小鼠直接胆红素D-BiL酶联免疫分析

血清直接胆红素DBIL测定1.实验原理直接胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐形成重氮化合物，在酸性条件下呈红色。

2.标本：2.1病人准备：无特殊要求。

最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。

2.2类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。

3.标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。

4.标本运输：常温条件下避光保存运输。

5.标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。

6.实验材料6.1试剂：申能总胆红素试剂盒：14108271701 试剂＋试剂2 6.1.1试剂组成试剂1：16×64mlEDTA-Na20.07mmol/L氯化钠6.6g/L氨基磺酸70mmol/L试剂2：6×16ml2,4-二氯苯胺重氮盐0.09mmol/L盐酸130mmol/LEDTA-Na20.02mmol/L6.1.2试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂有效期为18个月。

试剂2必需避光保存。

试剂不可冰冻。

6.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.5注意事项：此试剂为体外诊断用。

警告！腐蚀剂！不要入口。

避免和眼睛，皮肤或衣服接触。

如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟。

接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。

6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7.仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪8.操作步骤8.1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件检验结果的判断与分析10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

小鼠B因子（BF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的小鼠BF，且与其他相关蛋白无交叉反应。

有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中BF含量。

说明1.试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗BF抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗BF抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的BF呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。

2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）1×10ml/瓶。

6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）。

7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）。

8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

生化项目和免疫项目如何区分医学检验中一个检测项目该归入生化项目还是免疫项目？应如何区分？本文分别对生化项目种类和免疫项目种类进行介绍，并根据不同的分类原理对其进行区分。

1.生化项目种类及临床意义丙氨酸氨基转移酶（ALT）：又称为谷丙转氨酶（GPT）是衡量肝功能的重要指标，许多基层医疗机构在做体检时仅测此一项生化项目。

正常人一般在40U/L 以内[1]。

干粉试剂复溶后为单试剂，液体试剂一般为双试剂，应用动力学法可计算结果。

蛋白：通常测白蛋白（ALB）和总蛋白（TP），终点法医学教育网|搜集整理。

一般用单试剂，有的TP试剂为双试剂，可用两点终点法测。

蛋白质是血清的主要成份，大部份由肝细胞合成。

通过蛋白的测定可以协助某些疾病的诊断。

血糖：血液中的葡萄糖简称血糖（GLU）。

常用于糖尿病的诊断。

正常人空腹血糖一般为 3.9～6.1mmol/L.市场上单、双试剂的商品化试剂盒都有，可用终点法（单试剂）或两点终点法测量（双试剂）。

门冬氨酸氨基转移酶（AST）：又称为谷草转氨酶（GOT），主要用于心肌和肝胆疾病及骨骼肌病的诊断。

是肝功能测试的常用指标之一[2]。

正常人一般在40U/L以内。

同ALT一样，无论单、双试剂，用动力学法可计算结果。

碱性磷酸酶（ALP）：主要用于肝胆疾病及骨骼病的诊断。

是肝功能测试的常用指标之一。

正常人一般在240U/L以内。

用动力学法计算结果。

γ-谷氨酰转移酶（GGT）：主要用于肝胆疾病诊断。

是肝功能测试的常用指标之一。

正常人一般在50U/L以内。

用动力学法计算结果。

胆红素（BiL）：胆红素的测定，能准确反映黄疸的程度，判断黄疸的类型。

一般测量总胆红素（TBil）和直接胆红素（DBil）。

甘油三酯（TG）：其含量测定是血脂分析的重要内容之一。

总胆固醇（CHOL）：是游离胆固醇和胆固醇酯的总称，其测定对高脂蛋白血症和冠心病的诊断及发病机理的研究有一定意义。

高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）：主要在肝脏中合成，是血清中颗粒数最多的脂蛋白。

兽医内科学与兽医临床诊断学习题含答案一、单选题（共50题，每题1分，共50分）1、霉菌毒素中毒是目前危害养殖业的重要疾病之一,霉菌毒素最大的危害是( )。

A、肝肾损伤、皮肤坏死B、出血性胃肠炎C、繁殖障碍D、降低饲料营养价值E、免疫抑制正确答案：E2、高产奶牛产后 7 天,突然出现间歇性痉挛、狂躁,产奶量减少,乳、尿有烂苹果气味,血液生化检验可见( )。

A、血钙升高和血糖降低B、血糖和血酮升高C、血酮和游离脂肪酸升高D、血糖和游离脂肪酸升高E、血钙降低和血糖升高正确答案：C3、不能导致溶血出现血红蛋白尿的疾病是( )。

A、犬洋葱中毒B、低磷酸盐血症C、棉籽饼中毒D、菜籽饼中毒E、蕨类植物中毒正确答案：E4、急性肾炎与慢性肾炎最主要的区别点是( )。

A、肾性高血压B、尿检出现蛋白尿或血细胞C、尿量多少D、尿检出现肾上皮细胞或管型E、尿毒症正确答案：C5、犬,5 岁,咳嗽,体温40. 3℃ , 肺部听诊有广泛性湿啰音,两侧鼻孔呼出气体都呈现尸臭气味,鼻液呈污秽不洁,带灰色或暗褐色,则该病可能是( )。

A、小叶性肺炎B、化脓性肺炎C、坏疽性肺炎D、大叶性肺炎E、支气管炎正确答案：C6、健康犬猫心搏动检查部位在左侧胸廓下 1/3 的水平线处, 最明显部位在( )。

A、7 肋间B、第 5 肋间C、第 3 肋间D、第 6 肋间E、第 4 肋间正确答案：B7、左右两侧肺区,肺泡呼吸音都明显增强,不可能见于( )。

A、贫血性疾病B、代谢性酸中毒C、呼吸道炎症初期D、发热性疾病初期E、肺炎及胸膜炎正确答案：E8、肺部干性啰音的出现,提示( )。

A、胸膜肺炎B、支气管炎C、肺间质气肿D、肺水肿E、肺坏疽正确答案：B9、颈静脉波动明显,若指压迫颈静脉,远心端波动消失而近心端波动照常明显,称颈静脉阳性搏动。

提示( )。

A、右心阻滞B、二尖瓣闭锁不全C、心力衰竭D、三尖瓣闭锁不全E、颈静脉波动过强正确答案：D10、以精神沉郁为主要特征的疾病是( )。

小鼠β-防御素(β-DF）ELISA试剂盒操作说明小鼠β-防御素(β-DF）ELISA试剂盒操作说明小鼠β-防御素(β-DF）ELISA试剂盒实验原理小鼠β-防御素(β-DF）ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被小鼠β-防御素(β-DF）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB 显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的小鼠β-防御素(β-DF）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。

为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。

最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

小鼠肌酐酶联免疫分析解读小鼠肌酐酶（Creatine kinase，CK）是一种酶类蛋白，主要存在于细胞负责肌肉、心脏等组织中，是细胞内能量储备物质肌酸磷酸的主要蛋白搬运者。

CK是一个异源四聚体，由两个不同的亚基组成，包括肌酸激酶亚基（CK-MM）、脑型亚基（CK-BB）和心肌型亚基（CK-MB）。

CK的主要作用是将ADP和磷酸转化为ATP，在肌肉和心脏等高能耗组织中发挥重要的能量储备和传递作用。

CK水平的升高与细胞损伤和组织病变密切相关。

免疫分析是一种常用的测定CK水平的方法，通过与特异性抗原结合进行定量测定。

在小鼠中，根据CK亚基的不同表达和分布，可以通过测定不同亚基的浓度来评估组织的病变和损伤情况。

在CK活性的测定中，一般采用CK-MB和CK-MM的活性比值（CK-MB/CK-MM）作为心肌损伤的指标。

因为在正常情况下，心肌中的CK-MB的比例非常低，当心肌受损时，CK-MB的比例会显著升高。

因此，CK-MB/CK-MM的比值可以反映心肌损伤的程度。

而CK-BB的浓度则可用于反映脑部组织的损伤情况。

小鼠肌酐酶联免疫分析是一种灵敏度高、特异性强的检测方法。

通过对小鼠血清或组织样品中CK亚基的浓度进行测定和比较，可以了解小鼠体内组织的病变情况。

例如，当小鼠出现心肌损伤时，CK-MB的比例会升高，而CK-MM的比例则会下降。

这种模式在心肌梗死等心脏病变中特别显著，可以作为早期诊断和疾病进展的指标。

此外，小鼠肌酐酶联免疫分析还可以用于监测小鼠在实验室环境中的应激状况。

例如，当小鼠暴露在高强度的运动、高温或其他应激因素下时，CK水平会升高。

这种情况下，CK的浓度可以作为应激反应的指标，用于评估小鼠的适应能力和应激程度。

在实际使用CK联免疫分析的过程中，我们需要注意以下几点：首先，准确计量和采集样品非常重要。

如样品存放时间过长、受污染或由于其他不良条件，会导致CK的变性和降解，从而影响CK浓度的准确测定。

宠物生化分析仪血液常规检测项目及临床意义肝功能：白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、总胆红素（TB）、总胆汁酸（TBA）、直接胆红素（DBB）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、r-谷氨酰转移（r-GT）、胆碱酯酶（CHE）、碱性磷酸酶（AKP)肾功能：尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、尿酸（UA）心：乳酸脱氢酶（LDH）、血钾（K）、血钙（Ca）、肌酸激酶（CK-NAC）血糖血脂：葡萄糖(GLU-0X)、甘油三脂(TG)、酮体、胆固醇（CHOL）、果酸胺（FMN）、高密度脂蛋白胆固醇（HDC-C)、低密度脂蛋白胆固醇（LDC-C）电解质：钠（Na）、氯（Cl）、碳酸氢盐、镁（Mg）、无机磷（P）、钙（Ca）胰腺：淀粉酶（AMY）内分泌：碱性磷酸酶（AKP）、肌酸激酶（CK-NAC）、葡萄糖(GLU-0X)、胆固醇（CHOL）、钙（Ca）、磷（P）、钠（Na）、钾（K）、镁（Mg）（一）总蛋白（TP）犬猫参考值：54-78 58-78临床意义：增高：呕吐、腹泻、休克、多发性骨髓瘤降低：营养不良、消耗增加、肝功能障碍、大出血、肾病（二）白蛋白（ALB）犬猫参考值：24-38 26-41临床意义：增高：严重失水、血浆浓缩降低：急性大出血、严重烫伤、慢性合成白蛋白功能障碍、妊娠（三）谷草转氨酶（AST）犬猫天门冬氨酸转氨酶参考值：8-38 0-20临床意义：增高：心肌梗塞、肺栓塞、心肌炎、心动过速、肝胆疾病、感染、胰腺炎、脾肾或肠系膜梗死减少：维生素B6缺乏和大面积肝硬化。

（四）谷丙转氨酶（ALT）犬猫参考值：4-66 1-64临床意义：增高：急性药物中毒性肝炎、病毒性肝炎、肝癌、肝硬化、慢性肝炎、阻塞性黄疸、胆管炎、肝脏外伤、糖尿病、毒血症、甲状腺机能降低、肾脏综合征。

（五）碱性磷酸酶（ALP、AKP)犬猫参考值：0-80 2.2-37.8临床意义：增高：骨折愈合期、转移性骨瘤、阻塞性黄疸、急性肝炎或肝癌、甲亢、佝偻病降低：重症慢性肾炎、甲状腺机能不全、贫血、锌缺乏（六）肌酸激酶（CK、CKP) 犬猫参考值：8-60 50-100临床意义：增高：心肌损伤和坏死、心肌梗塞、皮肌炎、营养不良、肌肉损伤、甲状腺机能减弱、钩端螺旋体病、甲状腺机能降低、大脑皮质炎症或坏死（七）乳酸脱氢酶（LDH) 犬猫参考值：100 63-273临床意义：增高：心肌梗塞、白血病、癌舯、肌营养不良、胰腺炎、肺梗死、巨幼细胞性贫血、肝细胞损伤、肝癌（八）淀粉酶（AMYL) 犬猫参考值：185-700 502-1843临床意义：增高：急性胰腺炎(3000-6000U/L)、急性胆囊炎、胆道感染、糖尿病酮症酸中毒、肠扭转、肠堵塞和穿孔（九）γ-谷氨酰转移酶（GGT) 犬猫参考值：12-64 13-51临床意义：增高：肝癌、阻塞性黄疸、胰腺疾病、肝损害、肝中毒、肾疾患（尤其是肾病）、胆汁淤积、慢性肝功能不全（十）葡萄糖(GLU)犬猫参考值： 3.3-6.7 3.9-7.5临床意义：增高：生理性高血糖：餐后病理性高血：糖尿病、颅外伤、颅内出血、脑膜炎降低：生理性低血糖：饥饿病理性高血糖：胰岛B细胞增生或瘤，垂体前叶功能减退、肾上腺功能减退、严重肝病（十一）总胆红素（T-Bil) 犬猫参考值：2-15 2-10临床意义：增高：溶血性黄疸、肝细胞性黄疸、阻塞性黄疸（十二）直接胆红素（D-Bil）犬猫参考值：2-5 0-2临床意义：同上（十三）尿素氮（BUN) 犬猫参考值： 1.8-10.4 5.4-13.6临床意义：增高：急性肾小球肾炎、肾病晚期、肾衰、慢性肾炎、中毒性肾炎、前列腺肿大、尿路结石、尿路狭窄、膀胱肿瘤降低：严重的肝病，黄曲霉菌中毒，用葡萄糖治疗的长期厌食。

血清直接胆红素（D-BIL）测定1. 实验原理直接胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐形成重氮化合物，在酸性条件下呈红色。

2. 标本：2.1 病人准备：无特殊要求。

最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。

2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。

3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。

4. 标本运输：常温条件下避光保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。

6. 实验材料6.1 试剂：奥林巴斯总胆红素试剂盒：试剂＋空白对照6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂有效期为18个月。

试剂2必需避光保存。

试剂不可冰冻。

6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。

警告！腐蚀剂！不要入口。

避免和眼睛，皮肤或衣服接触。

如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟。

接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。

6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法以TruCal U复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以μmol/L报告。