氨苄青霉素抗性基因90页PPT

配伍禁忌

禁忌

不能与酸性药物配伍； 不能与碱性药物配伍（碳酸氢钠、氨茶碱、乳酸钠）； 不能与胺或醇类药物配伍； 不可与同类抗生素联用，效果不协同，毒性增加；
不可与速效抑菌剂联用；
不可与维生素C混合。
*给药时，应以注射用水或等渗氯化钠溶液作溶媒。
配伍禁忌

协同

与氨基糖苷类药物联用
青霉素类药物研究进展
青霉素类抗生素

1940年，青霉素作为第一个用于临床的抗生素面市。

结构通式：

母核：6-氨基青霉烷酸（6-APA）＋侧链 A：噻唑环；B：β -内酰胺环；R1：半合成青霉素改造侧链。
O H H
R1 C N C C O B
H
C N
S
A C
CH3
6APA
CH3 C C O R2 H O
其他不良反应

中枢神经系统反应

对神经组织有一定的刺激性和毒性； 局部肌内注射可发生外周神经炎；
由于定位错误而引起坐骨神经损害也并非罕见。
大剂量青霉素治疗时，每日几千单位，可产生腱反射增强、肌 肉阵挛、癫痫样大发作、昏迷等，此种毒性反应多见于肾功能
减退及老年病人。

血液系统异常

可引起溶血性贫血，中性粒细胞减少症或白细胞减少症。

青霉素治疗梅毒或钩端螺旋体病时，可出现症状加剧现象； 可能与螺旋体抗原抗体形成免疫复合物或螺旋体被杀灭裂解后释放内 毒素有关。

余不良反应见总论
药物相互作用

丙磺舒可使青霉素类血药浓度上升；
理论上氯霉素、红霉素、四环素类、林可霉素类、磺胺 类等抑菌药可能减弱青霉素杀菌作用，但在球菌性脑膜 炎时常与磺胺嘧啶钠联用，流感嗜血杆菌性脑炎时与氯 霉素联用；

作用机制 —干扰细菌细胞壁黏肽的合成
青霉素作用靶点：青霉素结合蛋白（PBPs）
竞争性抑制细菌PBPs 细胞壁的粘肽合成受阻 细菌细胞壁缺损 细菌肿胀、破裂、死亡 触发自溶酶活性，使细菌溶解
繁殖期杀菌 青霉素类药物对处于繁 剂 殖期细菌作用强，对已 合成细胞壁、处于静止期的细菌作用弱. 时间依赖性，需一日多次给药。
青霉素类只作用于G+菌、G-球菌及少数G-杆 菌引起的感染。 哺乳动物细胞无细胞壁,故青霉素毒性小。
耐药机制
产生水解酶—— 最常见的机制
‐内酰胺酶使‐内酰胺环水解裂开，失去抗菌活性。
酶和药物牢固结合
青霉素类与‐内酰胺酶结合，使之失去 与PBPS结合机会
PBPs改变
突变菌株通过改变其PBPS使之不能与青霉素结合；生成新的PBPS （甲 氧西林耐药葡萄球菌）
三、广谱青霉素类
特点： 耐酸，可口服 不耐酶，对耐药金葡菌感染无效 对G+、G-杆菌都有效，但对G+菌的作用略逊于青霉素G， 对绿脓杆菌无效。 代表药物： 氨苄西林 、匹氨西林、阿莫西林、美洛西林
氨苄西林
作用特 点 可透过胎盘，孕妇中浓度较低，肌注吸 收>口服，温度↑稳定性↓
阿莫西林
口服吸收=肌注吸收>氨苄西林口服 杀菌作用比氨苄西林快而强；
临床应用
氟氯西林注射剂用于严重感染，而轻症感染可选口服双氯西林,苯唑西林的抗 菌作用稍弱，且血药浓度较低，故较重的感染需加大剂量
PBPs改变 亲和力 ↓ MRSA耐药（MRSA对头孢菌素类、氨基糖苷类、 四环素、红霉素、克林霉素耐药。可选用万古霉素或万古霉素与利福平合用）
耐药性 肠球菌属和G-杆菌耐药，葡萄球菌 肠杆菌属、铜绿假单胞菌、肠球菌、脆

氨苄青霉素〖药物名称〗氨苄青、广谱青霉素、安比西林、安比林、苄那消〖英文名〗Ampicillin, Acillin, BRL-1341, Doktacillin, Eurocillin, Pamecil〖作用与用途〗属广谱抗菌素,对数G 菌的抗菌作用不及青霉素G,对阴性杆菌的作用超过青霉素。

作用机制同青霉素。

但肠球菌对本品较为敏感,对G-杆菌作用较卡那霉素,庆大霉素弱,与四环素相仿,对伤寒杆菌,大肠杆菌的抗菌作用较强,绿脓杆菌和金葡菌对本品耐药.主要用于治疗敏感细菌所致的败血症,尿路感染,肺部感染,胆道感染等;治疗伤寒、副伤寒疗效与氯霉素相仿。

本品在脑膜炎症时，脑脊液浓度较高，也适用于治疗由肺炎球菌、脑膜炎双球菌及流感杆菌引起的脑膜炎。

与其他半合成青霉素类、氨基糖甙类及氯霉素等合用可增强疗效。

〖适应证〗用以治疗敏感的G 菌和流感杆菌、伤寒杆菌、淋球菌、脑膜炎球菌、大肠杆菌等G所致的呼吸道感染、胃肠道感染、尿路感染、软组织感染、脑膜炎、败血症、心内膜炎等。

〖用法及用量〗肌内或静注。

成人，肌内注射剂量为每日2～4g，分4次给予；静脉给药剂量每日4～12g，分2～4次，每日最高剂量为16g。

小儿，肌注剂量为每日按体重50～100mg/kg，分4次；静脉给药剂量每日按体重100～200mg/kg，分2～4次，每日最高剂量为按体重300mg/kg。

口服，成人每日2～4g,分4次服用；小儿每日按体重50～100mg/kg，分4次服用。

〖药物不良反应〗1.与青霉素有交叉过敏反应，可发生包括过敏性休克在内的各型过敏反应。

2.有恶心、轻度腹泻及皮疹。

肾功能重度损害伴心功能不全者，静滴本品钠盐可诱发心力衰竭，宜注重。

3.本品皮疹反应高于其他青霉素类抗生素；4.抗生素关联性肠炎:腹泻发生率约5%；5.SGOT升高；6.其他反应如大剂量可发生惊厥、血液系统异常等。

〖注重要点〗药物不良反应与青霉素相仿，以过敏反应较为多见。

氨苄青霉素氨苄青霉素〖药物名称〗氨苄青、广谱青霉素、安比西林、安比林、苄那消〖英文名〗Ampicillin, Acillin, BRL-1341, Doktacillin, Eurocillin, Pamecil〖作用与用途〗属广谱抗菌素,对数G 菌的抗菌作用不及青霉素G,对阴性杆菌的作用超过青霉素。

作用机制同青霉素。

但肠球菌对本品较为敏感,对G-杆菌作用较卡那霉素,庆大霉素弱,与四环素相仿,对伤寒杆菌,大肠杆菌的抗菌作用较强,绿脓杆菌和金葡菌对本品耐药.主要用于治疗敏感细菌所致的败血症,尿路感染,肺部感染,胆道感染等;治疗伤寒、副伤寒疗效与氯霉素相仿。

本品在脑膜炎症时，脑脊液浓度较高，也适用于治疗由肺炎球菌、脑膜炎双球菌及流感杆菌引起的脑膜炎。

与其他半合成青霉素类、氨基糖甙类及氯霉素等合用可增强疗效。

〖适应证〗用以治疗敏感的G 菌和流感杆菌、伤寒杆菌、淋球菌、脑膜炎球菌、大肠杆菌等G所致的呼吸道感染、胃肠道感染、尿路感染、软组织感染、脑膜炎、败血症、心内膜炎等。

〖用法及用量〗肌内或静注。

成人，肌内注射剂量为每日2～4g，分4次给予；静脉给药剂量每日4～12g，分2～4次，每日最高剂量为16g。

小儿，肌注剂量为每日按体重50～100mg/kg，分4次；静脉给药剂量每日按体重100～200mg/kg，分2～4次，每日最高剂量为按体重300mg/kg。

口服，成人每日2～4g,分4次服用；小儿每日按体重50～100mg/kg，分4次服用。

〖药物不良反应〗1.与青霉素有交叉过敏反应，可发生包括过敏性休克在内的各型过敏反应。

2.有恶心、轻度腹泻及皮疹。

肾功能重度损害伴心功能不全者，静滴本品钠盐可诱发心力衰竭，宜注重。

3.本品皮疹反应高于其他青霉素类抗生素；4.抗生素关联性肠炎:腹泻发生率约5%；5.SGOT升高；6.其他反应如大剂量可发生惊厥、血液系统异常等。

〖注重要点〗药物不良反应与青霉素相仿，以过敏反应较为多见。

学号：091201215分子生物学实验论文(2009级本科)题目：氨苄青霉素抗性在大肠杆菌中的研究系（部）院：农业与生物技术学院专业：生物工程作者姓名：何增寿完成日期：2011年12月10日二零一一年十二月氨苄青霉素抗性在大肠杆菌中的研究（农业与生物技术学院工程09（2）班何增寿091201202）摘要：为研究人工合成的氨苄青霉素在大肠杆菌中的抗性表达，利用PGEM--Teasy质粒为载体，把人工合成的抗氨苄青霉素的基因导入大肠杆菌，通过含有氨苄青霉素的培养基筛选出抗氨苄青霉素的基因的大肠杆菌，对筛选出的大肠杆菌进行质粒DNA提取,并对质粒进行PCR扩增和酶切电泳图分析。

结果表明：人工合成的抗氨苄青霉素的基因在大肠杆菌中表达并复制。

关键字：氨苄青霉素抗性大肠杆菌研究引言：在分子生物学日益普及的今天, 基因操作已成为一项重要的常规技术。

体外连接的DNA 重组体导入合适的受体细胞便能大量地复制、增殖和表达, 从而得到大量的重组基因。

其中尤以转化为主。

目前可以通过两种方法得到大肠杆菌感受态细胞的储存物: 第一种是通过商业途径购买冻存的感受态细胞, 其转化效率十分可靠, 一般可以达到108 的转化子/μg 质粒DNA, 但是相当昂贵, 通常选择的是自制感受态细胞的储存物。

因此, 感受态细胞的制备是分子生物学研究中的一个重要环节, 其制备质量的好坏直接影响到后续实验工作的进行。

1 材料和方法1.1 实验材料1.1.1 供试材料：大肠杆菌（实验室提供） PGEM--Teasy质粒 Taq酶1.1.2 仪器：基因扩增仪移液器电泳仪紫外检测仪恒温摇床恒温水浴器恒温培养箱低温离心机超净工作台冰箱离心管小指管1.1.3 试剂： PCR缓冲液(含Mg2＋) 4种dNTP Taq酶 DNA模板两种引物（正向引物和反向引物） EB溶液氯化钠(Nacl) 氨苄青霉素氯化钙(CaCl2) 酒精灯牙签 LB液体培养基 ddHO 溶液Ⅰ（50 mmol/L 葡2萄糖，25mmol/L Tris.HCl pH8.0,10 mmol/L EDTA）溶液Ⅱ 0.4mol/L NaOH，2%SDS用前等体积混合溶液Ⅲ 5 mol/L KAc 溶液60ml， 11.5 ml冰醋酸，28.5 ml 去离子水。

2. 涉及到酶的操作时,一律在冰上操作
3. 使用移液器吸取酶时，tip头只能刚刚插入液 面吸取
4. 如果有多个反应，酶、buffer、水等应配制
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成mixture再分装
BamH I：
G▼GATT C C CTAA▲G
Kpn I:
G GTAC▼C C▲CATG G
35
含外源DNA片段的载体(M812) 的限制性内切酶消化 目的 载体（pUC19)
不同的酶对上述因素的敏感程度不同
32
典型的限制性内切酶作用的缓冲体系成分包括：
氯化镁、氯化钠/钾、Tris盐酸盐、 β－巯基乙醇或二硫苏糖醇（DTT） 牛血清白蛋白（BSA）
33
注意 1. 注意阅读商家提供的产品说明书，了解所使
用工具酶的浓度和最适作用条件，不要用错 了buffer和作用的温度等
25
质粒电泳检测
26
本科生试验图片
27
利用质粒克隆外源DNA片段的主要步骤
质粒载体的抽提，外源DNA的准备 琼脂糖凝胶电泳检测DNA的质量 亚克隆载体与外源DNA的限制性内切酶消化 (目的片段的回收，亚克隆载体的去磷酸化) 载体与外源DNA的连接 感受态细胞的制备 连接子转化感受态细胞 重组子的转化及筛选、鉴定
20
质粒DNA质量检测
1. DNA纯度：吸光值检测：检测260nm、280nm吸光 值，紫外分光光度计A260/A280=1.8－1.9； 1.8 最佳，低于1.6说明有蛋白质，大于1.9说明有 RNA。
2. 质 量 检 测 ： 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 ： 一 般 有 三 条 带 （超螺旋、开环、线型三种构型），点样孔附 近无DNA带（无染色体DNA污染）。
6
质粒DNA的提取

【作用特点】 耐酶—主要用于耐青霉素G的金葡菌感染 耐酸—可口服，严重感染时采用肌肉或静脉给药
【药理特性】 抗菌谱和青霉素相仿，但抗菌作用较差，其对青霉素酶
稳定，因产酶而对青霉素耐药的葡萄球菌对本类药物敏感， 但甲氧西林耐药的葡萄球菌对本类药物耐药。 【适应症】
主要用于除甲氧西林以外的产青霉素酶的葡萄球菌感染， 如败血症、脑膜炎、呼吸道感染、软组织感染等，也可用于 溶血性链球菌或肺炎链球菌与耐青霉素葡萄球菌的混合感染。
素结构中的β -内酰胺环与氨基糖苷类抗生素分子中的氨基 发生交联，生成无生物活性的氨基酰胺化合物，使氨基糖苷 类抗生素失活，故严禁混合应用。可采用青霉素静滴，庆大 霉素肌内注射的方式避免上述反应【11】。
3、溶于葡萄糖溶液中静滴
青霉素水溶液极不稳定，其β -内酰胺环极易被水解， 水解速度因溶媒不同而异。其最适宜pH为6.0~6.8，偏离这 一pH后，可使青霉素的水解加速。葡萄糖注射液的pH为 3.2~5.5，0.9%氯化钠注射液的pH为4.7~7.0，后者的pH接近 其最适pH；另外葡萄糖注射液对其水解有催化作用，故静滴 青霉素的溶液为0.9%氯化钠注射液最好【12】。
部分革兰阴性杆菌亦具有抗菌活性，如流感嗜血杆 菌、大肠埃希菌、奇异变形杆菌。 【临床应用】
适用于敏感菌所致的呼吸道感染、尿路感染、 皮肤软组织感染、脑膜炎、败血症以及心内膜炎等。
4、抗铜绿假单胞菌广谱青霉素 对铜绿假单胞菌具有显著的抗菌活性广谱青霉素，对G+
菌和大多数G-杆菌有效,常用药物有羧苄西林、替卡西林、以 及阿洛西林。 【作用特点】 不耐酸不耐酶——口服无效，对耐药金葡菌无效。 对铜绿假单胞菌作用强——主要用于铜绿假单胞菌所致的
（二）半合成青霉素
1、耐酸青霉素类： 主要指苯氧青霉素类，如青霉素V和非奈西林

02
青霉素对放线菌、淋球菌、脑膜 炎球菌、流感杆菌等也有一定的 抗菌作用。
青霉素的敏感性和耐药性
敏感
指病原微生物对药物反应敏感， 用药后可取得良好的治疗效果。
耐药
指病原微生物对药物产生了抵抗 力，使药物不能有效地治疗疾病 。
03 青霉素的生产过程
青霉素的生产流程
青霉素的生产流程主要包括菌种选育、 发酵培养、提取精制等步骤。
04 青霉素的临床应用
青霉素在常见疾病中的应用
急性扁桃体炎
皮肤软组织感染
青霉素是治疗急性扁桃体炎的首选药 物，通过抑制细菌细胞壁的合成，达 到杀菌效果。
青霉素对革兰氏阳性球菌有很好的抗 菌作用，适用于皮肤软组织感染的治 疗。
肺炎
对于由肺炎链球菌引起的肺炎，青霉 素具有很好的疗效，能够快速控制病 情。
总结词
优化青霉素的生产工艺和降低成本对于提高药物可及性和推动其广泛应用具有重要意义。
详细描述
生产技术改进包括提高发酵效率、简化提取和纯化过程、降低能耗和资源消耗等。通过 技术创新和规模化生产，可以降低青霉素的生产成本，使其更广泛地应用于临床治疗， 尤其在发展中国家和地区。此外，技术转让和市场拓展也是实现青霉素普及的重要途径。
青霉素在特殊疾病中的应用
风湿热
风湿热患者使用青霉素可以预防 链球菌感染，降低风湿热的复发
率。
梅毒
青霉素是治疗梅毒的首选药物，能 够破坏梅毒螺旋体的细胞壁，使其 死亡。
淋病
淋病是由淋球菌引起的性传播疾病， 青霉素能够有效杀死淋球菌，治愈 淋病。
青霉素的联合用药
与氨基糖苷类抗生素联合使用
01
青霉素与氨基糖苷类抗生素联合使用可以增强抗菌效果，扩大
反应。

⒉ 表达形式
直接转录并翻译出目的基因ORF对应的氨基酸序列，即 表达出完整的目的蛋白。
目的基因以融合蛋白的形式进行表达。
pKK223-3
终止子： 5SrRNA 区域（rrnB 操纵子区域），rrnBT 和 rrnBT2 终止子（ 防止通读）。
受 lac 阻抑物调控， 1-5mM IPTG 诱导。 可直接表达任何含 RBS 和 ATG 的基因，若无 RBS，其
当外源基因插入到多克隆位点后，可表达出由三部分序 列组成的融合蛋白。?
GST是来源于血吸虫的小分子酶（26kDa），在E.coli易
表达，在融合蛋白状态下保持酶学活性，对谷胱甘肽有 很强的结合能力。利用这些性质可用来分离纯化表达的 目的蛋白。
图5-4 GST融合表达载体pGEX图谱
分离纯化表达的目的蛋白
几丁质结合域
多克隆位点 克隆、表达
几丁质
内含肽1 目的蛋白 过柱、洗涤
pH7，室温，自然水解
洗脱 目的蛋白
产物纯化
在pTWIN1中，当外源目的基因插入多克隆位点并带有自 身的翻译终止密码子时，可表达出目的蛋白N末端带有 CBD和intein1的融合蛋白（图5-6）。
表达该融合蛋白的细胞抽提物流过几丁质树脂层析柱时， 融合蛋白就被吸附在树脂上，通过洗涤可将其他蛋白去 除。
启动子；噬菌体的PL启动子。(注意：表示方法）
⑵ 终止子
转录会受到模板RNA序列结构的影响，当遇到颈环 结构时转录便会停止，或遇到ρ因子介导的终止信 号转录也会停止。
⑶ 核糖体结合位点
转录出来的mRNA可在宿主细胞的翻译机器作用下翻 译出目的蛋白。
细胞中的核糖体必须在mRNA上找到有效的核糖体结 合位点以及其中的Shine-Dalgarno序列（SD序列）， 从而启动邻近其下游的翻译起始密码子的蛋白质翻 译。

✓2001年5月23日，中国国务院第304号令颁布了《农业转基因生物 安全管理条例》。该条例共分8章，分别是总则、研究与试验、生 产与加工、经营、进口与出口、监督检查、罚则、附则等。
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转基因生物的潜在生态风险
•
转基因生物的“基因污染”造成生态问题，引起杂草化。
1998年，加拿大Alberta省发现一种Canola油菜，它由于基因污染而含 有抗草甘膦、抗固沙草、抗咪唑啉类除草剂等三掌转基因堆积而成的 “光谱抗除草剂基因”（HT基因）。这种多抗性怪异油菜的种子爆荚、 休眠期长、种子很小、圆而光滑，可随风传播到相当远的距离，更易造 成基因污染和扩散，而一般除草剂对它无可奈何，成为多抗性的“超级 杂草”。 另一个有名的例子是：J. E. Losey 1996年在《Nature》杂志发表的一 篇报导：他们用转Bt基因玉米花粉的马利筋叶片来饲喂大斑蝴蝶幼虫， 对照组是加普通玉米花粉的马利筋叶片及不加玉米花粉的马利筋叶片， 结果转基因玉米花粉的叶片饲喂幼虫后，第二天死亡10％以上，4天后 死亡44％。而对照组全部存活。这就表明，Bt转基因玉米花粉可能威胁 大斑蝴蝶的生存,引起生态种群的破坏。
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•
转基因生物对自然生态系统的潜在风险
侵入到新的栖息地。通过昆虫、鸟类、风力等媒介使转基因花粉四处扩散，造成基 因污染，威胁生物多样性安全。
丧失生物多样性。转基因生物通过生存竞争、环境胁迫或其他不确定性因素增加的 影响（基因、种群或物种），使生物多样性受损害或者丧失。
对非目标本土物种的伤害。由于改变互惠共生关系导致。 营养循环和环境生物地球化学过程的改变。生物与非生物环境的相互作用关系改变
重组质粒
合
农杆菌筛选标记
转

又称苄青霉素、青霉素G
结晶性白色粉末，室温稳定 水溶液不稳定，易分解失效，生成抗原性产物
—临用前配制 易被酸、碱、醇和金属离子破坏
—用注射用水或等渗氯化钠注射液溶解 —严禁与碱性药液如NaHCO3、氨茶碱配伍
青霉素—抗菌作用
1. G+菌
高度敏感： 球菌——肺炎球菌，溶血性链球菌，草绿色链球菌 杆菌——白喉杆菌，炭疽杆菌 厌氧杆菌——产气夹膜杆菌，破伤风杆菌，难辨杆菌，丙酸杆菌，真杆
Inspired by musicologists' use of fragmented scores to complete the unfinished works of great composers, a British researcher has pieced together Alexander Fleming's laboratory scribblings to recreate a paper that he says restores the reputation of the much-maligned discoverer of penicillin.
用途
耐PG的金 葡菌感染
G-杆菌 感染
绿脓等G杆菌感染
G-杆菌 感染
药物 PG 苯唑西林 氨苄西林 羧苄西林 美西林
头孢菌素类抗生素
cephalosporins
一代头孢菌素
First-Generation Cephalosporins.
【药理作用】 抗G+需氧菌： 对甲氧西林敏感的葡萄球菌和链球菌产 青霉素酶稳定 对G-菌产生的－内酰胺酶不稳定—无效
所致泌尿道感染等
对G-杆菌作用强，对G+菌作用弱，对 铜绿假单胞菌无效，主要用于G-杆菌感染。

广谱青霉素
• • • • 氨苄西林 匹氨西林 氨氯西林 阿莫西林
临床应用
曾经是肠球菌感染的首选用药。作为尿路感染的二线药 物。 轻、中度肠球菌感染的治疗，对严重感染者则与氨基 苷类合用。 曾广泛应用于伤寒和全身性沙门菌病，目前已被氟喹 诺酮类取代。 现已不推荐为儿童细菌性脑膜炎治疗的首选药物，但 可以和氨基苷类合用。
6-[2,6-二甲氧基苯甲酰胺]-氨基青霉烷酸 对酸不稳定，不能口服，必须大剂量的注射才能保持活性， 抗菌活性较低。是第一个用于临床的耐酶青霉素。
耐酶青霉素作用特点
名称 特点 奈夫西林 对酸稳定，对耐药金黄色葡萄球菌作用是甲氧西 林的3倍。 氯唑西林 抗菌作用与苯唑西林相似，血药浓度比苯唑西林 高，对金黄色葡萄球菌的作用是苯唑西林的2倍。 氟氯西林 口服胃肠道吸收好，血药浓度高，可维持4小时。 对耐药金黄色葡萄球菌作用是耐酶青霉素中最强 的。
二、半合成青霉素
耐酶青霉素 半合成青霉素 广谱青霉素 抗铜绿假单胞菌青霉素 主要作用于G-菌
耐酶青霉素
• • • • • • 甲氧西林 苯唑西林 氯唑西林 氟氯西林 双氯西林 奈夫西林
耐酶青霉素的临床应用
产青霉素酶的葡萄球菌（MRSA耐药者除外）感染，如 败血症、脑膜炎、呼吸道感染、软组织感染等。 也可用于溶血性链球菌或肺炎链球菌与耐青霉素葡萄 球菌的混合感染。 单纯肺炎链球菌、溶血性链球菌或青霉素敏感葡萄球 菌感染则不宜采用。
羧苄西林与哌拉西林
羧苄西林与哌拉西林一样都属于广谱青霉素，但羧苄西 林对G－杆菌的抗菌作用不如哌拉西林，且在治疗上须大剂 量使用，因其制剂含钠较多，心功能不全者不宜使用；且羧 苄西林所致低钾血症的发生率较其他青霉素常见，因而羧苄 西林的使用越来越少。

抗微生物药青霉素、红霉素PPT课件
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进 而变成 法律。 ——朱 尼厄斯
END

40、人类法律，事物有规律，这是不 容忽视 的。— —爱献 生
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔沃

适用于mRNA转录丰度高的外源基因。 一、无细胞翻译系统
能把外源的mRNA翻译成蛋白质的细胞提 取物。 如：麦胚提取物系统、网织红细胞 提取物系统。
二、转译筛选 载体+外源DNA 转录
mRNA 无细胞翻译系统 翻译 35S标记的肽链
35S标记的 甲硫氨酸
PAGE电泳
与预期的产物 分子量相符？
比较放射性 带纹的位置
Western装置
② Blotting 原理与ELISA相同。 PAGE胶 待测蛋白
硝酸纤 待测蛋白 一抗 二抗
维素膜
辣根过氧
化物酶
底物
产物， 并发出光
辣根过氧化物酶：HRPO 底片曝光
③ Blotting过程
1）先用一抗（待测蛋白的单克隆抗体）与 膜上的蛋白结合。
2）洗去未结合的一抗。
3）用二抗与一抗结合（二抗上带有HRPO）。
第五节 免疫化学检测法
对表达产物的检测。蛋白——蛋白“杂交” 利用抗体作为“探针”来检测转入受体菌并 且表达出相应的蛋白质的外源基因。 一、放射性抗体检测法
1. 抗体与产物的结合方式 根据第一抗体（一抗）和第二抗体（二抗） 的性质可分为几种作用方式：
固相支 持滤膜
一抗
待测基因 产物蛋白
125I标记的二抗
固相支 持滤膜
一抗
待测基因 产物蛋白
二抗
125I 标记的二 抗结合蛋白
固相支 持滤膜
待测基因 产物蛋白
一抗 125I标记的二抗
固相支 持滤膜
待测基因 产物蛋白
一抗 二抗
125I 标记的二抗 结合蛋白
2. 放射性抗体检测法过程
3. Broome-Gilbert双位点检测法 检测融合蛋白。 既检测外源基因产物又检测载体基因产物。

Ampr：氨苄青霉素抗性基因。

cDNA文库：将某种生物特定组织或发育时期的纯化总mRNA，在逆转录酶作用下合成cDNA，并全部克隆成重组子，包含了该生物全部表达基因信息，由此获得的克隆总称为cDNA文库。

cDNA与cccDNA：指以mRNA为模板,经反转录酶催化合成DNA，则此DNA序列与mRNA互补，称为互补DNA或cDNA 。

cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。

标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。

几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。

CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ）。

是大肠杆菌分解代谢物基因活化蛋白，这种蛋白可将葡萄糖饥饿信号传递个许多操纵子，使细菌在缺乏葡萄糖时可以利用其他碳源。

Col质粒：编码控制大肠杆菌素合成的基因，即所谓产生大肠杆菌素因子，大肠杆菌素是一种毒性蛋白，它可以使不带Col质粒的亲缘关系密切的细菌菌株致死。

cosmid（cos site-carring plasmid）：人工构建的含有λDNA的cos位点序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体，广泛应用于基因组DNA文库的构建。

其特点：1）具有λ噬菌体的特性：在克隆了外源片段后可在体外被包装成噬菌体颗粒，高效地感染对λ噬菌体敏感的大肠杆菌细胞。

进入寄主的柯斯质粒DNA分子，按照λ噬菌体DNA的方式环化，但无法按噬菌体的方式生活，更无法形成子代噬菌体颗粒。

2）具有质粒载体的特性：在寄主细胞内如质粒一样进行复制，携带有抗性基因和克隆位点，并具氯霉素扩增效应。

3）具有高容量的克隆能力：柯斯质粒本身一般只有5～7kb 左右，而它克隆外源DNA片段的极限值竟高达45 kb，远远超过质粒载体及λ噬菌体载体的克隆能力。

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阿莫西林比氨苄西林耐药率更低 杀菌作用更强，更适合治疗轻中度感染
1
对大肠埃希氏菌的耐药对比
社区感染耐药率 医院感染耐药率
2
对肺炎球菌所致下呼吸道感染
杀菌作用
3
对变形杆菌所致的消化道感染
杀菌作用
阿莫西林 Amoxicillin
5.8%* 10.9%*
阿莫西林 Amoxicillin
+++
阿莫西林 Amoxicillin
泌尿道感染等。
1、对革阳菌较第一代略 差，对革阴菌作用明显增 强，部分厌氧菌高效。
2、对肾毒素较第一代小。
3、主要用于敏感菌所致 的呼吸道，胆道及泌尿感 染等。
1、对厌氧菌及革兰阴性菌 作用较强（包括酮绿假单孢 菌），对革阴菌作用不及一、 二代。
2、对肾基本无毒性。
3、主要用于敏感菌引起的 严重感染如泌尿系、肺炎、 脑膜炎、败血症及酮绿假单 孢菌感染等。
QID Po或克拉霉素500mg BID Po 静脉：氨苄西林500mg QID iv 或苄青霉素1.2g QID
iv+红霉素500mg QID iv或克拉霉素500mg BID iv
替代 红霉素500mg BID PO 红霉素500mg QID P0或克拉霉素
对肺炎链球菌活性加强的氟喹诺酮 例如左旋氧氟沙星500mg QD Po
口腔感染的病原治疗
口腔感染