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实验4 酵母RNA的分离及组分鉴定酵母RNA是由酵母细胞合成的核糖核酸，包含了酵母细胞的遗传信息，并参与了细胞的生理代谢过程。
本实验旨在通过离心分离和酸性酚/氯仿法提取，纯化酵母RNA，并通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳等方法对酵母RNA进行组分鉴定。
一、材料与方法1.材料酵母细胞、DTT、Tris、EDTA、NaCl、硝酸、醋酸等。
2.方法1)制备样品a.在液氮中将酵母细胞粉磨成细粉；b.称取10mg酵母细胞粉末加入1ml去离子水中，振荡混匀，制成1mg/ml的酵母细胞悬液。
2)离心分离a.取1ml稀释后的酵母细胞悬液，离心10000rpm/10min，弃去上清液；b.用10μl无菌去离子水重悬沉淀，制成1mg/ml的RNA悬液。
3)RNA的提取和纯化a.取1ml离心沉淀物加入700μl去离子水，混合均匀，加入100μl10%SDS和100μl 酸性酚(pH4.5)混合，振荡15min；b.加入300μl氯仿，振荡混合，离心12,000g/10min；c.取上层水相(约600μl)，加入等量异丙醇混合，振荡；d.离心12,000g/5min，弃去上清液，将胶状RNA沉淀用70%酒精重悬，制成1mg/ml的RNA溶液。
4)鉴定RNAa.测定RNA含量和纯度b.通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA条带。
c.用紫外吸收光谱测定RNA吸收光谱曲线。
5)结果分析a.通过鉴定RNA的吸收峰和电泳图谱来分析RNA组分。
二、实验结果1.酵母RNA提取和纯化效果良好，制得1mg/ml的RNA溶液。
2.根据紫外吸收光谱结果，可以看到RNA在260nm的吸收峰高于280nm，证明纯化后的RNA具有良好的纯度。
3.琼脂糖凝胶电泳显示，RNA溶液中有一个清晰的28S条带和一个模糊的18S条带，证明RNA转录水平较高。
三、讨论和结论通过离心分离和酸性酚/氯仿法提取纯化酵母RNA，可以得到高质量和高纯度的RNA样品。
此外，琼脂糖凝胶电泳和紫外吸收光谱可以对RNA组分和质量进行鉴定，为后续的RNA研究提供了有价值的基础数据。
酵母RNA的提取（浓盐法）及成分鉴定一、实验目的：1、掌握浓盐法提取RNA的原理和方法。
2、理解等电点沉淀分离两性物质的原理和基本操作。
3、掌握钼蓝反应的原理，了解戊糖和嘌呤检验的原理。
二、实验原理：1、浓盐法提取酵母RNA：酵母中RNA含量特别多，约占干重的3～10％，DNA含量很少，约占干重的0.5％或更少，且菌体容易收集（即可利用发酵工业的下脚料），因此多采用酵母来提取RNA。
；本实验采用工业上常用的浓盐法，其基本原理是在浓盐加热的条件下酵母细胞壁通透性增加或发生破损，且加热又可使酵母中蛋白质变性沉淀，使RNA以可溶性钠盐的形式游离析出。
离心去除菌体，将上清液调至RNA的等电点（pH2～2.5），使RNA沉淀析出，离心收集沉淀。
2、RNA成分鉴定:RNA酸解，其水解产物含有碱基+核糖+磷酸；碱基（嘌呤）：磷酸：核糖：戊糖在约12％的盐酸中可以发生脱水缩合成为糠醛，糠醛可与5-甲基间苯二酚(又称苔黑酚、地衣酚)缩合生成蓝绿色的物质。
该反应用于检验戊糖的存在。
三、实验步骤：1.浓盐法提取酵母RNA（1）RNA的提取：取干酵母一包（约1～2g）放入100mL锥形瓶内，加入10％NaCl溶液30mL，搅匀后将锥形瓶固定在水浴锅内，于沸水浴中加热40分钟。
（2）RNA的离心分离：将上述锥形瓶从沸水浴中取出，立即用自来水冷却至室温。
然后将锥形瓶内溶液倒入离心管，平衡后3000转／分离心10分钟,收集上清液。
（3）RNA的收集：将上清液小心倾入50mL烧杯内，在冰浴中冷却。
用6mol/LHCl溶液调pH值至RNA的等电点2.0～2.5（一滴一滴的加入，边加边搅拌，随着pH下降，白色RNA沉淀逐渐增加，至等电点时沉淀最多）。
静置冰浴中5分钟使沉淀完全，颗粒变大。
再经3000转／分离心10分钟，收集沉淀。
2.RNA成分鉴定（1）溶解RNA：在离心所得的含RNA的离心管中加入1滴蒸馏水，用玻棒把RNA搅成糊状，再加入蒸馏水至mL，然后一边搅拌一边加入5%氨水1滴，将溶液调至pH=6，使白色RNA沉淀完全溶解，成为RNA溶液。
※实验六酵母RNA的分离及组分鉴定【实验目的】了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
【实验原理】酵母核酸种RNA含量较多。
RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀。
由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。
加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
鉴定依据：磷酸与定磷试剂反应产生蓝色物质。
核糖与苔黑酚作用产生绿色物质。
嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤碱银化合物沉淀。
【实验器材】150ml锥形瓶、水浴、量筒、漏斗及抽虑瓶、吸管7、滴管8、试管及试管架9、烧杯、离心机、漏斗【试剂和材料】1、0.04 mol/L氢氧化钠溶液；2、酸性乙醇溶液：将0.3毫升浓盐酸加入30毫升乙醇中；3、95%乙醇；4、乙醚；5、1.5 mol/L硫酸溶液；6、浓氨水；7、0.1 mol/L硝酸银溶液；8、三氯化铁浓盐酸溶液：将2 ml 10%三氯化铁溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入到400ml浓盐酸中；9、苔黑酚（地衣酚）乙醇溶液：溶解6 g苔黑酚于100 ml 95%乙醇中（可在冰箱中保存一个月）；10、定磷试剂：（1）17%硫酸溶液：将19ml浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83ml水中（2）2.5%钼酸铵溶液：将2.5 g钼酸铵溶于100 ml水中（3）10%抗坏血酸溶液：10g抗坏血酸溶于100ml水中，贮棕色瓶保存（溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失败，需纯化抗坏血酸）。
临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。
17%硫酸溶液：2.5%钼酸铵溶液：10%抗坏血酸溶液：水=1：1：1：2 (V/V)；11、酵母粉。
【实验操作】1、溶解RNA将5 g酵母悬浮于90 ml 0.04 mol/L氢氧化钠溶液于150 ml锥形瓶中，在沸水浴中加热30分钟，制成碱提取液，将其冷却。
2、解聚RNA将冷却的碱提取液离心（6000ｒ/min）5分钟，将上清液用乙酸调节pH至酸性（pH5~6））缓缓倾入30 ml乙醇溶液中，注意要一边搅拌一边缓缓倾入。
rna的提取与鉴定实验报告一.原理本方法利用盐酸胍抑制RNA酶，匀浆裂解细胞，采用有机溶剂抽提去除蛋白质。
通过选择性沉淀RNA分子去除DNA。
二.方法1.样品处理⑴非政府样品处置：挑新鲜的非政府样品称量后，抠碎约1cm2的非政府块轻易重新加入坯浆液中展开RNA抽取，或液氮中速冻-70℃留存。
⑵贴壁培养细胞处理：用PBS洗细胞一次，吸干溶液后将培养板快速移至液氮中冷冻后转到-70℃保存；或加入1ml匀浆至培养板中直接裂解细胞，然后将粘稠的裂解液进一步匀浆。
⑶漂浮培育细胞处置：Vergt搜集细胞，用PHS漂浮冲洗再田心搜集，若不立即抽取RNA，则可以经液氮速冻后转往一70℃储藏水泵。
2.加l倍体积盐酸胍匀浆液[至准备好的样品细胞中，高速匀浆1min。
3.坯浆液g，室温Vergt10min。
4.将上清移至一个干净离心管中，加入0.1体积的3mol/L乙酸钠（PH5.2），混匀，再加5体积预冷的乙醇，立即充分混匀，-20℃放置至少2小时。
5.g 0℃Vergt10分钟结晶核酸，弃上清液，室温潮湿。
6，每个提取RNA的组织或细胞样品中，加入l0～15min盐酸胍匀浆液Ⅱ，搅拌溶解。
7.重新加入2.5体积预冷的乙醇，立即充份搅匀，-20℃至少置放2小时。
8.g 0℃离心10分钟沉淀核酸，去上清，室温挥发乙醇。
9.按每克组织细胞提5min的比例.分后两次重新加入0.02mol/L EDTA(pH8.0) 先加1/2体积EDTA震荡l～2分钟，gVergt2min.取出上清.再加另一个1/2体积的EDTA震荡l一2分钟.分拆两次核酸熔化液。
.10.用等体积氯仿―正丁醇(4：1)抽提核酸溶液，g室温离心l0min，g室温离心10min。
吸出上清至另一个干净离心管中。
11.提3倍体积lmol/L乙酸钠 (PH7.0) 搅匀，-20℃置放1h以上，此时RNA将选择地结晶，而DNA仍为熔化状况。
12.g，0℃离心20min，沉于管底的是RNA。
