马铃薯组织培养

马铃薯组织培养1、繁殖瓶苗将待繁脱毒苗在无菌条件下每叶节切一段，接种在仅含大量元素、微量元素和铁盐的无激素M S固体或液体（可用纸桥）培养基的组培瓶中，置培养室内培养。

培养条件为：光照1000-3000lx,光周期13-16h/d,培养温度（25±2）℃，空气相对湿度50%-60%，自然通风。

叶节段接种30-50d后长成3-5片叶的幼苗。

记录苗芽发生时间，生长状况，污染率。

再按照上述方法重复进行扩繁，直到达到要求繁殖数量为止。

2、繁殖微型薯将上述具有3-5片叶幼苗，加入液体培养基（MS+BA2-10mg/L)或（MS+BA2-10mg/L+IAA1m g/L+CCC100-500mg/L+糖80-100g/L),放入培养室，遮光全黑暗或光照时数少于8h/d，温度（20±2）℃，空气相对湿度50%-60%，自然通风。

经40-70d后，在植株叶腋处长出微型薯。

记录微型薯发生时间，生长状况，污染率。

马铃薯组织培养及原原种生产技术摘要：本文作者根据自己多年的工作经验，详细地介绍了马铃薯组织培养方法和原原种生产技术。

关键词：马铃薯组织培养原原种生产技术病毒和类病毒的累积性感染是引起马铃薯种性退化的重要因素，而通过组织培养获取无病毒种薯来恢复种性的方法已被马铃薯生产地区广泛采用。

现将马铃薯组织培养方法和原原种生产技术介绍如下：1 马铃薯组织培养1.1外植体培养从已催出芽（芽长一般2—4cm）的干净健康马铃薯块茎上掰下芽，用自来水冲洗干净，放入0.1—0.15%的升汞溶液中浸泡8—10分钟，在超净工作台上消毒完后，放入无菌水中浸泡6次，每次5分钟，然后接种到MS＋6－BA1.5mg/L （毫克/升）＋GA30.5mg/L＋IBA0.5mg/L＋琼脂8g/L＋蔗糖30g/L（PH值为5.8）的培养基上，每个培养瓶接种1—5个外植体。

1.2茎尖剥离及初代培养外植体培养20天后，在超净工作台上解剖镜下用解剖针将生长点0.1——0. 5mm部分剥离出来，转接到MS＋肌醇100mg/L+6－BA1.5mg/L＋GA30.5mg/L＋泛酸钙1.5mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂8g/L＋活性炭0.17g/L（PH值为5.8）的培养基上，每个培养瓶接种4—5个生长点。

马铃薯组织培养前言：马铃薯组织培养的意义 .马铃薯（Solanum tuberosum）属茄科茄属植物! 常见的育种途径有: 常规二倍体杂交法,四倍体水平的品种间杂交法,远缘种间杂交法 ,2n配子利用法。

这些途径都是通过有性生殖产生马铃薯变异体，通过系谱，回交，轮回选择的方法，需经过6-8代选出附合目标性状的新个体。

进入 20世纪90年代后，随着生物技术的深入发展，人类对植物细胞遗传行为，基因表达传递行为达到分子水平深入了解，作物育种工作者开始引入了除单纯户外有性杂交育种之外，又一育种方法室内体细胞无性系变异育种法，其中组织培养（tissue culture）诱导再生植株的突变就是最常用的一种。

当马铃薯外植体（茎尖脱毒分生组织）培养时，由于组培环境引发了细胞异染色质 DNA延迟复制, 产生了较田间自然突变率高出500倍的大量变异。

这一现象已越来越被马铃薯育种工作者所认可，并成为一条马铃薯育种的有效途径。

现从组织培养及组织培养在马铃薯育种上的发展历史，研究意义，研究方式以及未来展望等方面逐一论述。

马铃薯的市场效益（为什么选马铃薯作试验材料）马铃薯是世界上仅次于小麦、水稻和玉米的第四种主要农作物就单位面积出产的干物质而言，它高于小麦、大麦和玉米，就单位面积出产的蛋白质而言，分别为小麦、水稻和玉米的2.02，1.33和1.20倍。

目前我国马铃薯常年种植面积为467万公顷左右，鲜薯年总产量5 500万吨，居世界第一位。

种植区域主要分布在黑龙江、吉林、内蒙古、山西、甘肃、青海、云南、贵州、四川等广大地区。

但是我国的马铃薯加工业发展十分缓慢，基本上以鲜食为主，少部分用于传统食品加工和制取粗淀粉，深加工产品很少，而且加工生产规模小，工艺落后。

20世纪90年代国内以马铃薯为原料的食品工业进入了一个蓬勃发展的时期然而产品与外同类产品相比，无论是在色泽、口味、品质，还是在包装上均存在一定差距。

马铃薯块茎水分多、脂肪少、单位体积的热量相当低，所含的维生素C是苹果的10倍，B族维生素是苹果的4倍，各种矿物质是苹果的几倍至几十倍不等，土豆是降血压食物膳食中某种营养多了或缺了可致病。

马铃薯组织培养苗真菌污染原因及防治马铃薯组织培育中，真菌污染比较常见，找准污染缘由，做好防治是提高微型薯产量和质量的关键措施。

一、马铃薯组培苗真菌污染的缘由
1、培育基污染：可能是灭菌不彻底，封口材料老化、密封性差造成的；
2、组培苗带菌：主要是由于接种材料本身带菌，但前期菌量少未表现出来，接种后菌量富集而污染；
3、接种室或培育室真菌孢子浓度过大；
4、接种器械灭菌不彻底；
5、超净台不干净。

二、防治马铃薯组培苗真菌污染的措施
1、灭菌前先检查封口材料是否完好，密封性是否强；常常检查灭菌锅的灭菌质量，如有问题应马上检修；灭菌锅内的灭菌材料不能堆放过满，以免影响蒸汽的流通和热交换；冷空气要彻底排放洁净，以免导致灭菌锅内的实际温度与压力表上的温度不全都；升降温速度不能太快。

2、继代培育中若有真菌污染应采纳30g/L的多菌灵无菌水溶液浸泡半个小时以上，用无菌水冲洗后接种或直接接种。

3、针对接种室或培育室内的真菌孢子浓度过大造成的污染，应实行75%的乙醇溶液定期喷雾降尘，杀灭空气中的孢子，以保持室内清洁。

4、接种器械定期放入灭菌锅内灭菌，接种时要勤换工具以免交叉污染，接种过程中要常常对接种器械进行彻底消毒。

5、定期对超净台进行清理检修。

灭菌前超净台内的紫外灯要开30分钟以上，接种时超净台上的空白培育基不能堆放过多，否则造成气流不畅。

6、接种过程中要严格根据操作规程进行，常常用75%的乙醇擦拭双手。

7、接种前认真检查基础苗是否污染，对选择来的基础苗容器外壁用75%的乙醇进行彻底消毒。

马铃薯组培生产流程介绍马铃薯组培是一种无性繁殖技术，通过将马铃薯的离体培养提供适宜的营养条件和激素刺激，使其快速增殖。

组培技术被广泛应用于马铃薯种苗生产、病毒清除和基因转化等领域。

下面将详细介绍马铃薯组培的生产流程。

步骤一：材料准备与消毒1.选择适宜的母本马铃薯作为组培的起始材料。

母本应选取无病虫害、无病毒污染、形状规则的健康马铃薯。

2.将选取的母本进行消毒处理。

首先用水清洗去除表面的土壤和杂质，然后将马铃薯浸泡在10%含氯消毒液中，保持30分钟。

之后，用去离子水反复冲洗3-4次，确保彻底去除消毒剂。

步骤二：组织切割1.将消毒后的马铃薯切割成5mm×5mm的组织块，每块含有一个芽眼。

切割时要确保刀具和工作台的消毒，避免污染。

2.切割好的组织块放入含有抗生素的高浓度杀菌剂中，进行再次消毒处理，时间为30分钟。

步骤三：愈伤组织诱导1.将消毒后的组织块放置在含有适宜激素的培养基上，培养基中添加有机植物激素，如生长素（NAA）和维生素B6（PA）等，以促进愈伤组织的形成。

2.将培养瓶或培养皿密封，放置在光照适宜、温度适宜、湿度适宜的培养箱中。

通常，培养温度为20-25摄氏度，光照强度为3000-5000勒克斯，湿度控制在60-70%。

步骤四：愈伤组织块增殖1.经过适当时间的培养（通常为4-6周），愈伤组织块开始增殖。

此时，可以将它们转移到新的含有低浓度激素的培养基中，以促进增殖。

常用的增殖培养基包括MS培养基、SH培养基等。

2.愈伤组织块的增殖可分为两个阶段，即缩小增殖和快速增殖。

在缩小增殖阶段，愈伤组织块的增殖速度较慢，所需时间较长。

而在快速增殖阶段，增殖速度显著加快，愈伤组织块数量迅速增加。

步骤五：愈伤组织分化1.当愈伤组织块增殖至一定数量时，可以进行愈伤组织的分化。

将增殖后的组织块转移到含有适宜激素的培养基中，培养出新的植株。

2.分化培养基的选择要根据所要培养的植株部位而定。

例如，若要培养出根系，可选择含有较高浓度生长素（IBA）的培养基；若要培养出茎叶，可选择含有较高浓度细胞分裂素（KT）的培养基。

马铃薯组织培养技术综述摘要：马铃薯是我国重要粮食作物之一，其组织培养技术日益成熟，目前已大量应用于生产实践和科学研究。

掌握马铃薯组织培养的基本原理与方法，了解影响培养结果的因素，有利于完善培养技术，解决马铃薯组织培养过程中的常见问题如污染、褐变和玻璃化等。

目前国内专述马铃薯组织培养技术的文献不多，本文参考相关研究，就上述方面对马铃薯组织培养技术进行综述。

关键词：马铃薯；组织培养；影响因素；常见问题。

1 前言植物组织培养是指从植物体内取出组织或细胞，在离体的条件下模拟体内的生理环境，使其生存、生长、繁殖，近年来在生产实践上显示出广泛的应用前景。

马铃薯属茄科茄属植物，是粮菜兼用作物，产量仅次于水稻、小麦、玉米，居世界第四位，我国是种植面积最大的国家【1】。

马铃薯生产中多采用块茎进行无性繁殖，在其繁殖过程中，易受病毒和细菌侵染导致产量下降，经数代积累可使种性退化【2】。

通过植物组织培养技术，可以生产马铃薯的脱毒苗，缩短其生长周期，进行批量快速繁殖。

除了满足生产实践的需要，在科学研究上马铃薯是细胞培养和农杆菌介导转化的模式植物之一。

因此，马铃薯组织培养是植物组织培养技术的重要应用领域。

2 植物组织培养概述植物细胞具有全能性。

细胞全能性是指植物体任何一个细胞都携带者一套发育成完整植株的全部遗传信息，在离体培养情况下，这些信息可以表达产生出完整的植株。

根据这一理论，植物组织培养技术在20世纪初建立起来，至今发展已比较成熟，而且随着研究的深入不断涌现新的技术。

植物组织培养需要经过脱分化和再分化的过程。

分化了的植物根、茎、叶细胞，通过脱分化培养可以产生愈伤组织。

愈伤组织是一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团。

愈伤组织经过进一步的分化培养，提供不同的营养和激素成分，又可再生出完整的小植株。

植物组织培养常见应用领域包括脱毒和快速繁殖、育种研究、低温储存及种质库的建立、药物及其他生物制剂的工业化生产等【3】。

3 马铃薯组织培养技术3.1基本方法3.1.1表面灭菌由于在培养基上，真菌和细菌的生长远远快于植物试材，导致过盛生长而杀死植株。

马铃薯组培生产流程马铃薯组培生产流程马铃薯是世界上重要的粮食和工业作物之一。

传统的马铃薯种植方法存在许多问题，如土壤污染、病虫害等，给农民带来很大的经济损失。

为了解决这些问题，马铃薯组培生产技术应运而生。

本文将介绍马铃薯组培生产的主要流程。

1. 材料准备组培生产的第一步是收集马铃薯的组织细胞。

通常，我们会选用新鲜、健康的马铃薯作为材料。

然后，将马铃薯切成小块，用含有植物生长素和细胞分裂素的培养基进行处理。

2. 培养基制备培养基是组培生产的关键。

它提供了细胞分裂和植物成长所需的营养和激素。

通常，马铃薯培养基中含有葡萄糖、无机盐、维生素和胰蛋白胨等物质。

3. 细胞培养与增殖将经过处理的马铃薯细胞块放入培养基中，并在暗室中进行保温处理，使其不受外界干扰。

此时，细胞逐渐长成植物体，并逐渐增殖。

4. 植株分化将培养好的细胞块移植到含有植物生长素和细胞分裂素的新培养基中，可以促进细胞的不定向分化，形成不定芽、根和茎。

然后，将不定芽、茎、叶和根分开移植，进行标准化处理和定向培养，最终形成真正的植株。

5. 普通育苗和大田试验植株培育好之后，将其移植到普通的苗床中进行管理。

在它们长成健康的马铃薯苗后，会进行大田试验，以确保它们在真实环境下的适应性和生产能力。

6. 入市销售经过上述步骤的马铃薯植株可以投放市场销售，它们可以用来繁殖更多高质量的马铃薯，并在硬化、销售和应用等环节进行处理。

通过以上流程，马铃薯组培生产技术可以确保生产出高品质、高产量的马铃薯，从而提高效率降低成本，增加农民收入。

这种技术也可以避免植物疾病的传播和土壤污染等问题，减少对环境的影响，是一种非常值得推广的作物生产技术。

一、实验目的1. 学习植物细胞培养的基本原理和方法。

2. 掌握马铃薯细胞培养的实验操作技能。

3. 熟悉植物组织培养过程中的无菌操作和注意事项。

二、实验原理马铃薯细胞培养是利用植物组织培养技术，将马铃薯的愈伤组织或胚性细胞在体外培养条件下，使其生长发育成为完整的植株。

实验过程中，通过添加适当的植物激素和营养物质，调控细胞分裂和分化，实现马铃薯的再生。

三、实验材料1. 马铃薯：选用新鲜、无病虫害的马铃薯块茎。

2. 试剂：MS培养基、活性炭、琼脂、蔗糖、氮源、磷源、微量元素、植物激素等。

3. 仪器：超净工作台、高压蒸汽灭菌器、显微镜、移液器、培养皿、剪刀、镊子等。

四、实验步骤1. 马铃薯块茎表面消毒：用75%乙醇对马铃薯块茎进行消毒，然后用无菌水冲洗3次。

2. 块茎切块：将消毒后的马铃薯块茎切成1cm×1cm的小块，去除芽眼。

3. 外植体表面消毒：用75%乙醇对切块的马铃薯进行消毒，然后用无菌水冲洗3次。

4. 培养基制备：配制MS培养基，加入适量的活性炭、蔗糖、氮源、磷源、微量元素和植物激素。

5. 培养基灭菌：将配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌器中，121℃灭菌20分钟。

6. 培养基冷却：待培养基冷却至50℃左右，加入琼脂，搅拌均匀。

7. 培养基倒平板：将冷却后的培养基倒入培养皿中，待凝固后，用无菌镊子将外植体接种于培养基表面。

8. 培养条件：将接种好的培养皿放入培养箱中，保持25℃、光照强度为2000lx、光照时间12小时。

9. 观察记录：每隔一定时间观察马铃薯细胞培养的生长情况，记录细胞分裂、分化、生根、发芽等过程。

五、实验结果与分析1. 马铃薯细胞培养初期，外植体表面出现少量愈伤组织，细胞分裂旺盛。

2. 经过一段时间培养，愈伤组织逐渐增多，细胞分裂速度加快，形成愈伤组织块。

3. 随着培养时间的延长，愈伤组织块逐渐分化出芽和根。

4. 芽分化过程中，细胞分裂速度减慢，芽长出叶和茎。

5. 根分化过程中，细胞分裂速度加快，根逐渐伸长。

马铃薯组织培养简化脱毒技术
马铃薯是我国重要的蔬菜作物之一，具有高蛋白、高淀粉、高营养价值，是人们必不
可少的食品之一。

然而，在种植和生产过程中，马铃薯会遭受各种病害和虫害的侵害，如
果不进行科学有效的防治，将会严重影响马铃薯的生产和收成。

其中，病毒病是马铃薯种
植中主要的一种病害，如果不及时控制，将对马铃薯产生较大的危害。

为了解决这个问题，科学家们开发了一种名为“组织培养简化脱毒技术”的方法，该
技术可以有效地使马铃薯保持无病毒状态，同时提高其种植质量和产量。

组织培养简化脱毒技术是一种采用组织培养和简化脱毒技术相结合的马铃薯繁殖方法。

该方法要先从健康的母株中取出组织，再将其在营养剂和生长抑制剂的作用下进行培养，
使其形成小植株，再进行脱毒处理，最后将其移栽到田间进行种植，达到规模化繁殖的目的。

这种技术的主要优点在于其快速、高效、节约的特点。

与传统的马铃薯种植方法相比，组织培养简化脱毒技术可以迅速获得种植质量稳定、无病毒、高产的马铃薯，并且可以大
大降低种植成本。

但是，组织培养简化脱毒技术也具有一定的局限性。

首先，它需要高水平的技术人员
操作，普通农民应用难度较大；其次，它的操作过程需要比较严格的环境和设备控制，对
研究条件提出了较高的要求；再者，该技术的成功率也与所选用的材料有关，在选材上也
需要有比较严格的要求。

总之，组织培养简化脱毒技术是一种非常有效的马铃薯繁殖方法。

它可以为农民提供
更为优质的马铃薯种苗，并且可以大大提高马铃薯的种植效益，但是该技术在操作和选材
上都存在一定的难度，需要科学家们进一步研究和优化。

马铃薯脱毒种苗组织培养技术要点班级：园艺112 姓名：马寅学号：201101070202摘要：各种病毒、真菌、细菌等对马铃薯的侵染是导致我国马铃薯单产较低的主要原因，马铃薯脱毒种苗有巨大应用前景。

本文综合介绍了茎尖培养脱毒法组织培养的各技术要点，收集前沿技术信息。

论述了马铃薯脱毒种苗组织培养过程中以及移栽处理。

关键词：马铃薯脱毒种苗组织培养移栽1、马铃薯产业现状及危害其生产的主要因素栽培种的马铃薯(SolanumtuberosumL．，2n=48)是双子叶种子植物．属茄科(Solanaceae)茄属(Solanum)一年生喜凉草本植物【l】。

又名洋芋、土豆，原产南美洲，在我国已有300多年的栽培历史。

马铃薯生育期短，产量高，营养丰富，是典型的粮菜两用型作物，是我国四大栽培作物之一。

【2】世界马铃薯面积分布的最大特点是以欧、亚两洲种植为主，两者种植面积占世界马铃薯总面积的78％，其中中国、俄罗斯、乌克兰、印度四大生产国占世界种植面积的1／2 。

而马铃薯的发源地南美洲种植面积只占世界马铃薯总面积的5％。

除整个美洲大陆保持相对稳定外，欧洲的种植面积在持续减少，而亚洲、非洲的种植面积在不断增加。

马铃薯在生产上绝大多数是利用块茎进行无性繁殖。

国际马铃薯中心(CIP)和国际食品政策中心(IFPRI)合作研究表明，到2020年为止，全世界对马铃薯的需求将有望增长40％。

超过水稻、小麦和玉米的增长。

特别是亚洲和非洲对马铃薯的需求将增长更快。

[1]2、马铃薯组织培养的理论体系及研究现状2.1组织培养及马铃薯组织培养的发展史19世纪30年代，德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺创立了细胞学说，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活；1902年，德国植物学家哈伯兰特细胞全能性的理论是植物组培的理论基础。

1958年，一个振奋人心的消息从美国传向世界各地，美国植物学家斯蒂瓦特等人，用胡萝卜韧皮部的细胞进行培养，终于得到了完整植株，并且这一植株能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。

马铃薯组织培养实验室基本规划和设备配置马铃薯在生产中多采用块茎进行无性繁殖马铃薯在生产中多采用块茎进行无性繁殖, , , 繁殖过程中易受病毒和细菌侵繁殖过程中易受病毒和细菌侵染而导致产量下降染而导致产量下降, , , 经数代积累可使种性退化。

经数代积累可使种性退化。

利用无菌操作通过组织培养技术利用无菌操作通过组织培养技术, , 不仅可产生脱毒试管苗不仅可产生脱毒试管苗, , , 还可缩短生长周期还可缩短生长周期还可缩短生长周期, , , 进行大批量快速繁殖。

进行大批量快速繁殖。

在进行组织培养工作之前，应对所需基本设备条件进行全面了解，应对所需基本设备条件进行全面了解，以便因地制宜利用现有资以便因地制宜利用现有资源新建或改建实验室。

在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序进行没计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。

实验室大小则取决于工作目的和规模，以工厂化生产为目的，实验室规模太小则会限制生产和影响效率。

实验室规模太小则会限制生产和影响效率。

马铃薯组织培马铃薯组织培养是在无菌条件下进行的，实验室设计原则应严格保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。

防止污染。

一、 实验室基本规划1.1. 准备室功能：主要进行一切与实验有关的工作，完成所使用的各种药品的贮藏、称量、溶解、培养基配置与分装、培养材料的预处理等。

要求：宽敞明亮，便于放置多个实验台和相关设备，方便多人同时工作；通风条件好，便于气体流通；地面整洁，进行防滑处理。

设备：要求具有各种化学药品试剂、各种玻璃器皿、称量天平、电磁炉等。

2.2. 洗涤灭菌室功能：主要进行各种器皿的洗涤、干燥、保存和培养基的灭菌等。

要求：实验室一侧设置专用的洗涤水槽，地面耐湿并有良好的排水装置。

设备：水池、落水架、烘箱、高压灭菌锅等。

3.3. 接种室功能：主要进行马铃薯材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序，是植物离体培养研究或生产中最关键的一步。

粮油农资的配组方案较为自由，但由于我国目前的农业生产中，三系杂交水稻育种技术的应用程度较高且范围交广，故两系杂交水稻育种技术在发展过程中会受到传统技术的限制。

为降低我国粮食的生产风险，在水稻种子的强优组合选配方面，我国杂交水稻的未来发展趋势必然会朝向自由化与基因化的方向发展，通过大量的测交配组实验，来实现水稻品种的丰富化与多样化，使恢复系育种技术能够取得更先进的成果。

而两系杂交水稻育种技术，也能够与三系杂交水稻育种技术相互竞争与合作，并逐渐获得发展的机会，最终取代传统的三系杂交水稻育种技术的存在与应用，使我国的水稻农业生产迈向新的时代。

我国农业科学家可以通过基因工程来进行稻种培育，尽管当下的科学技术还未能够对转基因生物的安全性的得以证明，但不同领域的基因工程已经得到了良好的发展，通过研究过程的不断深入，才会对粮食方面的安全性探索出解决办法，故杂交水稻的基因工程，将会对育种技术起到良性推动作用。

杂交水稻高产育种技术为我国实现粮食高产提供了技术支持，在现代农业生产技术上更实现了重要突破，悉数我国杂交水稻技术的发展历程，也反应出我国综合国力的提升。

作为农业生产大国，我国对杂交水稻高产育种技术的研究从未停止，相关农业科学家更应利用当下时代的基因工程研究，对水稻的进一步高产作出更深层次的探究，为全人类的粮食生产贡献力量。

马铃薯组织培养技术研究进展高龙梅，吴明阳，刘小英，杨小丽，李　益，胡振兴（四川省达州市农业科学研究院，四川 达州　635000）摘要：马铃薯组织培养技术被广泛应用在马铃薯育种、脱毒快繁等应用研究方面，以及细胞、组织的代谢生理及生化方面的基础理论研究上，具有十分重要的意义。

文章对马铃薯组织培养中外植体材料的选择及预处理、愈伤组织的诱导和继代培养、再生植株的诱导三个方面进行了归纳和总结。

关键词：马铃薯；组织培养；外植体；愈伤组织马铃薯组织培养是指通过无菌操作将马铃薯植株上的器官或组织的片段（外植体）切取下来，接种到培养基上，在人工控制的条件下进行培养，使其产生完整植株的过程，主要包括外植体的选择及预处理、愈伤组织的诱导和继代培养、愈伤组织分化为再生植株等步骤。

一、实验目的1. 了解马铃薯组织培养的基本原理和方法。

2. 掌握马铃薯愈伤组织诱导、分化以及试管苗生根的技术。

3. 通过实验，提高学生对植物组织培养技术的实际操作能力。

二、实验材料与试剂1. 实验材料：马铃薯（品种：紫花1号）、无菌手术刀、无菌镊子、无菌培养皿、酒精、氯化汞、无菌水、蒸馏水等。

2. 试剂：MS培养基、琼脂、葡萄糖、硝酸铵、氯化钾、硫酸镁、硼酸、钼酸铵、维生素、生长素、细胞分裂素等。

三、实验方法1. 马铃薯外植体消毒与接种（1）将马铃薯块茎用流水冲洗干净，去皮，切成0.5cm×0.5cm的小块。

（2）用75%酒精对马铃薯小块进行消毒处理，时间为30秒。

（3）用无菌水冲洗3-5次，去除残留的酒精。

（4）将消毒后的马铃薯小块接种到MS培养基上。

2. 马铃薯愈伤组织诱导（1）将接种后的培养基置于培养箱中，温度控制在25℃、光照时间为12小时/天。

（2）观察愈伤组织诱导情况，记录愈伤组织的颜色、质地和生长速度。

3. 马铃薯愈伤组织分化（1）将诱导出的愈伤组织转接到分化培养基上。

（2）观察愈伤组织分化情况，记录分化出的芽、根和苗的数量。

4. 马铃薯试管苗生根（1）将分化出的试管苗移栽到生根培养基上。

（2）观察试管苗生根情况，记录生根时间和生根数量。

四、实验结果与分析1. 马铃薯外植体消毒与接种实验结果表明，消毒后的马铃薯小块在接种后能够正常生长，表明消毒效果良好。

2. 马铃薯愈伤组织诱导实验结果表明，在MS培养基上诱导的马铃薯愈伤组织呈白色、质地松软，生长速度较快。

3. 马铃薯愈伤组织分化实验结果表明，在分化培养基上诱导的马铃薯愈伤组织分化出较多的芽和根，表明分化效果较好。

4. 马铃薯试管苗生根实验结果表明，在生根培养基上移栽的马铃薯试管苗能够正常生根，生根时间较短，生根数量较多。

五、实验结论通过本次实验，我们成功掌握了马铃薯组织培养的基本原理和方法，包括马铃薯愈伤组织诱导、分化以及试管苗生根。

马铃薯的种植技术，附组织培养步骤选择种薯：要选择品种优良的种薯，一般选择表皮鲜艳且健康无畸形的马铃薯。

催芽处理：将选取的种子放在湿润且厚度在10cm左右的沙土中，平放种子，在上面覆盖一层5cm厚度的过筛沙土，浇水，保持土壤潮湿。

整地需求：栽种前消毒土壤，再浇入有机肥后进行松土。

入栽定植：栽种前在土表埋入少量稀薄的有机肥颗粒。

一、马铃薯的种植技术1、选择种薯种植马铃薯时，要挑选品种优良的种薯，一般选择表皮鲜艳且健康无畸形的马铃薯，再对其进行催芽处理。

2、催芽处理催芽处理是马铃薯种植技术中的关键，主要将选取的种子放在湿润且厚度在10cm左右的沙土中，将种子平放在里面，在上面覆盖一层5cm厚度的过筛沙土，用喷水壶进行浇水，保持土壤湿润状态，温度保持在20°C左右即可。

3、科学整地（1）栽种前需要将土壤进行消毒，消毒方法为喷洒稀薄的硫酸铜或者草木灰溶液，以防止病菌的滋生。

（2）基质应以疏松肥力足且富含有机质的土壤为主，马铃薯不适合连作，易发生病害，可在浇入有机肥后进行松土。

4、入栽定植（1）栽种前需要在土表埋入少量稀薄的有机肥肥粒，以加快根系的生长。

（2）一般早熟的种苗间距需保持在20公分左右，中熟品种的则在25公分左右，栽后覆盖一层6-10cm左右的细土，浇入水分后保湿，进行深耕处理。

5、栽后管理（1）如气温较低，需要在土壤上覆盖一层地膜，以免植株冻伤。

（2）在生长期间需控制温度在16°C-20°C左右，3月时可以打开地膜，利于通风，长势好的时候可追施1-2次的磷酸二氢钾，保持土壤湿润。

二、马铃薯的组织培养步骤1、什么是马铃薯的组织培养（1）马铃薯的组织培养是指，通过无菌操作分离马铃薯体的一部分（外植体explant），接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。

（2）主要有原生质体（Protoplast），悬浮细胞，组织（愈伤组织Callus、茎尖分生组织），器官（胚，花药，子房，根和茎的培养）。

马铃薯的块茎组织培养的研究生命科学学院生物工程132班组长：林伟平组员：温楚婷凌琦雯刘钰荧一,实验目的(1)以马铃薯的块茎为材料，研究经过器官分化或愈伤组织增殖与再分化途径，获得较多的试管苗，掌握植物快速繁殖的基本方法和过程。

(2)观察和分析不同糖类对外植体愈伤组织诱导，增殖和器官分化的影响。

二,实验原理在植物组织培养体系中，从外植体形成再生植株有不同的再分化途径，会受到培养基中不同浓度的糖的影响。

植物的快速无性繁殖是指以合适的外植体为起始材料，在无菌条件下，通过合适的培养技术，在有限的空间，短时间内快速生产大量植株的技术。

三,实验材料，试剂与器具(1)实验材料：马铃薯块茎(2)试剂：实验十一配制的各种培养基母液，蔗糖，葡萄糖，琼脂，蒸馏水，1mol/LHCl,1mol/LNaOH,HgCl或次氯酸钠，吐温20，75%乙醇或20g/L新洁尔灭，无菌水等。

(3)器具：高压灭菌锅，分析天平，酸度计，光照培养箱，微波炉，冰箱，培养架，果酱瓶，烧杯（1000mL,500mL,100mL,50mL）,移液管，量筒，不锈钢镊子，剪刀，解剖刀，脱脂棉，培养皿，称量纸，记号笔，标签纸，药匙，玻璃棒，洗耳球，洗瓶，电炉，酒精灯四,实验内容1,确定培养基配方，MS+2，4-D1.0mg/L+6-BA1.0mg/L+8g/L琼脂+不同浓度的葡萄糖/不同浓度的蔗糖（分别为1%，2%，3%，4%的葡萄糖或蔗糖）3,移液与溶化：将所需的各储存母液按顺序摆放好，将洁净的量筒，烧杯，移液管，玻璃棒，漏斗等放在指定的位置，准备好蒸馏水及瓶盖，包装纸等，取100mL小烧杯一只，用50mL 量筒量取大量元素，用各母液专用移液管分别吸取微量元素母液，铁盐母液，有机附加物母液，2，4-D母液，6-BA母液。

取1000ml烧杯一只，先用量筒取1000mL蒸馏水倒入烧杯中，用记号笔画好液位线，将蒸馏水倒出一半，准确称取8g琼脂倒入烧杯中，置于电炉煮沸，待琼脂完全溶化后，加入10g葡萄糖，充分溶解后，将准备好的含大量元素，微量元素，铁盐，有机附加物和植物生长调节物质的母液混合物倒入烧杯中，用蒸馏水将盛过母液混合物的小烧杯洗三次，一并倒入1000mL烧杯中，加热至沸腾，将烧杯远离火源，并加蒸馏水定容至设定的液位线。