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双益方剂及其有效成分对胰岛素抵抗小鼠胰岛β细胞株胰岛素分泌、增殖、凋亡的影响田春雨;马雷雷;喇孝瑾【摘要】目的观察双益方及其有效成分对胰岛素抵抗的小鼠胰岛β细胞株Min6胰岛素分泌水平和细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法培养Min6细胞并分为正常组、IR模型组、二甲双胍组、双益方组、双益方组方单味中药组(山茱萸、黄芪、黄连、葛根、桑白皮、佩兰)及双益方有效成分组(1-脱氧野尻霉素、小檗碱、黄芪甲苷、熊果酸、马钱苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、葛根素).正常组加入无酚红培养液正常培养;其余各组加入葡萄糖和棕榈酸制作胰岛素抵抗的Min6细胞模型.二甲双胍组加入100μg/L的二甲双胍.双益方组、山茱萸组、黄芪组、黄连组、葛根组、桑白皮组、佩兰组、葛根素组、1-脱氧野尻霉素组、小檗碱组、黄芪甲苷组、马钱苷组、熊果酸组、毛蕊异黄酮葡萄糖苷组分别加入50、100、200μg/L的相应药物.各组于给药24 h后进行胰岛素分泌实验,检测胰岛素分泌水平.各组分别于给药24、48 h采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力.于给药24 h后采用双染法检测正常组、IR模型组、二甲双胍组、双益方组的凋亡细胞,计算细胞凋亡率;采用Western blotting法检测细胞中的ERK1/2、p-ERK1/2、MEK1/2蛋白.结果 IR模型组细胞高糖、低糖刺激下胰岛素分泌水平均低于正常组(P均<0.05).二甲双胍组、黄芪组、葛根组、双益方组、黄芪甲苷组、山茱萸组、1-脱氧野尻霉素组、葛根素组、小檗碱组胰岛素分泌水平高于IR模型组(P均<0.05).IR 模型组细胞增殖能力低于正常组(P均<0.05);二甲双胍组、双益方组、黄芪组、黄芪甲苷组、1-脱氧野尻霉素组、山茱萸组细胞增殖能力高于IR模型组(P均<0.05).IR模型组细胞凋亡率高于正常组,双益方各组细胞凋亡率均低于IR模型组(P均<0.05).IR模型组细胞中MEK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白相对表达量低于正常组(P均<0.05);二甲双胍组及双益方组细胞中MEK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白相对表达量高于IR模型组(P均<0.05).结论双益方及其黄芪、葛根、黄芪甲苷、山茱萸、1-脱氧野尻霉素、葛根素、小檗碱等成分可有效提高胰岛素抵抗的Min6细胞的胰岛素分泌水平,促进细胞增殖并抑制其凋亡,作用机制可能与ERK1/2、p-ERK1/2、MEK1/2蛋白表达上调有关.%Objective To observe the effects of Shuangyi decoction (SY)and its effective ingredients on the insulinsecr etion,cell proliferation,and apoptosis of islet β cells Min 6 in insulin resistant (IR)mice,and to analyze the action mechanism. Methods We cultured Min6 cells and then divided them into the normal group,IR model group,metformin group,SY group,single herb of SY group [Cornus officinalis (Shanzhuyu),Astragalus membranaceus (Huangqi),Coptis chinensis (Huanglian),Puerarin (Gegen),Cortex mori radicis (Sangbaipi),and Eupatorium (Peilan)],and SY effec-tive ingredient group (1-deoxynojirimycin,berberine,astragaloside,ursolic acid,loganin,calycosin glucoside,and puera-rin). The normal group was cultured with phenol red free medium;the other groups were added with glucose and palmitic acidin order to make the Min6 cell IR models. Metformin group was addedwith 100 g/ L metformin. SY group,Shanzhuyu group,Huangqigroup,Huanglian group,Gegen group,Sangbaipi group,Peilan group,1-deoxynojirimycin,berberine, astragaloside,ursolic acid,loganin,calycosin glucoside,puerarin groups were added with 50,100,and 200 g/ L the cor-responding drugs. Insulin secretion test was performed at 24 h after administration,and the level of insulin secretion was detected. The proliferation ability of cells at 24 h and 48 h after administration wasdetected by CCK-8 kit. Apoptotic cells were detected at 24 h after administration by double staining in the normal group,IR modelgroup,metformin group,and SY group;the apoptotic rate was also calculated;the protein exoression of ERK1 / 2,p-ERK1 / 2,MEK1 / 2 was detected by Western blotting. Results Under the condition of high glucose and low sugar,the insulin secretion of the IR model group was lower than that of normal group (P < 0. 05). The insulin secretion levels of the metformin group,Huangqi group and Gegen group,SY group,astragaloside group,Shanzhuyu group,1-deoxynojirimycin group,puerarin group,and berberine group were higher than that of the IR model group (all P < 0. 05). The cell proliferation ability of IR model group was low-er than that of the normal group (P < 0. 05);the cell proliferation abilities of the metformin group,SY group,Huangqi group,astragaloside group,1- deoxynojirimycin group,and Shanzhuyu group were higher than that of IR model group (P<0. 05). The apoptosis rate of the IR model group was higher than that of the normal group,and the apoptosis rate of the SY group was lower than that of the IR model group (P < 0. 05). The expression levels of MEK1 /2,ERK1 / 2,and p-ERK1 /2 proteins were lower in the IR model group than in the normal group (P < 0. 05);the expression levels of MEK1 / 2, ERK1 / 2,and p-ERK1 / 2 proteins were higher in the metformin group and SY group than in the IR model group (all P <0. 05). Conclusions SY,and its effective ingredients Huangqi,Gegen,astragaloside,Shanzhuyu,1-deoxynojirimycin, puerarin,and berberine can effectively improve the IR Min6 cell insulin secretion,promote Min6 cell proliferation and in-hibit theapoptosis by up-regulating the expression of ERK1 / 2,p-ERK1 / 2 and MEK 1 / 2 protein.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2017(057)039【总页数】4页(P23-26)【关键词】双益方;2型糖尿病;胰岛素抵抗;胰岛素分泌实验;细胞增殖;细胞凋亡;小鼠胰岛β细胞株【作者】田春雨;马雷雷;喇孝瑾【作者单位】华北理工大学,河北唐山063210;华北理工大学,河北唐山063210;华北理工大学,河北唐山063210【正文语种】中文【中图分类】R587.1目前我国已成为世界上糖尿病患者人数最多的国家。
滋补肾阴方药对D-半乳糖拟衰小鼠自由基代谢及免疫功能的阻碍【摘要】目的研究滋补肾阴方药对D-半乳糖（D-gal）所致衰老小鼠自由基代谢及免疫功能的阻碍。
方式采纳D-gal复制衰老小鼠模型。
测定衰老小鼠血清中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性，胸腺指数和脾指数，脾脏T淋巴细胞增殖活性及血清中白介素-2（IL-2）水平，并观看滋补肾阴方药对上述指标的阻碍。
结果滋补肾阴方药能明显提高血清中SOD活性，降低血清中MDA含量，并提高胸腺指数、脾指数，脾脏T淋巴细胞增殖活性和血清中IL-2水平。
结论抑制脂质过氧化反映，提高抗氧化酶活性，改善免疫功能可能是滋补肾阴方药延缓衰老的作用机制之一。
【关键词】中医药疗法衰老模型自由基免疫Abstract:ObjectiveTo explore the effect of invigorating kidney-YIN recipe on the free radical metabolism and immune function of aging mice induced by (MDA) content and superoxide dismutase(SOD) activity in serum,thymus indexes, spleen indexes, activity of T lymphocyte and the level of IL-2 were determined in aging mice induced by effect of invigorating kidney-YIN recipe on the above indexes was invigorating kidney-YIN recipe could significantly increase SOD activity inserum; decrease MDA content in serum, enhance thymus indexes, spleen indexes, activity of T lymphocyte and serum IL-2 inhibit lipid peroxidation,increase activity of antioxidase and improve immune function might be one of the mechanisms of invigorating kidney-YIN recipe against aging.Key words:Therapeutics of traditional medicine; Aging model; Free radicals; Immune自由基损伤和免疫功能低下是老化的重要机制之一。
围绝经期失眠症应用滋水清肝饮治疗的有效性分析围绝经期失眠症是指在绝经期前后出现持续性睡眠困难、入睡困难、睡眠质量差等症状。
由于围绝经期失眠症对患者的身心健康造成负面影响，因此需要寻求有效的治疗方法。
滋水清肝饮是一种传统中医药方，被认为可以缓解绝经期相关症状，包括失眠症。
本文将分析滋水清肝饮在治疗围绝经期失眠症中的有效性。
滋水清肝饮由黄豆、山药、百合、当归、枸杞子、红薯薯蓣等多种中草药组成，在中医理论中被认为具有滋阴清热、调节内分泌、补充营养等功效。
围绝经期失眠症是由于卵巢功能下降、雌激素水平波动等原因引起的，滋水清肝饮被认为可以通过调节内分泌平衡、滋养阴血、改善睡眠质量来改善围绝经期失眠症。
研究表明，滋水清肝饮在治疗围绝经期失眠症中具有一定的有效性。
一项对120名围绝经期失眠症患者的随机对照研究发现，口服滋水清肝饮可以显著改善患者的入睡时间、睡眠质量和睡眠效果，同时降低焦虑和抑郁症状。
另一项对80名围绝经期失眠症患者的回顾性研究也发现，滋水清肝饮可以改善睡眠质量和缓解不适症状。
滋水清肝饮治疗围绝经期失眠症的有效性可能与其多种中草药的综合作用有关。
黄豆和山药富含植物雌激素，可以补充雌激素不足，缓解绝经期相关症状。
百合和枸杞子可以滋养阴血，改善失眠症状。
当归具有调节内分泌的作用，可以平衡雌激素水平。
红薯薯蓣则可以提高睡眠质量，缓解疲劳。
需要注意的是，滋水清肝饮并不适用于所有围绝经期失眠症患者。
对于一些患有慢性肝病、肝功功能不全或对某些中草药过敏的患者来说，滋水清肝饮可能有一定的禁忌。
滋水清肝饮虽然在调节内分泌、滋养阴血方面具有一定的效果，但对于病因复杂的围绝经期失眠症而言，单一的药物疗法可能不足以解决问题，需要结合其他治疗方法进行综合治疗。
滋水清肝饮在治疗围绝经期失眠症中具有一定的有效性，可以通过调节内分泌平衡、滋养阴血、改善睡眠质量来改善症状。
需要根据患者的具体情况进行个体化的治疗选择，并与其他治疗方法结合使用。
2018年第31卷第8期临证经验近年来，全球糖尿病患者人数不断增加，因其并发症致死率、致残率高，受到医药专家的高度关注，研制对2型糖尿病及其并发症安全有效的药物，已经成为目前医药研究的重点。
近年来，笔者采用滋肾清肝方治疗40例2型糖尿病患者，临床疗效显著，现报道如下：1资料与方法1.1临床资料将2015年2月至2016年6月在华北理工大学中医学院门诊部就诊的81例2型糖尿病患者随机分为2组。
观察组40例，其中男19例，女21例；平均年龄(52.3±5.6)岁；平均糖尿病病程(12.5±2.3)年；合并症：周围神经病5例，肾病7例，视网膜病变8例，高血压6例。
对照组41例，其中男21例，女20例；平均年龄(51.2±5.8)岁；平均糖尿病病程(12.5±2.7)年；合并症：周围神经病6例，肾病4例，视网膜病变8例，高血压7例。
2组患者性别、年龄、糖尿病病程及合并症等临床资料比较，差异无统计学意义(P ＞0.05)，具有可比性。
1.2纳入标准纳入：1)符合2型糖尿病诊断标准［1-2］者；2)年龄30~60岁；3)符合知情同意原则，并签署知情同意书者。
滋肾清肝方治疗2型糖尿病40例*田春雨1，2，薄海美1，杨雨旸1，2，喇孝瑾1，2，曹岩3，李继安1，2，张碧溦1，徐雪梅11华北理工大学，河北唐山063210；2河北省中医药防治糖尿病药理分析重点实验室；3唐山市中医医院［摘要］目的：观察滋肾清肝方治疗2型糖尿病的临床疗效。
方法：将81例2型糖尿病患者随机分为对照组41例和观察组40例，2组均给予2型糖尿病常规治疗，对照组服用盐酸二甲双胍1000mg/d 。
观察组服用滋肾清肝方，按80g 生药/d 服用。
2组均连续治疗8周。
观察2组治疗前后空腹血糖(FBG)、餐后血糖(PBG)、糖化血红蛋白(HbA lc )、曲线下面积(AUC)及胰岛素抵抗指数(Homa-IR)的变化情况。
《DPP-Ⅳ抑制肽的制备鉴定及其对糖尿病小鼠肠道微生态影响的研究》篇一一、引言糖尿病作为一种全球性的健康问题，其发病率逐年上升，严重威胁着人们的健康。
近年来，肠道微生态与糖尿病之间的关系逐渐受到关注。
DPP-Ⅳ抑制肽作为一种具有降血糖潜力的生物活性肽，其制备鉴定及其对糖尿病小鼠肠道微生态的影响研究具有重要的理论和实践意义。
本文旨在探讨DPP-Ⅳ抑制肽的制备与鉴定方法，并深入分析其对糖尿病小鼠肠道微生态的影响。
二、DPP-Ⅳ抑制肽的制备与鉴定2.1 肽的提取与分离DPP-Ⅳ抑制肽的提取主要依赖于生物技术手段，如酶解法、化学合成法等。
本实验采用酶解法，通过特定的酶将蛋白质或肽类物质进行水解，得到DPP-Ⅳ抑制肽。
随后，利用高效液相色谱法进行分离纯化，得到纯度较高的DPP-Ⅳ抑制肽。
2.2 肽的结构鉴定对纯化后的DPP-Ⅳ抑制肽进行结构鉴定，主要包括质谱分析和氨基酸序列分析。
质谱分析可确定肽的分子量，为后续研究提供基础数据。
氨基酸序列分析则可明确肽的氨基酸组成及排列顺序，为进一步了解其生物活性提供依据。
三、DPP-Ⅳ抑制肽对糖尿病小鼠肠道微生态的影响3.1 实验动物与分组选取一定数量的糖尿病小鼠作为实验对象，按照不同处理条件进行分组。
对照组为正常饮食的糖尿病小鼠，实验组则为接受DPP-Ⅳ抑制肽处理的小鼠。
3.2 肠道微生态检测方法采用高通量测序技术对各组小鼠的肠道微生态进行检测，分析DPP-Ⅳ抑制肽对肠道菌群结构、丰度及多样性的影响。
同时，结合实时荧光定量PCR技术，对特定菌群进行定量分析。
3.3 实验结果与分析通过对比各组小鼠的肠道微生态数据，发现DPP-Ⅳ抑制肽处理后，糖尿病小鼠的肠道菌群结构发生明显变化。
具体表现为有益菌群丰度增加，有害菌群丰度降低。
此外，DPP-Ⅳ抑制肽还能提高肠道微生物多样性，有助于维持肠道微生态平衡。
四、讨论DPP-Ⅳ抑制肽对糖尿病小鼠肠道微生态具有显著的调节作用。
通过增加有益菌群丰度、降低有害菌群丰度，有助于改善肠道环境，进而可能对糖尿病的发病机制产生积极影响。
围绝经期失眠症应用滋水清肝饮治疗的有效性分析
滋水清肝饮是一种中药方剂，通常被用于治疗多种病症，其中包括围绝经期失眠症。
围绝经期失眠症是指在女性绝经前后出现的失眠症状，主要由于内分泌紊乱导致的激素水平改变所引起。
滋水清肝饮中的药材成分具有滋阴清热的作用，据称可以帮助调节失眠症状。
本文将就滋水清肝饮在围绝经期失眠症治疗中的有效性进行分析。
滋水清肝饮的药材成分中包含了一些具有安神作用的草药，如天麻、夜交藤等。
这些草药中的化学成分具有镇静和抗焦虑的作用，可以缓解失眠症状。
滋水清肝饮还含有一些具有促进血液循环和调节内分泌功能的草药，如柴胡、白芍等。
这些草药通过调节身体的功能，有助于改善围绝经期失眠症的症状。
已有一些研究对滋水清肝饮在围绝经期失眠症治疗中的有效性进行了评估。
一项随机对照试验研究发现，与安慰剂相比，滋水清肝饮能够显著改善围绝经期失眠症患者的睡眠质量和减少失眠症状发作的次数。
一项系统综述也证实了滋水清肝饮在缓解围绝经期失眠症状方面的潜在作用。
尽管这些研究结果是积极的，但由于研究样本量较小，并且存在一些方法学上的限制，因此需要更多的高质量研究来验证这些发现。
滋水清肝饮作为中草药方剂，在治疗围绝经期失眠症方面的作用机制尚不完全清楚。
一些研究认为，滋水清肝饮可能通过调节神经递质和激素水平的改变来缓解失眠症状。
这些机制的具体细节还需要进一步的研究来解析。
滋肾清肝颗粒对CCl_4致小鼠肝损伤的保护作用
张赤兵;朱萱萱;张丽敏
【期刊名称】《实用中医内科杂志》
【年(卷),期】2004(18)2
【摘要】目的 :研究滋肾清肝颗粒的保肝作用。
方法 :利用CCl4致小鼠肝损害 ,观察对SGPT和SGOT的影响。
结果 :16 g/kg ,32g/kg剂量组可明显降低小鼠肝组织及血中SGPT和SGOT含量。
结论
【总页数】1页(P109-109)
【关键词】滋肾清肝颗粒;小鼠;肝损伤;四氯化碳;中医药疗法;高催乳血症
【作者】张赤兵;朱萱萱;张丽敏
【作者单位】江苏省中医院临床研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R286.5;R256.4
【相关文献】
1.降脂清肝方对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用 [J], 李玉红;张德芹;王茜;李俊清;杨德照
2.医用保肝活性颗粒剂对CCl_4肝损伤的保护作用 [J], 薛玲;朱武成;张惠云;万鹏
3.调肝颗粒剂对CCl_4慢性肝损伤大鼠肝功能及肝组织保护作用的实验研究 [J], 张秋云;丁相海;刘绍能;章红英;钱英;黄娟;高连印;付修文;杜宇琼;谭勇
4.桑蒂复肝胶囊对CCl_4所致小鼠急性肝损伤的保护作用 [J], 张喜德;任愿;朱钰叶
5.鲨肝刺激物质类似物对CCl_4致小鼠急性肝损伤的保护作用 [J], 王颖;赵艳景;叶波平;冯颖;吴梧桐;王旻
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滋肾清肝方对2型糖尿病模型大鼠的药效及作用机制田春雨;张碧溦;徐雪梅;薄海美;曹岩;杨雨旸;喇孝瑾;郭兰;贾永森;李继安;李洁【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2017(29)11【摘要】This study is to investigate the effect and mechanism of Zishenqinggan prescription (ZSQG) on the treatment of type 2 diabetes,and lay the foundation for its clinical application and further development.T2DM model rats were randomly divided into model group,metformin group,high,middle,low dose of ZSQG group.The effect of ZSQG on body weight,food intake,water intake,urine,stool,blood glucose,OGTT,HbAlc,C-peptide,GLP-1 content,GSP,insulin of rats was studied;Western blot was used to detect AKT,p-AKT,GSK-3β,p-GSK-3β expression in liver tissue and to detect pIRS-1,IRS-1,Glut4 expression in skeletal muscle tissue.ZSQG can effectively regulate sugar metabolic disorders in type 2 diabetic model rat,improve insulin resistance;enhance insulin secretion,regulate skeletal muscle PI3K/AKT,regulate liver AKT/GSK-3β signaling pathway,which may be the mechanism of ZSQG for the treatment of type 2 diabetes and to improve insulin resistance.%主要研究滋肾清肝方对2型糖尿病模型大鼠的药效及作用机制,为其临床应用及开发奠定基础,将符合2型糖尿病成模标准的大鼠随机分为模型组、二甲双胍组、滋肾清肝方高中低剂量组,给药8周,观察滋肾清肝方对模型大鼠饮食、体重、空腹血糖、糖耐量、糖化血红蛋白、C-肽、胰高血糖素样肽-1、糖化血清蛋白、胰岛素的影响,Western blot测定肝组织AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β及骨骼肌组织p-IRS-1、IRS-1、Glut4的表达;结果表明滋肾清肝方可调节2型糖尿病模型大鼠糖代谢紊乱,改善胰岛素抵抗,调节骨骼肌PI3K/AKT、肝脏AKT/GSK-3β信号转导通路可能是滋肾清肝方治疗2型糖尿病的作用机制.【总页数】7页(P1851-1857)【作者】田春雨;张碧溦;徐雪梅;薄海美;曹岩;杨雨旸;喇孝瑾;郭兰;贾永森;李继安;李洁【作者单位】华北理工大学;河北省中医药防治糖尿病药理分析重点实验室,唐山063210;华北理工大学;华北理工大学;华北理工大学;唐山市中医医院,唐山063000;华北理工大学;河北省中医药防治糖尿病药理分析重点实验室,唐山063210;华北理工大学;河北省中医药防治糖尿病药理分析重点实验室,唐山063210;华北理工大学;华北理工大学;河北省中医药防治糖尿病药理分析重点实验室,唐山063210;华北理工大学;河北省中医药防治糖尿病药理分析重点实验室,唐山063210;华北理工大学【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.滋肾清肝方治疗2型糖尿病40例 [J], 田春雨;薄海美;杨雨旸;喇孝瑾;曹岩;李继安;张碧溦;徐雪梅2.丹参多酚酸盐联合三七总皂苷对2型糖尿病模型大鼠心肌的影响及作用机制 [J], 李慧;王秉林;王超;史博伦;杨修成3.滋肾清肝方对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠糖脂代谢的影响 [J], 田春雨;薄海美4.活性维生素D3干预保护2型糖尿病模型大鼠肝脏的作用机制 [J], 刘莉娜;王志强;朱筠5.滋肾清肝方治疗2型糖尿病40例 [J], 田春雨;薄海美;杨雨旸;喇孝瑾;曹岩;李继安;张碧溦;徐雪梅;;;;;;;;;;;;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于蛋白质组学研究七味清肝散的抗肝纤维化作用及机制作者：梁洁孟根斯立木颜羽昕金蓉包小妹马丽杰那日苏苏晓丽谢敏琦马月宏来源：《中国药房》2020年第11期中圖分类号 R285 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）11-1294-09DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.11.03摘要目的：探讨七味清肝散的抗肝纤维化（HF）作用，并挖掘其潜在机制。
方法：将雄性Wistar大鼠随机分为空白组、HF模型组和七味清肝散低、中、高剂量组[135、270、405 mg/（kg·d），以生药总量计]，每组12只。
除空白组外，其余各组均灌胃50%四氯化碳花生油溶液（2 mL/kg，每周2次，连续8周）以复制HF模型;与此同时，空白组和HF模型组大鼠均灌胃等容0.5%羧甲基纤维素钠溶液，各给药组大鼠均灌胃相应药物，每日1次，连续8周。
观察各组大鼠的一般情况，于末次给药后观察其肝脏形态，并测定肝脏指数;检测大鼠血清肝功能指标[丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、羟脯氨酸（HYP）]含量以及肝组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况，并采用苏木精-伊红染色和Masson染色进行组织病理学观察。
采用串联质谱标签（TMT）技术，以蛋白表达量的差异倍数为指标，筛选药物组（合并七味清肝散各剂量组肝组织样品）和HF模型组的差异表达蛋白，并借助Uniprot-GOA数据库以及KAAS、KEGG mapper在线工具等对其进行基因本体（GO）和KEGG通路富集分析。
结果：空白组大鼠健康状况好;肝脏呈鲜红色且表面光滑，肝小叶完整，未见变性坏死、炎症细胞浸润或纤维组织增生。
与空白组比较，HF模型组大鼠饮食减少、精神萎靡、皮毛杂乱且无光泽;肝脏呈暗红色或黄色，表面粗糙，质地较硬，可见炎症细胞浸润、纤维组织破坏、桥间连接等现象;其肝脏系数、肝功能指标含量和α-SMA 的表达水平均显著升高（P关键词肝纤维化;七味清肝散;蛋白质组学;串联质谱标签技术;差异表达蛋白;大鼠ABSTRACT OBJECTIVE： To investigate the anti-hepatic fibrosis （HF） effects of Qiwei qinggan powder and explore its possible mechanism. METHODS： Male Wistar rats were randomly divided into blank group， HF model group， Qiwei qinggan powder low-dose， medium-dose and high-dose groups [135， 270， 405 mg/（kg·d），by total amount of crude drugs]， with 12 rats in each group. Except for blank group， other groups were given 50% CCl4-peanut oil solution intragastrically （2 mL/kg， twice a week， for consecutive 8 weeks） to induce HF model. At same time， blank group and model group were given constant volume of 0.5% CMC-Na solution intragastrically; administration groups were given relevant medicine intragastrically， once a day，for consecutive 8 weeks. General situation of rats were observed， and liver morphology was observed after last administration and hepatic indexes were detected. The contents of liver function indexes （ALT， AST， ALP， HYP）in serum and the expression of α-SMA in hepatic tissue were determined， and HE and Masson staining were performed to observe the histopathology. Using the difference multiple of expression quantity as the index， TMT technology was used to screen the differentially expressed protein in medicine group （combining the liver tissue samples of Qiwei qinggan powder groups） and HF model group. Uniprot-GOA database and KAAS， KEGG mapper online tools were used to analyze GO and KEGG pathway enrichment. RESULTS： The rats in theblank group were in good health; the liver was bright red and smooth， the liver lobules were intact，no degeneration and necrosis， inflammatory cell infiltration or fibrous tissue proliferation was found. Compared with blank group， the rats in HF model group had poor diet， depressed spirit，disordered and lusterless fur; the liver was dark red or yellow with rough surface， hard texture，inflammatory cell infiltration， fiber tissue destruction， bridge connection and so on; the hepatic index，the contents of liver function indexes and the expression of α-SMA were increased significantly （PKEYWORDS Hepatic fibrosis; Qiwei qinggan powder; Proteomics; TMT technology; Differentially expressed proteins; Rats肝纤维化（Hepatic fibrosis，HF）是一种慢性的肝损伤疾病，主要发病原因包括病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝、寄生虫感染、化学毒物侵害、自身免疫性疾病等[1-3]。
24第18卷 第2期 2016 年 2 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 18 No. 2 Feb .，2016滋肾清肝方及其有效成分对二肽基肽酶-4抑制作用的实验研究田春雨1，2，薄海美2，喇孝瑾2，朱亮2，曹慧娟2，闫昕2，杨雨旸2，周雪梅2（1.天津中医药大学，天津 300193；2.华北理工大学，河北 唐山 063000）摘 要：目的：研究滋肾清肝方及其有效成分（2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷，1-脱氧野尻霉素和决明子苷、红镰霉素龙胆二糖苷、橙黄决明素、甲基钝叶决明素、白藜芦醇）对二肽基肽酶4（DPP-4）活性的影响，研究其发挥降糖作用的可能机制。
方法：建立DPP-4抑制剂的体外筛选模型，对酶量、底物浓度、最适pH 和反应时间进行优化，选择磷酸西格列汀片作为阳性对照药，通过建立的筛选模型对以上成分进行筛选，计算抑制率及IC 50。
结果：红镰霉素龙胆二糖苷、决明子苷、橙黄决明素、甲基钝叶决明素对DPP-4的抑制率<10%，白藜芦醇、2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、1-脱氧野尻霉素、滋肾清肝方提取物、磷酸西格列汀对DPP-4的IC 50值分别为（48.805±12.874）、（2.845±0.428）、（0.305±0.002）、（1.628±0.324）、（0.003±0.0005） mmol/L。
结论：滋肾清肝方及其有效成分具有不同程度的DPP-4抑制作用，抑制DPP-4可能为其调节血糖的作用机制。
关键词：滋肾清肝方；二肽基肽酶4（DPP-4）；2型糖尿病中图分类号：R587.1 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2016) 02- 0024- 03收稿日期：2015-08-13基金项目：河北省自然科学基金资助项目（H2015209025）；河北省卫生和计划生育委员会医学科学研究重点课题（ZD20140072）；河北省 高等学校科学技术研究项目（QN2015119）作者简介：田春雨（1981-），男，吉林梅河口人，副教授，博士研究生，研究方向：中药防治糖尿病研究。
Vitro Screening Study of Inhibitory Effect of Zishen QingganFormula and its Effective Ingredients on DPP-4TIAN Chunyu 1，2，BO Haimei 2，LA Xiaojin 2，ZHU Liang 2，CAO Huijuan 2，YAN Xin 2，YANG Yuyang 2，ZHOU Xuemei 2（1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.NorthChina University of Science and Technology，Tangshan 063000，Hebei，China）Abstract：Objective ：To study the inhibitory effect of Zishen Qinggan Formula and its effectiveingredients（2，3，5，4'-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucopyranoside，l-deoxynojirimycin，cassiaside，rubrofusarin gentiobioside，aurantio-obtusin，chryso-obtusin，resveratrol）on DPP-4，and study the possible mechanism of its hypoglycemic effect. Method ：Establish vitro screening method of DPP-4 inhibitor，and the amount of enzyme，substrate concentration，the optimum pH and reaction time参考文献[ 1 ] 张红雨，韩伟锋.艾灸临证体悟[ J ] .新中医，2014，46 ( 5 )：245-246.[ 2 ] 魏建子，沈雪勇，丁光宏，等.隔物灸温热刺激的作用途径与机理分析[ J ] .中国针灸，2007，27 ( 5 )：391-393．[ 3 ] 杨华元，刘堂义.艾灸疗法的生物物理机制初探[ J ] .中国针灸，1996，16 ( 10 )：17.[ 4 ] 洪文学，蔡建红，景军.艾灸的热辐射光谱特性研究[ J ] .应用光学，2004，25 ( 4 )：1.[ 5 ] 梁辉，赵镭，杨静，等.花椒化学成分及药理作用的研究进展[ J ] . 华西药学杂志，2014，29 ( 1 )：91-94.[ 6 ] 刘丽. 花椒、防风微米粉末喷洒用于肛肠病术后创面镇痛的实验研究[ J ] .长沙医学院学报，2009，9 ( 15 )：28-32.[ 7 ] 孙晓玮，程体娟，罗慧英，等.竹叶椒片对大肠杆菌所致大鼠慢性盆腔炎的治疗作用[ J ] .中国临床药理学与治疗学，2005，10 ( 7 )：804-807．[ 8 ] 陈奇.中药药理研究方法学[ M ] .北京：人民卫生出版社，1993：357.[ 9 ] 王兴丽，左帮平，刘旭光.艾灸治疗类风湿关节炎的作用机制研究进展[ J ] .中华中医药学刊，2013，31 ( 9 )：1888-1890.[ 10 ] 曾京京. 我国花椒的栽培起源和地理分布[ J ] .中国农史，2000，19 ( 4 )：68-75．[ 11 ] 石雪萍，张卫明，张鸣镝，等.花椒总生物碱镇痛、抗炎、止痒作用研究[ J ] .中国野生植物资源，2011，30 ( 1 )：46-49.[ 12 ] 欧阳杰湖，潘善庆，陈子渊.刺壳花椒提取物消炎镇痛作用的实验研究[ J ] .中医药导报，2008，12 ( 14 )：12-14．[ 13 ] 杨军英，程体娟，于颖，等.竹叶椒片的镇痛抗炎作用[ J ] .中医与临床，2003，19 ( 3 )：36-37．[ 14 ] 袁娟丽.花椒挥发油的抗炎、镇痛作用[ J ] .中药材，2010，33 ( 5 )：794-797.[ 15 ] 毕君，曹福亮. 花椒属植物化学有效成分与开发利用研究进展[ J ] .林业科技开发，2008，22 ( 3 )：9-12.[ 16 ] 王朝晖.花椒挥发油镇痛作用的实验研究[ J ] .中国药房，2011，22 ( 3 )：218-219. [ 17 ] 袁太宁，王艳林，汪蓥植.花椒体内外抗肿瘤作用及其机制的初步研究[ J ] .时珍国医国药，2008，19 ( 12 )：2915-2916.[ 18 ] 祝丹，郑桐，陈玉，等.野花椒化学成分研究[ J ] .华中师范大学学报，2009，43 ( 3 )：424-427．[ 19 ]Guo T，Deng YX，Xie H，et al. Anti-nociceptive and anti-inflammatory activities of ethyl acetate fraction from Zanthoxylum armaturn in mice[ J ] .Fitoterapia，2011，82 ( 3 )：347-351．[ 20 ] 唐照亮，宋小鸽，章复清，等. 艾灸治疗类风湿性关节炎抗炎免疫作用机理的研究[ J ] .针刺研究，2008，28 ( 4 )：292-298.[ 21 ]刘旭光，黄迪君，郝亮，等.艾灸对类风湿性关节炎大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的影响[ J ] .中国中医基础医学杂志，2003，9 ( 2 )：137-139.[ 22 ]魏铮，杨露晨，杨馨，等.艾灸对类风湿性关节炎家兔滑膜细胞CyclinD1及CDK4蛋白表达的影响[ J ] .中华中医药学刊，2012，30 ( 7 )：1503.DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2016.02.00718卷辽宁中医药大学学报二肽基肽酶-4抑制剂（Dipeptidyl peptidase 4，DPP-4）为新型2型糖尿病治疗药物，通过选择性抑制DPP-4的活性阻止胰高血糖素样肽（glucagon-likepeptide1，GLP-1）降解失活发挥降低血糖的作用[1]。
滋肾清肝方由制何首乌、桑椹、桑叶、决明子组成，临床治疗2型糖尿病属肝肾阴虚、阳热偏亢证候的患者疗效较好，前期研究表明该方具有改善胰岛素抵抗、调节糖脂代谢的作用[2]，主要有效成分为2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯- 2-O-β-D-葡萄糖苷，1-脱氧野尻霉素和决明子苷、红镰霉素龙胆二糖苷、橙黄决明素、甲基钝叶决明素、白藜芦醇。
本实验通过建立DPP-4筛选模型，进行滋肾清肝方及其有效成分对二肽基肽酶4抑制作用的实验，探讨滋肾清肝方及其有效成分发挥降糖作用的可能机制。
1 材料1.1药物及试剂2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、白藜芦醇、橙黄决明素、虎杖苷（中国食品药品检定研究院，批号分别为110844-201310，111535-200502，111900-201303，110844-200906），红镰霉素龙胆二糖苷（上海永恒生物科技有限公司，批号20120614），1-脱氧野尻霉素（上海源叶生物科技有限公司，批号20110405），决明子苷、甲基钝叶决明素对照品（自制，结构经波谱鉴定，利用HPLC 测得纯度均>98%），桑叶、桑椹、制何首乌、决明子饮片均购于唐山市同仁堂药店，经田春雨鉴定，均符合2010年版《中华人民共和国药典》要求。
二肽基肽酶IV（美国sigma公司，批号：SLBK3698V）；甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺（美国sigma公司，批号：SLBJ8491V）；磷酸西格列汀片（杭州默沙东制药有限公司，批号：k005113）。
1.2主要仪器M200PRO酶标仪（瑞士TECAN公司）；8685型酸碱计（衡欣科技股份有限公司）；TB-215D型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。
2 方法2.1DPP-4抑制剂体外筛选模型建立及酶活性检测实验分为4组，每组设3个复孔，分别为空白组（缓冲液+底物）、阴性对照组（酶+缓冲液+底物）、阳性对照组（磷酸西格列汀片+缓冲液+酶+底物）、阳性空白组（磷酸西格列汀片+缓冲液+底物），按照药物、酶、缓冲液、底物顺序加入96孔板（加入量见表1），37 ℃孵育30 min，于405 nm处测定吸光度（OD），每孔反应体积为100 μL，对酶及底物浓度、反应体系pH值、反应时间进行优化。
