实验五 粉防己中粉防己碱和防己诺林碱的提取分离

实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定1 实验目的1.1生物碱的一般提取方法。

1.2 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定2 实验原理2.1 生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。

基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取。

常用的提取方法包括有溶剂提取法、直接提取法（水溶性生物碱、季铵碱）、离子交换树脂法（如麦角新碱类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。

2.2 一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。

因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证分析结果的准确性。

一般纯化的方法可析出结晶的生物碱用重结晶法；挥发性生物碱可用水蒸气蒸馏法；易升华的生物碱用升华法提取得到单体。

由不同沸点组成的液体生物碱总碱，往往可通过常压或减压分馏分离。

如毒芹中的毒芹碱和羟基毒芹碱，石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲基异石榴皮碱等都可通过减压分馏法分离出来。

许多生物碱的盐比游离碱更易于结晶。

因此，可利用其在各种溶剂中的不同溶解度进行分离，之后再转变成游离碱。

3 实验材料材料：汉防己4实验步骤4.1 生物碱的提取分离4.1.1 总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离100g0.5%H2SO4液渗漉（注一）倍量V/V）pH9~10，静置，抽滤（水溶性季铵碱及水溶性杂质）将沉淀与静砂拌匀（注二）80℃烘干，置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至提尽生物碱（注三）回收乙醚（注四）乙醚提取物用95%乙醇40~60ml回流热溶后倾入500ml水中，加30gNaCl盐析水溶上加热至凝结，静置抽滤注一：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度（约150ml），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5ml/分。

注二：净砂必须事前洗净烘干，拌和量最好不要超过120g，以免索氏提取器一次装不下或装得过多。

天然产物研究与开发N at Prod R es Dev 2008,20:701-703,697文章编号:1001-6880(2008)04-0701-04收稿日期:2007-08-27 接受日期:2007-11-01*通讯作者Te:l 86-28-85229073;E-m ai:l w angmk@ci b .ac .cn一种提取粉防己碱的新方法崔文峰1,鲍 玲1,周 英1,郁建平1,王明奎2*1贵州大学生命科学学院,贵阳550025;2中国科学院成都生物研究所,成都610041摘 要:本文报道了一种新的提取粉防己生物碱的方法。

粉防己根粉用0.6%稀硫酸渗滤,提取液通过D 72树脂柱,然后用氨水乙醇溶液洗脱,丙酮、甲苯结晶纯化得到粉防己碱纯品。

该方法在提取过程中避免了使用毒性大的溶剂,提高了防己生物碱的提取率,简化了操作,是一种环保型提取工艺,适用于其他中药叔胺和季胺型生物碱的提取。

关键词:防己;粉防己碱;防己诺淋碱;总生物碱;D 72树脂中图分类号:R 284 2文献标识码:AA N ew M ethod for Extracti ng Tetrandri nefro m Stephania tetrandra S .M ooreCU IW en -feng 1,B AO L i n g 1,Z HOU Y ing 1,YU Jian-p i n g 1,WANG M i n g -ku i2*1T he Co llege of B iology,Guizhou Univers it y,Gu i yan g 550025,Ch i na ;2Chengdu Institute of B iology,Chinese A cade my of Sciences ,Chengdu 610041,Ch i naAbstract :A new m ethod was used for the ex tracti ng o f te trandr i ne .T he roo t po w der o f S te p han i a tetrandras was d iffused w it h 0.6%H 2SO 4so l uti on and the d iffusi on passed through D72res i n co l u m n .T he resi n co l u m n w as eluted w ith 0.5M a mm onia -ethanol so luti on and tetrandr i ne w as purified by recrystallization i n t o l uene and acetone .T his extracti ng tech -no l ogy avo i ded t he use of large a m ount of tox i c so l v ents ,i m proved the recovery o f a l ka l o i ds ,and s i m p lifi ed t he operati on ,w hich could be regarded as a g reen extracti ng technology and appli ed t o t he ex tracti on o f tert -a m i ne and a mmon i u m al ka -lo i ds from other Chi nese herbs .K ey word s :S te phania tetrandra S .M oore ;tetrandrine ;fang ch i no li ne ;a l ka l o i ds ;D72resi n粉防己又名防己、汉防己、石蟾蜍,是防己科多年生缠绕藤本植物粉防己S tephani a tetrandra S.M oore 干燥的根。

实验三粉防己生物‎碱的提取分‎离与鉴定1 实验目的1.1生物碱的一‎般提取方法‎。

1.2 用低压柱层‎析分离，纯化单体的‎方法及薄层‎层析鉴定2 实验原理2.1 生物碱大都‎能溶于氯仿‎、甲醇、乙醇等有机‎溶剂，除季铵碱和‎一些分子量‎较低或含极‎性基团较多‎的生物碱外‎，一般均不溶‎或难溶于水‎，而生物碱与‎酸结合成盐‎时则易溶于‎水和醇。

基于这种特‎性，可用不同的‎溶剂将生物‎碱从中药中‎提取。

常用的提取‎方法包括有‎溶剂提取法‎、直接提取法‎（水溶性生物‎碱、季铵碱）、离子交换树‎脂法（如麦角新碱‎类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。

2.2 一种植物中‎往往含有几‎种或几十种‎生物碱。

因此，提取出来的‎总生物碱还‎需进一步分‎离，去除杂质、排除干扰物‎，保证分析结果的准确‎性。

一般纯化的‎方法可析出‎结晶的生物‎碱用重结晶‎法；挥发性生物‎碱可用水蒸‎气蒸馏法；易升华的生‎物碱用升华‎法提取得到‎单体。

由不同沸点‎组成的液体‎生物碱总碱‎，往往可通过‎常压或减压‎分馏分离。

如毒芹中的‎毒芹碱和羟‎基毒芹碱，石榴皮中的‎伪石榴皮碱‎、异石榴皮碱‎和甲基异石‎榴皮碱等都‎可通过减压‎分馏法分离‎出来。

许多生物碱‎的盐比游离‎碱更易于结‎晶。

因此，可利用其在‎各种溶剂中‎的不同溶解‎度进行分离‎，之后再转变‎成游离碱。

3 实验材料材料：汉防己4实验步骤4.1 生物碱的提‎取分离4.1.1 总生物碱的‎提取和亲脂‎性与亲水性‎生物碱的分‎离100g0.5%H2SO4液渗漉（注一）倍量V/V）pH9~10，静置，抽滤泥黄色沉淀（水溶性季铵碱及水溶性杂质）将沉淀与静砂拌匀（注二）80℃烘干，置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至提尽生物碱（注三）回收乙醚（注四）乙醚提取物用95%乙醇40~60ml回流热溶后倾入500ml水中，加30gNaCl盐析水溶上加热至凝结，静置抽滤白色沉淀（亲脂性叔铵总碱，以汉防己甲素、乙素为主）注一：将汉防已粗‎粉加适量酸‎水液，以能将生药‎粉末润湿为‎度（约150m‎l），充分拌匀，放置半小时‎，均匀而致密‎地装入渗筒‎内，用锥形瓶底‎部或其它平‎底工具压紧‎，供渗漉用，流速约1.5ml/分。

防己生物碱中药提取物防己生物碱【提取来源】本品为防己科植物防己Stephania tetrandra S.Moore的根提取的生物碱类成分，总生物碱含量≥80%。

【主要成分】粉防己碱Tetrandrine，含量：60%【随属成分】防己诺林碱Fangchinoline轮环藤酚碱Cyclanoline防己菲碱Stephanthrine小檗胺Berbamine含量：20%【性状】本品为类白色至淡黄色粉末，可溶于氯仿、乙醚、丙酮、乙醇。

【鉴别】取本品加氯仿制成0.5%溶液作供试液。

取标准品粉防己碱、防己诺林碱、防己菲碱等加氯仿制成各成分含量为1mg/ml溶液作对照液。

取防己标准对照药材2.0g加氨水0.5ml放置2小时，加氯仿4.0ml，超声提取30分钟，滤液浓缩至1ml作对照液。

取上述三液各5μl，分别点于同一硅胶G板，以氯仿-丙酮甲醇5%浓氨试液(6：1：1：0.1)展开，喷稀碘化铋钾试液，标品斑点对应位置显相同颜色斑点，比对标准药材斑点，对应率≥80%。

【检查】干燥失重：不得过4.0%(附录Ⅸ G)炽灼残渣：不得过0.8%(附录Ⅸ J)重金属：不得过10ppm(附录Ⅸ E)【含量测定】照高效液相色谱法(附录Ⅵ D)测定色谱条件C18柱流动相：乙腈甲醇-水-冰醋酸(40：30：30：1)(每100ml 含十二烷基磺酸钠0.41g)检测波长：280nm理论板数≥4000对照液：取防己碱标品加甲醇制成0.1mg/ml溶液备用。

供试液：取本品加甲醇制成0.2mg/ml溶液备用。

测定法：取上述两液各10μl注入液相色谱仪测定，并计算总生物碱含量。

【功能】抗菌，抗炎，抗疟，抗过敏，抗癌，抗化疗多药耐药，诱导瘢痕成纤维细胞增殖，镇痛，镇静，解痉，解热，催眠，肌松，保肝，降血脂，降血压，降血黏稠度，扩张冠脉，增加心脑血流量，抗再灌注损伤，抗心律失常，抗心室肥厚。

汉防己生物碱的提取、分离与鉴定汉防己为防己科千金藤属物Stephania tetrandra S. Mcore的根，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱。

主要是汉防己甲素和汉防已乙素。

临床上除用作治疗高血压、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌和扩张血管的作用。

一、目的要求通过汉防己中几种生物碱的提取分离和鉴定，要求掌握下列知识和技能。

1．生物碱的一般提取方法。

2．纯化单体的方法及薄层层析鉴定二、已知生物碱的结构和性质汉防已根中总生物碱含量为1.5~2.3%，主要为汉防已甲素，含量约1%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.2%；以及其它数种微量生物碱。

1．汉防已甲素（Tetrandrine，汉防已碱，粉防已碱）无色针晶，不溶于水和石油醚，易溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚和氯仿等有机溶剂及稀酸水中，可溶于苯，mp 216℃，有双熔点现象，自丙酮中结晶者，150℃左右熔后加热又固化，至213℃复熔。

NOCH3OROCH3OCH3ONCH3CH3H HR=CH3 R=H 汉防己甲素汉防己乙素O2．汉防已乙素（Fangchinoline, 又称防已诺林碱，去甲粉防已碱）溶解行为与汉防已甲素相似，因有一个酚羟基，故极性较汉防已甲素稍高，在苯中的溶解度小于汉防已甲素而在乙醇中又大于汉防已甲素。

籍此可以相互分离，用不同溶剂重结昌时，其晶形和溶点不同：乙醇 细棒状结晶 mp 245~40℃甲醇 细棒状结晶 mp177~9℃丙酮 六面粒状晶 mp134℃吡啶-甲醇 mp 121~2℃环已烷-EtocAc mp 156℃3．轮环藤酚碱（Cylanoline ）为水溶性季铵生物碱，不溶于极性溶剂，氯化物为无色，八面体状结昌，mp 214~6℃，碘化物为无色绢丝状结晶，mp185℃；苦味酸盐为黄色结晶，mp154~6℃。

江西翔云药业有限公司粉防己规范化生产标准操作规程(SOP)前言《粉防己规范化生产标准操作规程(SOP)》系2003年江西翔云药业有限公司，承担国家重点科技攻关计划专题研究自2003年以来对江西粉防己产区进行实地深入调查研究，并进行以粉防己规范化种植研究的成果总结。

其适用于粉防己产区的规范化种植及生产基地的建设。

引用标准系按照国家《中药材生产质量管理规范(GAP)》(试行)规定标准、国家农业部绿色食品标准及药用植物制剂进出口绿色行业标准等有关规定。

本规程按我国中药材GAP规范化生产的综合技术要求，对粉防己生产中的选地、种子处理、播种育苗、田间管理、病虫害防治、良种繁育、采收等作了规范化研究，并制定本规程。

本规程依据在江西省遂川县粉防己主要产区的有关研究制定，本规程适用于遂川县及其类似于遂川县自然条件粉防己产区。

本规程由江西翔云药业有限公司提出并归口本规程起草单位：江西翔云药业有限公司。

本规程主要起草人：项曙红、刘隆洪、彭安民、袁华生、张亚平等。

本规程委托江西翔云药业有限公司、中药固体制剂制造技术国家工程研究中心负责解释。

1 主题内容与适用范围本规程按我国中药材GAP规范化生产的综合技术要求，对粉防己生产中的选地、种子处理、播种育苗、田间管理、病虫害防治、良种繁育、采收等作了规范化研究，并制定本规程。

本规程依据在江西省遂川县粉防己主要产区的有关研究制定，本规程适用于遂川县及其类似自然条件粉防己产区。

2 引用标准：2.1 GB3095—1996环境空气质量标准2.2 GB9137—1988大气污染物最高允许浓度标准2.3 GB5084—1992农田灌溉水质标准2.4 GBl5618—1995土壤环境质量执行二级标准2.5 GB3838—1988国家地，面水环境质量标准2.6 GB4285—1989农药安全使用标准2.7 GB／T15517.1—1995农药残留检测2.8国家药品监督管理局《中药材生产质量管理规范(GAP)》(2002年试行版)2.9 《中华人民共和国药典》(2005年版一部)2.10 中华人民共和国对外贸易经济合作部《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》2.11 GB—6264—86{中药材袋运输包装件}2.12 GB—6265—86{中药材压缩打包运输包装件}2.13 GB—6266—86《中药材瓦楞纸箱运输包装件》2.14 GB—195—85《包装储运指标标志》3 定义：3.1 中药材生产基地：是指由某个生产单位根据生产的目标和要求，选择具有一定规模、并按一定程序进行药用植物栽培、药材加工、包装和储运等过程，建立的种植、加工场地。

实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识（一）目的要求学习羟基蒽醌类化合物的提取分离和检识，通过实验要求：1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。

2.掌握用pH梯度萃取法分离不同酸性的羟基蒽醌类化合物。

3.掌握蒽醌类化合物的主要检识方法。

4.熟悉蒽醌类化合物的色谱检识方法。

5.了解用柱色谱法分离蒽醌类成分。

（二）主要化学成分的结构及性质大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。

大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷，总含量约3％～5％。

1．大黄酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。

黄色针状结晶（升华法），mp.321～322℃，330℃分解。

能溶于碱水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，几不溶于水。

2．大黄素(emodin) 分子式C15H10O5，分子量270.23。

橙色针状结晶(乙醇)，mp.256～257℃，能升华。

易溶于乙醇、碱水，微溶于乙醚、氯仿，几不溶于水。

3．芦荟大黄素(aloe-emodin) 分子式C16H10O5，分子量270.23。

橙色针状结晶（甲苯），mp.223～224℃。

易溶于热乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黄色；溶于碱液呈红色；氨水及硫酸中呈绯红色。

4．大黄酚(chrysophanol) 分子式C15H10O4，分子量254.23。

橙黄色六方形或单斜结晶（乙醇或苯），mp.196～197℃，能升华。

易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，极微溶于石油醚、冷乙醇，几不溶于水。

5．大黄素甲醚(physcion) 分子式C 16H 12O 5，分子量284.26。

砖红色单斜针状结晶，mp.203～207℃，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。

高效液相色谱法测定防己药材中粉防己碱与防己诺林碱的含量黄泽春;王益群【期刊名称】《中南药学》【年(卷),期】2008(6)5【摘要】目的用高效液相色谱法测定不同产地防己药材中粉防己碱与防己诺林碱的含量。

方法色谱柱为Kromasil ODS-1（4．6mm×200mm，5μm），流动相为乙腈0．01％三乙胺水溶液，梯度洗脱，流速为1．0mL·min^-1，检测波长为280nm。

结果粉防己碱在474-4740ng内线性关系良好，r=0．9999，平均回收率为99．3％，RSD=1．5％；防己诺林碱在238-2380ng线性关系良好，r=0．9998，平均回收率为99．5％，RSD=1．1％。

结论建立了高效液相色谱法同时测定防己药材中粉防己碱与防己诺林碱的含量，比较了不同产地防己药材中粉防己碱与防己诺林碱的含量。

【总页数】3页(P541-543)【关键词】防己;粉防己碱;防己诺林碱;高效液相色谱法;含量测定【作者】黄泽春;王益群【作者单位】湖南省永兴县人民医院药剂科;安化县人民医院药剂科【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R917【相关文献】1.高效液相色谱法测定十味风消胶囊中粉防己碱和防己诺林碱的含量 [J], 巩伟;赵庆华2.高效液相色谱法同时测定防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量 [J], 杨帆; 吴梦丽; 高慧; 闫国跃; 何秋梅; 谢阳姣3.高效液相色谱法同时测定防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量 [J], 杨帆; 吴梦丽; 高慧; 闫国跃; 何秋梅; 谢阳姣4.HPLC法同时测定防己药材中防己诺林碱和粉防己碱 [J], 饶毅;黎莉;刘隆洪;袁华生;魏惠珍;黄周华;杨世林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。