植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法编制说明
- 格式:doc
- 大小:86.00 KB
- 文档页数:14
中华人民共和国农业部公告(第2258号、第2259号)佚名【期刊名称】《农产品质量与安全》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】4页(P75-78)【正文语种】中文第2258号编者按:《农产品等级规格评定技术规范通则》等131项标准经专家审定通过,由农业部于2015年5月21日批准发布为中华人民共和国农业行业标准,自2015年8月1日起实施。
序号标准号标准名称代替标准号1 NY/T 2714-2015 农产品等级规格评定技术规范通则2 NY/T 2715-2015 平菇等级规格3 NY/T 2716-2015 马铃薯原原种等级规格4 NY/T 2717-2015 樱桃良好农业规范5 NY/T 2718-2015 柑橘良好农业规范6 NY/T 2719-2015 苹果苗木脱毒技术规范7 NY/T 2720-2015 水稻抗纹枯病鉴定技术规范8 NY/T 2721-2015 柑橘商品化处理技术规程9 NY/T 2722-2015 秸秆腐熟菌剂腐解效果评价技术规程10 NY/T 2723-2015 茭白生产技术规程11 NY/T 2724-2015 甘蔗脱毒种苗生产技术规程12 NY/T 2725-2015 氯化苦土壤消毒技术规程13 NY/T 2726-2015 小麦蚜虫抗药性监测技术规程14 NY/T 2727-2015 蔬菜烟粉虱抗药性监测技术规程15 NY/T 2728-2015 稻田稗属杂草抗药性监测技术规程16 NY/T 2729-2015 李属坏死环斑病毒检测规程17 NY/T 2730-2015 水稻黑条矮缩病测报技术规范18 NY/T 2731-2015 小地老虎测报技术规范19 NY/T 2732-2015 农作物害虫性诱监测技术规范(螟蛾类)20 NY/T 2733-2015 梨小食心虫监测性诱芯应用技术规范21 NY/T 2734-2015 桃小食心虫监测性诱芯应用技术规范22 NY/T 2735-2015稻茬小麦涝渍灾害防控与补救技术规范23 NY/T 2736-2015 蝗虫防治技术规范24 NY/T 2737.1-2015 稻纵卷叶螟和稻飞虱防治技术规程第1部分:稻纵卷叶螟25 NY/T 2737.2-2015 稻纵卷叶螟和稻飞虱防治技术规程第2部分:稻飞虱26 NY/T 2738.1-2015 农作物病害遥感监测技术规范第1部分:小麦条锈病27 NY/T 2738.2-2015 农作物病害遥感监测技术规范第2部分:小麦白粉病28NY/T 2738.3-2015 农作物病害遥感监测技术规范第3部分:玉米大斑病和小斑病29 NY/T 2739.1-2015 农作物低温冷害遥感监测技术规范第1部分:总则30 NY/T 2739.2-2015 农作物低温冷害遥感监测技术规范第2部分:北方水稻延迟型冷害31 NY/T 2739.3-2015 农作物低温冷害遥感监测技术规范第3部分:北方春玉米延迟型冷害序号标准号标准名称代替标准号32 NY/T 2740-2015 农产品地理标志茶叶类质量控制技术规范编写指南33 NY/T 2741-2015 仁果类水果中类黄酮的测定液相色谱法34 NY/T 2742-2015 水果及制品可溶性糖的测定 3,5-二硝基水杨酸比色法35 NY/T 2743-2015 甘蔗白色条纹病菌检验检疫技术规程实时荧光定量PCR法36 NY/T 2744-2015 马铃薯纺锤块茎类病毒检测核酸斑点杂交法37NY/T 2745-2015 水稻品种鉴定SNP标记法38 NY/T 2746-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南烟草39 NY/T 2747-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南紫花苜蓿和杂花苜蓿40 NY/T 2748-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南人参41 NY/T 2749-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南橡胶树42 NY/T 2750-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南凤梨属43 NY/T 2751-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南普通洋葱44 NY/T 2752-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南非洲凤仙45 NY/T 2753-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南红花46 NY/T 2754-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南华北八宝47 NY/T 2755-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南韭48 NY/T 2756-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南莲属49 NY/T 2757-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南青花菜50 NY/T 2758-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南石斛属51NY/T 2759-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南仙客来52NY/T 2760-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南香蕉53 NY/T 2761-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南杨梅54 NY/T 2762-2015 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南南瓜(中国南瓜)55NY/T 2763-2015 淮猪56 NY/T 2764-2015 金陵黄鸡配套系57 NY/T 2765-2015 獭兔饲养管理技术规范58 NY/T 2766-2015 牦牛生产性能测定技术规范59 NY/T 2767-2015 牧草病害调查与防治技术规程60 NY/T 2768-2015 草原退化监测技术导则61 NY/T 2769-2015 牧草中15种生物碱的测定液相色谱-串联质谱法62 NY/T 2770-2015 有机铬添加剂(原粉)中有机形态铬的测定63 NY/T 2771-2015 农村秸秆青贮氨化设施建设标准64 NY/T 2772-2015 农业建设项目可行性研究报告编制规程65 NY/T 2773-2015 农业机械安全监理机构装备建设标准66 NY/T 2774-2015 种兔场建设标准67 NY/T 2775-2015 农作物生产基地建设标准糖料甘蔗68 NY/T 2776-2015 蔬菜产地批发市场建设标准69 NY/T 2777-2015 玉米良种繁育基地建设标准70 NY/T 2778-2015 骨素71 NY/T 2779-2015 苹果脆片72 NY/T 2780-2015 蔬菜加工名词术语73 NY/T 2781-2015 羊胴体等级规格评定规范74 NY/T 2782-2015 风干肉加工技术规范75 NY/T 2783-2015 腊肉制品加工技术规范76 NY/T 2784-2015 红参加工技术规范序号标准号标准名称代替标准号77 NY/T 2785-2015 花生热风干燥技术规范78 NY/T 2786-2015 低温压榨花生油生产技术规范79 NY/T 2787-2015 草莓采收与贮运技术规范80 NY/T 2788-2015 蓝莓保鲜贮运技术规程81 NY/T 2789-2015 薯类贮藏技术规范82 NY/T 2790-2015 瓜类蔬菜采后处理与产地贮藏技术规范83 NY/T 2791-2015 肉制品加工中非肉类蛋白质使用导则84 NY/T 2792-2015 蜂产品感官评价方法85 NY/T 2793-2015 肉的食用品质客观评价方法86 NY/T 2794-2015 花生仁中氨基酸含量测定近红外法87 NY/T 2795-2015 苹果中主要酚类物质的测定高效液相色谱法88 NY/T 2796-2015 水果中有机酸的测定离子色谱法89 NY/T 2797-2015 肉中脂肪无损检测方法近红外法90 NY/T 2798.1-2015 无公害农产品生产质量安全控制技术规范第1部分:通则91 NY/T 2798.2-2015 无公害农产品生产质量安全控制技术规范第2部分:大田作物产品92 NY/T 2798.3-2015 无公害农产品生产质量安全控制技术规范第3部分:蔬菜93 NY/T 2798.4-2015 无公害农产品生产质量安全控制技术规范第4部分:水果94 NY/T 2798.5-2015 无公害农产品生产质量安全控制技术规范第5部分:食用菌95 NY/T 2798.6-2015 无公害农产品生产质量安全控制技术规范第6部分:茶叶96 NY/T 2798.7-2015 无公害农产品生产质量安全控制技术规范第7部分:家畜97 NY/T 2798.8-2015 无公害农产品生产质量安全控制技术规范第8部分:肉禽98 NY/T 2798.9-2015 无公害农产品生产质量安全控制技术规范第9部分:生鲜乳99 NY/T 2798.10-2015 无公害农产品生产质量安全控制技术规范第10部分:蜂产品100 NY/T 2798.11-2015 无公害农产品生产质量安全控制技术规范第11部分:鲜禽蛋101 NY/T 2798.12-2015 无公害农产品生产质量安全控制技术规范第12部分:畜禽屠宰102 NY/T 2798.13-2015 无公害农产品生产质量安全控制技术规范第13部分:养殖水产品103 NY/T 2799-2015 绿色食品畜肉104 NY/T 658-2015 绿色食品包装通用准则NY/T 658-2002 105 NY/T 843-2015 绿色食品畜禽肉制品NY/T 843-2009 106 NY/T 895-2015 绿色食品高粱 NY/T 895-2004 107 NY/T 896-2015 绿色食品产品抽样准则 NY/T 896-2004 NY/T 902-2004,NY/T 429-2000 109 NY/T 1049-2015 绿色食品薯芋类蔬菜 NY/T 1049-2006 110 NY/T 1055-2015 绿色食品产品检验规则 NY/T 1055-2006 111NY/T 1324-2015 绿色食品芥菜类蔬菜 NY/T 1324-2007 112 NY/T 1325-2015 绿色食品芽苗类蔬菜 NY/T 1325-2007 113 NY/T 1326-2015 绿色食品多年生蔬菜 NY/T 1326-2007 114 NY/T 1405-2015 绿色食品水生蔬菜 NY/T 1405-2007 115 NY/T 1506-2015 绿色食品食用花卉 NY/T 1506-2007 116 NY/T 1511-2015 绿色食品膨化食品 NY/T 1511-2007 117 NY/T 1714-2015 绿色食品即食谷粉 NY/T 1714-2009 118 NY/T 5295-2015 无公害农产品产地环境评价准则 NY/T 5295-2004 119 NY/T 544-2015 猪流行性腹泻诊断技术 NY/T 544-2002 120 NY/T 546-2015 猪传染性萎缩性鼻炎诊断技术NY/T 546-2002 108 NY/T 902-2015 绿色食品瓜籽序号标准号标准名称代替标准号121 NY/T 548-2015 猪传染性胃肠炎诊断技术 NY/T 548-2002 122 NY/T 553-2015 禽支原体PCR检测方法 NY/T 553-2002 123 NY/T 562-2015 动物衣原体病诊断技术 NY/T 562-2002 124 NY/T 576-2015 绵羊痘和山羊痘诊断技术NY/T 576-2002 125 NY/T 635-2015 天然草地合理载畜量的计算 NY/T 635-2002 126 NY/T 798-2015 复合微生物肥料 NY/T 798-2004 127 NY/T 983-2015 苹果采收与贮运技术规范 NY/T 983-2006 128 NY/T 1160-2015 蜜蜂饲养技术规范 NY/T 1160-2006 129 NY/T 1392-2015 猕猴桃采收与贮运技术规范 NY/T 1392-2007 130 SC/T 6074-2015 渔船用射频识别(RFID)设备技术要求131 SC/T 8149-2015 渔业船舶用气胀式工作救生衣第2259号编者按:根据《中华人民共和国农业转基因生物安全管理条例》规定,《转基因植物及其产品成分检测基体标准物质定值技术规范》等19项标准经专家审定通过,由农业部于2015年5月21日批准发布为中华人民共和国国家标准,自2015年8月1日起实施。
实时荧光PCR定性检测1.引物和探针大豆及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR检测所用引物和探针序列。
2.实时荧光PCR反应体系实时荧光PCR反应体系见表11—16,反应体系中各试剂的用量,可按照详细状况或不同的反应总体积举行适当的调节。
每个反应体系应设置两个平行测试。
3.实时荧光反应参数实时荧光定量PCR的反应参数为:37℃,5min;预变性,95℃,3min;95℃,15s,60℃,1min,40个循环。
不同仪器可按照仪器要求将反应参数作适当调节。
4.实时荧光.PCR结果分析 (1)阈值设定实时荧光PCR反应结束后,应设置荧光信号阈值,普通挑选3~15个循环的阴性对比的10倍标准差作为阈值。
阈值设定原则按照仪器噪声状况举行调节,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点,且Ct值=40为准。
(2)实时荧光PCR定性检验的质量控制空白对比:外源基因检测Ct值大于或等于40,内参照基因检测Ct值大于或等于40。
阴性对比:外源基因检测Ct值大于或等于40,内参照基因检测Ct值在20~30。
阳性对比:外源基因检测Ct值小于或等于34。
上述指标有一项不符合者,应重新做实时荧光PCR扩增。
(3)实时荧光PCR结果判定测试样品外源基因检测Ct值大于或等于40,内参照基因检测Ct值20~30者,阴性对比、阳性对比和空白对比结果正常者,则可判定该样品未检出转基因成分。
测试样品外源基因检测Ct值小于或等于36.内参照基因检测Ct值20~30者,阴性对比、阳性对比和空白对比结果正常者,则可判定该样品检出转基因成分。
测试样外源基因检测Ct值在36~40,应重做实时荧光PCR。
再次扩增后的外源基因Ct值仍小于40,且阴性对比、阳性对比和空白对比结果正常,则可判定为该样品检出转基因成分。
再次扩增后的外源基因Ct值大于或等于40,且阴性对比、阳性对比和空白对比结果正常,则可判定为该样品未检出转基因成分。
上一篇:下一篇:第1页共1页。
转基因植物NOS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)说明书转基因植物NOS基因核酸检测试剂盒(PCR荧光探针法)说明书试剂盒简介货为了适应新加坡石斑鱼虹彩病毒染料法荧光定量PCR试剂盒快速检测和疫病研究的需要,本公司参照 OIE国际标准中规定的引物序列,经多次实验及系统优化,开发生产了本试剂盒。
应用本试剂盒进行检测具有快速、灵敏、特异、准确、安全操作简单、应用广泛和高通量检测等特点及优点。
试剂盒组成及试剂配制:酶联板(Assay plate):一块(96孔)。
2.标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶4.生物su标记抗体稀释液(Biotinantibody Diluent):1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRPavidin Diluent):1×10ml/瓶。
6.生物su标记抗体(Biotinantibody):1×120μl/瓶(1:100)7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRPavidin):1×120μl/瓶(1:100)8.底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
样本处理及要求:1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于20℃或80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于20℃或80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。
调味品中转基因植物成分实时荧光PCR定性检测方法(三)8.5.1 实时荧光PCR反应体系实时荧光PCR反应体系见表2。
每个样品举行实时荧光PCR检测时应设置2个平行。
实时荧光PCR检测过程中应设置PCR扩增试剂对比、PCR扩增阴性目标DNA对比、PCR扩增阳性目标DNA对比,并对DNA提取和纯化过程中设置的核酸提取空白对比同时举行实时荧光PCR检测,详细方式根据GB/T 19495.2中相关规定。
表2 实时荧光PCR反应体系 8.5.2 实时荧光PCR反应参数实时荧光PCR反应参数见表3。
用法不同实时荧光PCR仪,可对参数作适当调节。
表3 实时荧光PCR反应参数3 8.5.3 仪器检测通道的挑选设置PCR 反应管荧光信号收集条件,应与探针标志的报告基团全都。
详细设置办法可参照仪器用法解释书。
9 结果分析、推断和表述 9.1 基线和阈值的设置实时荧光PCR反应结束并分析结果时,应设置基线和闽值。
基线范围设置在3个~15个循环。
基线阈值设置在基线刚好超过正常阴性目标DNA对比扩增曲线最高点且Ct=40,通常状况下可以采纳仪器默认的基线阈值,即采纳3个~15个循环的阴性日标DNA对比的10倍标准差作为阈值。
9.2 质量控制 9.2.1 基本原则试验中设置的各种对比PCR检测结果应符合以下状况:否则,任一种对比假如浮现非9.2.2~9.2.4所述正常结果,应重做试验。
9.2.2 核酸提取空白对比和PCR扩增试剂对比空白对比外源基因检测结果Ct≥40,内源基因检测结果Ct≥40。
9.2.3 PCR扩增阴性目标DNA对比外源基因检测结果Ct≥40,内源基因检测结果20≤Ct≤36。
9.2.4 PCR扩增阳性目标DNA对比外源基因检测结果Ct≤36。
9.3 结果推断和表述9.3.1 待测样品外源基因2个平行样检测结果Ct≥40,内源基因检测20≤Ct≤36并浮现典型的扩增曲线,同时各种试验对比结果正常,此时可以判定该样品未检出XXX基因,检测结果表述为未检出XXX基因。
大豆中转基因成分定性PCR 检测一、 实验目的 (1)DNA 的原理和操作技术。
(2)DNA 的纯度、含量与分子大小。
(3)学习PCR 的基本原理和操作方法。
(4)掌握高速冷冻离心机、微量移液枪、水平电泳仪、PCR 仪等仪器设备的使用。
二、 实验原理由于现有的商品化转基因产品中绝大多数含35S 启动子和NOS 终止子。
故转基因食品的检测一般基于聚合酶链式反应(PCR)35S 启动子和NOS 终止子进行筛选。
聚合酶链反应(PCR)是近年来常用的一种快速、灵敏的检测转基因产品的方法,但要求待分析的基因组DNA 样品尽可能纯化。
PCR 技术的基本原理类似于DNA物。
PCR 由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。
三、 PCR 引物设计表1 引物序列及扩增产物长度四、 转基因大豆抗草甘膦转基因大豆品种京引D-1 、京引D-2 、京引D-3 、京引D-4获市面上购买的转基因大豆,万能粉碎机粉碎。
五、 DNA 的提取 1、称取约0.1g 2ml 离心管中;2、加入600μl CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)缓冲液震荡均匀,65℃水浴保温30min;3、加入500μl 酚:三氯甲烷:异戊醇(25:24:1),振荡均匀,12000r/min离心15min;4、吸取上清液,放入另一新管中加入500ul的异丙醇,12000r/min离心10min。
5、弃去上清液,加入70%乙醇溶液洗涤,12000r/min离心1min。
6、弃去上清液,干燥,用50μl TE缓冲溶液溶解沉淀。
7、加入5μl RNA酶溶液,37℃水浴保温30min。
8、加入400μl的CTAB缓冲溶液,振荡均匀。
9、加入250μl的三氯甲烷:异戊醇(1:1),振荡均匀,12000r/min离心15min。
10、吸取上清液,放入另一个新管中,加入200μl的异丙醇,12000r/min离心10min。
11、弃去上清液,干燥,用50μl TE缓冲液溶解沉淀。
实时荧光定量PCR方法快速检测转基因大豆朱德斌;邢晓波【摘要】A real-time fluorescence quantitative PCR method was developed to detect genetically modified ( GM ) soybean using SYBR Green I,a double-stranded DNA-selective fluorescent dye. Special primers were used to amplify 35S promoter that was often used in GM soybeans. The fluorescence of SYBR Green I was used to monitor the quantity of PCR product. The results show that the detection limit for 35S promoter is 0. 005 nmol/L and the linear range is more than three orders of magnitude. The GM soybean and the non-GM soybean can be clearly discriminated. Thus, the method may become a convenient tool for daily GM food detection due to its rapidness, simplicity, sensitivity, safety, high throughput and low cost.%针对转基因大豆中普遍含有的35S启动子进行引物设计,以双链DNA染料SYBR Green Ⅰ为荧光标记物,利用实时荧光定量PCR方法对大豆样品进行检测.该法检测转基因大豆的检测低限为0.005 nmol/L的35S启动子,线性范围达3个数量级,可快速区分转基因大豆和非转基因大豆,具有快速、简便、灵敏、安全、高通量、低成本等优点,可推广用于转基因植物产品的快速定量检测.【期刊名称】《激光生物学报》【年(卷),期】2012(021)003【总页数】4页(P279-282)【关键词】实时荧光定量PCR;转基因大豆;35S启动子【作者】朱德斌;邢晓波【作者单位】华南师范大学生物光子学研究院激光生命科学研究所、暨激光生命科学教育部重点实验室,广东广州510631;华南师范大学生物光子学研究院激光生命科学研究所、暨激光生命科学教育部重点实验室,广东广州510631【正文语种】中文【中图分类】Q503;Q78随着近年来人们对转基因产品(genetically modified organism,GMO)安全性的日益重视,GMO标识已成为各国GMO监管的重要部分。
附件7:出入境检验检疫行业标准草案编制说明(参考格式)标准草案名称中文植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法英文Protocol of the real-time PCR for detecting geneticallymodified plants and their derived products与国际标准和国外先进标准一致程度情况□等同□修改☑非等效标准号英文名称Protocol of the real-time PCR for detecting genetically modifiedplants and their derived products中文名称植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法任务来源批准立项的文件名称和文件号植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法计划编号2011B477r制(修)订情况□制定☑修订替代的标准编号SN/T 1204-2003起止时间2012年12 月--- 2013 年12 月项目承担单位中国检科院起草团队中国检科院,山东出入境检验检疫局,上海出入境检验检疫局专业类别□食品(化妆品)检验;□卫生检疫;□动物检疫;☑植物检疫;□纺织产品检验;□轻工产品检验;□机电产品检验;□化工、矿产品和金属材料检验;□管理;□鉴定;□包装及危险化学品标准体系表代码调整情况无调整2 背景情况目的、意义原标准是10年前制定的,2003年,全球转基因作物种植面积只有8亿公顷,至2012年,种植面积达亿公顷,全球59个国家或地区批准了2497项申请,涉及25种作物319个转化体。
转基因产品呈现出生物技术产品品种多、性状全、成分复杂等新特点,原有标准所涉及的检测方法远远无法满足日常转基因检测的需求。
具体存在的问题有,1、转基因筛查用通用元件有很大的发展,急需补充完善相应的检测方法;2、原有标准中的一些检测方法有更新,可采用更先进更灵敏的检测方法;3、品系检测是目前转基因鉴定的重点,原标准中尚未涉及,需制定系统覆盖我国主要进出口作物的品系检测方法;4、现有的标准检测方法较分散,在实际的检测操作中带来很大的不便。
基于上述背景,本标准拟制定一项内容全,适用面广,可操作性强、灵敏度高的转基因植物及其产品检测方法。
与国内外相关标准、文献的关系引用国际国内已发布的权威标准方法,属于标准等同采用。
3 编制过程准备阶段(可选项)分工情况中国检科院负责标准总体方案设计及标准草案,山东出入境检验检疫局负责转基因产品通用元件检测方法的收集,上海出入境检验检疫局负责转基因品系检测方法的收集,分工协作,保证了该标准的顺利完成。
标准草案编写情况该标准草案的编写主要按照格式要求,撰写核酸提取方法、定性方法、检测的引物探针和体系以及检测的质量控制和结果判断方法等内容来编写。
征求意见情况(适用于送审稿)审定情况(适用于报批稿)预期的管理目标(适用于规程类标准)或技术指标(适用于方法类标准)4 主要技术内容的确定1 范围本标准规定了植物及其加工产品中转基因成分筛选、基因特异性和品系特异性实时荧光PCR检测方法。
本标准适用于玉米、大豆、油菜籽、棉花、水稻及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR品系特异性检验或者其它检验方法检测结果为阳性的确证实验。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 27403 实验室质量控制规范食品分子生物学检测GB/T 转基因产品检测实验室技术要求GB/T 转基因产品检测核酸提取纯化方法GB/T 转基因产品检测抽样和制样方法3 术语、定义和缩略语下列术语、定义和缩略语适用于本标准。
3.1 术语和定义3.1.1 转基因 transgene将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能DNA序列,通过生物工程技术,使其在该物种中进行表达,以便使该物种获得新的品种特征。
3.1.2 实时荧光PCR real-time polymerase chain reaction实时荧光聚合酶链式反应。
是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,荧光信号的强弱直接反映模板数量。
3.1.3 内源基因 endogenous gene在检测物种中拷贝数恒定的、不显示等位基因变化的基因。
该基因可用于判定物种特异性。
3.1.4 外源基因 exogenous gene利用生物工程技术转入的其他生物基因,使该生物品种表现新的生物学性状。
3.1.5 Ct值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。
3.2 缩略语CTAB:cetyltrithylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵。
dATP:deoxyadenosine triphosphate,脱氧腺苷三磷酸。
dCTP:deoxycytidine triphosphate,脱氧胞苷三磷酸。
dGTP:deoxyguanosine triphosphate,脱氧鸟苷三磷酸。
DNA:deoxyribonucleic acid,脱氧核糖核酸。
dNTP:deoxyribonucleoside triphosphate,脱氧核苷三磷酸。
dUTP:deoxyuridine triphosphate,脱氧尿苷三磷酸。
EDTA:ethylene diaminetetraacetic acid,乙二胺四乙酸。
bp:base pair,碱基对。
PAT:phosphinothricin acetyltransferase gene from Bacillus amyloliquefaciens,来源于解淀粉芽孢杆菌的草丁膦乙酰转移酶基因。
PCR:polymerase chain reaction,聚合酶链式反应。
SDS:sodium dodecylsulfate,十二烷基磺酸钠。
Taq:Taq DNA polymerase,DNA聚合酶。
TE:Tris-HCl、EDTA缓冲液。
tNOS:terminator of nopaline synthase gene from Agrobacterium tumefaciens,来源于农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子。
Tris:tris (hydroxymethyl) aminomethane,三(羟甲基)氨基甲烷。
UDG:uracil DNA glycosylase,尿嘧啶DNA-糖基酶。
UNG酶:uracil-N-glycosylase,尿嘧啶-N- 糖基化酶。
Lectin:植物凝集素。
ADH:alcohol dehydrogenase乙醇脱氢酶。
PE3-PEPcase:Phosphoenilpyruvate-Carboxylase,磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶。
tRNALeu:植物叶绿体基因。
18s rRNA: 真核生物18s核糖体RNA基因。
CaMV 35S:35S promoter from Cauliflower mosaic virus,来自于花椰菜花叶病毒的35S启动子。
NOS:Terminator of nopaline synthase gene,胭脂碱合成酶基因终止子。
FMV35S:35S promoter from a modified figwort mosaic virus (caulimovirus group) 玄参花叶病毒35S启动子。
NPTII:Neomycin-3'-phosphotransferase gene,新霉素-3’-磷酸转移酶基因。
BAR:Phosphinothricin acetyltransferase gene from Bacillus amyloliquefaciens 来源于杆菌Bacillus amyloliquefaciens草丁膦乙酰转移酶基因PAT:Phosphinothricin acetyltransferase gene,草丁膦乙酰转移酶基因。
GOX:Glyphosate oxidoreductase gene 草甘膦氧化还原酶基因。
CryIA(b) :A synthetic gene encodes the first 648 amino acids, insecticidal-active ftruncated product identical to that of cryIA(b) gene of Bacillus thuringiensis subsp。
苏云金芽孢杆菌杀虫毒蛋白cryIA(b)基因。
Cry3A:subsp. Tenebrionis strain BI 256-82 抗虫毒蛋白,选择性毒杀科罗拉多马铃薯甲虫(Colorado potato beetle larvae)。
EPSPS:5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase gene 5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因。
BAR:phosphinothricin acetyltransferase gene,磷化麦黄酮乙酰转移酶基因。
BARNASE:ribonuclease gene from Bacillus amyloliquefaciens,来源于解淀粉芽孢杆菌的核糖核酸酶基因。
BARSTAR:specific inhibitor of the barnase gene from Bacillus amyloliquefaciens,来源于解淀粉芽孢杆菌的BARNASE基因的特异抑制基因。
BXN:nitrilase enzyme gene from Klebsiella pneumoniae subsp. Ozaenae,来源于肺炎克雷伯杆菌臭鼻亚种的腈水解酶基因。
Cru A:Cruciferin A gene,油菜种子储藏蛋白基因。
GOX :glyphosate oxidoreductase gene,草甘膦氧化还原酶基因。
HMGI/Y:High mobility group protein gene,高移动性蛋白家族基因。
NPTII:neomycin-3'-phosphotransferase gene,新霉素-3’-磷酸转移酶基因。
PEP:phosphoenolpyruvate carboxylase gene,磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因。
pCaMV 35S:35S promoter from cauliflower mosaic virus,花椰菜花叶病毒35S启动子。