实验6 酸性染料比色法测定硫酸阿托品的含量(学生)

硫酸阿托品Liusuan Atuopin Atropine SulfateH O OH2H2SO4 H2O(C17H23NO3)2`H2SO4`H2O 694.84本品为（±）α-（羟甲基）苯乙酸8-甲基-8- 氮杂双环[3.2.1]-3-辛酯硫酸盐一水合物。

按干燥品计算，含(C17H23NO3)2·H2SO4不得少于98.5％。

【性状】本品为无色结晶或白色结晶性粉末；无臭。

本品在水中极易溶解，在乙醇中易溶。

熔点取本品，在120℃干燥3小时后，立即依法测定（附录ⅥC），熔点不得低于189℃，熔融时同时分解。

【鉴别】(1)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集487图）一致。

原理：从红外吸收光谱中可以获得硫酸阿托品吸收光谱的形状，吸收峰波数的位置、吸收相对强度等信息，这些信息均可以用于鉴别。

若供试品德光谱图与对照光谱图一致，通常可判定两化合物为同一物质。

(2)本品显托烷生物碱类的鉴别反应（附录Ⅲ）。

原理：托烷类生物碱的酯键易水解生成莨菪酸。

莨菪酸与发烟硝酸共热得黄色的莨菪酸三硝基衍生物，冷后，加醇制氢氧化钾溶液或固体氢氧化钾作用转变成醌型产物，呈深紫色。

(3)本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应（附录Ⅲ）。

原理：①取供试品溶液，滴加氯化钡试液，即生成BaSO4的白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。

②取供试品溶液，滴加醋酸铅试液，即生成PbSO4的白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。

③取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀（与硫代硫酸盐区别）。

【检查】酸度取本品0.5g，加水10ml溶解后，加甲基红指示液1 滴，如显红色，加氢氧化钠滴定液(0.02mol/L) 0.15ml ，应变为黄色。

原理：阿托品为弱碱性物质，与硫酸（强酸）成盐，即为强酸弱碱盐，故水溶液显酸性，所以加入甲基红后显红色；滴加氢氧化钠滴定液，中和掉了硫酸，使得阿托品游离出来，此时溶液显碱性，所以甲基红变为黄色。

一、实验目的1. 了解硫酸阿托品的性质和用途；2. 掌握硫酸阿托品在实验中的用量和配制方法；3. 通过实验，验证硫酸阿托品在不同条件下的药效。

二、实验原理硫酸阿托品是一种抗胆碱药，主要作用是阻断乙酰胆碱受体，使副交感神经功能减弱，从而产生扩瞳、调节麻痹、抑制腺体分泌等作用。

本实验通过观察硫酸阿托品在不同条件下的药效，验证其药理作用。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：电子天平、移液管、滴定管、烧杯、试管、试管架、酒精灯、加热器、温度计等；2. 试剂：硫酸阿托品、氢氧化钠溶液、酚酞指示剂、蒸馏水等。

四、实验步骤1. 硫酸阿托品标准溶液的配制：a. 称取一定量的硫酸阿托品，准确至0.0001g；b. 将称取的硫酸阿托品溶解于少量蒸馏水中，转移至100ml容量瓶中；c. 用蒸馏水定容至刻度，摇匀；d. 配制浓度为1mg/ml的硫酸阿托品标准溶液。

2. 硫酸阿托品药效实验：a. 将实验分为三组，每组设置5个试管；b. 分别向三个试管中加入1ml的硫酸阿托品标准溶液，另两个试管作为对照组，加入1ml蒸馏水；c. 向每个试管中加入2ml的氢氧化钠溶液，观察并记录溶液颜色变化；d. 向每个试管中加入1滴酚酞指示剂，观察并记录溶液颜色变化；e. 分别对三个试管进行加热，观察并记录溶液颜色变化；f. 记录实验数据。

五、实验数据及结果1. 硫酸阿托品标准溶液的配制：1mg/ml；2. 硫酸阿托品药效实验数据：| 组别 | 加入硫酸阿托品 | 加入氢氧化钠溶液 | 加入酚酞指示剂 | 加热 || ---- | -------------- | ----------------- | ---------------- | ---- || 1 | + | + | + | + || 2 | + | + | + | + || 3 | + | + | + | + || 4 | - | + | + | + || 5 | - | + | + | + |结果：加入硫酸阿托品的三个试管溶液颜色变化明显，对照组溶液颜色变化不明显。

硫酸阿托品及其制剂的分析硫酸阿托品是消旋莨菪碱的硫酸盐，为酯类药物，易水解，水解产物可用于鉴别。

分子结构中，氮原子位于桥环上，碱性较强，易与酸成盐。

硫酸阿托品虽具有不对称碳原子，但为外消旋体，故无旋光性。

硫酸阿托品是目前最常用的M胆碱受体阻断剂，临床用途十分广泛。

硫酸阿托品一、主要理化性质1、水解性硫酸阿托品中具有酯的结构，易水解，可水解生成茛菪醇（I）和茛菪酸（II）。

茛菪醇（I）茛菪酸（II）2、旋光性硫酸阿托品中含有一个手性碳原子，这个不对称碳原子来自莨菪酸。

但值得注意的是，临床使用的硫酸阿托品为外消旋体，无旋光性。

3、碱性硫酸阿托品分子结构中，五元酯环上有叔胺氮原子，因此具有较强的碱性，易与酸成盐。

硫酸阿托品的pK b1为4.35，可与硫酸成盐。

4、紫外光吸收特性硫酸阿托品具有苯环结构，因此它具有紫外光吸收的特性。

硫酸阿托品紫外吸收光谱二、鉴别试验1、Vitali反应Vitali反应是托烷生物碱类的特征鉴别反应，收录于药典第四部通则中。

反应结果生成的产物显深紫色。

方法如下：取供试品约10mg，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黄色残渣，放冷，加乙醇2~3滴湿润，加固体氢氧化钾一小粒，即显深紫色。

莨菪酸上述反应的原理是：茛菪烷类生物碱结构中的酯键水解后生成茛菪酸，经发烟硝酸加热处理，转变为三硝基衍生物而显黄色，再与氢氧化钾的醇溶液和固体氢氧化钾作用脱羧，产物共轭程度增加，颜色加深。

2、SO 24的反应本品为硫酸盐，水溶液显硫酸盐的鉴别反应。

照中国药典通则一般鉴别试验”项下“硫酸盐”的鉴别方法试验：(1)取供试品溶液，滴加氯化钡试液，即生成BaSO4的白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。

(2)取供试品溶液，滴加醋酸铅试液，即生成PbSO4的白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。

(3)取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀(与硫代硫酸盐区别)。

三、检查1.莨菪碱阿托品为莨菪碱的外消旋体，莨菪碱因消旋不完全而引入。

比色法测定硫酸阿托品滴眼液中硫酸阿托品的含量
王慧
【期刊名称】《北方药学》
【年(卷),期】2014(000)003
【摘要】目的：测定硫酸阿托品滴眼液中硫酸阿托品的含量。

方法：采用比色法，在416nm波长处测定含量。

结果：硫酸阿托品在10.43～104.3μg·ml-1
（r=0.9999）范围内线性良好；平均回收率97.83%，RSD为1.02%。

结论：本
法操作简便、结果准确，可满足医院制剂的质量控制要求。

【总页数】1页(P9-9)
【作者】王慧
【作者单位】河南省洛阳市食品药品检验所洛阳 471023
【正文语种】中文
【中图分类】R917
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药物分析A卷及答案天津医科⼤学2010-2011学年⼀学期药学、制剂专业药物分析课程考试及答案（A卷）⼀、名词解释1 药物分析课程：是⼀门研究药品全⾯质量控制的学科。

2 Heavy metal：重⾦属是指在实验条件下能与硫代⼄酰胺或硫化钠作⽤显⾊的⾦属杂质3 杂质限量：杂质的最⼤允许量4 ⼀般杂质：在⾃然界分布较⼴泛，在多种药物的⽣产和储藏过程中容易引⼊的杂质。

5 精密度：是指在规定的测试条件下，在同⼀均匀供试品经多次取样测定所得结果之间的接近程度⼆、填空1．丙⼆酰脲类的鉴别反应有银镜反应、铜盐反应。

适⽤于巴⽐妥类药物的鉴别。

2．药物稳定性试验包括影响因素试验、加速试验和长期试验。

3．溴量法可⽤来测定含有双键、酚羟基结构的药物。

4．中国药典（2005版）测定维⽣素A含量采⽤的是三点校正法。

5．GMP的中英⽂全称分别是：药品⽣产质量管理规范、Good manufacture practice。

6．钯离⼦⽐⾊法可⽤于吩噻嗪类药物的含量测定，其依据是该类药物结构中含有S 。

7．区分巴⽐妥与含硫巴⽐妥可采⽤铜盐反应和紫外检测。

8．CE的英⽂全称为capillary electrophoresis。

9．对HPLC法进⾏准确度考查时，回收率⼀般为98-102%；容量分析法的回收率⼀般为99.7-100.3%。

10．绿奎宁反应可⽤于6位含氧喹啉衍⽣物的鉴别，例如奎宁。

11．阿司匹林⽚剂（中国药典2005版），采⽤的是双步滴定法，该⽅法可以消除制剂中⽔杨酸和酸性稳定剂的⼲扰。

12．⽤⾮⽔滴定法测定有机碱药物常⽤的滴定剂是⾼氯酸，常采⽤的溶剂是醋酸，常⽤的指⽰剂是结晶紫，硫酸根的⼲扰可通过计算⽅法消除，在⾮⽔介质中硫酸根呈⼀级电离。

13．芳酸的碱⾦属盐的药物可⽤双相滴定法进⾏含量测定。

14．链霉素鉴别的特征反应式麦芽酚反应，其⽔解产物链霉胍的特有反应是坂⼝反应。

15．⽤戊烯⼆醛反应鉴别异烟肼是针对结构具有γ或β位被羧基衍⽣物取代的吡啶16．阿司匹林中⽔杨酸的检查室利⽤⽔杨酸具有酚羟基，可在弱酸性溶液中与⾼铁盐反应呈紫⾊。

硫酸阿托品Liusuan AtuopinAtropine Sulfate本品为α-（羟甲基）苯乙酸8-甲基-8- 氮杂双环[3.2.1]-3-辛酯硫酸盐一水合物。

按干燥品计算，含(C17H23NO3)2·H2SO4不得少于98.5％。

【性状】本品为无色结晶或白色结晶性粉末；无臭。

本品在水中极易溶解，在乙醇中易溶。

熔点取本品，在120 ℃干燥3 小时后，立即依法测定（附录ⅥC），熔点不得低于189 ℃，熔融时同时分解。

【鉴别】(1) 本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集487 图）一致。

(2) 本品显托烷生物碱类的鉴别反应（附录Ⅲ）。

(3) 本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应（附录Ⅲ）。

【检查】酸度取本品0.5g ，加水10ml溶解后，加甲基红指示液1 滴，如显红色，加氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)0.15ml ，应变为黄色。

莨菪碱取本品，按干燥品计算，加水制成每1ml 中含50mg的溶液，依法测定（附录ⅥE），旋光度不得过－0.40°。

其他生物碱取本品0.25g ，加盐酸溶液(9→1000)1ml溶解后，用水稀释成15ml，分取5ml ，加氨试液2ml ，振摇，不得立即发生浑浊。

干燥失重取本品，在120 ℃干燥3 小时，减失重量不得过5.0 ％（附录ⅧL）。

炽灼残渣不得过0.1 ％（附录ⅧN）。

【含量测定】取本品约0.5g，精密称定，加冰醋酸与醋酐各10ml溶解后，加结晶紫指示液1 ～2 滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显纯蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。

每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于67.68mg 的(C17H23NO3)2·H2SO4。

【类别】抗胆碱药。

【贮藏】密封保存。

【制剂】(1) 硫酸阿托品片(2) 硫酸阿托品注射液。

陈向丹，徐军，丁阳，等.兽用硫酸阿托品注射液含量测定方法的优化［J ］.中南农业科技，2024，45（1）：40-42．硫酸阿托品（Atropine sulfate ）是抗胆碱药，主要用于有机磷酸酯类药物中毒、麻醉前给药和拮抗胆碱神经兴奋症状。

其注射液含量常用测定方法是溴甲酚绿酸性染料比色法［1］，该方法萃取过程中三氯甲烷易发生乳化，分层效果较差，三氯甲烷层易出现浑浊现象，且水层易黏附在分液漏斗底部，随三氯甲烷一同放出造成比色皿污染，影响吸收度测定结果。

溴甲酚绿酸性染料比色法专属性不强，操作繁琐，重现性和精密度对于经验不丰富的新检测人员来说均不易达标；原标准采用的提取后的紫外分光光度法，提取过程中使用的三氯甲烷为易致毒试剂，采购与使用管理严格，且毒性较大，对人员及环境存在一定的安全隐患［2］。

为了更好地控制产品质量的同时最大限度保护检验人员及环境，本研究建立了以反相高效液相色谱法测定硫酸阿托品溶液中硫酸阿托品含量的方法［3-10］，为该药的质量控制提供新方法。

1材料与方法1.1仪器与试剂安捷伦1260Ⅱ型高效液相色谱仪；Agilent Po⁃roshell 120Ec-C18色谱柱，4.6mm×150mm （i.d.），粒径4μm ；资生堂MG Ⅱ型C18色谱柱，4.6mm×150mm （i.d.），粒径3μm ；Waters SymmetryShieldRP18色谱柱，4.6mm×250mm （i.d.），粒径5μm ；Met⁃tler AE240型电子天平；PHS-3C 型酸度计（上海精密科学仪器有限公司）；MILIPORE 超纯水处理器等。

硫酸阿托品对照品［①含量98.3%（坛墨质检科技股份有限公司，批号2471910）；②含量98.3%（广州佳途科技股份有限公司，批号0702-RB-0001）］；甲醇、乙腈，均为色谱纯（美国TEDIA 公司）；水为二次纯化水。

第十三章茛菪烷类抗胆碱药物的分析（一）最佳选择题1.茛菪烷类生物碱的特征反应是 EA.与三氯化铁反应B.与生物碱沉淀剂反应C.重氮化-偶合反应D.丙二酰脲反应E.Vitali反应2.药物水解后，与硫酸-重铬酸钾在加热的条件下，生成苯甲醛，而逸出类似苦杏仁的臭味的药物是 AA氢溴酸山茛菪碱 B.异烟肼 C.硫酸奎宁 D.盐酸氯丙嗪 E.地西泮3.Ch2010中守在的茛菪烷类原料药都采用的鉴别方法是 CA.Vitali鉴别反应B.UV鉴别C.IR鉴别D.硫酸盐鉴别反应E.溴化物鉴别反应4.影响酸性染料比色法的最主要因素是 AA.水相pHB.酸性染料的种类C.有机溶剂的种类D.酸性染料的浓度E.水分的影响5.在冰醋酸非水介质中，硫酸阿托品与高氯酸反应的化学计量摩尔比是 AA.1：1B.1:2C.1:3D.1:4E.2:36.能与二氯化汞的乙醇溶液生成白色沉淀的药物是 CA.阿托品B.后马托品C.氢溴酸东茛菪碱D.异烟肼E.苯巴比妥7.BP2000检查氢溴酸东茛菪碱中其他生物碱采用的方法是 AA.TLC自身稀释对照法B.TLC对照品对照法C.HPLC法D.PC法E.UV法8.以下药物没有旋光性的是 BA.氢溴酸东茛菪碱B.阿托品C.丁溴东茛菪碱D.甲溴东茛菪碱E.氢溴酸山茛菪碱9.Ch2010硫酸阿托品中有关物质检查的方法是 BA.HPLC标准品对照法B.HPLC主成分自身对照法C.TLC标准品对照法D.TLC自身稀释对照法E.UV法10.采用酸性染料比色法测定药物含量，如果溶液pH过低对测定造成的影响是 AA.使In-浓度太低，而影响离子对的形成B.有机碱药物呈游离状态C.使In-浓度太高D.没有影响E.有利于离子对的形成（二）配伍选择题[11-14]A.HPLC法B.酸性染料比色法C.硝酸银电位滴定D.非水溶液滴定法E.双相滴定法以下药物Ch2010含量测定的方法是 D；B；A；C11.硫酸阿托品原料药含量测定方法12.硫酸阿托品制剂含量测定方法13.氢溴酸东茛菪碱的含量测定方法14.丁溴东茛菪碱原料药的含量测定方法[15-16]A.UV法B.HPLC法C.TLC法D.与三氯化铁呈色E.Vitali反应以下药物Ch2010杂质检查的方法是 C；B15.氢溴酸东茛菪碱其他生物碱的检查16.丁溴东茛菪碱有关物质的检查[17-19]A.重氮化-偶合反应B.Vitali反应C.麦芽酚反应D.硫色素反应E.与三氯化铁呈色以下药物的特征鉴别试验是 C；D；B17.链霉素18.维生素B119.氢溴酸山茛菪碱（三）多项选择题20.离子对高效液相色谱法要在流动相中加入与呈解离状态的待测组分离子电荷相反的离子对制剂，分析碱性物质时常用的离子对试剂有 ABCA.戊烷磺酸钠B.庚烷硫酸钠C.十二烷基硫酸钠D.四丁基溴化铵E.四丁基氢氧化铵21.离子对高效液相色谱法在流动相中加入与呈解离状态的待测组分离子电荷相反的离子对试剂，分析酸性物质时常用的离子对试剂有 DEA.戊烷硫酸钠B.庚烷硫酸铵C.十二烷基硫酸钠D.z四丁基溴化铵E.四丁基氢氧化铵22.氢溴酸东茛菪碱中其他生物碱的检查方法是 BEA.水溶液加入氨试液产生浑浊B.水溶液加入氨试液不得发生浑浊C.加入氢氧化钾试液则有浑浊D.加氢氧化钾试液无浑浊E.加氢氧化钾试液数滴，只发生瞬即消失的类白色浑浊（四）是非判断题23.茛菪烷类抗胆碱药物是由茛菪烷衍生的氨基醇与笔筒有机酸缩合成酯的生物碱（√）24.茛菪烷类抗胆碱药物都具有水解性、碱性和旋光性（×）25.硫酸阿托品原料药的含量测定可以采用酸性染料比色法（×）26.Ch2010收载的茛菪烷类原料药都可以采用IR标准图谱对照法鉴别（√）27.Ch2010收载的丁溴东茛菪碱原料药含量测定方法是以硝酸银为滴定剂，电位法指示终点（√）（五）简答题28.简述酸性染料比色法的原理和影响因素29.简述茛菪烷类药物的结构与性质30.今有三瓶药物分别为硫酸阿托品（A）、氢溴酸东茛菪碱（B）和氢溴酸后马托品（C），但瓶上标签脱落，请采用适当的化学方法将三者区分开。

生物碱类药物的分析(一)一、A型题题干在前，选项在后。

有A、B、C、D、E五个备选答案其中只有一个为最佳答案。

1. 取盐酸麻黄碱约10mg，加水1ml溶解后，加硫酸铜试液2滴与20%NaOH溶液lml，即显蓝紫色，加乙醚1ml振摇后，放置，乙醚层即显紫红色，水层变成蓝色，此盐酸麻黄碱的鉴别试验，其利用的反应是A.双缩脲反应B.紫脲酸铵反应C.Vitali反应D.Thalleiaquin反应E.Marquis反应答案：A2. 取某药物约10mg，加水1ml溶解后，加硫酸铜试液2滴与20%NaOH溶液1ml，即显蓝紫色，加乙醚1ml，振摇后，放置，乙醚层即显紫红色，水层变成蓝色。

该药物是A.盐酸麻黄碱B.硫酸奎宁C.硫酸阿托品D.盐酸吗啡E.硝酸士的宁答案：A3. 第12题项下的试验称为A.Marquis反应B.Vitali反应D.Frohde反应E.Thalleioquin反应答案：D4. 取某生物碱类药物约10mg，加发烟硝酸5滴置水浴上蒸干，得黄色残渣放冷，加乙醇2-3滴湿润，加固体氢氧化钾一小粒，即显深紫色。

此鉴别硫酸阿托品的反应称为A.Marquis反应B.Thalleiaquln反应C.Frohde反应D.Kober反应E.Vitali反应答案：E5. 取某生物碱药物10mg，加盐酸lml与氯酸钾0.1g，置水浴上蒸干，残渣遇氨气即显紫色；再加氢氧化钠试液数滴，紫色即消失。

该药物应为A.茶碱B.利血平C.地西泮D.异烟肼E.磷酸可待因答案：A6. 提取酸碱滴定法测定生物碱药物时，滴定反应的化学计量点和滴定突跃范围区应在A.碱性区B.酸性区C.中性D.酸碱性区答案：B7. 中国药典(2000年版)规定检查盐酸吗啡中“其他生物碱”的方法为A.TLCB.HPLCC.GCD.PCE.IR答案：A8. 提取酸碱滴定法测定生物碱盐类药物时，最常用的碱化试剂为A.氢氧化钙B.碳酸钠C.氧化镁D.氨水E.氢氧化钠答案：D9. 非水滴定法测定磷酸可待因含量时，1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于该药物的量为(磷酸可待因的分子量为397.39)A.198.69mgB.19.87mgC.397.39mgD.39.739mgE.39.74mg答案：E10. 非水滴定法测定生物碱氢卤酸盐含量时，若加入醋酸汞的量不足，则会使测定结果A.不准B.不精密C.偏高D.偏低E.准确度下降答案：D11. 属于磷酸可待因中的特殊杂质为A.游离磷酸B.阿扑吗啡C.吗啡D.罂粟碱E.蒂巴因答案：C12. 提取酸碱滴定法测定磷酸可待因片剂含量时，应选用的指示剂为A.酚酞指示剂B.淀粉指示液C.铬酸钾指示液D.溴百里酚蓝E.甲基红答案：E13. 中国药典(2000年版)测定生物碱的氢卤酸盐时，应预先加入的试液为A.醋酸汞的水溶液B.醋酸汞固体E.醋酸汞的冰醋酸溶液答案：E14. 《中国药典》(2000年版)采用非水滴定法测定硫酸阿托品含量时，1mol的高氯酸相当于硫酸阿托品的摩尔数是A.4molB.3molC.2molD.1molE.1/2mol答案：D15. 《中国药典》(2000年版)规定盐酸麻黄碱含量测定方法是A.银量法B.非水滴定法C.酸性染料比色法D.提取中和法E.紫外分光光度法答案：B16. 检查硫酸阿托品中莨菪碱的方法是A.旋光度测定法B.比旋度法C.比色法D.比浊度法E.TLC17. 生物碱与酸性染料在合适的pH值条件下，分别形成阳离子与阴离子并结合为有色的离子对。