食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法

高效液相色谱法测定糕点中苯甲酸.山梨酸.糖精钠含量的研究摘要本文对国标法进行改进,建立了用HPLC测定糕点中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠的前处理方法。

结果表明,该方法平均回收率均达到92.8%以上,符合试验要求。

关键词HPLC;糕点;苯甲酸;山梨酸;糖精钠;前处理苯甲酸、山梨酸是有机化学防腐剂,可以防止食品腐败变质,延长食品保存期,抑制食品中微生物繁殖;糖精钠是一种人工合成甜味剂,其糖度为蔗糖的500倍,且价格低廉。

上述3种添加剂在食品加工过程中被广泛使用,但过量食用会对人体会产生一定影响,因此对食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量进行检测有重要意义。

目前,国标法(GB/T 5009-2003)[1]使用高效液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠只适用于汽水、果汁、配制酒等液体食品,但在实际工作中,经常遇到固体食品(如糕点)需要检测。

由于糕点类食品含有蛋白质、淀粉类大分子,以及油脂,直接进样会堵塞、损伤色谱柱;而采用有机溶剂提取,操作过程繁琐,对操作者健康的损害大。

为此,笔者对国标法进行改进,探讨出针对糕点样品的HPLC前处理方法,进行糕点样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量测定,获得了良好的效果。

1 试验原理糖精钠是易溶于水的盐类,样品中的苯甲酸、山梨酸经氢氧化钠溶液(1.0 mol/L)浸泡后,转化为易溶于水的苯甲酸钠、山梨酸钠,经沉淀蛋白质、过滤等处理后,3种被测组分滞留于水相中与杂质分离,经流动相带进色谱柱后进行分离,以保留时间定性,以峰面积定量。

2 材料与方法2.1 材料2.1.1 仪器1)高效液相色谱仪;2)快速扫描紫外分光检测器;3)超声波清洗器;4)0.45μm微孔滤膜过滤器;5)台式低速大容量离心机;6)样品粉碎机。

2.1.2 试剂1)甲醇,色谱纯;2)0.02 mol/L的乙酸铵溶液;3)1.0 mol/L氢氧化钠溶液;4)6 mol/L盐酸溶液;5)106 g/L的亚铁氰化钾溶液;6)220 g/L的乙酸锌溶液;7)50 g/L饱和硼砂溶液;8)纯水,2次重蒸水。

项目五用高效液相色谱法检测物质任务一食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的测定（液相色谱法）单元一液相色谱分离原理和液相色谱仪的基本组成教学内容苯甲酸和山梨酸是我国目前最常用的食品防腐剂，广泛应用于各种果汁饮料中，以防止其变质。

但如果防腐剂的含量超过标准限度，或者长期饮用含有防腐剂的饮料，则会对人体健康造成不得影响，因此检测果汁中的苯甲酸和山梨酸含量是非常有必要的。

表GB2760-2007国家食品添加剂使用卫生标准抑制物质腐败的药剂。

即对以腐败物质为代谢底物的微生物的生长具有持续的抑制作用。

重要的是它能在不同情况下抑制最易发生的腐败作用，特别是在一般灭菌作用不充分时仍具有持续性的效果。

对纤维和木材的防腐用矿油、煤焦油、丹宁，对生物标本用甲醛、升汞、甲苯、对羟基苯甲酸丁酯、硝基糠腙衍生物或香脂类树脂。

在食品中使用防腐剂受到限制，因此多靠干燥、腌制等一些物理的方法。

特殊的防腐剂有乙酸等有机酸、以油酸脂为成分的植物油、芥子等特殊的精油成分。

对于生物体的局部（如人体表面或消化道），可以根据具体条件采用各种防腐剂（如碘仿、水杨酸苯酯、苯胺染料或吖啶类色素等）。

我国规定使用的防腐剂有苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙等25种。

防腐剂应具备的几个条件：1、性质较稳定：加入到食品中后在一定的时期内有效，在食品中有很好的稳定性2、低浓度下具有较强的抑菌作用3、本身不应具有刺激气味和异味4、不应阻碍消化酶的作用，不应影响肠道内有益菌的作用5、价格合理，使用较方便。

防腐剂的作用机理：1、能使微生物的蛋白质凝固或变性，从而干扰其生长和繁殖。

2、防腐剂对微生物细胞壁、细胞膜产生作用。

由于能破坏或损伤细胞壁，或能干扰细胞壁合成的机理，致使胞内物质外泄，或影响与膜有关的呼吸链电子传递系统，从而具有抗微生物的作用。

3、作用于遗传物质或遗传微粒结构，进而影响到遗传物质的复制、转录、蛋白质的翻译等。

4、作用于微生物体内的酶系，抑制酶的活性，干扰其正常代谢。

134 食品安全导刊 2020年9月Tlogy科技分析与检测食品很容易因为温湿度、环境等出现变质，给企业带来巨大经济损失，也会制约食品行业发展。

防腐剂的添加很好地延长了食品的保质期，因此被广泛添加到食品中。

目前常添加的有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、丙酸及其盐、脱氢乙酸等。

甜味剂能够改善口感进而增加食欲，常用的甜味剂有糖精钠、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜与阿力甜等[1]。

近些年的研究表明食品添加剂超量使用也会危害人体健康，食品安全国家标准对防腐剂和甜味剂的添加量作出明确规定，以保证食品安全[2]。

本文采用液相色谱法同时测定食品中所添加的苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、糖精钠和安赛蜜。

1　试验部分1.1　仪器与试剂Waters allianc acquity e2695液相色谱仪；涡旋混合器；HR/T20 MM 立式高速冷冻离心机；KH-250DB 数控型超声波清洗器。

甲醇（HPLC 纯）；乙酸铵、亚铁氰化钾、乙酸锌均为分析纯；标准试剂：山梨酸、安赛蜜、苯甲酸、糖精钠纯度均＞99%。

1.2　色谱条件色谱柱：C 18柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm）；流动相：甲醇+乙酸铵溶液=8+92；柱温：35 ℃；进样量：10 μL，检测波长：230 nm；流速：1 mL/min。

1.3　样品前处理取2.5 g 左右样品于50 mL 离心管中，加入25 mL 水涡旋振荡，加入2 mL 10.6%的亚铁氰化钾溶液涡旋20 s 混匀，再加入2 mL 22%的乙酸锌溶液涡旋1 min 后定容至刻度线，超声30 min，于10 000 r/min 离心10 min，上清液转移至50 mL 容量瓶中，残渣再加水混匀后离心提取一次，上清液合并至原容量瓶中，用水定容至刻度线混匀，取上清液2 mL 过 0.22 μm 滤膜，供液相色谱上机检测。

2　结果与讨论2.1　流动相条件的选择参照GB 5009.28-2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》检测标准，通过改变甲醇的比例[1]对比验证标准品目标峰的分离和出峰时间，最后确定流动相条件为：甲醇+乙酸铵溶液=8+92。

066苯甲酸、山梨酸、糖精钠是常用的食品添加剂，也是衡量食品卫生质量的重要指标。

苯甲酸、山梨酸具有防腐保鲜的作用，糖精钠是合成甜味剂，甜度比蔗糖甜300－500倍。

GB2760－2016《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》对这三者的添加范围和限量都有明确的规定，超范围或者超限量使用都是违法的。

GB5009.28－2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》对其检测方法做了规定，有高效液相色谱法和高效气相色谱法，其中高效液相色谱法为第一法仲裁法被广泛应用。

国标方法在使用前要进行方法验证，核查实验室能否满足检测方法的要求。

本研究针对高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的适用性、线性、检出限、定量限、加标回收率等进行了一一验证，均能够满足检测方法的要求。

一、仪器与试剂1.仪器。

高效液相色谱仪（紫外检测器，Y001），岛津LC－20AT；电子分析天平（Y033），BSA623S－CW，d ＝0.001g。

2.试剂。

苯甲酸钠标准品（唯一性标识3422003，纯度100.0％），北京坛墨质检科技有限公司；山梨酸标准品（唯一性标识3192003，纯度99.9％），北京坛墨质检科技有限公司；糖精钠标准品（唯一性标识3212005，纯度99.5％），北京坛墨质检科技有限公司；甲醇（色谱级），Aigma－Aldrich；乙酸铵（色谱级），aladdin；亚铁氰化钾、乙酸锌（分析纯），天津市天力化学试剂有限公司；实验室用水为自制超纯水。

二、实验与方法1.色谱条件。

（1）色谱柱：Diamonsil Plus 5um C 18，250×4.6mm；检测波长230nm；进样量10uL。

（2）流动相：甲醇＋乙酸铵溶液（0.02mol/L）＝5＋95；流速1mL/min。

高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证2.样品前处理。

准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min。

食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定1 范围本方法适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量的测定。

2 依据GB/T 23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 高效液相色谱法》。

3 原理不同样品经提取后，将提取液过滤，经反相高效液相色谱分离测定，根据保留时间定性，外标峰面积定量。

.4 试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682要求。

甲醇，乙酸铵等。

苯甲酸标准储备液：称取0.0638g 苯甲酸，用少量乙醇溶解并用水定容至100mL 。

山梨酸标准储备液：称取0.0766g 山梨酸，用少量乙醇溶解并用水定容至100mL 。

糖精钠标准储备液：称取0.0766g 糖精钠，用水溶解并定容至100mL 。

混合标准使用液：分别吸取不同体积苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液，将其稀释成适当浓度，见附后标准曲线图谱。

5 分析步骤 5.1 样品处理称取适量样品（雪菜）于小烧杯中，用50mL 水分数次将样品移入100mL 容量瓶中，80℃水浴提取30min ，冷却后定容、过滤，滤液待上机分析。

5.2 色谱条件a) Agilent 高效液相色谱仪；b) 色谱柱：C 18柱，250mm ×4.6mm ，5μm ；c) 流动相：0.02mol/L 乙酸铵溶液+甲醇（90+10）； d) 流速：1mL/min ； e) 检测波长：230nm ； f) 进样量：20μL ； g) 柱温：25℃。

5.3 测定取处理液和混合标准使用液各20μL 注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间为依据定性，以其峰面积求出样液中被测物质含量。

6 结果计算样品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量按下式计算： X =式中：X ——样品中待测组分含量，g/kg ；c ×Vm ×1000c ——由标准曲线得出的样液中待测物的浓度，μg /mL ； V ——样品定容体积，mL ； m ——样品质量，g 。

食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法-回复[食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法]引言：食品中的添加剂是保证食品质量及延长其保质期的重要组成部分。

然而，由于食品添加剂的广泛应用，安全性和卫生问题引起了广泛的关注。

苯甲酸、山梨酸和糖精钠是常见的食品添加剂，在超标使用或不当使用的情况下，可能对人体健康产生不良影响。

因此，为了确保食品质量和消费者的健康，有必要开发一种有效的方法来准确测定食品中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量。

本文将介绍一种基于液相色谱法的测定方法，并详细阐述其步骤和原理。

一、实验所需设备和试剂1. 液相色谱仪2. 色谱柱：C18色谱柱3. 色谱条件：流动相为乙腈-水混合溶液，比例为90：10，流速为1 mL/min，检测波长为210 nm4. 标准品：苯甲酸、山梨酸和糖精钠的纯品5. 待测食品样品二、实验步骤1. 准备标准曲线a. 分别称取适量的苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准品，溶解于适量的甲醇中，得到不同浓度的标准溶液。

b. 以液相色谱仪的条件进行测定，绘制出标准曲线。

2. 准备待测食品样品a. 将待测食品样品加入适量的甲醇中，进行超声处理，使样品中的目标物溶解于甲醇中。

b. 过滤处理，去除杂质。

3. 液相色谱测定a. 取适量的样品溶液，注入液相色谱柱中进行分析。

b. 根据标准曲线，计算出样品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量。

三、实验原理液相色谱法是一种基于溶液中目标物的分配与移动速度的差异来分离和测定化合物的方法。

在该实验中，通过使用C18色谱柱，利用溶液中苯甲酸、山梨酸和糖精钠分子之间的相互作用力差异进行分离，以此来测定样品中这些成分的含量。

在液相色谱的过程中，流动相起到了重要的作用。

在本实验中，流动相为乙腈-水的混合溶液，并通过调整乙腈和水的比例来使混合溶液的极性适宜于目标物的分离。

流速的选择需要在快速分离和充分分离之间进行权衡。

波长的选择主要考虑目标物在特定波长下的吸收峰。

分析检测高效液相色谱法测定果汁饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量辛明彦（浮山县综合检验检测中心，山西临汾 042600）摘 要：目的：建立高效液相色谱-紫外检测器测定果汁饮料中苯甲酸、山梨酸及糖精钠3种食品添加剂的分析方法。

方法：果汁饮料试样用纯水提取，经Acclaim TM 120 C18色谱柱分离，用紫外检测器测定。

结果：苯甲酸、山梨酸及糖精钠在1.00～50.00 mg/L线性良好，相关系数均大于0.999，3种添加剂的检出限均为0.005 g/kg，定量限均为0.015 g/kg，加标回收率为91.7%～109.0%，RSD为1.29%～3.36%。

结论：该方法前处理简便、分析速度快、准确度高及精密度好，可用于上述3种添加剂的定性、定量检测。

关键词：高效液相色谱；果汁饮料；食品添加剂Determination of Benzoic Acid, Sorbic Acid and Saccharin Sodium in Fruit Juice Drinks by HPLCXIN Mingyan(Fushan County General Inspection and Testing Center, Linfen 042600, China) Abstract: Objective: The method for the determination of benzoic acid, sorbic acid and saccharin sodium in fruit juice drinks by HPLC with UV detector was established. Method: Pear juice beverage samples were extracted with pure water, separated by Acclaim TM120 C18 chromatographic column and determined by UV detector. Result: The linearity of benzoic acid, sorbic acid and saccharin sodium is good at 1.00～50.00 mg/L, the correlation coefficient is greater than 0.999, the detection limit of the three additives is 0.005 g/kg, the quantitative limit is 0.015 g/kg, the recovery is 91.7%～109.0%, and the RSD is 1.29%～3.36%. Conclusion: The method has the advantages of simple pretreatment, fast analysis speed, high accuracy and good precision. It can be used for the qualitative and quantitative detection of the above three additives.Keywords: high performance liquid chromatography; fruit juice beverage; food additives随着我国社会经济发展与食品工业水平的提升，人们对饮料类食品的消费需求日益增长，果汁类饮料以其口味佳、富含维生素与矿物质等优势深受广大消费者喜爱[1-3]。

液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/，糖精钠的检测参照GB/T，即可开展实验。

苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在一定的难度，许多新手常出现因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。

笔者根据自己多年该方面工作的实际经验出发，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详细的阐述。

2样品前处理的注意事项GB/和GB/在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只讲述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。

食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作。

这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。

GB/使用5％硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。

如用10％钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10％亚铁氰化钾溶液和20％醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过最理想的沉淀剂）。

具体操作步骤如下：取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡均匀，加入氢氧化钠溶液(1mol/L) ml，加入%亚铁氰化钾溶液，20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物,初滤液过μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL 测定。

用这种方法简单易行，接触有机试剂少，重复性和回收率都令人满意；缺点是一定要用液相色谱法检测，有一定局限。

3检测仪器的选择虽然液相色谱仪操作起来比气相色谱仪要复杂，但笔者建议如条件许可仍尽量用液相色谱法检测。

原因如下：液相色谱法所用的样品处理方法远比气相色谱法简单，且不需使用有机试剂。