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甘肃医药2020年39卷第10期Gansu Medical Journal ，2020，Vol.39，No.10宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤，好发于30~60岁的中老年女性。
阴道触碰性流血、阴道排白色或血色液体及有腥臭味道是宫颈癌常见的临床特征［1］。
宫颈癌是较严重的恶性肿瘤之一，该病有一定潜伏期，大多数患者并未出现不适及其他症状，在日常的妇科检查中难以发现或确认。
因此，宫颈癌的发现时间在治疗该疾病中占有关键作用。
宫颈癌的主要恶化原因是人类乳头瘤病毒（human papilloma virus ，HR-HPV ）持续感染，致癌潜力依赖于E6/E7癌基因的大量表达［2］。
宫颈癌患者的HPV 感染原因多种多样，最重要的感染途径为性行为。
口服避孕药的滥用以及吸烟等都会引起恶变，同时也是高危型HPV 感染不断扩大的最重要的原因［3］。
从HPV 感染到发生癌前病变，进而发展到宫颈癌，一般需5~10年，在这过程中可通过筛查，及早发现宫颈癌前病变，否则会错过最佳治疗时机。
高危型HPV 中E6/E7基因编码的原癌蛋白是导致子宫颈上皮癌变的重要因子，对细胞生长刺激最为重要，可引起宫颈上皮细胞的癌变，促进其恶化［4］。
本研究探讨HPVE6/E7mRNA 检测对宫颈病变患者的筛查价值。
1资料与方法1.1一般资料选取2018年1月至2018年12月于我院就诊的宫颈病变患者168例，年龄22~60岁，平均年龄（36.48±6.78）岁，常见临床症状均为接触性出血、阴道异常出血、白带异常及下腹隐痛等。
1.2纳入排除标准纳入标准：①至少有3年以上性生活史；譺訛均符合宫颈病变的入选标准［5］；③资料齐全，意识正常，能够配合治疗；④签署知情同意书。
排除标准：①具有子宫或宫颈切除术史的患者；②相关资料有缺失的患者；③调查期间无故退出者。
1.3检测方法1.3.1宫颈液基细胞学（TCT ）检查。
样本采集前3天禁止性生活和药品使用。
T C T标本及H P V E E m R N A检测结果实例解读集团标准化工作小组 [Q8QX9QT-X8QQB8Q8-NQ8QJ8-M8QMN]TCT标本及HPV E6/E7 mRNA检测结果判断实例解读：前提：TCT结果满意，如不满意，需6-12周后复查TCT结果，并处理可能存在的感染。
参考宫颈癌筛查指南第一组：TCT结果正常细胞（如果未作HPV DNA，按照HPV DNA阴性分组处理，下同）1.TCT结果正常，HPV DNA阳性，HPV E6/E7 mRNA阴性。
考虑：HPV病毒虽然存在，但没有整合入宿主细胞或者整合入宿主细胞后并未进行病毒癌基因的转录翻译，属于低风险状态。
如果仅仅做E6/E7 mRNA检测（以下简称mRNA检测），可按照NCCN指南每2年一次HPV+TCT的筛查，注意，每年的妇科体检不完全等同于宫颈癌筛查。
2.TCT结果正常，HPV DNA阴性，HPV E6/E7 mRNA阳性。
考虑：HPV病毒存在，病毒整合入宿主细胞，细胞内无游离状态的HPV病毒存在，HPV病毒癌基因已整合并开始转录翻译，属于正常人群中的高风险状态。
按照宫颈癌筛查指南，结合HPV E6/E7 mRNA检测特点，可选择：半年到1年后复查HPV E6/E7 mRNA及细胞学检查，如果HPV mRNA仍为阳性建议阴道镜检查。
21岁以下女性，可延长至1年后复查HPV E6/E7 mRNA及细胞学检查，如果HPV mRNA仍为阳性建议阴道镜检查。
第二组：TCT结果 ASCUS1.TCT结果ASC-US，HPV DNA阴性，HPV E6/E7 mRNA阳性。
考虑：HPV病毒存在，病毒整合入宿主细胞，细胞内无游离状态的HPV病毒存在，HPV病毒癌基因已整合并开始转录翻译，属于ASCUS高风险状态。
按照NCCN宫颈癌筛查指南，结合HPV E6/E7 mRNA检测特点，可选择①立即阴道镜检查，②3月至半年后复查HPV E6/E7 mRNA，仍为阳性立即阴道镜检查。
多重实时荧光定量PCR方法在高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测中的应用发布时间：2022-11-23T07:43:18.894Z 来源：《医师在线》2022年21期作者：赖锦锋[导读] 目的：在研究中基于多重实时荧光定量PCR的方法以及相关的技术赖锦锋赣州市人民医院 341000摘要：目的：在研究中基于多重实时荧光定量PCR的方法以及相关的技术，来建立一个能够同时对14中高危型人乳头瘤病毒进行检测与分析，来有效地建立一个对癌基因E6/E7mRNA的检测方法。
方法：在此次研究中选取我院223例临床样本进行检测与分析，来探究14种高危型人乳头瘤病毒中，不同病毒的E6/E7基因序列，来探究这些基因序列中存在的区域设计特异性，并且结合相对应的反应体系来构建一个高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA的检测方法与系统。
在实验中需要结合这些临床样本来利用温核算扩增技术进行高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测，最终来探究其检测结果与宫颈组织病理学检测结果之间是否存在着一致性。
结果：在实验中所建立的检测方法，能够在试验检测中将检测限提升更高的程度，并且对于一些常见低危型HPV中也并没有出现交叉检出的情况，使用多重实时荧光定量PCR方法所检测出的结果与Aptima HPV检测结果是具有较好的一致性，并且多重实时荧光定量PCR法中的敏感性为84.0%，特异性更是高达94.4%阴性预测值比阳性预测值高出更多，高达97.9%，而阳性预测值仅为65.6%。
结论：使用多重实时荧光定量PCR法进行检测有着特异性好、稳定性好以及灵敏性高等等优势，能够在为高危型人乳头瘤病毒的患者提供一个更好的诊断方案以及技术平台。
关键词：多重实时荧光定量PCR；高危型人乳头瘤病毒；E6/E7mRNA检测高危型人乳头瘤病毒（hrHPV）对人体有着较大的不良影响，其中就对人体宫颈癌的发生有着紧密的关联。
并且根据相关的数据统计，hrHPV病毒的感染，是导致全球95%患有宫颈癌患者的必要条件和因素。
高危型人乳头瘤病毒E6、E7 mRNA 检测筛检宫颈病变研究进展目前国内外研究认为高危型HPVE6/E7蛋白与宫颈病变的发生密切相关，本文从高危型HPVE6、E7蛋白致宫颈癌机制及临床应用两方面入手，综述高危型HPVE6、E7蛋白与宫颈病变相关的一系列研究进展。
发病率位居女性恶性肿瘤的第2位[1]，至今大量研究表明高危型HPV持续感染是导致宫颈癌的主要原因[2]。
其中E6和E7早期基因是高危型HPV的主要致癌基因[3]，现对高危型HPVE6、E7蛋白进行阐述，分析其作用及临床应用价值。
标签：高危型HPVE6/E7蛋白；宫颈病变1 宫颈病变筛查方法1.1高危型HPV DNA检测宫颈液基薄层细胞学检查（TCT）联合HPV DNA 检测显著降低了宫颈癌的发生率，但HPV-DNA只是病因检测，而对病毒的活动程度及病变程度无法判断，从而使其不能预测宫颈病变的进展及进行风险评估[4]。
1.2高危型HPV E6、E7 mRNA检测HPV-E6/E7 mRNA含量能较好地反映HPV致癌基因E6/E7的活动度，可以更为直观地评估宫颈癌的发病风险和预后[5]。
2 高危型HPV E6/E7蛋白2.1高危型HPVE6蛋白致宫颈癌的分子机制E6的原癌蛋白与p53相互作用，破坏p53介导的细胞对DNA损伤的免疫应答，导致细胞周期紊乱，细胞过度增殖，致使基因突变增加和细胞染色体不稳定及外源DNA整合到宿主染色体中的几率升高，最终引起癌变[6]。
2.2高危型HPVE7蛋白致宫颈癌的分子机制E7的原癌蛋白与视网膜母细胞瘤蛋白（pRb）结合，诱导后者的降解，导致上皮细胞永生化，使细胞过度增殖、细胞周期调控失控，导致细胞的永生化，促进宫颈癌的发生[7]。
3 高危型HPV E6、E7 mRNA 检测的临床应用3.1高危型HPVE6、E7 mRNA检测的意义最近研究发现HPVE6E7 基因从慢性宫颈炎、CINⅠ～Ⅱ、CINⅢ到浸润性宫颈鳞癌阶段，E7的检出率不断增加[8]，李世蓉等[9]通过反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法对各组标本进行TNF-α、HPV16 E2、HPV16 E6 及HPV16 E7mRNA 表达水平进行半定量检测，结果表明E6及E7在HPV（-）、HPV（+）、CINⅠ～Ⅱ、CINⅢ及CIS/SCC 组的表达均呈逐渐上升趋势，并且E7的逐级升高趋势更显著。
高危型HPVE6/E7mRNA检测在宫颈病变分层管理中的应用价值背景和目的宫颈癌（cervical cancer）对全世界妇女的生命和健康构成严重威胁。
高危型人乳头瘤病毒（High-risk human papillomavirus,HR-HPV）的持续感染是导致宫颈癌发生的必要条件,但从HR-HPV感染到宫颈癌前病变再进展为子宫颈癌,时间可能长达数年甚至数十年。
因此有效的筛查计划即可及早发现癌前病变并给予干预,可以预防宫颈癌的发生。
最早被应用于临床的巴氏涂片使全球宫颈癌的发病率和死亡率显著降低。
然而,由于巴氏涂片存在一定的缺陷以及其结果受许多因素的影响,仍具有较低的灵敏度及较高的假阴性率。
随着液基细胞学技术应运而生,在一定程度上改善及解决了传统巴氏涂片所存在的相关问题,诊断的准确性远高于传统涂片的准确性。
随着对宫颈癌病因的深入研究,有科学家提出HR-HPV持续感染是引起宫颈癌及癌前病变发生发展的必要条件。
然而,HPV-DNA检测只能检测出是否存在高危型HPV的感染,并不能区分是短暂感染还是持续感染。
近年来,关于高危型HPV致癌机制的研究表明,HPV基因组中的E6和E7癌基因对肿瘤的发生起重要作用,这两个癌基因可编码E6和E7蛋白,这两种蛋白表达物可以分别与肿瘤抑制基因p53和Rb的结合,引起不受控制的细胞增殖,从而导致癌前病变和癌症。
针对HPV致癌机制,2012年美国食品和药品管理局（FDA）批准了Aptima检测技术,该检测方法不仅可以检出是否存在高危型HPV感染,而且可以判断HPV感染是否处于活动期,从而对宫颈病变的进展和预后进行预测和评估。
本文对HPV-DNA初筛阳性的患者,进行Aptima检测,旨在研究HPVE6/E7mRNA检测对不同级别宫颈病变中的诊断效能及其表达水平,从而为宫颈病变的分层管理提供依据。
资料与方法集2017年6月至2018年6月期间在郑州大学第二附属医院妇科门诊（河南省子宫颈癌防治中心）,因接触性出血、阴道不规则出血、阴道排液等或常规体检行HC<sub>2</sub>初筛阳性的381例患者为研究对象。
HPVE6／E7mRNA检测在宫颈疾病中的临床应用探讨目的：探讨人乳头瘤病毒（HPV）癌基因E6/E7 mRNA检测在宫颈病变中的临床应用。
方法：收集210例宫颈疾病疑似患者的宫颈分泌物标本行液基细胞学（TCT）检测，同时分别进行实时荧光定量PCR HPV DNA检测及支链DNA （bDNA）HPV E6/E7 mRNA检测，对两组检测结果进行对比。
结果：HPV E6/E7 mRNA特异性高于HPV DNA。
细胞学病变组的HPV E6/E7 mRNA阳性率和拷贝数均比细胞学正常组增高，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论：HPV E6/E7 mRNA检测与HPV DNA检测相比具有较高的特异性，HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈癌的筛查具有较好的临床应用前景。
标签：宫颈病变；HPV E6/E7 mRNA；bDNA宫颈癌是最常见的一种妇科恶性肿瘤，其发生和发展存在着一个比较长的、可逆转的癌前演变过程，所以早期诊断、早期治疗尤为重要。
HPV持续性感染是宫颈上皮内瘤变及宫颈癌发生的必要条件[1]。
HPV早期基因编码E1、E2、E4、E5、E6、E7蛋白，其中E6、E7蛋白被认为是肿瘤进展和保持癌症状态的基本条件，只有存在HPV E6/E7致癌蛋白时才会发展成宫颈癌[2]。
HPV E6/E7 mRNA 检测可了解人体细胞内HPV E6/E7致癌基因的转录情况，反映其活性程度。
本文采用PCR HPV DNA和bDNA HPV E6/E7 mRNA两种检测方法对宫颈疾病进行筛查，并结合TCT检测结果进行比较分析，探讨HPV E6/E7 mRNA在宫颈疾病筛查中的临床应用。
现报告如下。
1 资料与方法1.1 一般资料以2014年1-7月在笔者所在医院因宫颈炎症、阴道异常流血及排液、阴道分泌物增多而就诊的210例患者为研究对象，均为已婚或有多年性生活史，年龄20～65岁，平均年龄为38岁。
1.2 方法1.2.1 标本的采集将专用的宫颈刷伸入子宫颈外口，轻压并依顺时针方向旋转3～4周，取得宫颈口脱落细胞。
694Internal Medicine,Dec.2020,W.15,0o.6 .论著.宫颈脱落细胞HPV E6/E7mRNA检测诊断宫颈高危病变及宫颈癌的临床价值分析李丽晖许锦文开平市中心医院病理科,广东省开平市529300【摘要】目的探讨宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒（HPV）基因E6/E7mRNA检测诊断宫颈高危病变及宫颈癌的临床价值。
方法选择2019年1月至2020年5月来本院进行宫颈癌筛查的300例女性作为研究对象，分别进行宫颈脱落细胞液基细胞学检测（TCT）、HPV E6/E7mRNA检测和宫颈病理组织学检测，比较不同宫颈病理组织分级女性宫颈脱落细胞HPV E6/E7mRNA和TCT的阳性率；以宫颈病理组织学检测结果作为诊断金标准，分析女性宫颈脱落细胞HPVE6/E7mRNA和TCT检测诊断宫颈高危病变及宫颈癌的特异性、敏感性、阳性预测值和阴性预测值;检测不同宫颈病理分级女性宫颈脱落细胞的HPV E6/E7mRNA载量水平，分析女性宫颈病理组织学分级与其宫颈脱落细胞HPVE6/E7mRNA拷贝数水平的关系。
结果在300例接受筛查的女性中，宫颈脱落细胞HPVE6/E7mRNA 阳性210例（70.0%）、TCT阳性184例（61.3%），HPV E6/E7mRNA阳性率随宫颈病理组织学分级的升高而增高，不同宫颈病理组织学分级女性的阳性率比较差异有统计学意义（P<0.05），但不同宫颈病理组织学分级女性的TCT 阳性率比较差异无统计学意义（P>0.05）。
以宫颈病理组织学检查结果作为诊断金标准，根据女性宫颈脱落细胞HPV E6/E7mRNA检测结果诊断宫颈癌的灵敏度为89.0%、特异度为73.6%、阳性预测值为88-6%%阴性预测值为74.4%；根据女性宫颈脱落细胞TCT检测结果诊断宫颈癌的灵敏度为71.8%、特异度为62.6%、阳性预测值为81.5%、阴性预测值为49-1%。
女性宫颈脱落细胞HPV E6/E7mRNA载量水平随其宫颈病理组织学分级升高而增高Spearman相关分析结果显示，女性宫颈病理分级与其宫颈脱落细胞HPV E6/E7mRNA拷贝数水平呈正相关（s=0.612，P=0.009）o结论女性宫颈脱落细胞HPVE6/E7mRNA的表达水平与其宫颈病变的严重程度密切相关，HPV E6/E7mRNA检测诊断宫颈癌的效能优于TCT检测。
