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藻蓝蛋白的提取方法1.PBS 缓冲液直接提取法(1)配制pH=6.0 的PBS 缓冲溶液。
(2)称取20 g 螺旋藻粉, 加入步骤( 1) 配制的缓冲溶液200 mL, 然后将其放在磁力搅拌器上搅拌 4 h, 将搅拌后的溶液置于离心机中10 000 g 离心10 min, 收集蓝色上清液。
(3) 将离心得到的上清液加洗涤剂洗涤, 再将洗涤后溶液进行过滤。
(4)将滤液用旋转真空蒸发仪蒸干, 可得蓝色固体,将固体置于干燥器中 1 h, 待完全干燥后取出, 将其研磨成蓝色粉末样品。
2藻蓝蛋白的富集分离2 .1螺旋藻细胞的破碎准确称取0 .5 g 螺旋藻粉, 加入100 mL 的pH =7 .0 、0 .01 mol/L 的H3PO4 缓冲液, 采用反复冻融(3 次)的方法对藻体细胞进行破碎, 在显微镜下观察计数细胞破碎率在90%以上即可.将破碎的螺旋藻细胞悬浊液于4 000 r/min 离心20min , 倾倒上清液可得到含藻蛋白的粗提液.在568 、620 和650 nm处测粗提液的吸光度, 计算藻蓝蛋白的含量.2.2 盐析法沉淀藻蓝蛋白在装有固定体积藻蛋白粗提液的烧杯中加入一定量的(N H4)2SO4 溶液, 边加边搅拌, 以防溶液局部过浓使蛋白质发生变性, 最终(NH4)2 SO4 溶液的质量浓度分别为20 %、40 %、50 %和60 %, 然后分别在20 ℃和40 ℃下对(NH4)2 SO4 盐析法沉淀藻蓝蛋白进行实验研究.在设置的温度和盐浓度下静置过夜, 再于-4 ℃离心机中以10 000 r/min 离心20 min , 将离心得到的沉淀用1/4 上清液体积的H3PO4 缓冲液(pH =7 .0)溶解, 并倾倒于透析袋中, 再置于去离子水中透析24h(每隔4 h 更换一次去离子水);透析结束后, 再于-4 ℃离心机中以10 000 r/min离心25 min ;用移液管抽取上清液,在568 、620 和650 nm 下测吸光度, 计算藻蓝蛋白的含量.2 .3 等电点法沉淀藻蓝蛋白在装有固定体积藻蛋白粗提液的烧杯中加入0 .1 mo l/L 稀H2 SO4 溶液, 边加边搅拌,以防溶液局部过浓使蛋白质发生变性, 将藻蛋白粗提液pH调节为3 .0 、4 .0 和5 .0 , 即藻蓝蛋白的等电点附近,静置过夜, 于-4 ℃离心机中以10 000 r/min 离心20 min ;将离心得到的沉淀用1/4 上清液体积的H3PO4 缓冲液(pH =7 .0)充分溶解, 再于-4 ℃高速离心机中以10 000 r/min 离心25 min ;用移液管抽取上清液,在568 、620 和650 nm 下测吸光度, 计算藻蓝蛋白的含量.2 .4 藻蓝蛋白的收率和分离因数分别计算藻蓝蛋白的收率(Y )、浓缩率(m)和分离因数(β):式(3)-(5)中, N(g/L)为藻液比, 0 和t 分别代表冷冻-融化后藻蛋白粗提液和经过盐析法沉淀或等电点法沉淀最终得到的藻蓝蛋白上清液.双水相萃取（1）藻蓝蛋白的初步提取。
藻类保健品中藻蓝蛋白的盐析提取技术研究背景介绍藻类保健品作为一种为人们所关注的健康食品种类，近年来在市场上的需求量逐渐增加。
在藻类保健品中，藻蓝蛋白作为一种高效的保健成分，被广泛应用于运动营养补充品、心血管保健品、抗肿瘤等领域。
因此，提高藻类保健品中藻蓝蛋白的提取率，成为保健品生产企业的重要目标之一。
藻蓝蛋白藻蓝蛋白是全球广泛分布且相似的蓝色光合色素，主要存在于紫色藻、蓝藻等水生植物中。
藻蓝蛋白基于染色体的基因编码，其分子量为35-40kDa，是一种富含珍贵氨基酸的假单胺酸蛋白质。
藻蓝蛋白的生理活性主要表现在抗氧化、抗炎、抗原性、降低血糖、调节血脂、保护肝脏等多个方面。
盐析提取技术盐析法是常用的蛋白质分离和纯化方法，适用于对蛋白质进行快速的富集和分离。
在盐析方法中，利用蛋白质在不同盐类浓度下的稳定性差异而实现了富集和分离。
由于藻蓝蛋白对不同浓度的钾离子具有不同的亲和力，于是有学者用盐析法来提取纯化藻蓝蛋白，其提取效率和活性也得到了较好的保持。
盐析提取技术研究一项将盐析法应用于藻蓝蛋白的提取纯化研究表明，在盐析法中，影响藻蓝蛋白提取率的因素很多，包括盐类类型、盐类浓度、pH值、温度等。
其中，钾盐和钠盐是常用的盐类类型，其在不同条件下的选择和比例会影响藻蓝蛋白的提取率和纯度。
盐析提取出的藻蓝蛋白可以进一步经过SDS-PAGE电泳与ELISA检测方法来证明其提取效率和纯度。
在大量试验基础上，研究人员建立了一种高效的藻蓝蛋白盐析提取技术，其提取效率可以达到90%以上，纯度也可以保持在85%左右。
以藻蓝蛋白盐析提取技术为基础，进一步开展其生物活性、理化性质、抗氧化性质等方面的研究，有望为藻类保健品的开发和生产提供有力的技术支持。
藻蓝蛋白作为藻类保健品中一种极具活性的成分，其提取技术的研究和开发对于保健品生产企业的发展至关重要。
基于盐析方法的藻蓝蛋白提取技术不仅操作简单，而且能够提取高纯度、高效率的藻蓝蛋白。
粉末活性炭联合盐析法纯化藻蓝蛋白的研究盛晶梦;张发宇;袁梦媛;汪家权【摘要】文章以巢湖新鲜蓝藻藻泥为处理材料,采取粉末活性炭联合盐析的方法提取纯化藻蓝蛋白.综合考虑粉末活性炭种类、粒径、添加量、处理时间、pH值及硫酸铵浓度等影响因素,通过一系列单因素试验研究了不同活性炭处理条件以及两步盐析中硫酸铵的浓度对藻蓝蛋白提纯的影响,对藻蓝蛋白的提纯条件进行了优化.结果表明:在粉末活性炭种类为煤质,粒径为400~500目,添加量为100 g/L,静置时间为10 min,pH值为70,两步盐析(NH4)2SO4的浓度分别为1 mol/L和2 mol/L 时,粉末活性炭联合盐析法提纯藻蓝蛋白的效果最好,藻蓝蛋白的纯度可达316,回收率为45%.%The extraction and purification of C-phycocyanin from fresh blue algae in Chaohu Lake were performed by the combined use of powdered activated carbon(PAC) treatment and saltprecipitation.Considering the PAC variety, particle size, dosage, treatment time, pH value and amount of substance concentration of (NH4)2SO4, the effects of different PAC treatment conditions and amount of substance concentration of (NH4)2SO4 in two-step salt precipitation on the extraction and purification of C-phycocyanin were studied by series of single factor experiments,and the extraction and purification conditions were optimized.The results showed that the effect of combined use of PAC and salt precipitation was best when the coal PAC particle size was 400-500 mesh, dosage was 100 g/L, treatment time was 10 min, pH value was 70 and the amount of substance concentration of (NH4)2SO4 in two-stepsalt precipitation were 1 mol/L and 2 mol/L, and the purity and recovery rate of C-phycocyanin were 316 and 45%.【期刊名称】《合肥工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(040)002【总页数】6页(P242-247)【关键词】粉末活性炭;两步盐析;提取纯化;藻蓝蛋白【作者】盛晶梦;张发宇;袁梦媛;汪家权【作者单位】合肥工业大学资源与环境工程学院,安徽合肥 230009;合肥工业大学资源与环境工程学院,安徽合肥 230009;合肥工业大学资源与环境工程学院,安徽合肥 230009;合肥工业大学资源与环境工程学院,安徽合肥 230009【正文语种】中文【中图分类】TQ464.7我国是世界上多湖泊国家,湖泊富营养化已经成为我国最重要的水环境问题之一。
螺旋藻藻蓝蛋白的分离摘要: 藻蓝蛋白(Phycocyanin)是一个具有生物活性功能的天然蓝色素蛋白,已被用作优质蛋白源,添加于食品和鱼饵料中, 具有抗氧化、增强人体免疫力等功能, 又可制成荧光探针, 用于免疫学、细胞生物学等领域。
本文主要介绍运用硫酸铵盐析与层析柱结合法从螺旋藻中分离提取藻蓝蛋白。
藻蓝蛋白是一类普遍存在于蓝藻细胞中的光合辅助色素,一种特殊的色素蛋白, 由开链四吡咯化合物和脱辅蛋白通过硫链键结合。
藻蓝蛋白在螺旋藻中的含量高达10%～20% , 是螺旋藻细胞中重要的光合作用的天然色素,在光合作用中能以近乎100% 的高效率把光能优先地传递给光系统。
藻蓝蛋白既可以作为天然色素广泛应用于食品、化妆品、染料等工业。
同时藻蓝蛋白具有强烈荧光可制成荧光试剂、荧光探针、荧光示踪物质等, 用于临床医学诊断、免疫化学及生物工程等研究领域中。
同时藻蓝蛋白还是一种无毒副作用的理想光敏剂。
由于藻蓝蛋白具有良好的开发前景, 在螺旋藻的含量较高, 螺旋藻中藻蓝蛋白的研究成了藻类蛋白研究的热点。
1工艺流程弃去下层墨绿色沉淀↗螺旋藻（加入提取液）→冻融→离心（10000r/min,15min）→取亮蓝色上清液→加入↗弃去蓝色沉淀(NH4)2SO4固体粉末（在溶液浓度达到20%）→离心（10000r/min,15min）→取亮蓝色上清液→加入(NH4)2SO4固体粉末（在浓度达到50％）→离心（10000r/min,15min）→取得深蓝色沉淀→加入蒸馏水→装入层析袋→蒸馏水中层析（4℃）→过柱纯化→结果检测↘弃去黄绿色上清液2分离纯化具体方法2.1取螺旋藻粉颗粒倒入塑料瓶中，加提取液。
2.2.将塑料瓶用滤纸封住瓶口置低温（－20℃）下冰冻一定时间，然后取出置室温下（或40℃左右）迅速融化。
如此反复冻融多次（实验中此步骤我们只做了一次，其余由老师帮做）,细胞可在形成冰粒和增高剩余胞盐浓度的同时,发生溶胀破碎。
实验现象:解冻前:墨绿色固状(略带紫色)解冻后:墨绿色溶液2.3.冻融所得溶液分两次在10000rpm下高速离心15min，得到亮蓝色上清液，用小烧杯收集，弃去下层墨绿色沉淀。
藻蓝蛋白的提取纯化与鉴定(实验教案)藻蓝蛋白(phycocyanin , PC)是一种存在于蓝藻细胞内的光合色素 ,能高效捕获光能。
其分子质量在 40 ku 左右 ,由α、β两个亚基组成 ,亚基分子质量都在 20 ku 左右。
肽链上共价结合 1 个开链的四吡咯环辅基 ,类似动物红细胞的血红素结构。
天然存在的藻蓝蛋白通常以六聚体(αβ) 6的形式存在。
与之相近的别藻蓝蛋白(Anthocyanin ,APC)为三聚体( αβ) 3 ,在 650 nm 处有最大吸收峰。
分离纯化的水溶藻蓝蛋白在溶液中呈蓝色 ,并发出紫色荧光 ,在波长620 nm 具有特异吸收峰 ,可用吸光度 A 620 / A 280表示其纯度。
因其水溶性、无毒、清亮且着色力强等优点 ,藻蓝蛋白被广泛用于食品着色剂和化妆品的添加剂。
藻蓝蛋白带有荧光 ,可用作荧光标记物。
一、教学目的通过藻蓝蛋白的提取纯化与鉴定使学生学会生物大分子制备方案设计与实践研究，体验从复杂细胞混合物体系中提取生物大分子的基本原理、过程和方法。
整个实验过程学生独立完成，虽然操作难度较大，所需要的实间较长（64-80学时），但每一步单元操作的原理清晰，技术成熟，实验结果明显，能给学生较多的动手机会。
有利于培养学生的学习兴趣。
二、实验方案1材料与方法1. 1 实验材料钝顶螺旋藻粉产自中国科学院武汉植物所 ,其他无机盐和酸碱试剂均为国产分析纯试剂。
1. 2 分析方法1.2.1藻蓝蛋白浓度的测定方法一：【曲文娟等，钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的脉冲超声辅助提取技术，食品科学，2007年5期，135-138】用紫外分光光度计对粗提的藻蓝蛋白溶液进行全波段扫描, 可见藻蓝蛋白的特征吸收在620nm, 异藻蓝蛋白的特征吸收在:方法二：【刘杨等，水提分离钝顶螺旋藻藻蓝蛋白及其稳定性研究，天津师范大学学报(自然科学版)，Vol.28 No.3.11-14（2008）】 螺旋藻中以藻胆蛋白吸收光谱的差异作为其测定标准。
藻类保健品中藻蓝蛋白的盐析提取技术研究
概述
藻类保健品中常含有藻蓝蛋白，该蛋白质对人体健康具有重要作用，如提高免
疫力、抗氧化等。
因此，研究藻蓝蛋白盐析提取技术对于藻类保健品的生产具有重要的意义。
盐析提取技术
盐析提取技术是指通过控制溶液中盐的浓度和类型，使蛋白质由水相沉淀而得
到的提取方式。
盐析提取技术的优点在于：有效、简单、成本低。
盐浓度的选择
盐浓度的选择对藻蓝蛋白的盐析提取非常重要。
通常，盐浓度过低会导致蛋白
质在上清液中分散，无法得到充分的分离。
而盐浓度过高则会使蛋白质在浓度过大对蛋白质的空间结构造成破坏。
因此，需要在实验中通过调整盐浓度来找到一个最合适的值。
在实验中，可以
选择硫酸铵或氯化钠等盐类进行调整。
pH值的影响
除了盐浓度，对于盐析提取技术而言，pH值对于蛋白质的分离同样具有重要
的作用。
不同的蛋白质在不同的pH值下具有不同的电荷，因此在不同的pH值下
对蛋白质的分离效果也不同。
通过对不同pH值下的蛋白质分离情况的观察，可以找到最适合藻蓝蛋白盐析
提取的pH值，并最终得到高纯度的藻蓝蛋白。
结论
藻蓝蛋白在藻类保健品中有广泛的应用，通过盐析提取技术可以得到纯度高、
效能好的藻蓝蛋白。
在实验中，盐浓度以及pH值的调整对于蛋白质分离至关重要。
不同的藻蓝蛋白需要进行不同条件下的提取，在实践中需要根据实际情况进行调整。
论螺旋藻藻蓝蛋白提取纯化方法研究作者：陈军峰来源：《科学与财富》2018年第14期摘要：螺旋藻藻蓝蛋白是一种具有抗氧化、增强机体免疫力、抗癌、保肝等功能的物质，且可用于食品、医疗等领域，具有较高的利用价值，对改善公众健康具有积极的作用。
而螺旋藻藻蓝蛋白在具体的生产中，提取纯化方法是影响螺旋藻藻蓝蛋白产量的重要因素。
故此，文章展开对螺旋藻藻蓝蛋白提取纯化方法的分析，结合相关研究内容分别对提取方法和纯化技术进行阐述，旨在为螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化提供参考，推动螺旋藻藻蓝蛋白产量提升。
关键词：螺旋藻；藻蓝蛋白；提取方法；纯化技术螺旋藻为丝状多细胞螺旋形原核藻类生物，具有较高的蛋白含量，且螺旋藻本身具有较好的繁殖能力，可为螺旋藻大范围繁育提供基础。
而螺旋藻藻蓝蛋白则是一种安全，且无毒副作用的蛋白资源，可应用到诸多领域中。
当前，国内外研究者对螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化较多，并取得了一定的成就。
基于此，螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化方法展开研究与分析，分析具体几种纯化技术，详细内容如下。
1螺旋藻藻蓝蛋白的相关研究1.1螺旋藻藻蓝蛋白结构藻蓝蛋白包含一个蛋白与一个发色团，其中蛋白是由分子量18Mu与20Mu的α和β亚基构成，且二者之间相互作用，使得单体形成，且单体间由多台连接，形成多聚体。
藻蓝蛋白的亚基体内以多聚体形式存在，包含三聚体、六聚体等。
且藻蓝蛋白的聚集态受到PH值、蛋白质浓度等因素影响。
1.2藻蓝蛋白的生理活性藻蓝蛋白是一种安全、无毒的蛋白资源，其具有显著的生理活性特征，先对藻蓝蛋白的生理活性展开分析，详细内容如下。
（1）抗氧化性。
相关研究表明，藻蓝蛋白可清除过氧化亚硝酸阴离子，如ONOO-，且研究中还发现，随着藻蓝蛋白的含量增加，其抗氧化活性也得到明显增加。
说明藻蓝蛋白的具有可清除有毒自由基的功能，且其本身无毒无害，可作为治疗药剂使用。
（2）抗炎性。
研究人员对藻蓝蛋白的抗炎性进行分析，发现藻蓝蛋白对活性氧具有清除行为。
学校代码：11059学号：0802012040Hefei University本科毕业论文BACH ELO R DI SSERTATIO N论文题目：藻类保健品中藻蓝蛋白的盐析提取技术研究学位类别：工学学士学科专业：生物工程作者姓名：导师姓名：夏潇潇完成时间：二零一二年五月目录摘要 (Ⅰ)Abstract (Ⅱ)1 引言 (1)1.1 螺旋藻的简介 (1)1.2 藻蓝蛋白介绍 (2)1.3 藻蓝蛋白的提取方法 (2)1.4 研究的意义、目的和内容 (3)1.4.1 研究的意义 (3)1.4.2 研究的目的 (3)1.4.3 研究的内容 (3)2 材料与方法 (4)2.1 原料和仪器 (4)2.1.1 原料 (4)2.1.2 主要仪器 (4)2.1.3 主要试剂 (4)2.2 实验方法 (5)2.2.1 原料中总蛋白质含量的测定 (5)2.2.2 螺旋藻的前处理及藻蓝蛋白计算 (5)2.2.3不同盐的提取实验 (6)2.2.4 冻融次数实验 (6)2.2.5 盐浓度实验 (6)2.2.6 提取次数实验 (7)3 结果与分析 (8)3.1 原料中总蛋白质含量结果与分析 (8)3.2 不同盐的提取实验结果与分析 (8)3.3 盐浓度实验结果与分析 (9)3.4 冻融次数实验结果与分析 (13)3.5 提取次数实验结果与分析 (18)3.6 总结 (22)5 结论 (23)参考文献 (24)致谢 (26)摘要本文对螺旋藻精片中藻蓝蛋白的提取工艺进行研究，考察不同盐、不同浓度、冻融次数、提取次数对藻蓝蛋白提取率的影响。
可知：针对不同盐的最佳提取条件分别为：氯化钠：浓度30%，冻融次数6次，提取次数3次；磷酸钾：浓度50%，冻融次数6次，提取次数4次；硫酸铵：浓度40%，冻融次数6次，提取次数6次；硝酸钾：浓度40%，冻融次数8次，提取次数6次。
在最优提取条件下，氯化钠、磷酸钾、硫酸铵和硝酸钾的提取率分别为11.00%、10.87%、11.767%和10.837%，其中硫酸铵的提取率最高，可将约98%的藻蓝蛋白提取出来。
关键词：藻蓝蛋白；盐析；冻融；提取；得率Abstractthis article research about the extraction process of Spirulina film and the extraction rate of different salts, different concentration, freezing and thawing times, the number of extraction; I Against the best Extracting conditions, respectively ①Sodium chloride: 30% concentration, freezing and thawing 6 times, three times the number of extraction; ②Potassium phosphate: 50% concentration, freezing and thawing 6 times, and extracted 4 times; ③Ammonium sulfate: 40% concentration, freezing and thawing 6 times, six times the number of extraction;④Potassium nitrate: 40% concentration, freezing and thawing times eight times, six times the number of extraction. Under the best extracting condition, the extraction rate of Sodium chloride; Potassium phosphate; Ammonium sulfate; Potassium nitrate are 11.00%.10.87%.11.767% and 10.837%,respectively.Ammonium ,sulfate can be extracted. The extraction rate about 98% of the phycocyanin .Key words：phycocyanin; salting; freezing and thawing; extraction; yield1 引言1.1 螺旋藻的简介螺旋藻（如图1），是存在于地球已逾30亿年的低等水生藻类植物，属于蓝藻门，颤藻科。
它们与细菌一样，细胞内没有真正的细胞核，所以又称蓝细菌。
蓝藻的细胞结构原始，且非常简单，是地球上最早出现的光合生物，其外观为蓝绿色，显微镜观察呈螺旋状，故而得其名[1]。
在非洲的乍得湖和墨西哥的Texcoco湖畔（图2），当地居民用螺旋藻作为食物来源已有一百年的历史。
螺旋藻因其丰富、优质的蛋白质而被联合国粮农组织和世界食品协会誉为“人类最理想和最优秀的食品”；国际儿童基金会则称“螺旋藻可以安全根除儿童营养不良”；Clement博士称其为大自然为人类早就准备好的一份“超级营养包”、“微型的营养宝库”；1973年第二届国际微生物蛋白质会议确认“螺旋藻是最佳蛋白质来源之一”、“螺旋藻是人类迄今为止所发现的最优秀的纯天然保健食品源”[2]。
图1显微镜下的螺旋藻图2螺旋藻的生长地螺旋藻主要以干粉形式直接应用食品行业，其蛋白质含量为56%~77%；总脂肪含量约7%，脂肪酸为5.7%，并且其中大多为多不饱和脂肪酸，亚油酸、γ-亚麻酸，螺旋藻中碳水化合物的含量为16.5%,并含有丰富的多糖[2]；维生素B1.55mg/kg、维生素B2.40mg/kg、维生素B6.3mg/kg、维生素B12.2mg/kg、泛酸11mg/kg、叶酸0.5mg/kg、烟酸113mg/kg、肌醇350mg/kg、生物素0.4mg/kg、维生素E190mg/kg、胡萝卜素4000mg/kg [3-7]。
螺旋藻是超碱性食品，可维持血液中酸碱值的平衡，降低胆固醇，减轻高血压和心脏病症状或减少其发病几率；有效改善胃病症状，对抗各种腹泻和便秘，防治贫血，帮助脂肪代谢，有效对抗心脑血管疾病，预防脂肪肝和肝硬化，降低血糖，预防糖尿病；预防因服用镇定剂、抗生素、抗癌剂等对肾机能的损害；减轻汞及药物对肾的毒性，使人体免受重金属的毒害；减肥，美容，去暗疮、黄褐斑，抗衰老。
螺旋藻中尤以蛋白质含量最为丰富，是大豆蛋白质的两倍，是目前已知植物中蛋白质含量最高的一种[4-6]。
1.2 藻蓝蛋白的介绍螺旋藻中的蛋白质被称为藻蓝蛋白体，它由多种藻蓝蛋白及连接蛋白或多肽组成，藻蓝蛋白是强荧光的色素-蛋白络合物，能捕获光能。
根据他们存在的不同发色团又把藻蓝蛋白分为三大类[11]：藻红蛋白(吸光度480~570nm)、藻蓝蛋白(吸光度590~630nm)、藻红蓝蛋白(吸光度560~600nm)和别藻蓝蛋白(吸光度620~665nm)。
其中藻蓝蛋白占总藻蓝蛋白中的20%左右。
藻蓝蛋白包含了一个蛋白和一个发色团，而蛋白是由分子量分别在18Ku和20Ku的α和β亚基组成。
藻蓝蛋白是一种重要的藻蓝蛋白，参与藻类高效的光传递过程，分离纯化藻蓝蛋白对于研究其结构以及模拟其生理功能有重要意义，作为一种荧光物质，藻蓝蛋白在生物标记等方面也有广阔的应用前景[12]。
1.3藻蓝蛋白的提取方法螺旋藻受其细胞壁的保护，采用机械方法很难达到破壁效果，所以目前提取藻蓝蛋白的方法通常有采用化学破壁法、溶胀法和反复冻融法等[13-16]。
①化学破壁法：是用化学缓冲液破坏细胞壁后提取藻蓝蛋白的方法。
虽然它可有效破壁，但也给下一步分离造成了很大麻烦，需要花费较多的工序，使运行成本大幅上升。
②溶胀法：是利用原料溶解，在一定条件下膨胀的性质进行破碎的方法。
该种方法需要的实验周期较长，实验条件要求高。
③超声法：是利用超声波粉碎技术控制仪器的频率、能量和波发射间歇周期，经过一定时间来使细胞破碎。
该方法操作简单，易控制，但单一使用此方法，必须使用高能量、低频率的超声仪才能达到理想的细胞破碎率，这会增加成本。
④反复冻融法：是将含有水分的螺旋藻置于0℃以下冻结成冰，然后取出在0℃以上解冻，利用水在-20℃﹣27℃的膨胀特性，破壁析出藻蓝蛋白。
这种技术完全采用了物理方法将螺旋藻的细胞壁破裂，不使用任何化学添加剂，同时耗费的能源很少，因此方法很简单，容易实施，保全了螺旋藻的固有成分，藻蓝蛋白的生物活性不受破坏。
此方法所需要的设备简单，整个破壁工序需要的时间短，可大大提高生产效率，降低成本。
蛋白质的提取多用中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硝酸钾、氯化钠、磷酸钾等。
其中应用最多的硫酸铵，它的优点是温度系数小而溶解度大，在这一溶解度范围内，许多蛋白质和酶都可以盐析出来。
1.4 研究的意义、目的和内容1.4.1 研究的意义藻蛋白是当前研究的热点，如何提高螺旋藻蛋白的提取率是拓宽螺旋藻应用的一个关键。
本文以反复冻融法破碎螺旋藻细胞，辅以超声提取技术，实现更快速更高效的藻蓝蛋白提取率，为螺旋藻蛋白质的充分利用提供研究基础。
1.4.2 研究的目的本文以反复冻融法破碎螺旋藻细胞，辅以超声提取技术，考察不同提取条件对藻蓝蛋白提取率的影响，确定最佳的提取条件，建立藻蓝蛋白盐析提取工艺路线。
1.4.3 研究的内容（1）原料中总蛋白质含量的测定。
（2）不同盐、不同浓度、冻融次数、提取次数对藻蓝蛋白提取率的影响。
2 材料和方法2.1 材料与方法2.1.1 原料原料名称生产厂家产品批号螺旋藻精片云南白药-千草堂Q/YBZ 0002S-2011 2.1.2 主要仪器仪器名称生产厂家KDC160HR型高速冷冻离心机上海博讯实业有限公司医疗设备厂HF-2.5B脉冲超声循环提取机北京弘祥隆生物技术开发有限公司ATN-300型全自动凯氏定氮仪上海洪纪仪器设备有限公司电子天平德国赛多利斯股份有限公司752分光光度计合肥正鑫仪器设备有限公司福意联电冰箱北京福意电器有限责任公司HH型恒温水浴锅巩义市科瑞有限公司2.1.3 主要试剂主要试剂生产厂家硫酸铵国药集团化学试剂有限公司磷酸钾盐国药集团化学试剂有限公司浓硫酸国药集团化学试剂有限公司硫酸铜国药集团化学试剂有限公司氯化钠国药集团化学试剂有限公司硝酸钾国药集团化学试剂有限公司2.2实验方法2.2.1原料中总蛋白质含量的测定实验采用的为凯氏定氮法。
主要分为两个部分组成：(1) 消化：称取0.2g 样品粉末，精确至0.001g ，移入干燥的25mL 定氮瓶中，加入0.2g 硫酸铜、6g 硫酸钾，再加入20mL 浓硫酸，轻摇后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上，在温度约100℃小心预热2h ，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，升高温度至350℃，并保持瓶内溶液微沸状态，待溶液由黑色变为棕黄色，再变为蓝绿色并澄清后，再继续加热1h 。
