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食品微生物学检验菌落总数培训

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微生物检测培训考核试题-(附答案)

微生物检测培训考核试题-(附答案)

培训试题一、填空题(共35个空，共计70分）1、菌落总数：食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。

2、平板计数琼脂培养基的成分有胰蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、琼脂、蒸馏水。

3、菌落总数小于100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约,以整数报告.4、大肠菌群：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。

5、GB 4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》中第一法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数;第二法适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。

6、MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法.待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。

7、GB 29921-2013《食品安全国家标准食品中致病菌限量》n为同一批次产品应采集的样品件数；c为最大可允许超出m值的样品数;m为致病菌指标可接受水平的限量值；M为致病菌指标的最高安全限量值。

8、无菌生理盐水的制法：称取8。

5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中,121℃高压灭菌15min.9、霉菌和酵母平板计数法的培养过程：琼脂凝固后,正置平板，置28±1℃培养箱中培养，观察并记录培养至第5天的结果。

10、菌落总数的培养过程:待琼脂凝固后，将平板翻转，36±1℃培养48±2h。

11、霉菌和酵母平板计数法：若空白对照平板上有菌落出现，则此次检测结果无效。

12、大肠菌群平板计数法:在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色，带有或不带有沉淀环的菌落.二、简答题(共1题，共计30分)GB 2749-2015《食品安全国家标准蛋与蛋制品》中液蛋制品的菌落总数和大肠菌群的微生菌落总数：25g(ml)样品+225ml稀释液，均质→10倍系列稀释→选择2～3个适宜稀释度的样品匀液,各取1ml分别加入无菌培养皿中→每皿中加入15～20ml平板计数琼脂培养基,混匀→培养→计数各平板菌落数→计数菌落总数→报告大肠菌群（平板计数法)：25g（ml）样品+225ml稀释液,均质→10倍系列稀释→选择2～3个适宜稀释度的样品匀液，倾入VRBA平板(36±1℃培养18～24h)→计数典型和可疑菌落→BGLB肉汤(36±1℃培养24～48h)→报告结果。

食品微生物学检验菌落总数培训

食品微生物学检验菌落总数培训
大，易流出等 2、颜色特别重的样品，如桔黄色，掩盖了菌落； 3、抑菌剂浓度比较高的样品，如辣椒及辣椒粉、大蒜及洋葱制品； 4、某些微生物会液化凝胶，造成局部扩散或菌落模糊的现象，大部分是芽胞杆菌。
3、菌落计算公式
有两个稀释度的菌落数在合适范围， 按照如下公式计算：
N
C (n10.1n2)d
N = 样品中菌落数
• 有时，当细菌浓度很高时，测试片中央没有可见菌落，但 圆形培养膜的边缘有许多小的菌落，其结果也记录为“多 不可计”；进一步稀释样品可获得准确的读数。
• 某些微生物会液化凝胶，造成局部扩散或菌落模糊的现象 。如果液化现象干扰计数，可以计数未液化的面积来估算 菌落浓度。
结果的表述
• 菌落总数的计算方法和报告规则同第一法。
菌落计算－例子
1:100（第一稀释度） 232，244 1:1000（第二稀释度）38，35
N
C (n1 0.1n2 )d
232 [2
244 (0 .1
38 2 )]
10
35
2
549 2 .2 10
2
24909
25000
N
C1 n1
d1
C n2
2
d2
2
C 1 10 n1
• 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷酸盐缓冲 稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻 璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
操作步骤——样品稀释
• 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管 壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸 头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸 管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。

食品微生物检验中菌落总数测定的注意事项说课讲解

食品微生物检验中菌落总数测定的注意事项说课讲解

食品微生物检验中菌落总数测定的注意事项食品微生物检验中菌落总数测定的注意事项1菌落总数及测定菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物,它是由数以万计相同的细菌集合而成。

当样品被稀释到一定程度,与培养基混合,在一定培养条件下,每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。

菌落总数就是指食品检样经过处理,在一定条件下(如需氧性质、培养基成分、pH、培养温度和时间等) 1 mL ( g)检样中所含菌落的总数。

菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度、食品的新鲜度及卫生质量,它反映食品在生产、加工、销售过程中是否符合卫生要求,以便对被检样品做出适当的卫生学评价。

也可以应用这一方法观察食品中细菌的性质以及细菌在食品中繁殖的动态,菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣[ 1 ] 。

2菌落总数测定中的注意事项2. 1所用器皿及稀释液2. 1. 1检验中所用玻璃器皿,如培养皿,吸管、试管、移液器的吸头等必须是完全灭菌的,并在灭菌前彻底洗涤干净,不得残留有抑菌物质。

2. 1. 2用作样品稀释的液体,每批都要有空白对照。

如果在琼脂对照平板上出现几个菌落时,要查找原因,如可通过追加对照平板,以判定是空白稀释液,用于倾注平皿的培养基,还是平皿、吸管或空气可能存在的污染。

2. 1. 3检样的稀释液一般用灭菌盐水,如果对含盐量较高的食品(如酱品等)进行稀释,则宜用蒸馏水。

做醋时用20% ～ 30%碳酸钠调pH 至中性。

2. 2检样的稀释2. 2. 1检样稀释时,应以无菌操作称取(或量取)有代表性的样品25 g (或mL ) , 剪碎放于含有225 mL灭菌稀释液的玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠) ,经充分振摇作成1: 10 的稀释液。

如系肉、鱼等固体样品,先用自来水把表面冲洗干净,取可食部分(即鱼肉)剪细加入稀释液后,置均质器中以8 000 ～ 10 000 r /min 速度处理1 min,使做成均匀的1: 10稀释液。

4789.2-2016菌落总数测定专题培训教材

4789.2-2016菌落总数测定专题培训教材
GB 4789.2－2010
15
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标准修订起草单位和主要起草人
GB 4789.2－2016修订
主要起草单位 中国检验检疫科学研究院
参加起草单位 国家食品安全风险评估中心 福建出入境检验检疫局
江苏出入境检验检疫局 安徽出入境检验检疫局 内蒙古疾病预防控制中心 江苏省农业科学研究院 南昌大学
修改培养基和试剂； 删除第二法PetrifilmTM测 试片法。 修改菌落总数的定义
12
GB/T 4789.2－2008
2.1 菌落总数 食品检样经过处理，在一定条 件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、 pH、需养性质等），所得1 mL（或1 g）检样 中形成菌落的总数。本标准规定的培养条件下 所得结果，只包括一群在平板计数琼脂上生长 发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。
6.1.3 用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释 液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反 复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
31
防止移液过程污染
移液过程使用的器具，都应避免微生物污染。使用耐高压移液枪，核查洗耳球无菌程度，避免 移液枪触及均质袋或试管内壁……
3.7 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻 度）、10mL（具0.1mL 刻度）或微 量移液器及吸头。 3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。 9. 无菌培养皿：直径90 mm。 10. pH计或pH比色管或精密pH试 纸。 3.11 放大镜或/和菌落计数器。
26
4 培养基和试剂
4.1
GB 4789.2－2010
菌落总数

培训讲义-细菌.霉菌及酵母计数

培训讲义-细菌.霉菌及酵母计数

16400 37750 27100
16000或 1.6×104
38000或 3.8×104
27000或 2.7×104
表3-1 稀释度选择及菌落数报告方式
例 稀释液及菌落数 两稀 菌落总数个 报告方式个/g
次
释液 /g 或mL
或mL
10-1 10-2 10-3 之比
4 多不可 多不 313 —— 计 可计
关于稀释倍数的选择可参考细菌菌落 总数的测定。
3.2.1 霉菌菌丝的特征
（1）平行壁：霉菌菌丝呈管状，多数情况 下，整个菌丝体的直径是一致的。因此在 显微镜下菌丝壁看起来象两条平行的线。 这是区别霉菌菌和其他纤维时最有用的特 征之一。
（2）横隔：许多霉菌菌丝具有横隔，毛霉、 根霉等少数霉素菌的菌丝没有横隔。
液体或半固体样品可用迅速颠倒容器 25次来混匀。有的规定在实际操作时， 振摇时振幅要30cm，7s振摇25次。
为了减少样品稀释倍数的误差，在连 续递增稀释时，每一稀释度应更换一 根吸管。
3.1.2 培养基的选择
（1） 马铃薯-葡萄糖琼脂培养基 （PDA）：
马铃薯含有氮源、丰富的维生素， 霉菌和酵母生长良好。抗菌素可以 抑制细菌。
（5）培养温度37℃，水产品30℃。 （6）检样从开始稀到最后一个平皿所用
时间不宜超过20min。 （7）培养基温度、用量：46℃，15mL。
霉菌和酵母计数
Enumeration of molds and yeasts
1. 概述
霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为 食品中正常菌相的一部分。
25~28℃ 5d 菌落计数
报告
2.2 霉菌直接镜检计数法
常用的方法为郝氏霉菌计数法，或称 霍华德（Howard）霉菌计数法。

食品中菌落总数的测定实验报告

食品中菌落总数的测定实验报告

食品中菌落总数的测定实验报告一、实验目的1、学习并掌握食品中菌落总数测定的基本原理和方法。

2、熟练使用无菌操作技术和相关仪器设备。

3、了解食品卫生质量的重要性，以及菌落总数在评价食品卫生状况中的意义。

二、实验原理菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、pH 值、需氧性质等），所得 1g 或 1ml 检样中所含细菌菌落的总数。

菌落总数主要作为判定食品被细菌污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。

三、实验材料和设备1、实验材料各种待检食品样品（如牛奶、面包、水果等）营养琼脂培养基无菌生理盐水2、实验设备恒温培养箱高压蒸汽灭菌锅超净工作台无菌吸管（1ml、10ml）无菌培养皿电子天平均质器四、实验步骤1、样品的采集和处理以无菌操作采集具有代表性的食品样品，放入无菌容器中。

对于固体食品，使用均质器将其均质成匀浆；液体食品则直接吸取进行稀释。

2、稀释样品用 1ml 无菌吸管吸取 1ml 样品匀浆或液体样品，注入盛有 9ml 无菌生理盐水的试管中，制成 1:10 的样品稀释液。

用 1ml 无菌吸管吸取 1:10 稀释液 1ml，沿管壁缓慢注入盛有 9ml 无菌生理盐水的试管中，振摇试管混合均匀，制成 1:100 的稀释液。

以此类推，进行适当的梯度稀释。

3、接种选择 2-3 个适宜稀释度的样品稀释液，每个稀释度分别吸取 1ml 注入无菌培养皿中。

及时将 15-20ml 冷却至 46℃左右的营养琼脂培养基倾注于培养皿中，并转动培养皿使其混合均匀。

4、培养待琼脂凝固后，将培养皿翻转，放入 36±1℃的恒温培养箱中培养48±2h。

5、菌落计数培养结束后，取出培养皿，计数每个平板上的菌落数。

菌落计数时，应选取菌落数在 30-300 之间的平板进行计数。

若有两个稀释度的平板菌落数在 30-300 之间，应按两者菌落总数之比值来决定。

最新微生物检测培训考核试题 (附答案)

最新微生物检测培训考核试题 (附答案)

一、填空题（共35个空，共计70分）1、菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。

2、平板计数琼脂培养基的成分有胰蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、琼脂、蒸馏水。

3、菌落总数小于100 CFU 时,按“四舍五入”原则修约，以整数报告。

4、大肠菌群：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。

5、GB 4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》中第一法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数；第二法适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。

6、MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。

待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。

7、GB 29921-2013《食品安全国家标准食品中致病菌限量》n为同一批次产品应采集的样品件数；c为最大可允许超出m值的样品数；m为致病菌指标可接受水平的限量值；M为致病菌指标的最高安全限量值。

8、无菌生理盐水的制法：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。

9、霉菌和酵母平板计数法的培养过程：琼脂凝固后，正置平板，置28±1℃培养箱中培养，观察并记录培养至第5天的结果。

10、菌落总数的培养过程：待琼脂凝固后，将平板翻转，36±1℃培养48±2h。

11、霉菌和酵母平板计数法：若空白对照平板上有菌落出现，则此次检测结果无效。

12、大肠菌群平板计数法：在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色，带有或不带有沉淀环的菌落。

二、简答题（共1题，共计30分）GB 2749-2015《食品安全国家标准蛋与蛋制品》中液蛋制品的菌落总数和大肠菌群的微生菌落总数：25g（ml）样品+225ml稀释液，均质→10倍系列稀释→选择2～3个适宜稀释度的样品匀液，各取1ml分别加入无菌培养皿中→每皿中加入15～20ml平板计数琼脂培养基，混匀→培养→计数各平板菌落数→计数菌落总数→报告大肠菌群（平板计数法）：25g（ml）样品+225ml稀释液，均质→10倍系列稀释→选择2～3个适宜稀释度的样品匀液，倾入VRBA平板(36±1℃培养18～24h)→计数典型和可疑菌落→BGLB肉汤(36±1℃培养24～48h)→报告结果小升初数学模拟试卷姓名得分。

食品微生物学检验菌落总数培训

食品微生物学检验菌落总数培训

结果的表述——菌落总数的计算方 法
• 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落 数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）中菌落总数 结果。
• 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式计算。 • 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300，则对稀释度最高的平板进行计
谢 谢
汇报结束
谢谢大家! 请各位批评指正
• 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷酸盐缓冲 稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻 璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
操作步骤——样品稀释
• 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管 壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸 头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸 管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
菌落计数
• 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释 倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（ colony-forming units，cfu）表示。
• 选取菌落数在30cfu～300cfu之间、无蔓延菌落生长的平 板计数菌落总数。低于30cfu的平板记录具体菌落数，大 于300cfu的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采 用两个平板的平均数。
培养
36℃±1℃
48h±2h
计数各平板菌落数
计算菌落总数
报告
第一法 平ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ菌落计数法
操作步骤——样品稀释
• 固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸盐缓冲稀 释液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000 r/min 均质1min～2min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中 ，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。

教学课件第一节食品中菌落总数的测定

教学课件第一节食品中菌落总数的测定
第一节食品中菌落总数的测定
一、菌落总数
是指食品检样经过处理，在一定条 件下培养后,所得1mL(g)或1cm2面积检 样中所含菌落的总数。
二、菌落总数测定的意义
1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。 2、预测食品存用的期限长短。 3、了解细菌在食品中的繁殖动态。
三、菌落总数测定的方法
※ 平板倾注法＃ 平板表面涂布法 平板表面点滴法
或中心深紫色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光 滑，常有金属光泽； 在麦康凯琼脂上的典型菌落:呈桃红色或中心桃红、 圆形，扁平，光滑湿润。
EMB平板照片及原理
麦康凯琼脂平板 Age of culture is 24 h
大肠杆菌、大肠菌群选择性显色培养基--COLI ID 用于在37℃下对食品中大肠菌群和大肠杆菌进行检测、计数及大肠杆菌的鉴定
湿润纸片后，立即贴于食具内侧表面，30秒后取 下，置于原塑料袋内。筷子以5只为一份样品，用 吸管吸取生理盐水湿润纸片后，立即将筷子进口 端（约5cm）抹拭两张，放入原塑料袋内。
2.将已采样的纸样置于37°C培养15小时.
纸片在黄色背景上出现红色斑点为阳性，纸片在紫 兰色背景上呈现红色斑点，但周围没有黄晕均为 大肠菌群阴性。同一份样品两张纸片均是阴性为 合格。
MPN 个/100 g/ml
0
0
0
＜30
0
0
1
30
0
0
2
60
0
0
3
90
0
1
0
30
0
1
1
60
0
1
2
90
0
1
3
120
0
2
0
60
0

食品卫生微生物学检验大肠菌群计数培训

食品卫生微生物学检验大肠菌群计数培训
食品卫生微生物学检验大肠菌群计数培训
单击此处添加副标题内容 单击此处输入你的正文，文字是您思想的提炼，为了最终演示 发布的良好效果，请尽量言简意赅的阐述观点。
食品卫生微生物学检验 大肠菌群计数培训
大肠菌群计数
大肠菌群
定义：一群在36℃条件下培养24~48小时能发酵乳糖、产酸 产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 卫生学概念，包括埃希氏菌属，克雷伯氏菌属、肠杆菌属 和柠檬酸杆菌属等的细菌
37
420
40
420
18
420
37
420
40
430
90
1,000
42
1,000
90
2,000
180
4,100
420
--
现国标的MPN表与原国标的MPN表的不同点：
1，现表里的数字是有小数点的，而原标准对小数点进行 了四舍五入的处理。
2，现标准的MPN表比原标准的MPN表要简化一些。原标 准MPN表有64个组合，而现标准MPN表只有40个组合。 3，报告单位不同。现报告单位为MPN/g(mL) ，而原报告 单位是MPN/100g(100mL)。
6.1.2 液体食品：以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐 水的无菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠)中,以30cm幅度、于 7s内振摇25次(或以机械振荡器振摇),制成1:10的样品匀液。
6.1.3 样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1 mol/L NaOH或1 mol/L HCl予以调节。
6 操作步骤
6.1 样品的稀释
6.1.1 固体和半固体食品：以无菌操作取25g）样品,放入装有225 mL生理盐水的无菌均质杯内,于8000 r/min均质1min～2min,制成 1:10样品匀液，或放入225 mL生理盐水的无菌均质袋中，用均质 器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。
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2019/12/15
6
1、培养基改变情况
平板计数琼脂 （PCA)
胰蛋白胨 酵母浸膏 葡萄糖 琼脂 蒸馏水
5.0g 2.5g 1.0g 15.0g 1000mL
营养琼脂（NA)
蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 琼脂 蒸馏水
10.0g 3.0g 5.0g 15.0g 1000mL
2019/12/15
7
培养基改变依据
• 国外情况
– 比对试验数据（已发表） – 标准方法
• 国内情况
– 使用状况 – 比对试验数据（已发表）
2019/12/15
9
优缺点
• 优点： 1、培养基具有良好的生产质量； 2、菌落计数特别方便（容易判读），红色菌落，易于食品颗粒分开，也不菌落重叠现
象；
3、准确计数，有方格，尤其是数目较多时，两个人分别计数同一纸片时差异； 4、菌落分布特别均匀； 5、平行平板菌落结果一致性比较好，与避免了热损伤有关； 6、菌落蔓延或半透明菌膜现象很少发生； 7、安全方面不像玻璃平皿易碎、对人员造成潜在的伤害，另外密封比较好，不容易直
食品微生物学检验 菌落总数培训 （GB/T4789.2）
2019/12/15
1
内容
一、立项修订依据 二、主要修订内容 三、检验程序 四、第一法 五、第二法
2019/12/15
3
一 立项修订依据
• 修订的背景
– 标准清理 – 多年未进行修订
• 修订的意义（紧迫性）
– WTO的要求 – 原标准的局限（培养基、计数方式等） – 3M纸片法
• 菌落总数的卫生学意义
2019/12/15
4
修订依据（修订的主要参考方法）
• FDA/BAM Chapter 3 Aerobic Plate Count Jan. 2001 • SN 0168-92 出口食品平板菌落计数 • AOAC 986.32 Aerobic Plate Count in Foods • AOAC 988.18 Aerobic Plate Count • AOAC 990.12 Aerobic Plate Count in Foods • USDA/FSIS MLG CHAPTER 3 EXAMINATION OF FRESH, REFRIGERATED AND
接接触菌落。
缺点：
1、某些有红色颗粒的样品，需要注意；粘稠的液体样品，不易分散开；表面活性比较 大，易流出等
2、颜色特别重的样品，如桔黄色，掩盖了菌落； 3、抑菌剂浓度比较高的样品，如辣椒及辣椒粉、大蒜及洋葱制品； 4、某些微生物会液化凝胶，造成局部扩散或菌落模糊的现象，大部分是芽胞杆菌。
3、菌落计算公式
两个相邻的稀释度平板菌落数直接相加，不考虑 稀释倍数的影响，采用加权平均值代替简单的算 术平均值
2019/12/15
14
4、其他内容
—菌落形成单位的定义 —菌落总数的英文 —培养温度和时间
36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h
—微量移液器 —天平
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三 检验程序
检样 25g(mL)样品+ 225mL稀释液，均质
10倍系列稀释
选择2～3个适宜样品匀液， 各取1mL分别加入无菌培养皿内
FROZEN PREPARED MEAT, POULTRY AND PASTEURIZED EGG PRODUCTS • ISO 4833:1991 Microbiology -- General guidance for the enumeration of
micro-organisms -- Colony count technique at 30 degrees C • ISO 6610:1992 Milk and milk products-Enumeration Colony-forming units of
N
C (n1 0.1n2 )d
232 244 38 35 [2 (0.1 2)]102

549 2.2 102

24909
25000
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N
C1 n1
d1

C2 n2
d2

2

C1 n1

10
n2
micro-organisms-Colony-count technique at 30℃ • NMKL APHA CCFRA JAPAN HPB
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二、修订的主要内容
——培养基由营养琼脂改为平板计数琼脂 ——添加了PetrifilmTM 细菌总数检验测试片法 ——菌落计数公式进行了修改 ——添加了拍打式均质器或等效的设备 —— ………
C2
d1
2

232

244 380 4 102

350
1206 4102 30150 30000
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统计学依据：
– 平板菌落数越多，结果越具有代表性； （不考虑稀释倍数和培养基的营养状况等）
– 取样量越大，结果越具有代表性； （同等取样条件、排除其他方面的干扰因素）
• 国外食品微生物权威的检测方法如ISO、AOAC和 FDA/BAM等基本上都是采用平板计数琼脂或在平板 计数琼脂的基础上进行了改良；
• 针对能力验证菌落总数的样品，采用两种培养基，结 果无显著性差异；
• 平板计数琼脂具有细菌比较容易生长，菌落特征明显 ，容易计数等特点。
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2、3MTM PetrifilmTM 细菌总数试片法
有两个稀释度的菌落数在合适范围， 按照如下公式计算：
N
C (n1 0.1n2 )d
N = 样品中菌落数 ∑C =平板菌落数之和 n1 = 含合适范围菌落数的第一稀释度（低）平板数 n2 =含合适范围菌落数的第二稀释度（高）平板数 d = 第一稀释度（低）
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菌落计算公式
1:100（第一稀释度） 232，244 1:1000（第二稀释度）33，35
N
C (n1 0.1n2 )d

232 [2
244 (0.1
33 35 2)]10 2

544 2.210 2
24727
25000
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菌落计算－例:1000（第二稀释度）38，35