脂肪酶(LPS)测定试剂盒(甲基试卤灵底物法)产品技术要求lideman

体液总脂肪酶（lipase）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途体液总脂肪酶（lipase）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过底物三丁酸二巯基丙醇受到脂肪酶水解，释放出巯基基团，使用Ellman试剂，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心改良、成功实验证明的。

其适用于各种动物和人体各种体液包括尿液、脑脊液、唾液、精液等样品脂肪酶的总活性检测。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景脂肪酶（lipase；EC3.1.1.3）是可溶性糖蛋白分子，催化不溶性脂质分子的酯键（ester bond）的水解。

在人体中，其来源于胰腺产生。

在消化系统中，脂肪酶（Lipase），裂解脂肪分子，例如甘油三酯（triglyceride；TAG），产生1个分子甘油（glycerol）和3个分子游离脂肪酸分子（fatty acid）。

脂肪酶异常增高与胰腺炎、胰腺管阻塞、胰腺癌、肾病、唾液腺炎症、肠道阻塞等相关；异常降低则与胰腺中脂肪酶产生细胞的永久性损伤有关。

脂肪酶的活性检测是临床诊断的指标之一。

基于脂肪酶在水分子的参与下，催化三丁酸二巯基丙醇（dimercaptopropanol tributyrate；DMPTB或BALB）的水解，产生二巯基丙醇（dimercaptopropanol；DMP），并释放出巯基基团（－SH），进而与Ellman试剂5,5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5,5’-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量分析脂肪酶的活性。

脂肪酶反应系统为：产品内容缓冲液（Reagent A）毫升反应液（Reagent B）毫升底色液（Reagent C）微升补充液（Reagent D）微升产品说明书1份保存方式保存反应液（Reagent B）和底色液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；底色液（Reagent C）避免光照，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于样品制备恒温水槽：用于孵育反应比色皿或96孔板：用于反应和比色的容器分光光度仪或酶标仪：用于比色分析实验步骤一、样品准备1．准备好1.5毫升离心管2．移取1毫升液体（尿液/脑脊液/唾液/精液等）到离心管3．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）4．小心移取上清液到新的1.5毫升离心管5．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存6．（选择步骤）移取10微升进行蛋白定量测定（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－HL30030.1）二、测定准备1．准备好待测样品，置于冰槽里2．设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长412nm，间隔10分钟，读数4次（共30分钟），并置零3．缓冲液（Reagent A）室温下均衡温度三、背景对照测定1．移取xx微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿2．加入xx微升底色液（Reagent C）3．上下倾倒数次，混匀4．在37℃温度下孵育3分钟5．加入50微升待测样品（或100微克蛋白）（注意：样品须清澈）6．上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）7．即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照（30分钟读数－0分钟读数）四、样品测定1．移取xx微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿2．加入xx微升反应液（Reagent B）3．加入xx微升底色液（Reagent C）4．上下倾倒数次，混匀5．在37℃温度下孵育3分钟6．加入50微升待测样品（或100微克蛋白）（注意：样品须清澈）7．上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）8．即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（30分钟读数－0分钟读数）五、计算样品活性[（样品读数－背景读数）X样品稀释倍数X 1（体系容量；毫升）]÷[0.05（样品容量；毫升）X 13.6（毫摩尔吸光系数）X 30（反应时间；分钟）]＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克单位＝微摩尔DMPTB/分钟六、酶标仪测定1．在96孔板上做好相应标记：背景对照和样品2．分别移取xx微升缓冲液（Reagent A）到所有孔里3．加入xx微升反应液（Reagent B）到样品孔里4．加入xx微升阴性液（Reagent D）到背景对照孔里5．分别加入xx微升底色液（Reagent C）到所有孔里6．轻轻摇动96孔板7．在37℃温度下孵育3分钟8．分别加入10微升待测样品（或20微克蛋白）到所有孔里（注意：样品须清澈，且pH为7.2）9．轻轻摇动96孔板10．即刻放进酶标仪检测，包括（0分钟初始读数和30分钟读数）11．活性计算注意事项1．本产品为20次（96孔板，包括20次样品和20次背景对照）和5次（比色皿，包括5次样品和5次背景对照）操作2．本产品检测范围是40至1600毫单位/毫升3．建议样品采集后3小时内制备完成4．操作时，须戴手套5．每次样品测定，需要背景测定一次6．样品须澄清，至关重要7．样品中避免含有EDTA、TWEEN20、NP40、巯基乙醇、DTT等，否则干扰检测8．孵育反应完成后即刻进行比色测定9．比色测定后，比色皿须清洗彻底10．建议待测样本的蛋白浓度为100微克/50微升（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒HL30030.1）11．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度12．酶活性单位浓度定义：在37℃下，pH 7.5的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）水解1微摩尔三丁酸二巯基丙醇13．本公司提供系列医学生化检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。

脂肪酶测定试剂盒(甲基试卤灵底物法) 适用范围：用于体外定量测定人血清中脂肪酶的活性。

1.1规格试剂1:2×60mL，试剂2:1×60mL；试剂1:2×60mL，试剂2:2×15mL；试剂1:3×40mL，试剂2:1×30mL；试剂1:2×60mL，试剂2:2×12mL；试剂1:2×60mL，试剂2:2×20mL；试剂1:1×45mL，试剂2:1×15mL；试剂1:1×4L，试剂2:1×1L；试剂1:2×4L，试剂2:1×2L。

1.2主要组成成分试剂1主要组分：试剂2主要组分：2.1 净含量应不低于试剂瓶标示装量。

2.2 外观试剂1：无色或淡黄色透明溶液；试剂2：无色或淡黄色透明溶液。

外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。

2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度在570nm处测定试剂空白吸光度，应≤0.9；2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.5。

2.4 分析灵敏度测试50U/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.0025 。

2.5 准确度在样品中加入一定体积的纯品，计算回收率，应介于90%-110%之间。

2.6 重复性批内变异系数（CV）应不超过10％。

2.7 线性2.7.1在[5，500]U/L区间内，线性相关系数r应不低于0.990；2.7.2[5，60)U/L区间内绝对偏差不超过±7.2U/L；[60，500]U/L区间内相对偏差不超过±12%。

2.8 批间差对同一份样品进行重复测定，相对极差不大于12％。

2.9 稳定性取在2℃～8℃条件下贮存达到12个月后的试剂进行检测，应符合本标准2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7之规定。

脂肪酶测定试剂盒（甲基试卤灵底物法）适用范围：用于体外定量测定人血清或血浆中脂肪酶的含量。

1.1 包装规格包装规格见表1。

表1 包装规格1.2 试剂成分试剂成分见表2。

表2 试剂成分注：不同批号的校准品、质控品赋值有差异。

2.1 外观试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为橘黄色到橘红色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；校准品为黄色粉末状物质，复溶后为淡黄色或黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；质控品微黄色粉末状物质，复溶后为淡黄色或黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。

试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。

2.2 净含量试剂的净含量应不少于标称量。

2.3 试剂空白吸光度A570nm下测定空白吸光度应≤ 0.8000。

2.4 准确度与已上市产品进行比对试验：在[5，300]U/L区间内，线性相关系数r≥0.975，在[5，50]U/L区间内测定的绝对偏差应不超过±7.5U/L，在（50，300]U/L 区间内测定的相对偏差应不超过±15%。

2.5 分析灵敏度样本浓度为100 U/L时，其吸光度变化率在0.0150～0.0450之间。

2.6 线性区间在[5，300]U/L区间内，线性相关系数r≥0.990，在[5，50]U/L区间内测定的绝对偏差应不超过±7.5U/L，在（50，300]U/L区间内测定的相对偏差应不超过±15%。

2.7 测量精密度2.7.1重复性对高、低浓度的血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于5％。

2.7.2批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。

2.8 瓶间差校准品、质控品的瓶间差应≤10%。

2.9 稳定性2.9.1 效期稳定性试剂在2℃～25℃密封避光保存，校准品、质控品在2℃～8℃密封避光保存，有效期为12个月。

在试剂盒有效期满后一个月以内，分别检测2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7.1项，结果应符合各项目的要求。

脂肪酶测定试剂盒（甲基试卤灵底物法）适用范围：本试剂用于体外定量测定人血清或血浆中脂肪酶的活性。

1.1规格液体双剂型试剂1（R1）：40mL×1，试剂2（R2）：10mL×1；试剂1（R1）：60mL×1，试剂2（R2）：15mL×1。

1.2规格划分说明根据净含量划分规格。

1.3主要组成成分试剂盒由试剂1（R1）液体和试剂2（R2）液体组成。

1.3.1 试剂1（R1）液体：甘氨酸 450mmol/L 氢氧化钠 3.6mmol/L 共脂肪酶 1mg/L脱氧胆酸钠 1.6mmol/L 1.3.2 试剂2（R2）液体：酒石酸缓冲液 19mmol/L脂肪酶生色底物 3.4mmol/L2.1 外观试剂盒中各组件的外观应满足：a) 试剂1 (R1)应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损；b) 试剂2 (R2)应为橙色至红色微浊液体，外包装完整无破损。

2.2 试剂空白2.2.1 试剂空白吸光度在波长570nm（550nm～600nm）（光径1cm）处，试剂空白吸光度（A）应≤0.7000。

2.2.2试剂空白吸光度变化率在波长570nm（550nm～600nm）（光径1cm）处，试剂空白吸光度变化率（△A/min）≤ 0.200。

2.3.准确度测定BCR693,相对偏差应不超过±15％。

2.4分析灵敏度对应于浓度为100U/L的脂肪酶所引起的吸光度变化率（△A/min）的绝对值应在0.020 ～0.200的范围内。

2.5重复性重复测定高、中、低浓度样本，变异系数（CV）应≤15%。

2.6批间差测定同一样本，批间差（R）应≤15%。

2.7线性范围在[3,300]U/L范围内，线性相关系数（r）应≥0.990；在（50,300]U/L范围内，线性相对偏差应不超过±10％；在[3,50]U/L范围内，线性绝对偏差应不超过±5U/L。

2.8稳定性原包装的试剂盒在2℃～8℃避光贮存，有效期为12月。

脂肪酶测定试剂盒（甲基试卤灵底物法）适用范围：本试剂适用于体外定量测定人血清或血浆中脂肪酶活性。

1.1规格试剂1(R1)：4×70ml 试剂2(R2)：1×70ml试剂1(R1)：4×50ml 试剂2(R2)：2×25ml试剂1(R1)：2×64ml 试剂2(R2)：2×16ml试剂1(R1)：2×80ml 试剂2(R2)：1×40ml试剂1(R1)：4×45ml 试剂2(R2)：1×45ml试剂1(R1)：1×64ml 试剂2(R2)：1×16ml2.1外观2.1.1包装完整，标签清晰；2.1.2试剂1为无色透明溶液、无悬浮物、无沉淀物；试剂2为橘红色微乳液。

2.2净含量试剂盒内液体的装量应不低于标示值。

2.3试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度用试剂盒测定空白样本，记录试剂盒在570nm波长条件下，试剂空白吸光度A应不大于0.50。

2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂吸光度变化率（△A/min）应不超过0.035。

2.4分析灵敏度测定50U/L样本时，吸光度变化率（△A/min）应符合：0.010～0.150。

2.5线性范围试剂盒线性范围在[3.0，300.0]U/L：线性相关系数r≥0.990；在[3.0,30]U/L线性范围内，绝对偏差不超过±3 U/L；在（30,300]U/L线性范围内，相对偏差不超过±10%。

2.6测量精密度2.6.1重复性用高、低2个水平的血清样品或质控品测试同一批号试剂盒，测试结果应符合CV≤10%。

2.6.2 批间差用3个不同批号的试剂盒测定同一份样本，测得结果极差R≤10%。

2.7准确度以选定的上市分析系统对照试剂作为比对方法进行方法学比对测试，比对结果应满足：a）在[3.0,300]U/L 范围内，线性相关系数r≥0.975；b）在[3.0,30]U/L 范围内，绝对偏差不超过±3 U/L；在（30,300]U/L范围内，相对偏差不超过±10%。

脂肪酶测定试剂盒（甲基试卤灵底物法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中的脂肪酶的活性浓度。

1.1产品规格1.2产品组成试剂1：BICN缓冲液（pH8.0）50mmol/L，脱氧胆酸钠1.6mmol/L，氯化钙10mmol/L，共脂肪酶≥1mg/L。

试剂2：酒石酸缓冲液（pH4.0）10mmol/L，牛黄脱氧胆酸盐8.8mmol/L，1,2-邻-二月桂基-消旋-甘油-3-戊二酸-(6-甲基试卤灵)酯0.27mmol/L。

2.1 外观试剂1为无色透明溶液，试剂2为黄色透明溶液；试剂盒各组分齐全、完整，液体无渗漏，包装标签文字符号清晰牢固不易脱落，外包装完整无破损。

2.2 装量液体试剂的净含量应不少于标示量。

2.3 试剂空白吸光度在37℃、570nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于0.80。

2.4分析灵敏度测定80U/L脂肪酶时，吸光度变化率在（0.04±0.02）/min范围内。

2.5 准确度采用比对试验，相关系数r≥0.98；[3，30]U/L区间内，线性绝对偏差不超过±3U/L；(30，300]U/L区间内，线性相对偏差不超过±10% 。

2.6 精密度2.6.1 重复性用血清样品或质控样品重复测试所得的变异系数（CV）应不大于10.0%。

2.6.2 批间差试剂（盒）批间相对极差应不大于10.0%。

2.7 线性区间试剂线性在[3，300]U/L（37℃）区间内：a) 线性相关系数|r|应不小于0.990；b) [3，30]U/L区间内，线性绝对偏差应不超过±3U/L；（30，300]U/L区间内，线性相对偏差应不超过±10%。

2.8稳定性原包装试剂2～8℃避光保存有效期12个月，到效期后的样品检测试剂空白、分析灵敏度、准确度、重复性、线性区间应符合2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。

血清脂肪酶测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清脂肪酶(缩写LPS)测定；组合项目申请：胰腺炎检测。

临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。

或采用含分离胶的真空采血管。

2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。

专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血标本。

2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。

2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定1天，普通冰箱中（2～8℃）稳定7天。

-20℃可保存数月；-70℃至少可保存半年；应避免标本反复冻溶。

为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。

2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。

2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。

抽血前3天内避免高脂饮食，24小时内不饮酒。

2.3.2如果使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。

EDTA、草酸盐、氟化钠、枸橼酸对酶有抑制作用。

2.1.5 抽血前最好停用影响血脂的药物（如调脂药、避孕药、某些降压药、激素等）数天或数周，否则应记录用药情况。

3 方法原理采用1,2-邻-二月桂宗甘油－3-戌二酸－(6'-甲基试卤灵）-酯作为底物，OH－脂肪酶1,2-邻-二月桂宗甘油－3-戌二酸－(6'-甲基试卤灵)-酯 ----------1,2-邻-二月桂宗甘油 + 戌二酸 + 甲基试卤灵在570nm波长下，根据产物红色的甲基试卤灵生成速率测定脂肪酶的活性。

血清脂肪酶（LPS）
一、检测原理
LPS水解底物1,2-o-二月桂-外消旋-甘油-3-戊酸酯，产生显色的6-甲基试卤灵，生成速率反应LPS活力。

由于在底物中含有共脂肪酶和胆汁酸，抑制其他水解酶和酯酶的影响，使本方法能特定可靠，也不受血清基质效应的影响。

当6-甲基试卤灵酯降解为6-甲基试卤灵时，此红色染料引起的吸光度上升与样品中LPS的活力成正比，在570nm波长处，根据甲基试卤灵的生成速率，从而求得LPS的活性。

二、参考区间
血清：小于60U/L
三、临床意义
1、血脂肪酶仅有胰腺产生，测定血清脂肪酶水平，对胰腺疾病的诊断，特异性较大。

2、升高见于：急慢性胰腺炎、胰液淤滞（胰腺癌、胰腺囊肿、胆管癌、胆石症、乳头癌等），胰腺损伤、穿孔性腹膜炎、胰腺导管阻塞。

血清LPS增高常见于急性胰腺炎及胰腺
癌，偶见于慢性胰腺炎。

急性胰腺炎时，血清淀粉酶增加的时间较短，而血清LPS活性上升可持续10～15天。

腮腺炎未累及胰腺时，LPS通常在正常范围。

3、降低见于：胰腺炎晚期、胰大部切除等。

甲状腺过氧化物酶抗体测定试剂盒（磁微粒化学发光法）适用范围：用于体外定量测定人血清中甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）含量。

1.1包装规格100测试/盒。

1.2 主要组成成分表1 产品组成成分校准品和质控品浓度具有批特异性，具体浓度见瓶标签。

2.1 外观2.1.1试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；2.1.2磁分离试剂摇匀后为均匀悬浊液，无明显凝集；2.1.3液体组分应澄清，无沉淀或絮状物；2.1.4包装标签应清晰，易识别。

2.2净含量不得低于标示体积。

2.3 特异性试剂盒与表2中有关潜在交叉反应物应无显著的交叉反应。

表2 交叉反应2.4 准确度用国际标准品（来源：NIBSC,编号66/387）作为样本进行检测，其测量结果的相对偏差应不超过±10%。

2.5 空白限应不大于2IU/ml。

2.6 线性在［2，1000］IU/ml的测量范围内，试剂盒的相关系数r应不小于0.990。

2.7重复性用（20±4）IU /ml和（200±40）IU /ml的样本各重复检测10次，其变异系数（CV）应不大于10%。

2.8 质控品的赋值有效性质控品的测量值应在质控范围内。

2.9批间差批间变异系数（CV）应不大于15%。

2.10效期稳定性该试剂盒置于2℃～8℃储存，有效期为12个月，在有效期满后一个月内检测试剂盒的准确度、空白限、线性和重复性，应符合2.4～2.7的要求。

2.11 溯源性根据GB/T 21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程以及不确定度等内容，甲状腺过氧化物酶抗体校准品溯源至有证参考物质NIBSC：66/387。