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Nikon 80i荧光显微镜使用说明△荧光显微镜属贵重仪器，未经保管人员同意请勿擅自使用。
△严格按照操作步骤进行，在使用过程中如发现问题应及时向保管人员反映。
△因违反操作规程，而导致仪器损坏，根据本中心《损坏仪器赔偿制度》进行赔偿。
△使用者在使用完毕后应进行登记.维护和保养本仪器应定期进行维护和保养。
●防止镜头霉变，定期除湿。
●为防止损坏荧光灯泡，荧光光源关闭后，15分钟内不得再重新开启。
●荧光灯泡的最佳使用期限是200小时，如发现荧光强度明显降低应更换荧光灯泡。
荧光显微镜操作步骤△显微镜系精密仪器，务请不要碰击，要仔细耐心使用。
△荧光光源关闭后，15分钟内不得再开启。
△荧光灯泡的最佳使用期限是200小时，因此每次使用时请尽量缩短时间。
1.插上电源插座，打开主机电源开关。
2. 将待检标本置于载物台上。
3. 用10×物镜对焦点，根据使用者的眼间距调节双目镜筒的间距。
4. 调节光圈及灯光强度至合适位置。
5. 调节粗调和微调使标本至最清晰。
6. 拔出活动杆，使光路通过CCD至显示器。
7.保存图象至电脑中。
8. 使用完毕后关掉电源，如镜头上有指纹或污迹用擦镜纸将其擦除。
●荧光光源操作1.插上荧光光源电源插座，打开荧光光源电源开关。
2. 打开光栅。
3. 根据使用荧光素的不同选择不同的荧光滤光片。
4. 将待检标本置于载物台上。
5. 用10×物镜对焦点，根据使用者的眼间距调节双目镜筒的间距。
6. 调节粗调和微调使标本至最清晰。
7. 拔出活动杆，使光路通过CCD至显示器。
8. 保存图象至电脑中。
9. 使用完毕后关掉电源，如镜头上有指纹或污迹用擦镜纸将其擦除。
10. 登记使用情况。
Nikon 80i主要技术参数：放大倍数40-1000，CFI60无限远光学系统，内置滤色镜，数字成像头。
明场、暗场、简单偏光、荧光/明场、荧光/暗场。
波长：330-380，450-490，510-560。
主电压90~250V。
尼康显微镜操作说明尼康A1R共聚焦操作说明第⼀章 A1R共聚焦使⽤总则第⼀条共聚焦操作⼈在⾃主上机前需提交培训申请，经过导师培训，通过考核后⽅可进⾏⾃主上机操作。
第⼆条使⽤共聚焦需⾄少提前1天向仪器负责⼈提交申请使⽤仪器时间段并严格按照规范使⽤仪器。
第三条严格按照规范进⾏开关机，在拍摄过程中如出现任何异常请及时联系仪器负责⼈并说明情况，特别注意仪器使⽤完毕按规范关闭仪器所有开关，清理好镜头，做好登记，保持房间和台⾯整洁，出门时关好房灯和房门。
第⼆章 A1R共聚焦开关机操作说明共聚焦主要包括：显微镜部分、共聚焦部分和计算机部分，请按照以下顺序进⾏开关机。
第⼀条 A1R-si 开机顺序1. 打开 UPS 或接线板总电源开关（⼀般都处于⼀直开机状态）；2. 打开需要使⽤的激光器，不使⽤的激光器可以不打开（具体见后⾯）；3. 依次打开显微镜的长寿命汞灯电源，卤素灯电源，电动载物台控制电源；4. 打开显微镜底座右后端的 HUB 控制部件电源；5. 打开共聚焦控制器左侧⾯板右上⾓的控制器开关；6. 待确认控制器打开的状态下，打开电脑，双击桌⾯ NIS-Elements快捷图标，选择confocal 选项进⼊软件，开始共聚焦操作。
第⼆条 A1R-si 关机顺序1. 请先确认关闭软件，再关闭共聚焦控制器（此条请特别注意）；2. 依次关闭显微镜各个控制部件电源；3. 依次关闭各个激光器之后，关闭激光器电源总开关；4. 关掉 UPS 或接线板总开关（遇到如停电等特殊情况时进⾏此步骤）。
第三条激光器的开关机顺序各个激光器的开关是独⽴的。
下⾯分别加以介绍：⾸先要打开激光器电源盒前⾯钥匙旋钮，然后根据需要打开相应的激光器。
（1）405nm 激光器开机：电源开关拨到 ON 位置-- 钥匙开关拨到 I 位置;关机：钥匙开关拨到 O 位置-- 电源开关拨到 OFF 位置（2）488nm 多线 Ar离⼦激光器开机：确认开关 “标记1”处于 Stand by 位置，钥匙开关“标记2”处于 on 位置，这时风扇开始转动，打开开关“3”，液晶⾯板会有数字显⽰ 17 左右-- 将开关“标记4”由 standby 拨到 operate，液晶⾯板显⽰数值 40 左右，打开完成；关机：将开关“标记4”由 run 拨到 stand by，液晶⾯板会有数字显⽰ 17 左右时关掉开关“3”即可，488钥匙⼀直处于开机状态。
Osa在果蝇卵巢生殖干细胞分化中的功能研究李敏;瞿杰;李梦婕;胡晓龙【摘要】The Drosophila ovary germline stem cell(GSC)is recognized as an ideal model system for studying stem cell fate regulation in vivo. The epigenetic mechanism is involved in the Drosophila ovary GSC fate regulation. Identification and characterization of apparent epigenetic regulators involved in this process will contribute to reveal underlying regulatory mechanisms. The aim of this study is to investigate the possible functions and the molecular mechanisms of Osa,the chromatin remodeling complex BAP-specific subunit,in Drosophila GSC differentiation. GAL4/UAS binary system combined with RNAi technology was used to specifically down-regulate osa expression in escort cells (ECs),and immune fluorescent dyeing was for detecting the relevant indexes. The results showed that knock-down of osa led to a significant increase of undifferentiated germ cells(UGCs)in the germarium of ovarian tissue,the positive cells of pMad and Dad-lacZ,two BMP signaling activity reporters,increased significantly. Moreover,EC morphology was abnormal,and they failed to wrap germline cells. In conclusion,Osa might be involved in the regulation of GSC differentiation by BMP signaling pathway-depending and specific morphological process of ECs.%果蝇卵巢生殖干细胞(Germline stem cell,GSC)是在活体(in vivo)研究干细胞命运调控的理想平台.表观遗传机制在果蝇卵巢GSC 命运调控中发挥重要作用,其机理的探明需要研究并发现更多参与此过程的表观调控因子.为探究果蝇染色质重塑复合物BAP中特有的亚基Osa在果蝇卵巢GSC分化调控中的功能及其分子机理,利用GAL4/UAS二元表达系统结合RNAi技术在干细胞微环境组分护卫细胞(Escort cells,ECs)中特异性下调osa的表达,并通过免疫荧光染色法对相关指标进行检测.结果显示,敲减ECs中osa可致卵巢组织卵原区中未分化生殖细胞数目(Undifferentiated germ cells,UGCs)显著增多,同时BMP信号通路激活标志pMad、Dad-lacZ阳性细胞数目显著增多,并观察到EC细胞形态异常,不能有效包裹生殖系细胞.推论Osa以BMP信号通路依赖方式参与果蝇卵巢GSC的分化调控,其作用机理还可能涉及EC细胞特定的形态学过程.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2017(033)009【总页数】6页(P139-144)【关键词】果蝇;Osa;生殖干细胞;分化【作者】李敏;瞿杰;李梦婕;胡晓龙【作者单位】上海交通大学生命科学技术学院,上海 200240;上海交通大学生命科学技术学院,上海 200240;上海交通大学生命科学技术学院,上海 200240;上海交通大学生命科学技术学院,上海 200240【正文语种】中文成体干细胞是一类位于成体组织中的未分化细胞，具有自我更新（Self-renewal）能力与分化潜能，这两方面的特性对于组织内稳态的维持及组织损伤后修复具有重要意义［1］。
尼康荧光显微镜技术特点一、光学系统：尼康CFI60无限远光学以其卓越的成像质量受到全球市场的高度好评，齐焦距离60mm。
对人眼观察和数字化成像都是最优的物镜：1、提升的边缘性性和平场度2、消渐光晕（亮度的差别小于5%）3、提升的紫外DAPI 和其他滤光片的焦平面的性能。
二、80i主机的标准配置配备了新的复眼透镜系统，“复眼”透镜阵列使视场边缘的光强达到视场中心光强的90%，所以完全能适用数字成像的照明。
使目镜的视场数达到25mm以上。
三、噪声消除器（H i S/N）是80i 荧光装置的标准特征，信噪比提高了5倍，电动快速低噪声马达滤光片转盘。
四、电动控制装置精巧方便，130W高效长寿命荧光装置，无需调中，滤光片电动快速转换，低噪声，使用寿命2000小时以上，同为NIKON产品，提高产品整体性，方便售后服务五、扩展了人机学性能。
新的矩形机械台：固定位手轮、扭力矩手轮调节，可延伸的工作台固定把手位、超硬铝合金工作台表面。
人机学主机。
显微镜构成尼康显微镜80i的主要构成：（如下图所示）1、80i显微镜主机2、聚光镜3、载物台及夹片器4、荧光物镜：10倍40倍100倍5、物镜转盘6、电动荧光装置：包含荧光专用激发块7、C-BOX2控制器8、双目观察镜筒及照像端口9、目镜10、视频接口11、冷CCD12、长寿命荧光光源主要可调节的部分：（如下图所示）长寿命荧光光纤照明器显微观察方法明场显微术：1 打开电源装置的开关。
将显微镜主机后面的电源开关置于“I”的位置。
电源指示灯亮。
2 按预置开关（显微镜前面的绿色按钮）打开明场照明。
3 将显微镜右下部的ND8、ND32 和NCB11 减光片移至光路中。
（NCB11是白光平衡片，ND8、ND32两个减光片分别将光强减弱为原来的1/8和1/32）4 推入目镜筒上面的光路转换杆，对准双目镜筒使光路充满5 转动激发方式转换盘放在没有激发块的空位处（打开显微镜右后面C-BOX2的开关，通过控制器选择没有荧光块的空位转入光路中）6 提升聚光镜到最高位置。
荧光原位杂交技术检测自然流产中绒毛染色体异常与男女双方叶酸含量的研究李晓泽;药泽蓉;胡志鹏;魏岳峰;梁飞;魏魏【摘要】目的利用荧光原位杂交技术(FISH)检测绒毛染色体,同时检测夫妇双方叶酸水平,寻找叶酸含量与染色体畸变二者的关系. 方法选择100例早期自然流产妇女作为病例组,100例正常早期妊娠妇女作为对照组,对病例组胚胎或绒毛运用FISH 技术进行染色体数目检测,并用绒毛染色体核型分析进行验证.检测病例组与对照组夫妇双方血清叶酸水平. 结果病例组中,FISH诊断流产绒毛染色体数目异常40例,占40.0％,以三体型最为常见,与绒毛染色体核型分析结果比较,差异有统计学意义.病例组与对照组夫妇双方叶酸水平比较,差异有统计学意义. 结论 FISH技术能够快速、准确、高效地检测自然流产或死胎染色体异常情况,血液叶酸水平低下为自然流产中绒毛染色体异常的危险因素.【期刊名称】《中国生育健康杂志》【年(卷),期】2014(025)001【总页数】3页(P75-77)【关键词】自然流产;染色体异常;荧光原位杂交;叶酸含量【作者】李晓泽;药泽蓉;胡志鹏;魏岳峰;梁飞;魏魏【作者单位】046011 山西长治长治市妇幼保健院医学遗传室;046011 山西长治长治市妇幼保健院医学遗传室;046011 山西长治长治市妇幼保健院医学遗传室;046011 山西长治长治市妇幼保健院医学遗传室;046011 山西长治长治市妇幼保健院医学遗传室;046011 山西长治长治市妇幼保健院医学遗传室【正文语种】中文荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH）是近年来兴起的分子细胞遗传学方法，被认为是诊断染色体异常的一个新技术。
本研究采用FISH 技术对100例早期自然流产绒毛细胞13、16、18、21、22、X／Y号染色体进行检测，同时检测自然流产夫妇双方的叶酸水平，结合绒毛染色体结果，探讨二者间关系。
1 开启电源：显微镜的电源开关，在显微镜后侧。
2 按下照明开关，打开透射显微观察的照明灯。
并将亮度控制旋钮调到预设位置。
3 将ND8、ND32 和NCB11 滤光块切入光路。
4 按下光路切换杆，将双目镜完成切入光路5 转动激发方式切换转盘，将其调节到无滤光块的位置上。
6 将聚光镜升到最高位置。
7 将视场光阑和孔径光阑充分打开8 将10 倍物镜移入光路。
9 放置标本后调节载物台，将标本移入视野中10 对标本对焦。
11 调节屈光度和瞳间距。
12 对聚光镜进行对焦。
13 切换到所需的物镜并观察标本。
14 观察完毕后请关闭电源。
2.4 落射荧光显微观察进行显微观察前必须：•检查照明灯的累计照明时间和落射荧光附件的状态。
如果照明灯己超过其使用寿命，请更换照明灯。
•使用无荧光型的玻片。
•使用非荧光型浸油。
•为防止标本发生褪色，请在不进行显微观察时关闭光闸。
1将明场光源关闭。
注意：A 荧光显微术用于观察荧光染色和荧光标记的样本；B 使用前明确样本荧光激发光波长和发射光波长，了解需要使用的荧光滤光片；C 荧光显微镜光学系统部件在组成以及原理上与前三种显微镜差别很大，在使用时应了解荧光显微镜光程和明场显微镜光程；D 汞灯灯室可产生高温高热，使用完请勿立即盖上防尘罩，而要在关闭电源30 分钟后再盖上防尘罩，防止烧坏显微镜部件和发生火灾E 为延长汞灯使用寿命，应按规范操作：开启汞灯变压器电源预热三分钟后再启动激发按钮，激发后就可以使用，每次使用至少开机30分钟，两次连续使用的时间间隔至少30分钟以上；2将当前所需激发方式的滤光块移入光路。
3放置标本，并调节载物台使标本进入视野。
4 切换到所需的物镜并观察标本。
5 返回明场显微观察。
转动激发方式切换转盘，将其调节到无滤光块的位置上。
拍照软件：NIS图像捕捉软件介绍打开NIS软件包，主菜单中有File Edit Camera Preprocess View Help以下主要介绍各目录下的主要子目录一．File:在此目录下主要是打开，保存，另存，Options(选项),打印，退出等其中重要的是Options点击File/options会出现一个对话框，可设置图片保存路径，前缀，格式（JPEG/TIFF等）还可设置标尺的计量单位（纳米，微米，毫米等）二．Edit：在此目录下主要是Resize(尺寸重设)，Crop（剪裁），Copy（复制）Flip Horizontally （水平翻转），垂直翻转，向左旋转，向右旋转，文件合并（File Merge）其中重要的是File Merge点击Edit／File Merge会出现一个对话框，可以分别输入红，绿，蓝三色荧光图片，点OK，就可实现三色荧光叠加。
