脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合比色法)

测定总蛋白的参考方法总蛋白是指物质中所有的蛋白质的总量，是衡量生物体内蛋白质含量的一个重要指标。

测定总蛋白的参考方法有多种，包括比色法、免疫测定法等。

比色法是测定总蛋白的常用方法之一。

比色法利用蛋白质与某些试剂（如比目鱼肝素，布鲁斯基试剂等）反应产生显色反应，通过测量显色产物的光密度，从而确定总蛋白的含量。

其中，布鲁斯基试剂法是一种常用的测定总蛋白方法。

操作步骤如下：1. 准备试液：将布鲁斯基试剂溶液配制为适当浓度，通常为1g/L。

2. 试管预处理：使用清洁的试管，将其进行空白校准，然后标记每个试管的编号。

3. 处理样品：准备待测样品，将其加入相应的试管中。

4. 加样：将布鲁斯基试剂溶液和样品依次加入试管中。

5. 摇匀：用试管摇匀，使试液充分混合。

6. 反应：让试管中的试液在适当的温度下静置，反应一定时间。

7. 比色：使用分光光度计将试管中的反应混合液吸入比色皿中，然后测量其光密度。

同时，使用空白校准和标准样品以及待测样品进行比较。

8. 计算：根据标准曲线（将标准品的光密度与其对应的已知浓度绘制的曲线），将样品的光密度值与标准曲线进行比对，从而确定样品中总蛋白的含量。

除了比色法，免疫测定法也是常用的测定总蛋白的方法之一。

免疫测定法是利用特异性抗体与待测蛋白质发生特异性反应，通过测量抗体与蛋白质结合形成的复合物的信号强度，从而确定总蛋白的含量。

常用的免疫测定法有封闭试剂法、双抗法、酶联免疫吸附试验（ELISA）等。

封闭试剂法是一种常用的免疫测定法。

操作步骤如下：1. 准备试剂：准备特异性抗体、酶联试剂和共价耦合试剂等。

2. 样品处理：将待测样品进行预处理，如稀释、去除干扰物质等。

3. 加样：将已处理的样品和试剂依次加入微孔板中。

4. 反应：在适当的温度和时间条件下，使抗体与样品中的总蛋白相互作用。

5. 清洗：使用洗涤缓冲液洗涤微孔板，去除未结合的物质。

6. 加底物：加入适当的底物，使底物与标记的酶发生反应产生显色物质。

总蛋白测定试剂盒（双缩脲法）适用范围：本产品与ABBOTT ARCHITECT c4000/c8000/c16000全自动生化分析仪配套使用，用于体外定量测定人血清中总蛋白的浓度。

1.1包装规格液体单剂型（液体Ⅰ型）试剂（R）：60mL×4；试剂（R）：80mL×4。

1.2主要组成成分试剂（R）（液体）氢氧化钠0.6mol/L酒石酸钾钠32mmol/L碘化钾20mmol/L硫酸铜12mmol/L2.1 外观试剂（R）应为蓝色溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损。

2.2 净含量液体试剂净含量应不少于标示值。

2.3 试剂空白吸光度在波长546nm（540nm～560nm）（光径1cm）处，试剂空白吸光度（A）应≤0.200。

2.4准确度测定尿素、尿酸和总蛋白复合冰冻人血清国家标准品（编号：360012），相对偏差应不超过±5%。

2.5分析灵敏度对应于浓度为60g/L的TP所引起的吸光度差值（△A）的绝对值应在0.100～0.500的范围内。

2.6重复性重复测试高、中、低浓度样本，变异系数（CV）应≤5%。

2.7批间差测定同一样本，批间差（R）应≤6%。

2.8线性范围在[2，100]g/L范围内，线性相关系数（r）应≥0.990；在(30，100]g/L范围内，线性相对偏差应不超过±10%；在[2，30]g/L范围内，线性绝对偏差应不超过±3g/L。

2.9试剂稳定性2.9.1试剂效期稳定性：原包装的试剂盒在2℃～8℃避光贮存，有效期为36个月。

试剂有效期满后3个月以内，试剂性能应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8的要求。

2.9.2开盖稳定性：开盖后，在2℃～8℃避光保存，稳定期为30天；稳定期满后1天内，试剂性能应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8的要求。

脑脊液化学和免疫学检验及意义（1）蛋白质检查：正常脑脊液中蛋白质含量不到血浆蛋白的1%，主要为清蛋白。

1）蛋白质定性试验：①潘迪（Pandy）试验：脑脊液中蛋白质与苯酚结合成不溶性的蛋白盐而产生白色混浊。

②罗-琼试验：正常脑脊液球蛋白质含量很低。

正常定性试验均为阴性。

2）蛋白质定量试验：①磺基水杨酸（SSA）-硫酸钠为比浊法代表方法，特点是简便、快速，无需特殊仪器。

②染料结合比色法以丽春红S和考马斯亮蓝（CBB）法应用较多，CBB法快速、高灵敏度。

比色法的检测灵敏度及结果的重复性优于比浊法，且标本用量少，但对实验条件的pH 值要求较高。

3）参考值：成人，腰池200～400mg/L，脑池100～250mg/L，；脑室内50～150mg/L。

4）临床意义：脑脊液蛋白质含量随着年龄增加而升高。

在新生儿，由于血脑屏障发育尚不完善，脑脊液蛋白质相对较高，6个月后逐步降至成人水平。

脑脊液蛋白质含量见于：血屏障通透性增高性疾病：①脑膜炎：化脓性脑膜炎，蛋白质含量显著增高；结核性脑膜炎，中度增高；病毒性脑炎，轻度增高。

②出血性脑病：脑室及蛛网膜下腔出血，蛋白质含量中度增高。

脑脊液循环障碍：脑部肿瘤或椎管梗阻如脊髓肿瘤、蛛网膜下腔粘连脑脊液蛋白质含量增高。

在蛛网膜下腔梗阻性疾病，蛋白质含量增高到10g/L以上时，脑脊液外观呈黄色胶胨状，且有蛋白-细胞分离现象（Froin综合征），是蛛网膜下腔梗阻的脑脊液特征。

（2）葡萄糖测定：目前常用葡萄糖氧化酶法或己糖激酶法。

1）参考值：2.5～4.4mmol/L2）临床意义：脑脊液中葡萄糖含量与血糖浓度、血脑屏障的通透性及脑脊液中葡萄糖酵解程度有关。

脑脊液葡萄糖减低见于：中枢神经系统细菌性、真菌性感染：主要见于化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎及真菌性脑膜炎等。

当中枢神经系统发生感染性病变时，在病原微生物和破坏细胞释放的葡萄糖酵解酶的作用下，使脑脊液中葡萄糖含量降低。

在化脓性脑膜炎早期，葡萄糖含量即明显降低，疾病高峰期可为零。

用途本试剂盒适用于检测血清（浆）、尿液、动植物组织、细胞等样本中总抗氧化能力。

检测范围及灵敏度检测范围：0.047-1.50 mmol/L灵敏度：0.047 mmol/L背景介绍机体存在两类抗氧化系统，一类是酶抗氧化系统，包括超氧化物歧化酶(SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px）；另一类是非酶抗氧化系统，包括尿酸、维生素C、维生素E、谷胱甘肽、胆红素、α-硫辛酸、类胡萝卜素[1-3]。

抗氧化能力被认为是血液和体液中所有抗氧化剂的累积效应[3]。

检测原理ABTS在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的 ABTS●+，在抗氧化物存在时ABTS●+的产生会被抑制，在414 nm测定ABTS●+的吸光度即可测定并计算出样本中的总抗氧化能力。

Trolox是一种维生素E的类似物，具有和维生素E相近的抗氧化能力，用作其他抗氧化物总抗氧化能力的参考。

例如，Trolox的总抗氧化能力为1，相同浓度情况下，其他物质的总抗氧化能力用其抗氧化能力和Trolox相应的倍数来表示。

本试剂盒测组织和细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用BCA法（货号：E-BC-K318-M）。

提供试剂和物品注：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同批次试剂盒中的试剂不能混用。

Focus on your research Service for life science 耗材：枪头（1000 μL ，200 μL ，10 μL ）。

仪器：酶标仪（405-425 nm ）、微量移液器（1000 μL ，200 μL ，100 μL ，10 μL ）。

所需自备物品配制试剂之前，请穿戴好防护装备。

试剂盒中部分试剂含有危险性物质。

禁止食入，吸入，直接接触眼睛、皮肤和衣物。

使用完后的试剂瓶经彻底清洗后再处理。

安全提示试剂：双蒸水、生理盐水（0.9% NaCl ）、PBS （0.01 M，pH 7.4）、80%乙醇。

实验关键点ABTS工作液配制完成后，室温避光保存，在30 min内使用完毕。

植物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒是一种旨在通过过硫酸钾的参与，使染料ABTS 氧化，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox的总抗氧化能力，即抑制氧化等值浓度的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

适用于各种体液包括血浆、血清、尿液、脑脊液、唾液、精液等各种体液的总抗氧化能力检测。

产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。

技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。

在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER）、铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素（bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。

文章编号:1001-5949(2001)10-0584-02・论　著・双缩脲双波长自动分析法测定脑脊液总蛋白含量的临床应用刘　彤1,刘志浩2 【摘要】　目的　在全自动分析仪上建立一种快速简便的脑脊液蛋白双缩脲测定法。

方法　在日产7170A全自动分析仪上,用双缩脲法测定脑脊液蛋白含量。

结果　双缩脲法测定脑脊液蛋白准确度高,精密度好,与磺基水杨酸比浊法有很好的相关性,而且重现性优于比浊法,两法相比,P<0.01,有较显著的差异。

结论　在全自动分析仪上用双缩脲法测定脑脊液蛋白是一种简使、快速、可靠的方法。

【关键词】　缩二脲反应;脑脊髓液蛋白质类;自动分析【中图分类号】　R446.14 【文献标识码】　ADu al-w avelength automatic analysis of cerebrospinal fluid protein with biuret method L IU Tong.(Beijing China-Japan Friendship Hosp.,Beijing100029,China)【Abstract】　Objective　To establish a kind of rapid and simple biuret method for measuring cerebrospinal fluid protein of auto2 matic analyser.Method　To use biuret method for measuring cerebrospinal fluid protein of HITACHI71701A automatic analyzer. R esults　This method has good accruacy and precision.The relativity between this method and sulfosalicylic acid turbidimetry is very good.The reproducibility of this method is better than turbidimetry(P<0.01).Conclusion　To measure cerebros pinal fluid protein with biuret method on automatic analyser is a kind of simple,rapid and reliable method.【K ey w ords】　Biuret reaction;Cerebrospinal f luid proteins;A utoanalysis 双缩脲试剂与各种血清蛋白多肽链产生的紫色非常一致(即几种主要血清蛋白显色后吸光度值相似,且具有稳定的吸光系数),是目前公认的最可靠的总蛋白浓度测定方法之一,多年来广泛用于临床标本分析。

白蛋白检测试剂盒(溴甲酚紫比色法)简介：总蛋白(Total Protein ，TP)由白蛋白和球蛋白组成，检测白蛋白的方法有双缩脲法、色氨酸法、染料结合法。

检测白蛋白的染料结合法可采用溴甲酚绿或溴甲酚紫染料结合，上述染料对白蛋白具有高度的亲和力，通常监测染料与白蛋白结合的初速率，该速率与样品中白蛋白浓度成正比。

Leagene 白蛋白检测试剂盒(溴甲酚紫比色法)检测原理是在酸性环境下，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚紫(Bromocresol purple ，BCP)结合生成绿色复合物，在603nm 处有吸收波，该复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白标准比较，求得待测样品中白蛋白浓度。

本试剂盒多用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的蛋白含量测定，该法操作简单、方法特异，既可手工操作，又可采用自动分析仪检测，对血清清蛋白的特异性比BCG 法(溴甲酚绿法)要好，不易受时间和温度变化的影响。

本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 离心管、小试管2、 比色杯3、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 取白蛋白标准配制液或稀释液加入到白蛋白标准中，充分溶解后配制成40mg/ml 的白蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的白蛋白标准溶液应-20℃保存。

亦可按自己试验要求继续进行稀释，如稀释至1mg/ml 。

特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，白蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。

例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取白蛋白标准溶解于蔗糖中。

一般也可以用NaCl 或PBS 作为溶解白蛋白标准品的稀释液。

2、 样本处理：血清、血浆样本直接取检测。

对于组织样本，按组织质量(g)：生理盐水比例，加入生理盐水或PBS ，冰浴下匀浆后，离心，取上清待检。

编号 名称TC0567 100T Storage试剂(A): BCP 试剂 200ml 4℃ 避光试剂(B): 白蛋白标准 20mg RT 试剂(C): 白蛋白标准配制液 100mlRT使用说明书1份3、白蛋白加样操作，按下表依次加入试剂：加入物(ml) 空白管标准管待测管白蛋白标准配制液0.01 −−白蛋白标准溶液(40mg/ml) −0.01 −待检样品(血清、血浆、组织匀浆液) −−0.01BCP试剂 2.0 2.0 2.04、比色杯光径，先在分光光度计以空白管调零，逐管加入BCP试剂，并立即混匀。

脑脊液蛋白质的检测原理
脑脊液蛋白质的检验有定性和定量两种方法,并可根据需要计算蛋白商(球蛋白/清蛋白)和脑脊液清蛋白指数(Ralb)[脑脊液清蛋白(g/L)/血清清蛋白(g/L)].
1.定性法
(1)Pandy试验:脑脊液中的蛋白质与苯酚结合形成不溶性蛋白盐而出现白色浑浊或沉淀。

(2)硫酸铵试验:包括Ross-Jone试验和Nonne-Apelt试验。

饱和硫酸铵能沉淀球蛋白,出现白色浑浊或沉淀。

若球蛋白增多则Ross-Jone试验阳
性;Nonne-Apelt试验可检测球蛋白和清蛋白医|学教育搜集整理。

(3)Lee-Vinson试验:磺基水杨酸和氯化高汞均能沉淀脑脊液蛋白质,根据沉淀物的比例不同,可鉴别化脓性和结核性脑膜炎。

2.定量法:
利用比浊法、染料结合比色法和免疫学方法检测脑脊液蛋白质含量。

常用的方法为磺基水杨酸-硫酸钠比浊法。

脑脊液总蛋白检测试剂盒(邻苯三酚红钼比色法)简介：脑脊液(Cerebro-Spinal Fluid，CSF)是存在于脑室、蛛网膜下腔和脊髓中央管内的无色透明液体，由脑室中的脉络丛产生，与血浆和淋巴液的性质相似。

正常成年人的脑脊液约100~150ml，弱碱性，不含红细胞。

正常脑脊液具有一定的化学成分和压力，对维持颅压的相对稳定有重要作用，当中枢神经系统受损时，脑脊液的检测成为重要的辅助诊断手段。

总蛋白(Total Protein，TP)由白蛋白和球蛋白组成。

对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于如下两个假设：1、所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比为16%；2、体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都具有非常相似的特性。

目前常用的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。

Leagene脑脊液总蛋白检测试剂盒(邻苯三酚红钼比色法)其检测原理是在酸性条件下，首先邻苯三酚红和钼酸络合形成红色复合物，该复合物与蛋白质形成复合体，其吸收峰移至604nm，通过比色法求出样本中蛋白质的含量。

本试剂盒专门用于人或动物脑脊液样本中的总蛋白含量测定，但易受表面活性剂影响。

本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、离心管、小试管2、比色杯3、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、取蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准中，充分溶解后配制成蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。

取蛋白标准溶液用蛋白标准配制液或稀释液继续进行稀释。

特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。

例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白标准溶解于蔗糖中。

一般也可以用NaCl或PBS 作为稀释液。

2、TP加样操作，按下表依次加入试剂：3、混匀, 室温孵育。

4、比色杯光径，分光光度计测定波长处的吸光度。

临床生化常用‎的色原及检测‎波长Toos 545nm苯酚（对氯苯酚）505nmNAD（P）H指示系统，波长340n‎m，项目：ALT、AST、GLUC己糖‎激酶法、C K、UREA、LDH等。

苯衍生物类，波长400-410nm，如ALP、GGT、CHE等。

过氧化物酶指‎示系统，项目：TG、TCH、HDL-C、LDL-C、UA等。

可见光波长及‎其互补色：可见光波长及‎其相应被吸收‎的颜色依次为‎：红色（630～700nm）、橙色（600～630nm）、黄色（570～600nm）、绿色（500～570nm）、蓝色（435～500nm）、紫色（400～435nm）。

★540nm：1. 双缩脲测蛋白‎：所有蛋白质分‎子都含有肽键‎。

在碱性溶液中‎，肽键与铜离子‎结合，生成蓝紫色化‎合物，在540nm‎处吸光度与肽‎键的数量呈正‎比关系，可以计算蛋白‎质含量。

2. 染料结合法测‎脑脊液蛋白：在柠檬酸存在‎的酸性条件下‎，伊红Y燃料离‎解成阴离子型‎，染料的黄色消退，使试剂空白吸‎光度降低；另外，蛋白质多肽链‎中的精氨酸、组氨酸、赖氨酸和色氨‎酸残基，离解生成带－NH3+基团，与染料阴离子‎的羧基和酚基‎借静电吸引而‎结合成红色蛋‎白燃料复合物‎，其540nm‎处吸光度大小‎与蛋白质浓度‎呈比例。

★628nm：1. 溴甲酚绿法测‎血清白蛋白：在PH4.2的缓冲液中‎，白蛋白分子带‎正电荷，与带负电荷的‎溴甲酚绿（BCG）生成蓝绿色复‎合物，在波长628‎n m处有吸收‎峰。

复合物的吸光‎度与白蛋白浓‎度成正比。

★603nm：1. 溴甲酚紫法（BCP）测血清白蛋白‎：BCP溶于P‎H5.2的醋酸缓冲‎液中，呈黄色。

当它与白蛋白‎结合后转变为‎绿色的符合物‎，在波长603‎出有最大吸收‎峰。

★650nm：1. 磷钨酸法测黏‎蛋白：以0.6mol/L过氯酸沉淀‎血清中蛋白质‎时，黏蛋白不被沉‎淀，仍存留在滤液‎中，再加磷钨酸使‎黏蛋白沉淀，然后以酚试剂‎测定沉淀物中‎蛋白质的含量‎。