐惧和忧虑的不愉快情感。
焦虑是预感到未来威胁,与惧怕不同,后者是对客观存在的某种特殊威胁的反应。
用学习说来看,它是中介威胁情境和逃避行为的驱力。
焦虑可用自我报告、生理激活测量和外部行为观察等方法来测量。
焦虑水平的过分与不及,都影响适应功能。
焦虑水平的过分,就是焦虑障碍。
焦虑也可以是所有精神疾病的一种症状。
病理性焦虑是一种控制不住,没有明确对象或内容的恐惧,其威胁与焦虑的程度很不相符。
焦虑障碍是最常见的精神障碍,包括焦虑症状、焦虑症等,其中焦虑症状又包括器质性疾病所致的焦虑、精神活性物质所致的焦虑,精神疾病伴有的焦虑等。
焦虑症状群:包括一组焦虑症状,经因子分析,可以分为三类:(1)心理症状:担忧、紧张、着急、烦躁、害怕、不祥预感和惊恐等焦虑情感为主,可伴注意集中不能、警觉增高、记忆障碍等。
(2)躯体症状:交感神经兴奋的表现,如出汗、瞳孔扩大、血压升高、心悸、气短、胸闷、尿频、排尿困难、腹泻、性功能障碍等。
(3)运动障碍:震颤、小动作增多、静坐不能、往复徘徊及激起等。
一、概述(一)概念、分类在当今通行的几个分类系统中,焦虑障碍包括以下几种疾病:正常焦虑:焦虑是一种情感表现,当人们面对潜在的或真实的危险或威胁时,都会产生的情感反应。
正常人的焦虑是人们预期到某种危险或痛苦境遇即将发生时的一种适应反应或为生物学的防御现象,是一种复杂的综合情绪。
有人认为焦虑是“心理警告的信号”。
最典型的例子为应激反应,焦虑是应激所致的心理生理反应的一个组成部分。
绝大多数因一定原因引起、可以理解的、适度的焦虑,属于正常焦虑。
失去焦虑反应的人倒是不正常的。
病理焦虑和焦虑症状:如同许多生理心理反应一样,如果反应过度,便是不正常了。
病理焦虑是指不适当的焦虑表现,指没有明确的致焦虑环境因素,或者是环境因素和反应不相称,严重的或持续的焦虑反应。
后者可以反映于他们的他们的感受、行为或功能状态中,他们本人、亲属或周围人,也能觉察到这类反应/状态。
缩胆囊素在神经系统中的作用
冯宁;伍晓汀
【期刊名称】《中国普外基础与临床杂志》
【年(卷),期】2008(15)8
【摘要】目的总结缩胆囊素(cholecystokinine,CCK)的生物学特性及其在中枢神经系统中的生物学作用。
方法通过检索近年来相关文献,分析总结关于CCK作为神经肽/神经递质在信号传递、神经保护及镇痛等方面的研究进展。
结果CCK作为神经递质能够拮抗致痫剂的致痫作用;CCK8还能够对抗神经元的手术和化学损伤以及延缓神经元老化;CCK在痛觉传导过程中起到了重要的整合作用。
结论CCK是大脑中最丰富的神经递质/神经肽之一,同时也是中枢和外周神经系统中一重要的信号因子,在神经系统中有着非常重要的生物学作用。
【总页数】3页(P628-630)
【关键词】缩胆囊素;神经系统;神经递质
【作者】冯宁;伍晓汀
【作者单位】四川大学华西医院普外科
【正文语种】中文
【中图分类】Q71
【相关文献】
1.缩胆囊素的作用机制与应用 [J], 刘洁珠;李年龙
2.八肽缩胆囊素对脂多糖诱导血管内皮细胞诱生型一氧化氮合酶表达变化的抑制作
用 [J], 闫骏;谷振勇;王杏云;刘森;徐小虎;丛斌;凌亦凌
3.缩胆囊素在胆源性胰腺炎发病中的作用 [J], 张志强;葛春林;荣大庆
4.胆囊结石中胆固醇含量与胆囊动力、缩胆囊素及其受体间关系的研究 [J], 朱翔宇;徐国强
5.基于脑肠轴理论胆囊收缩素在消化系统和中枢神经系统的作用研究进展 [J], 张新宁;李学军;孟繁兴;陈路;武洋;高燕洁
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胆囊收缩素的主要作用李丽;司军强;赵磊【期刊名称】《农垦医学》【年(卷),期】2006(028)004【摘要】胆囊收缩索(Cholecystokinin,CCK)是192g年由Ivy和Oldberg 发现并命名的一种能引起胆囊收缩的胃肠道多肽激素,随后发现CCK还广泛存在于中枢及外周神经系统,并以神经递质或神经调制的形式发挥重要的生理作用,因而它已成为一种典型的脑肠肽。
CCK具有多种生理功能,如:在胃肠道的主要生理作用是促进胰酶分泌和胆囊收缩,并可协同促胰液素促进胰液HCO3-分泌,能松弛Oddi扩约肌,降低下食管扩约压力,减缓胃排空,增强小肠和结肠运动等多方面功能。
在中枢神经系统发挥神经递质的作用,参与了痛觉感受、食欲调节、记忆等生理过程,亦有调节垂体激素释放的作用,与惊恐、焦虑、癫痫等病理表现有关;同时,CCK还具有控制中枢呼吸节律及调节心血管紧张的作用。
目前关于CCK的研究十分活跃,本文就CCK的主要作用作一综述。
【总页数】4页(P298-301)【作者】李丽;司军强;赵磊【作者单位】石河子大学医学院生理学教研室,新疆,石河子,832002;石河子大学医学院生理学教研室,新疆,石河子,832002;石河子大学医学院生理学教研室,新疆,石河子,832002【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.脾虚证模型大鼠血清中血管活性肠肽和胆囊收缩素的变化及四君子汤的干预作用[J], 张海燕;陈君千;张望;黄绍刚;黄穗平2.中枢八肽胆囊收缩素:阿片样作用抑抗阿片作用 [J], 周岩;韩济生3.胆囊收缩素对心血管系统的调节作用 [J], 王思月4.八肽胆囊收缩素对缺氧缺血性细胞损伤模型的干预作用 [J], 刘瑛;周江堡5.基于脑肠轴理论胆囊收缩素在消化系统和中枢神经系统的作用研究进展 [J], 张新宁;李学军;孟繁兴;陈路;武洋;高燕洁因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
人胆囊收缩素(CCK)试剂盒使用方法
检测范围:96T
8pg/ml-200pg/ml
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中胆囊收缩素(CCK)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胆囊收缩素(CCK)水平。
用纯化的人胆囊收缩素(CCK)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胆囊收缩素(CCK),再与HRP标记的胆囊收缩素(CCK)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胆囊收缩素(CCK)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人胆囊收缩素(CCK)浓度。
试剂盒组成
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结:
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。
一次加样时间最好
控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月。