(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910176199.6
(22)申请日 2019.03.08
(71)申请人 北海生巴达生物科技有限公司
地址 536000 广西壮族自治区北海市创源
路1号科技创业基地401室（北海高新
区）
(72)发明人 薛命雄 张玮瑲 李玉芬 梁振秀
陈国珍
(74)专利代理机构 贵阳睿腾知识产权代理有限
公司 52114
代理人 谷庆红
(51)Int.Cl.
C07K 14/795(2006.01)
C07K 1/34(2006.01)
C07K 1/14(2006.01)
C12N 1/06(2006.01)
(54)发明名称
一种蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法
(57)摘要
本发明涉及蛋白提取技术领域；具体涉及一
种蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法，包括：破壁、粗过
滤、纯化；所述粗过滤是将破壁所得物用0.5-1μ
m的微滤膜过滤后，依次加入油脂、去离子水进行
混合，经水油分离去除油脂后，再用0.5-1μm的
微滤膜过滤；本发明具有产率高、纯度高、蛋白稳
定性强、提取周期短，成本低，操作简单，资源利
用率好的特点。
权利要求书1页 说明书6页CN 110272486 A 2019.09.24
C N 110272486
A
权 利 要 求 书1/1页CN 110272486 A
1.一种蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法，包括：破壁、粗过滤、纯化；其特征在于，所述粗过滤是将破壁所得物用0.5-1μm的微滤膜过滤后，依次加入油脂、去离子水进行混合，经水油分离去除油脂后，再用0.5-1μm的微滤膜过滤。
2.如权利要求1所述蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法，其特征在于，所述油脂的用量为蓝藻质量15-20％，混合时间为5-10min。
3.如权利要求1所述蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法，其特征在于，所述去离子的用量为蓝藻质量50-60％，混合时间为5-10min。
4.如权利要求1所述蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法，其特征在于，所述破壁的方法为：将蓝藻与食盐按1：(0.1-0.2)的质量比混合后，置于真空冷冻至温度为零下20-零下10℃后研磨至过50-80目，再加热至温度为30-35℃，然后加入等温的提取液进行恒温浸泡15-20min。
5.如权利要求4所述蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法，其特征在于，所述提取液由如下质量份物质组成：5-8份柠檬酸钠、13-17份十二烷基硫酸钠、2-6份酒石酸钠、10-12份磷酸二氢钠、80-90份去离子水。
6.如权利要求1所述蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法，其特征在于，所述纯化的方法为：
(1)将粗过滤液与吸附填料混合搅拌10-15min后，固液分离，洗脱固形物，收集洗脱液；
(2)将洗脱液以10-20mL/min的流速，通过树脂进行脱色纯化，收集二次洗脱液；
(3)将二次洗脱液用中空纤维膜进行超滤。
7.如权利要求6所述蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法，其特征在于，所述吸附填料为羟基磷灰石、改性牡蛎壳按质量比为1：(0.05-0.07)。
8.如权利要求7所述蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法，其特征在于，所述改性牡蛎壳是将牡蛎壳研磨至过100目筛后，然后加入羧甲基纤维素钠及聚乙二醇进行改性；羧甲基纤维素钠的用量为牡蛎壳质量5-8％，聚乙二醇的用量为牡蛎壳质量20-25％。
9.如权利要求6所述蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法，其特征在于，所述混合搅拌中粗过滤液与吸附填料按照1：(1.2-1.6)的质量比，温度为50-70℃。
10.如权利要求1所述蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法，其特征在于，所述中空纤维膜的截留分子量为60-80KDa。
2。
