实验六 粉防己中粉防己碱和防己诺林碱的精制及检识

RP-HPLC测定轻身减肥片中粉防己碱与防己诺林碱的含量
宋旭峰;余菁;胡晓炜
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2005(027)004
【摘要】目的:运用反相高效液相色谱法测定轻身减肥片(大黄、防己等)中粉防己
碱及防己诺林碱的含量.方法:采用Zor-bax C18柱,甲醇-0.3%二乙胺溶液(75:25)
为流动相,检测波长为242nm.结果:粉防己碱的回收率为103.65%、RSD为
1.59%(n=6);防己诺林碱的回收率为97.11%、RSD为1.91%(n=6).结论:本法简便、快速、重现性好,可作为产品的定量分析方法.
【总页数】3页(P405-407)
【作者】宋旭峰;余菁;胡晓炜
【作者单位】杭州市药品检验所,浙江,杭州,310014;杭州市药品检验所,浙江,杭
州,310014;杭州市药品检验所,浙江,杭州,310014
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.HPLC法测定豨莶风湿片中粉防己碱及防己诺林碱的含量 [J], 刘珊珊;殷善霞;张峰
2.RP-HPLC测定舒肝饮丸中粉防己碱与防己诺林碱的含量 [J], 杨学猛;徐凤梅;魏
景文;罗桂萍
3.UFLC法同时测定防己中粉防己碱和防己诺林碱的含量 [J], 朱鹤云;费雪;孙宇慧;
王黎明;郝乘仪;冯波;关皎
4.HPLC法测定复方防己口服液中粉防己碱和防己诺林碱的含量 [J], 侯丽丽;晏永新;张丽
5.高效液相色谱法测定防己药材中粉防己碱与防己诺林碱的含量 [J], 黄泽春;王益群
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粉防己生物碱的提取分离和鉴别粉防己为植物防己科粉防己Stephania tetrandrd S.Moore的根，又名汉防己，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱，主要是汉防己甲素和汉防已乙素。

汉防己生物碱具有降低血压及镇痛的作用，临床上除用作治疗高血压、心绞痛、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌、扩冠和解热抗炎的作用。

一、实验目的1．掌握生物碱的提取原理和实验操作方法；2．掌握生物碱的基本鉴别法；3．掌握生物碱结构与一般性质的关系；4．熟悉用柱层析分离纯化生物碱单体的方法。

二、仪器与试药（一）仪器RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵分液漏斗（250mL）HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（1000mL）ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）蒸发皿小玻璃蒸发器玻璃层析柱（2.0cmⅹ40cm）（二）试药粉防己乙醇盐酸氯仿无水硫酸钠滤纸丙酮中性三氧化二铝无水硫酸钠甲醇浓氨水硅胶G 凡士林脱脂棉漏斗 CMC-Na改良碘化铋钾试液汉防已甲素和汉防已乙素对照品丙酮苦味酸碘化汞钾试液雷氏铵盐试液三、主要成分的结构和性质汉防已根中总生物碱含量为1～3%，主要为汉防已甲素，含量约1～2%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.4%；以及其它数种微量生物碱。

轮环藤酚碱四、实验原理：1．提取：利用游离的伯、仲、叔胺生物碱具有亲脂性，能溶于乙醇的性质，用乙醇提取总生物碱；2．分离：利用水溶性生物碱（季铵类生物碱）易溶于水而难溶于有机溶剂的性质进行二者的分离；3．粉防己甲、乙素的分离：利用甲、乙素在结构上的不同（二者极性大小不同）用氧化铝柱层析来分离甲、乙素。

五、生物碱的提取分离1．总生物碱的提取、亲脂性与亲水性生物碱的分离95%乙醇300mL水浴回流提取1小时，过滤NOCH3OROCH3OCH3ONCH3CH3H HR=CH3R=H汉防己甲素汉防己乙素ONOHOCH3CH3OHOOHCH3同法提取0.5小时，过滤5～10mL浓缩物2%盐酸转移至蒸发皿中充分搅拌，残渣做生物碱反应，将滤液放在分液漏斗中先加入50mL氯仿，pH至9-10，振摇萃取，静置分层后，分出氯仿层30mL萃取1次2次，每次20mL，分出氯仿层20g无水硫酸钠，密闭，（上交）加入丙酮适量（共15mL，少量多次），水浴加热溶解，趁热倒入蒸发皿丙酮液加入中性三氧化二铝3g拌匀，水浴上小心蒸干含生物碱的三氧化二铝颗粒2．低压柱层析分离汉防已甲素和乙素低压柱层析在低压下（0.5-3kg/cm2，一般0.3-1.2 kg/cm2）采用颗粒直径介于经典柱层析（100-200μm）和HPLC（37μm）之间的薄层层析用硅胶（或氧化铝）H或G（50-75μm）作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法。

实验九 防己中粉防己碱的提取分离与检识（一）目的要求学习生物碱类成分的一般提取分离法，通过实验要求：1．掌握生物碱的溶剂提取法和粉防己碱与防己诺林碱的分离方法。

2．熟悉生物碱的一般理化性质。

3．熟悉粉防己碱和防己诺林碱的检识方法。

4．掌握连续回流法（索氏提取器）、萃取法、结晶法等的基本操作过程及注意事项。

（二）主要化学成分的结构及性质防己为防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore 的干燥根。

总生物碱含量约为1.5％～2.3％，主要为粉防己碱和防己诺林碱。

1．粉防己碱(tetrandrine) 又称粉防己甲素，分子式C 38H 42N 2O 6，在防己中的含量约为1％，为无色针状结晶（乙醚），mp.217～218℃。

易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，溶于乙醚、苯等有机溶剂，几乎不溶于水和石油醚。

N H 3C O NO C H 3O RH 3C OO C H 3OC H 3粉防己碱 R=CH 3防己诺林碱 R=H2．防己诺林碱(fangchinoline) 又称粉防己乙素，分子式C 37H 40N 2O 6，在防己中的含量约为0.5％，六面体粒状结晶（丙酮），mp.237～238℃。

溶解度与粉防己碱相似，但因较粉防己碱多一个酚羟基，故极性较粉防己碱稍大，因此在冷苯中的溶解度小于粉防己碱，可利用此性质相互分离。

（三）实验原理本实验是根据粉防己碱和防己诺林碱游离时难溶于水，易溶于氯仿，成盐后易溶于水，难溶于氯仿的性质提取得到总生物碱。

再利用两者在冷苯中的溶解度不同，使之相互分离。

（四）实验内容1．防己总生物碱的提取略2．防己总生物碱的精制略3．粉防己碱和防己诺林碱的分离略4．防己生物碱的检识（1）生物碱沉淀反应取粉防己碱的盐酸水溶液8 ml分置于4支试管中，分别滴加下列试剂2～3滴，观察并记录有无沉淀产生及颜色变化。

①碘化铋钾试剂②碘化汞钾试剂③碘－碘化钾试剂④硅钨酸试剂（2）薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na板试样：自制粉防己碱乙醇溶液自制防己诺林碱乙醇溶液对照品：粉防己碱标准品乙醇溶液防己诺林碱标准品乙醇溶液展开剂：氯仿-丙酮-甲醇（6∶1∶1）氨气饱和显色剂：喷雾改良碘化铋钾试剂（五）实验说明及注意事项1．提取总生物碱时，回收乙醇至稀浸膏状即可，不宜过干，否则当加入1％盐酸水溶液后，易结成胶状团块，影响提取效果。

HPLC法测定复方防己口服液中粉防己碱和防己诺林碱的含量侯丽丽;晏永新;张丽【摘要】为了用HPLC法同时测定复方防己口服液中粉防己碱和防己诺林碱的含量.采用Diamonsil C 18柱(5μm,4.6 mm×250 mm),以乙腈-0.2％磷酸水溶液-三乙胺(63∶37∶0.05)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长282 nm的液相检测方法.结果表明,在此色谱条件下,粉防己碱和防己诺林碱的分离良好,分别在20.52 ～205.2μg/mL和17.84 ～ 178.4 μg/mL浓度范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系.按外标法以峰面积计算进行测定,粉防已碱和防己诺林碱的平均回收率分别为98.15％和97.35％,RSD分别为1.39％和1.90％.表明该方法简便,快速,准确,适用于防已散中粉防己碱和防己诺林碱的含量测定.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2013(047)002【总页数】3页(P24-26)【关键词】复方防己口服液;粉防己碱;防己诺林碱;高效液相色谱法【作者】侯丽丽;晏永新;张丽【作者单位】江西出入境检验检疫局综合技术中心,南昌330002【正文语种】中文【中图分类】S859.79复方防己口服液是《中国兽药典》2010年版二部收载的“防己散”改剂型产品，具有补肾健脾，利尿除湿之功效[1]，用于治疗禽腹水综合症。

为了提高复方防己口服液的质量可控性，在参考相关文献资料[2-4]的基础上，研究建立了高效液相色谱同时测定复方防己口服液中粉防己碱和防己诺林碱含量的方法。

1 材料1.1 试验仪器及试剂 LC200高效液相色谱仪(N2000色谱工作站);超声波清洗仪;电子天平(十万分之一);乙腈、甲醇为色谱纯;去离子水自制。

1.2 对照品及样品粉防己碱对照品(批号:110711-200507，供含测用)，防己诺林碱对照品(批号:110793-200605，供含测用)，均由中国药品生物制品检定所提供;复方防己口服液，批号:110901、110902、110903，江西新世纪民星动物保健品有限公司产品。

粉防己生物碱的提取分离和鉴别粉防己为植物防己科粉防己Stephania tetrandrd S.Moore的根，又名汉防己，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱，主要是汉防己甲素和汉防已乙素。

汉防己生物碱具有降低血压及镇痛的作用，临床上除用作治疗高血压、心绞痛、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌、扩冠和解热抗炎的作用。

一、实验目的1．掌握生物碱的提取原理和实验操作方法；2．掌握生物碱的基本鉴别法；3．掌握生物碱结构与一般性质的关系；4．熟悉用柱层析分离纯化生物碱单体的方法。

二、仪器与试药（一）仪器RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵分液漏斗（250mL）HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（1000mL）ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）蒸发皿小玻璃蒸发器玻璃层析柱（2.0cmⅹ40cm）（二）试药粉防己乙醇盐酸氯仿无水硫酸钠滤纸丙酮中性三氧化二铝无水硫酸钠甲醇浓氨水硅胶G 凡士林脱脂棉漏斗 CMC-Na改良碘化铋钾试液汉防已甲素和汉防已乙素对照品丙酮苦味酸碘化汞钾试液雷氏铵盐试液三、主要成分的结构和性质汉防已根中总生物碱含量为1～3%，主要为汉防已甲素，含量约1～2%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.4%；以及其它数种微量生物碱。

轮环藤酚碱四、实验原理：1．提取：利用游离的伯、仲、叔胺生物碱具有亲脂性，能溶于乙醇的性质，用乙醇提取总生物碱；2．分离：利用水溶性生物碱（季铵类生物碱）易溶于水而难溶于有机溶剂的性质进行二者的分离；3．粉防己甲、乙素的分离：利用甲、乙素在结构上的不同（二者极性大小不同）用氧化铝柱层析来分离甲、乙素。

五、生物碱的提取分离1．总生物碱的提取、亲脂性与亲水性生物碱的分离95%乙醇300mL水浴回流提取1小时，过滤NOCH3OROCH3OCH3ONCH3CH3H HR=CH3R=H汉防己甲素汉防己乙素ONOHOCH3CH3OHOOHCH3同法提取0.5小时，过滤5～10mL浓缩物2%盐酸转移至蒸发皿中充分搅拌，残渣做生物碱反应，将滤液放在分液漏斗中先加入50mL氯仿，pH至9-10，振摇萃取，静置分层后，分出氯仿层30mL萃取1次2次，每次20mL，分出氯仿层20g无水硫酸钠，密闭，（上交）加入丙酮适量（共15mL，少量多次），水浴加热溶解，趁热倒入蒸发皿丙酮液加入中性三氧化二铝3g拌匀，水浴上小心蒸干含生物碱的三氧化二铝颗粒2．低压柱层析分离汉防已甲素和乙素低压柱层析在低压下（0.5-3kg/cm2，一般0.3-1.2 kg/cm2）采用颗粒直径介于经典柱层析（100-200μm）和HPLC（37μm）之间的薄层层析用硅胶（或氧化铝）H或G（50-75μm）作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法。

UFLC法同时测定防己中粉防己碱和防己诺林碱的含量朱鹤云;费雪;孙宇慧;王黎明;郝乘仪;冯波;关皎【摘要】为了建立超快速液相色谱法(UFLC)同时测定防己中粉防己碱和防己诺林碱的含量,为防己药材的质量控制提供参考.方法:采用Shim-Pack XR-ODS柱(75mm×3.0mm,2.2 μm);以乙腈-0.2％磷酸水(三乙胺调pH值至8.0)(65:35,v/v)为流动相;流速为0.8 mL/min;检测波长为282 nm;柱温为30℃.结果:粉防己碱和防己诺林碱分别在10-500 μg/mL(R=0.9999)和10-500 μg/mL(R=0.999 9)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为98.0％和99.1％.表明该方法结果准确、操作简便、具有良好的重现性和稳定性,可用于防己药材的质量控制,同时为新兽药开发利用提供参考.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2017(053)008【总页数】3页(P91-93)【关键词】防己;粉防己碱;防己诺林碱;超快速液相色谱法【作者】朱鹤云;费雪;孙宇慧;王黎明;郝乘仪;冯波;关皎【作者单位】吉林医药学院药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院药学院,吉林吉林132013【正文语种】中文【中图分类】R917防己为防己科植物粉防己Stephania tetrandra.S.Moore.的干燥根[1]，性苦，寒，归膀胱、肺经，具有利水消肿、祛风止痛之功效 [1]。

防己中的主要化学成分为生物碱，其中粉防己碱和防己诺林碱为主要活性成分，2015年版《中国药典》将粉防己碱和防己诺林碱作为防己药材质量控制的主要指标。

高效液相色谱法测定大鼠血浆中防己诺林碱和粉防己碱
田卫;张海霞;黄华宇;李仁德
【期刊名称】《分析测试技术与仪器》
【年(卷),期】2007(013)001
【摘要】建立了高效液相色谱(HPLC)快速测定血浆中2种生物活性碱-防己诺林碱和粉防己碱的方法.血浆经乙腈沉淀蛋白,稀释后直接进样,采用ODS C18柱,乙腈-磷酸缓冲液-三乙胺(80:30:0.3,V/V/V)为流动相,紫外检测波长282 nm,外标法定量.为研究防己诺林碱和粉防己碱在生物体内的药物代谢机理研究提供了简便、灵敏、准确的分离测定方法.
【总页数】4页(P60-63)
【作者】田卫;张海霞;黄华宇;李仁德
【作者单位】兰州大学,化学化工学院,甘肃,兰州,730000;兰州大学,化学化工学院,甘肃,兰州,730000;兰州大学,化学化工学院,甘肃,兰州,730000;兰州大学,生命科学学院,甘肃,兰州,730000
【正文语种】中文
【中图分类】O657.72
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粉防己碱的提取与结构鉴定一 文献综述1 粉防己碱的简介[中文名称] 粉防己碱[英文名称] (+)-Tetrandrine[别 名] 汉防己碱，粉防己甲素，粉防己碱 [化学名称] (+)-Tetrandrine [分 子 式] C38H42N2O6[分 子 量] Mw ＝622.76 [C A S 号] 518-34-3 [ L D 50 ] 41.3mg/Kg [ 熔 点 ] 215－217℃[物理性质] 无色针状结晶(乙醚),几乎不溶于水,石油醚,溶于乙醚有机溶剂 [成分分类] 防己为防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore 的干燥根。

总生物碱含量约为1.5％～2.3％，主要为粉防己碱和防己诺林碱。

防 己为防己科植物粉防己Stephania tetrandra S. Moore 、木防己Cocculustrilobus (Thunb.)DC. 及马兜铃科植物广防己(防己马兜铃)Aristolochia fangchi Wu 、异叶马兜铃(汉中防己)Aristolochia heterophylla Hemsl. 的根。

味苦，性寒。

入膀胱、脾、肾经。

功能：利水消肿、祛风止痛、泻下焦湿热。

主治：水肿臌胀、湿热脚气、风湿痹痛、手足挛痛、癣疥疮肿。

内服：煎汤，5～10g ；或入丸、散。

【现代研究】主要成分：粉防己根含生物碱1.2%。

其中大部分是双苄基异喹啉生物碱。

研究认为它含有汉防己碱(Tetrandrine)，即汉防己甲素(Hanfangchin A ，Fanchinin)；防己醇灵碱(防己诺林碱，Fangchinoline)，即汉防己乙素(Hanfangchin B)，又名去甲汉防己碱(Demethyltetrandrine)；汉防己丙素[1](Hanfangchin C)；门尼新碱(Menisine，木防己素甲)；门尼定(Menisidine，木防己素乙)和轮环藤酚碱(Cyclanoline)。