硒标准曲线

谷物化学与品质分析饲料中硒的测定 氢化物发生原子荧光法肖学彬(国家粮食局成都粮食储藏科学研究所 610031)摘 要 采用AFS-920型原子荧光光度计进行饲料微量硒的测定。

选择最佳的仪器条件,进行样品处理方法及酸度、干扰离子的研究,做了方法的检出限、精密度、加标回收率等方法学的研究。

实验结果表明:本方法准确性好,灵敏度高,操作简便,便于推广。

关键词 硒 饲料 氢化物发生原子荧光法硒是动物体必需的微量元素,缺硒会明显影响繁殖性能,加重缺碘症状,并降低机体免疫力;相反,动物摄入过量可引起硒慢性或急性中毒。

而饲料则是动物体获取硒的主要来源之一,因此准确测定动物饲料中的硒对动物饲养安全具有重要意义。

目前硒的测定方法有:比色法、电化学法、气相色谱法、中子活化法、荧光法、原子吸收分光光度法等。

比色法灵敏度较低,试剂也不稳定;电化学法干扰严重;气相色谱法与分子荧光法的灵敏度和选择性较好,但操作繁琐,试剂需进口且对人体有害;中子活化法所需的设备较昂贵,一般实验室难以具备;氢化物原子吸收法灵敏度高,但线性范围较窄,样品用量较大。

本文采用氢化物原子荧光法测定饲料中的硒,准确性好,操作简便。

1 主要仪器与试剂1.1 主要仪器M DS-6型温压双控密闭微波溶样系统,ECH -1电子控温电热板(上海生产),AFS-920型原子荧光仪(北京生产),特制编码硒空心阴极灯。

1.2 试剂和材料本方法所用试剂纯度均为优级纯,测定用水为去离子水。

常规试剂:浓硝酸、浓盐酸、双氧水;5.0%盐酸溶液;5.0%硫脲+ 5.0%抗坏血酸混合液;载气:氩气;还原剂:1.0%硼氢化钾+0.2%氢氧化钾,临用时现配。

载流5.0%盐酸+ 1.0%硫脲+ 1.0%抗坏血酸,临用时现配。

饲料样品:大鸭料、乳猪料、鱼饲料、蛋鸡料各一份。

标准物质:茶叶(GBW07605,国家标准物质研究中心)。

硒标准储备液:1mg/mL (国家标准物质研究中心)。

硒标准使用液:准确吸取一定量的硒标准储备液,用5.0%盐酸溶液逐级稀释,最后加入10mL5.0%硫脲+ 5.0%抗坏血酸混合液并用5.0%盐酸溶液稀释成10.0 g/L的硒标准使用液50mL,摇匀,静置30min后测定。

食用菌中硒元素含量的测定摘要以食用菌为试验材料介绍硒元素含量的测定，结果表明：硒标准曲线方程为I=21.947 C+11.543，R=0.999 8，重复试验中，测得香菇中硒平均含量为0.023 0 mg/kg，相对标准偏差为4.68%，加标回收率试验中，平均回收率为100.27%，相对标准偏差为3.24%；双孢蘑菇中硒含量要高于姬菇、香菇、金针菇、平菇中的硒含量。

关键词食用菌；硒含量；测定硒既是一种营养元素，又是一种抗氧化剂，具有清除体内自由基及抗衰老的作用。

它是人体红细胞谷胱甘肽过氧化物酶和磷脂过氧化氢谷胱过甘肽过氧化物酶的组成成分，其主要作用是参与酶的合成，保护细胞膜的结构与功能免遭过度氧化和干扰。

近年来的研究表明，硒及硒化物（Sodium Selenete）除具有抗氧化作用外，还有抗肿瘤、延长寿命和提高机体免疫功能等作用。

机体缺硒将导致一系列疾病的发生，如克山病、大骨节病等。

但世界上有40多个国家的土壤缺硒，我国有72%的地区属于缺硒地区。

因此，生产富硒食品成为我国功能性食品的研究热点之一。

目前，食用菌作为富集硒元素的载体，因其栽培面积广，操作简便，富集效果显著，在我国正被广泛应用。

但是食用菌中的硒含量是否属安全食用量范围，需要检测才能判定。

常见的测定方法有分光光度法、荧光法、氢化物原子荧光光谱法和电感耦合等离子质谱（ICP-MS）法。

分光光度法和荧光法操作繁琐，所用试剂2，3-二氨基萘（2，3-diaminonap-hthalene，简称DAN）有一定毒性且需进口。

氢化物原子荧光光谱法和电感耦合等离子质谱（ICP-MS）法相对前2个方法快速、简便、准确度和精密度要好。

电感耦合等离子质谱仪（ICP-MS）虽能同时检测多种元素，但其价格昂贵，需进口，且对实验室环境要求较高。

由于ICP-MS的载气是高纯氩气，氩气和氯化氩的同位素接近硒的同位素而产生很大干扰。

因此，ICP-MS无法采用普通的方法进行硒的检测。

原子荧光法测定食品中的硒【摘要】采用原子荧光法测定食品中的硒，硒的相对标准偏差为1.2％，检出限为0.40mg/ml。

线性范围为0～400μg/L，相关系数为0.9999.回收率为95.1%～103.8％。

【关键词】硒；原子荧光；食品硒是人体必需的微量元素，但是摄入过多对人体健康造成危害。

近年来，在食品加工方面有任意在一些食品中强化硒的倾向。

为了保障人体健康，因此要加强硒在食品、水中含量的监测力度。

常用方法有荧光法、原子吸收法和比色法等，荧光法虽然准确但繁琐，并且所用试剂DAN毒性大且需进口。

原子吸收法火焰法灵敏度低，石墨炉法有严重的基体干扰，比色法简便、灵敏度低。

原子荧光法测定硒克服以上方法的缺点，是一种简便、灵敏度高的方法。

1 实验部分1.1 试剂与仪器单光道原子荧光分光光度计（北京瑞利分析仪器公司ＡＦ-610），配有计算机处理系统，硒空心阴极灯：北京真空电子技术研究所，硝酸（优级纯），高氯酸（优级纯），盐酸（优级纯），混合酸：硝酸＋高氯酸（4+1），氢氧化钾（分析纯），硼氢化钾溶液（15g/L）称取2g KOH溶于约200ml纯水中，加入15g硼氢化钾并使之溶解后，用脱脂棉过滤，用纯水稀释至1000ml，摇匀。

宜现配现用。

铁氰化钾（100g/L)：称取10.0g铁氰化钾（K3Fe(CN)6)溶于100ml蒸馏水中，混匀。

硒标准贮备液：国家标准物质GBW（E）080215 100μg/ml，硒标准应用液：取100μg/ml 硒标准贮备液1ml，定容至100ml，此应用液浓度为1μg/ml。

载流：20%（V/V）HCl本方法中，除特殊规定外，所用试剂分析纯，实验用水为去离子水。

1.2 仪器工作条件ＰＭＴ电压：340V，ＨＣl主阴极电流：100mA。

HCl辅助阴极电流：0mA；原子化器温度：室温（档）。

原子化器高度：7mm。

载气流量：600ml/min。

测量方式：标准曲线法，进样体积：0.5ml。

方法验证报告项目名称：水质硒的测定分析方法：原子荧光法方法编号：HJ 694-2014验证人员：验证日期：2020年7月21日~30日一、适用范围适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中硒的测定；方法检出限为 0.4 ug/L，测定下限为 1.6 ug/L。

二、检测方法原理检测方法：原子荧光法方法原理:经预处理后的试液进入原子荧光仪，在酸性条件的硼氢化钾还原作用下，生成硒化氢，氢化物在氩氢火焰中形成基态原子，其基态原子灯发射光的激发产生原子荧光，原子荧光强度与试液中待测元素含量在一定范围内呈正比。

三、仪器和试剂1、仪器1.1原子荧光光谱仪：北京海光AFS-230E型；1.2硒元素灯；1.3抽滤装置：0.45 μm孔径水系微孔滤膜；1.4分析天平：梅特勒电子天平，精度为0.0001g；1.5一般实验室常用器皿和设备；1.6 采样容器：硬质玻璃瓶。

2、试剂2.1盐酸：ρ（HCl）= 1.19 g/ml，优级纯。

2.2氢氢化钠（NaOH）：优级纯。

2.3 硼氢化钾（KBH4）：优级纯。

2.4 硒标准溶液直接购买市售有证标准物质（1000mg/L）和样品；硒标准贮备液：ρ（Sb）=100 mg/L，以有证标准物质制备硒储备液；硒标准中间液：ρ（Sb）=1.00 mg/L，以硒储备液制备硒中间液；硒标准使用液：ρ（Sb）=10 μg/L，以硒中间液制备硒使用液；四、采样要求和样品预处理3.1样品的采集样品采集参照HJ/T 91和HJ/T 164的相关规定执行，溶解态样品和总量样品分别采集。

3.2样品的保存样品保存参照HJ 493 的相关规定进行。

3.3试样的制备样品采集后尽快用0.45 μm滤膜过滤，弃去初始滤液50ml，用少量滤液清洗采样瓶，收集滤液于采样瓶中。

每升水样中加入2ml盐酸，样品保存期为14d。

量取50.0ml混匀后的样品于150ml锥形瓶中，加入5ml硝酸-高氯酸混合酸，于电热板上加热至冒白烟，冷却。

应用原子荧光光谱法测定环境标准样品硒作者：郑文婷来源：《商品与质量·消费视点》2013年第07期摘要：硒是一种具有蓄积作用的有毒有害元素，列为饮用水中重要的监测项目。

本文应用原子荧光光谱法探讨仪器参数、标准样品的稀释倍数、消解过程及还原剂的配制等因素对测定标准样品硒的影响，总结出在饮用水中测定硒过程中最佳条件。

关键词：氢化物发生；原子荧光光谱法；消解；硒一、实验部分1.原理在盐酸介质中，以硼氢化钾（KBH4）为还原剂，将硒还原成硒化氢（SeH4），由载气氩气将其带入原子化器中进行原子化，在硒空心阴极灯照射下，基态硒原子被激发至高能态，在去活化回到基态时，发射出特征波长荧光，在一定浓度范围内其荧光强度与硒的含量成正比。

与标准系列比较定量。

反应如下：KBH4+3H2O+HCl→H3BO3+KCl+8H（2+n）H+Em++KH4+H2↑2.仪器及试剂AFS-230双道原子荧光光度计（北京海光公司）；硒特制空心阴极灯；硒标准溶液（100mg/L）：国家标准物质研究中心购买；还原剂：2%硼氢化钾-0.4%氢氧化钾溶液；载流液：3mol/L盐酸溶液；载气：高纯氩，纯度> 99.99%；其中实验用水为超纯水，所用试剂硝酸、高氯酸、氢氧化钾、盐酸等均为优级纯，使用试剂均现用现配；分析玻璃仪器提前用15%～20%硝酸浸泡24h纯水冲洗干净。

2.分析步骤（1）配制硒标准曲线准确吸取1mL硒标准液，加入5mL的5%盐酸，用纯水定容到100ml，最后稀释成浓度为0.10 ug/mL的硒标准使用液。

取50 mL容量瓶6个依次编号，按表1硒标准应用液用量。

加入纯水稀释至刻度。

表1 硒标准系列配制元素编号 1 2 3 4 5 6硒取量（mL） 0.00 0.50 2.50 5.00 7.50 10.00浓度（ug/m） 0.00 1.00 5.00 10.00 15.00 20.00（2）标准样品预处理按要求将硒环境标准样品稀释为25倍，浓度在10.0～15.0ug/L。

实验四水体中硒（Ⅳ），硒(Ⅵ)的测定一、实验目的1．学习原子荧光分析仪的操作2．掌握原子荧光法测定水体中硒（Ⅳ），硒(Ⅵ)的原理二、实验原理硒化合物对人体有较强的毒性，其毒性的大小与价态有关。

硒化合物以四价的亚硒酸和亚硒酸盐毒性最大，其次为六价的硒酸和硒酸盐。

因此测定水体中硒的不同价态有着重要的意义。

硒（Ⅳ），硒(Ⅵ)的测定原理：硒在不同酸度下与KBH4反应形成氢化物的行为不同，在2mol/L HCl介质中，硒（IV）被KBH4还原生成H2Se，而硒（VI）在此酸度下不与KBH4反应。

但在以沸水浴加热的6mol/L HCl介质中，硒（VI）能够全部还原成硒（IV）。

由此可在2mol/L HCl介质中直接测定硒（IV），在煮沸的4mol/L HCl介质中测定总硒，再用差减法求得硒（VI）的量。

氢化物发生-原子荧光法测定硒原理：在盐酸和高氯酸溶液中，以硼氢化钾作还原剂，使硒生成硒化氢，以氮气作为载气将生成的硒化氢导入电加热石英管炉中进行原子化。

硒原子受光辐射后被激发产生电子跃迁，当激发态的电子返回基态时发出荧光。

此时产生的荧光谱线与硒无极放电灯发射谱线产生共振，于波长196.0nm处测定所产生的荧光强度，其荧光强度与试样中硒含量成正比。

硒的标准分析条件：光源：空心阴极灯，灯电流60mA负高压：260～360V炉温：200℃样品消耗量：断续流动法约0.8mL三、仪器和试剂1.无色散原子荧光分折仪2.空心阴极灯3.沸水浴4.硝酸，优级纯5.盐酸，优级纯6.高氯酸，优级纯7.盐酸—高氯酸混合酸液：将300m1浓盐酸加入500m1水中，搅匀，加入50m1浓高氯酸，用水稀释至1L(此溶液作为空白试液用)8.0.8％(g/L)硼氢化钾碱溶液；将4g氢氧化钠溶解于500m1水中，加入8g硼氢化钾，搅拌至溶解完全。

加水至1L，用定性滤纸过滤，滤液贮于塑料瓶中(临用前配制)9.硒标准贮备溶液：准确称取纯度≥99.9％的金属硒0.1000g，溶于少量浓硝酸中，加入高氯酸2ml，于水浴上加热至白烟冒尽以除去硝酸。

土壤硒测定SOP及方法验证项目名称：土壤中硒含量的测定分析方法：微波消解-原子荧光光谱法标准编号：NY/T 1104-2006《土壤中全硒的测定》中6；HJ 680-2013《土壤和沉积物汞、砷、硒、铋、锑的测定微波消解/原子荧光法》验证人：谢威验证地点：杨柳北路1号验证时间：2018.6.6第一部分SOP1、试剂及耗材1.1 硝酸（HNO3），ρ-1.19g/mL。

1.2 盐酸（HCl），ρ-1.42g/mL。

1.3 氢氟酸（HF）。

1.4 氢氧化钠（NaOH）。

1.5 硼氢化钾（KBH4）1.6 盐酸溶液：V/V=5%1.7 还原剂：称取0.5g氢氧化钠（1.4）于100mL实验用水中，搅拌溶解后加入称好的2g硼氢化钾（1.5），搅拌溶解。

此溶液当日配制。

1.8 硒标准溶液：经国家认证并授予标准物质证书的单元素标准溶液，浓度：1000mg/L2 仪器2.1 原子荧光分光光度计（型号：AFS-9700）2.2 微波消解仪（型号：Multiwave PRO）2.3 可调式控温电热板。

2.4 粉碎机。

3 试样处理3.1 试样的制备将样品风干后，用粉碎机破碎，并过0.2mm的筛。

保存备用。

3.2 试样的消解称取制备好的样品0.2~0.5g（精确至0.0001g）置于微波消解罐中，少量水润湿。

加入9mL硝酸（1.1），3mL盐酸（1.2），1mL氢氟酸（1.3）。

混匀后置于120℃加热板上预消解30min，待反应缓和后取下，稍冷。

密封微波消解罐，并放入微波消解仪中，按照仪器预设的消解程序进行消解。

消解完成后冷却，泄压，打开消解罐。

3.3 样液的制备将打开后的消解罐置于160℃的加热板上，赶酸，待酸液剩至约1mL时，取下冷却，加入10mL盐酸（1.2），继续加热赶酸，将硒还原。

待酸液剩至约1mL时，取下冷却，加入5mL盐酸（1.2），用水洗涤消解罐，将样品全部转入50mL容量瓶中，以水定容至刻度。

必要时过滤。

中华人民共和国国家标准GB 5009.93—2010食品安全国家标准食品中硒的测定National food safety standardDetermination of selenium in foods中华人民共和国卫生部发布前言本标准代替GB/T 5009.93-2003《食品中硒的测定》。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB/T 5009.93-2003；——GB/T 12399-1996；——GB 13105-1991。

食品安全国家标准食品中硒的测定1范围本标准规定了用氢化物原子荧光光谱法和荧光法测定食品中硒的方法。

本标准适用于食品中硒的测定。

2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

第一法氢化物原子荧光光谱法3原理试样经酸加热消化后，在6 mo1/L盐酸介质中，将试样中的六价硒还原成四价硒，用硼氢化钠或硼氢化钾作还原剂，将四价硒在盐酸介质中还原成硒化氢（H2Se），由载气（氩气）带入原子化器中进行原子化，在硒空心阴极灯照射下，基态硒原子被激发至高能态，在去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其荧光强度与硒含量成正比。

与标准系列比较定量。

4试剂和材料除非另有规定，本方法所使用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。

4.1硝酸：优级纯。

4.2高氯酸：优级纯。

4.3盐酸：优级纯。

4.4 混合酸：将硝酸与高氯酸按9：1体积混合。

4.5 氢氧化钠：优级纯。

4.6 硼氢化钠溶液（8 g/L）：称取8.0 g硼氢化钠（NaBH4），溶于氢氧化钠溶液（5 g/L）中，然后定容至1000 mL，混匀。

4.7 铁氰化钾（100 g/L）：称取10.0 g铁氰化钾[（K3Fe（CN）6）]，溶于100 mL水中，混匀。

4.8 硒标准储备液：精确称取100.0 mg硒（光谱纯），溶于少量硝酸中，加2 mL高氯酸，置沸水浴中加热3 h～4 h，冷却后再加8.4 mL盐酸，再置沸水浴中煮2 min，准确稀释至1000 mL，其盐酸浓度为0.1 mo1/L，此储备液浓度为每毫升相当于100 μg硒。

FHZDZHS0025 海水硒的测定催化极谱法F-HZ-DZ-HS-0025海水—硒的测定—催化极谱法1 范围本方法适用于海水及河水中溶解态硒的测定。

检出限：0.1μg/L。

2 原理用盐酸将硒（V1）还原成硒（1V）。

在pH 4.6～6时，以氢氧化铁作载体共沉淀硒（1V）。

沉淀溶于高氯酸中，以柠檬酸三铵、EDTA作掩蔽剂，硒（1V）被亚硫酸还原成单价硒。

在氟化铵-氢氧化铵缓冲溶液中（pH10），Se与SO32-生成SeSO32-。

在碘酸钾存在下，SeSO32-产生一个灵敏的硒极谱催化波。

其峰电流值随硒浓度增加而增加。

3 试剂除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水均为二次去离子水或等效纯水。

3.1 硝酸（ρ1.42g/mL），优级纯。

3.2 盐酸溶液，1+4：取1体积盐酸（ρ1.09g/mL，优级纯）与4体积水混合。

3.3 高氯酸溶液，1+1：取1体积高氯酸（ρ1.66g/mL，优级纯）与等体积水混合。

3.4 氢氧化铵溶液，1+2：取1体积氢氧化铵（ρ0.90g/mL，优级纯）与2体积水混合。

3.5 氢氧化铵溶液，1+99：取1体积氢氧化铵（ρ0.90g/mL，优级纯）与99体积水混合。

3.6 亚硫酸钠溶液，50g/L：称取5g亚硫酸钠（Na2SO3）于50mL烧杯中，加水溶解，移入100mL 容量瓶中并稀释至刻度，摇匀。

3.7 柠檬酸三铵-EDTA混合溶液：称取5g柠檬酸三铵[(NH4)3C6H5O7]和2g乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA二钠盐，C10H14N2O8Na2·2H2O，优级纯）于50mL烧杯中，加水溶解，移入100mL容量瓶中并稀释至刻度，摇匀。

3.8 碘酸钾溶液，12g/L：称取1.2g碘酸钾（KIO3，优级纯）于50mL烧杯中，加水溶解，移入100mL容量瓶中并稀释至刻度，摇匀。

3.9 氟化铵-氢氧化铵缓冲溶液（pH10）：称取20g氟化铵（NH4F）于100mL烧杯中，加水溶解，移入200mL容量瓶中，加入60mL氢氧化铵（ρ0.90g/mL，优级纯），加水稀释至刻度，摇匀后转入聚乙烯塑料瓶中保存。

硒的测定方法及中草药中硒含量的测定冯程08应用化学摘要硒是人体健康必需的微量元素之一，具有抗癌、抗氧化、抗辐射、抗衰老和提高人体免疫力等作用，人体补硒的最佳途径是食用农副产品，但其含量过多或过少都会对人体造成损害[1 ]，因此，硒含量的测定非常重要。

目前测定硒的方法很多，主要有电化学法[2]、原子吸收法[3]、紫外分光光度法[4]、催化动力学光度法[5]、催化极谱法[6]、氢化物原子荧光法[7]等。

利用原子荧光分光光度法测定了活血化瘀中草药和普通中草药的硒含量,活血化瘀中草药中硒含量平均值高于普通中草药,两者具有显著性差异(P<0·01)。

[关键词] 中草药,硒,荧光分光光度法,心血管疾病ABSTRACTTo study the method of determination contents of Selenium of tea by hydride generation atomic fluorescence spectrometry, the influence of instrument parameters and sample digestion condition are discussed, and the optimized experimental conditions were obtained.The average content of seleniumwas (0·73±0·26) ×10-6and (0·34±0·24)×10-6respectively. The difference of selenium between common herbs and invigorating circulation blood and removing blood stasis herbs was significant (P<0·01).[Key words] herb, selenium, fluorometry目录摘要 (i)ABSTRACT (ii)前言 (1)1总硒的测定方法 (1)1.1荧光法 .................................................................................. 错误!未定义书签。