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QCB细菌内毒素工作标准品标定操作规程QCB细菌内毒素工作标准品标定操作规程————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：2标题：1.目的2.范围3.职责4.参考资料5.定义6.细菌内毒素工作标准品效价的标定标题：正文规范细菌内毒素工作标准品效价的标定程序，确保细菌内毒素检查结果的可靠性。
适用于质监处药理室对细菌内毒素工作标准品效价的标定。
质监处药理室分析人员负责本规程的实施和完成相关记录。
USP版附录85；CP版附录Ⅺ E 。
细菌内毒素检查法：本法系利用从鲎的变形细胞中提取的试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的含量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。
鲎试剂：是鲎变形细胞的溶出物经提取而成。
鲎试剂灵敏度：在本检查法规定的条件下能检测出内毒素标准溶液或供试品溶液中的最低内毒素浓度，用EU/ml表示。
细菌内毒素检查用水(BET水)：系指与灵敏度为0.03EU/ml 或更高灵敏度的鲎试剂在37±1 ?C 条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。
细菌内毒素参考标准品(RSE)：RSE 是USP细菌内毒素参考标准品，每瓶有10,000个USP 内毒素单位。
细菌内毒素工作标准品(CSE)：是除RSE 之外的内毒素标准品。
反应终点浓度：是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈现阳性结果的浓度。
一、试剂、材料与仪器设备试剂：鲎试剂批号、灵敏度、规格、生产商。
细菌内毒素检查用水(BET水) 批号、规格、生产商。
细菌内毒素工作标准品(CSE) 批号、效价、生产商。
细菌内毒素参考标准品(RSE) 批号、效价、生产商。
材料及仪器设备：电热恒温水箱型号、设备编号。
电热鼓风干燥箱型号、设备编号。
正文漩涡混合器型号。
无热原试管规格：10?75mm。
无热原玻璃瓶规格：25ml。
细菌内毒素工作标准品效价一、前言细菌内毒素是一类在细菌体内产生的毒素，能引起机体免疫反应和炎症反应。
在临床上，细菌内毒素被广泛应用于药物研发、毒素中和剂的生产和治疗方案的评估。
对细菌内毒素进行准确的测定和标准化工作尤为重要。
本标准品效价的制定旨在为细菌内毒素相关研究和生产工作提供技术支持和参考依据。
二、细菌内毒素工作标准品效价的概念细菌内毒素工作标准品效价是指在一定实验条件下，细菌内毒素与抗毒素的血清所能达到的中和效果。
它不仅可以用于药物研发中的质量控制，还可以作为毒素抗毒素反应的评价指标。
三、细菌内毒素工作标准品效价的测定方法1. 原理：细菌内毒素工作标准品的效价测定是基于毒素与抗毒素的反应，通过一系列的稀释和混合实验，确定抗毒素在中和单位内所含的毒素的量。
2. 试剂和仪器：包括细菌内毒素标准品、抗毒素血清、稀释液、离心管、恒温搅拌器、分光光度计等。
3. 实验步骤：- 步骤一：准备稀释液，将抗毒素血清分别进行稀释，并与细菌内毒素标准品按一定比例混合。
- 步骤二：将混合液在一定温度下反应，并观察其混浊度。
- 步骤三：根据混浊度的变化，采用光度计进行吸光度测定。
- 步骤四：根据实验数据，绘制中和曲线并计算效价。
四、影响细菌内毒素工作标准品效价的因素1. 细菌内毒素标准品的纯度和活性。
2. 抗毒素血清的质量和力价。
3. 温度、pH值等实验条件的控制。
4. 操作人员的经验和专业技能。
五、细菌内毒素工作标准品效价的应用1. 药物研发过程中的质量控制。
2. 毒素中和剂的生产和质量评价。
3. 临床治疗方案的评估和监测。
六、细菌内毒素工作标准品效价的意义1. 为相关领域的科研工作提供了可靠的实验参数和标准。
2. 为毒素抗毒素反应的评价提供了重要依据。
3. 促进了细菌内毒素研究与应用的深入开展。
七、结语细菌内毒素工作标准品效价的制定和测定工作是一项综合性的技术工作，它不仅需要对实验方法和原理有深入的理解，还需要对相关仪器设备和试剂的选择和操作有高度的熟练度。
细菌内毒素工作标准品细菌内毒素是一种细菌产生的毒素，它可以引起机体免疫系统的异常反应，导致严重的感染和炎症。
因此，对细菌内毒素进行有效的监测和检测至关重要。
为了确保检测的准确性和可靠性，需要使用细菌内毒素工作标准品进行标定和质控。
本文将介绍细菌内毒素工作标准品的相关知识和使用方法。
1. 细菌内毒素工作标准品的来源。
细菌内毒素工作标准品通常来源于纯化的细菌培养物，经过特定的处理和提取过程得到。
这些工作标准品中含有已知浓度的细菌内毒素，可以用于标定检测方法的灵敏度和准确性，同时也可以用作实验室内部的质控标准。
2. 细菌内毒素工作标准品的种类。
根据不同的细菌内毒素类型，细菌内毒素工作标准品可以分为多种不同的规格和浓度。
常见的细菌内毒素包括大肠杆菌内毒素（endotoxin）、金黄色葡萄球菌肽聚糖（lipoteichoic acid）、产气荚膜梭菌内毒素等。
在选择工作标准品时，需要根据实际检测的需要进行选择，确保符合实验要求。
3. 细菌内毒素工作标准品的使用方法。
在使用细菌内毒素工作标准品进行标定和质控时，需要严格按照相关操作规程进行。
首先，需要根据实验要求稀释工作标准品至合适的浓度，然后进行标定实验或者质控实验。
在实验过程中，需要严格控制实验条件，确保实验结果的准确性和可靠性。
4. 细菌内毒素工作标准品的质量控制。
为了确保细菌内毒素工作标准品的质量，需要对其进行严格的质量控制。
在生产和使用过程中，需要对工作标准品进行稳定性测试、纯度测试等，确保其符合相关标准和要求。
同时，实验人员在使用过程中也需要注意标准品的保存和操作，避免出现误差和污染。
5. 结语。
细菌内毒素工作标准品在细菌内毒素检测和研究中起着至关重要的作用。
正确的选择和使用工作标准品，可以确保实验结果的准确性和可靠性，为细菌内毒素相关研究提供有力支持。
因此，实验人员在使用细菌内毒素工作标准品时，需要严格按照操作规程进行，确保实验的顺利进行和结果的准确性。
细菌内毒素检测标准一、范围：本试验为《中国药典（二部）》附录“细菌内毒素检查法”中规定的“凝胶法”，系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝胶反应的机理，经判定供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。
二、依据：GB/T14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法。
第二部分：生物学试验方法。
《中华人民共和国药典》2010年版二部三、器具及试剂：1.器材：（1）锥形瓶（2）三角烧瓶（3）无热原剪刀、镊子（4）恒温培养箱（5）超净工作台（6）恒温水浴箱（7）电热干燥箱（8）旋涡混合器（9）移液器2.试剂：（1）细菌内毒素国家标准品（2）细菌内毒素工作标准品（3）鲎试剂（4）细菌内毒素检查用水四、实验前准备：1.器具处理：试验所用器皿需经处理除去可能存在的外源性内毒素。
玻璃器皿置电热干燥箱内1800C干烤至少2h，或2500C干烤至少30min。
塑料器皿置30%双氧水中浸泡4h，再用细菌内毒检查用水充分冲洗后置600C烘干备用。
2.鲎试剂灵敏度复核实验：当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度试验。
试验步骤按《中国药典（二部）》附录“细菌内毒素检查法”中规定进行。
3.供试品干扰实验：（1）对未知或可疑的供试品初次进行细菌内毒素试验之前应先进行干扰试验，以检验供试品对细菌内毒素试验是否有抑制或增强作用，以及其他影响细菌内毒素试验准确性和敏感性的干扰作用。
当鲎试剂、供试品来源、供试品配方或生产工艺有变化或其他任何影响细菌内毒素试验结果的试验条件改变时，应重新进行干扰实验。
（2）每种产品应取3批并分别使用不少于两个制造商生产的鲎试剂进行干扰实验。
供试液制备按《中国药典（二部）》附录“细菌内毒素检查法”规定进行。
（3）如供试品对细菌内毒素试验有干扰作用，可选用下列适宜方法排除干扰：a)使用更灵敏的鲎试剂对供试品进行更大倍数稀释;b)采用无热原氨基甲烷缓冲液稀释供试液;c)采用无热原氢氧化钠或盐酸溶液调节供试液pH值在6.0-8.0范围;d)采用阳离子缓冲（MgSO4或MgCl2）稀释供试液以调节离子浓度。
SMP-QC--细菌内毒素标准品与检测试剂标准管理规程————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：1.0 目的1.1建立细菌内毒素标准品与检验试剂的管理标准操作规程。
2.0 范围2.1适用于公司细菌内毒素标准品与检测试剂的采购、接收、保存、使用、销毁、去热原物品的存放、鲎试剂灵敏度复核及工作标准品效价的标定。
3.0 职责3.1质量控制（QC）部对本操作规程实施负责。
4.0 定义4.1细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
4.2 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准物质标定其效价，用于试验中灵敏度的复核、干扰试验及各种阳性对照。
4.3 细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品应使用由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品。
5.0 规程5.1细菌内毒素标准品与检测试剂的采购5.1.1细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品按一年的使用量做计划。
5.1.2鲎试剂、缓冲液、细菌内毒素检查用水、无热原吸头、无热原安瓿等按半年的使用量做计划，从可靠的供应商处购买，如湛江安度斯生物有限公司、湛江博康海洋生物有限公司。
5.2细菌内毒素标准品与检测试剂的接收5.2.1细菌内毒素标准品与检测试剂购回后，由生测组组长协同采购管理人员验收。
5.2.2 验收项目包括：运输条件、内包装、名称、数量、规格、有效期、生产厂家及外观检查等是否复核请购要求或相应规定，如购买的是细菌内毒素工作标准品，则必须有厂家提供的内毒素工作标准品效价分析证明书，验收不合格的试剂或标准品直接由采购退货处理或按相关标准操作规程销毁处理。
5.2.3试剂登记项目包括：试剂名称、批号、数量、规格、有效期、生产厂家、接收时间等。
5.3细菌内毒素标准品与检测试剂的保存5.3.1登记过的试剂才能进行保存。
1.0 目的1.1建立细菌内毒素标准品与检验试剂的管理标准操作规程。
2.0 范围2.1适用于公司细菌内毒素标准品与检测试剂的采购、接收、保存、使用、销毁、去热原物品的存放、鲎试剂灵敏度复核及工作标准品效价的标定。
3.0 职责3.1质量控制（QC）部对本操作规程实施负责。
4.0 定义4.1细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
4.2 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准物质标定其效价，用于试验中灵敏度的复核、干扰试验及各种阳性对照。
4.3 细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品应使用由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品。
5.0 规程5.1细菌内毒素标准品与检测试剂的采购5.1.1细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品按一年的使用量做计划。
5.1.2鲎试剂、缓冲液、细菌内毒素检查用水、无热原吸头、无热原安瓿等按半年的使用量做计划，从可靠的供应商处购买，如湛江安度斯生物有限公司、湛江博康海洋生物有限公司。
5.2细菌内毒素标准品与检测试剂的接收5.2.1细菌内毒素标准品与检测试剂购回后，由生测组组长协同采购管理人员验收。
5.2.2 验收项目包括：运输条件、内包装、名称、数量、规格、有效期、生产厂家及外观检查等是否复核请购要求或相应规定，如购买的是细菌内毒素工作标准品，则必须有厂家提供的内毒素工作标准品效价分析证明书，验收不合格的试剂或标准品直接由采购退货处理或按相关标准操作规程销毁处理。
5.2.3试剂登记项目包括：试剂名称、批号、数量、规格、有效期、生产厂家、接收时间等。
5.3细菌内毒素标准品与检测试剂的保存5.3.1登记过的试剂才能进行保存。
5.3.2标准品、缓冲液于冰箱中冷藏保存，不得冷冻。
鲎试剂的保存见厂家的说明书。
5.3.3细菌内毒素检查用水、无热原吸头、无热原安瓿等应存放在去热原物品专柜中，此柜仅存放已去热原的物品。
细菌内毒素工作标准品效价标定方法研究摘要：根据《中国药典》2020年版通则1143细菌内毒素检查法，工作标准品应该用法定标准品进行标定。
探究了运用凝胶法对细菌内毒素工作标准品效价进行标定的检测方法，使用购于中国食品药品检定研究院，效价为9000EU/支细菌内毒素国家标准品（CSE）标定标示效价为10EU/支的细菌内毒素工作标准品（WSE）。
通过试验，检验结果均符合《中国药典》现行版的要求。
关键词：细菌内毒素国家标准品，细菌内毒素工作标准品，鲎试剂，凝胶法，效价引言：根据《中国药典》先行版收载的细菌内毒素检查法要求，根据实际使用要求，使用细菌内毒素国家标准品来标准定CSE的效价，可以用凝胶法或光度法进行标定，本企业实际日常检验中，使用多个灵敏度的鲎试剂则采用两个不同灵敏度的鲎试剂标定CSE的效价。
若标定的CSE效价Pt，结果0.5Pe≤Pt≤2Pe （细菌内毒素工作标准品标示效价（Pe））。
则按照标示效价使用。
正文：1.实验材料1.1仪器设备1.2试剂试药2.实验准备2.1玻璃器皿的洗涤将检验所用玻璃器皿放入洁洁灵水中充分浸泡，然后取出将洗液空干，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用纯化水反复冲洗三遍以上，晾干后放入适宜的密闭金属容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内，放置电热恒温干燥箱中。
2.2除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置烤箱后将烤箱调至250℃，待烤箱温度升至设定的温度后开始记时，需干烤至少2小时。
达到规定时间后，关断电源。
待烤箱温度自然降至室温，在不开启金属容器的情况下，可以保存24小时，否则需再次灭菌除去可能存在的外源性内毒素。
2.3细菌内毒素国家标准品溶液的制备取细菌内毒素国家标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，再用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕,75％酒精棉球擦拭后启开，防止玻璃屑落入瓶内。
用移液器（100-1000μL）吸取BET水1ml放入细菌内毒素国家标准品瓶中,或按标准品使用说明书用移液器加入规定量的BET水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟，然后根据鲎试剂标示灵敏度（λ1为0.25EU/ml标示灵敏度、λ2为0.03U/ml标示灵敏度）），将细菌内毒素国家标准品稀释制备成所需浓度的细菌内毒素标准溶液即0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml、0.0625EU/ml和0.0625EU/ml、0.03125EU/ml、0.15625EU/ml、0.078125EU/ml。
1.试剂和样品鲎试剂（生产厂家：湛江安度斯生物有限公司，批号：1112202，灵敏度：0.125EU/ml，规格：0.1 ml/支）细菌内毒素检查用水（生产厂家：湛江安度斯生物有限公司，批号：1106130，规格：5 ml/支）细菌内毒素工作标准品（P=160EU/支，生产厂家：中国药品生物制品检定所批号：150601-201174）细菌内毒素国家标准品（10000 EU/支，生产厂家：中国药品生物制品检定所批号：150600-200707）2.操作步骤2.1细菌内毒素国家标准品稀释、细毒内毒素工作标准品稀释将细菌内毒素国家标准品用1ml细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合仪上混合15分钟，然后制备成4个浓度的标准内毒素溶液，即0.25 EU/ml、0.125 EU/ml、0.0625 EU/ml和0.03 EU/ml备用，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒。
具体稀释步骤如下：100008.12.0108.12.015.15.00.25110.125110.0625110.03待复核的细菌内毒素工作标准品标示效价为160 EU，用1ml细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合仪上混合15分钟，然后制备成4个浓度的内毒素溶液，即640倍（0.25 EU/ml）、1280倍（0.125 EU/ml）、2560倍（0.0625 EU/ml）和5120倍（0.03 EU/ml）备用，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒。
具体稀释步骤如下：1608.12.0165.05.084.12.015.15.00.25110.125110.0625110.03以上细菌内毒素国家标准品和细菌内毒素工作标准品需同时进行。
2.2加样取规格为0.1ml/支的鲎试剂36支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，70%异丙醇棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。
每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡将准备好的鲎试剂取其中18（管）放在试管架上，排成5列，其中4列4支（管），1列2支（管），4支（管）4列每列每支分别加入0.1ml的2λ、λ、0.5λ和0.25λ的内毒素标准溶液；另2支（管）加入0.1ml检查用水。
正文规范细菌内毒素工作标准品效价的标定程序，确保细菌内毒素检查结果的可靠性。
适用于质监处药理室对细菌内毒素工作标准品效价的标定。
质监处药理室分析人员负责本规程的实施和完成相关记录。
USP版附录85；CP版附录Ⅺ E 。
细菌内毒素检查法：本法系利用从鲎的变形细胞中提取的试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的含量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。
鲎试剂：是鲎变形细胞的溶出物经提取而成。
鲎试剂灵敏度：在本检查法规定的条件下能检测出内毒素标准溶液或供试品溶液中的最低内毒素浓度，用EU/ml表示。
细菌内毒素检查用水(BET水)：系指与灵敏度为0.03EU/ml 或更高灵敏度的鲎试剂在37 1 C 条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。
细菌内毒素参考标准品(RSE)：RSE 是USP细菌内毒素参考标准品，每瓶有10,000个USP 内毒素单位。
细菌内毒素工作标准品(CSE)：是除RSE 之外的内毒素标准品。
反应终点浓度：是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈现阳性结果的浓度。
一、试剂、材料与仪器设备试剂：鲎试剂批号、灵敏度、规格、生产商。
细菌内毒素检查用水(BET水) 批号、规格、生产商。
细菌内毒素工作标准品(CSE) 批号、效价、生产商。
细菌内毒素参考标准品(RSE) 批号、效价、生产商。
材料及仪器设备：电热恒温水箱型号、设备编号。
电热鼓风干燥箱型号、设备编号。
正文漩涡混合器型号。
无热原试管规格：1075mm。
无热原玻璃瓶规格：25ml。
无热原玻璃吸管规格：1ml、2ml、5ml、10ml。
试管架、无热原封口膜、洗耳球、酒精棉球、砂轮片。
二、试验准备试验所用的容器、用具都必须经过处理，250C以上干烤至少1小时，以去除外源性内毒素。
试验操作过程应避免微生物的污染。
三、内毒素溶液配制USP细菌内毒素参考标准品(RSE)系列溶液配制取RSE 1瓶，加入5ml细菌内毒素检查用水溶解并用漩涡混合器间歇混匀30分钟，然后用细菌内毒素检查用水进一步稀释至2.0、、 0.5、 0.25四个浓度的内毒素标准溶液，每一步稀释应混匀至少30秒钟。
