炎调方干预脓毒症大鼠模型的效果研究

依达拉奉对脓毒症大鼠肾损伤的保护作用及机制的研究的开题报告一、研究背景与意义脓毒症是临床上常见的严重疾病，由于其病情急性危重，死亡率极高，对临床医生的工作造成了巨大的挑战。

肾损伤是与脓毒症相关的主要并发症之一，其发生率高达50%以上，严重影响了患者的生存质量和预后。

目前的治疗手段主要是抗生素治疗和支持治疗，但疗效并不理想，有时甚至会加重病情。

依达拉奉是一种靶向性的治疗药物，具有显著的抗炎和免疫调节作用。

其已经被证明可以对肾损伤有保护作用，但是其作用机制还不清楚，因此本研究选择依达拉奉作为研究对象，探究其在脓毒症大鼠中对肾损伤的保护作用及其机制。

二、研究目的本研究的主要目的是探究依达拉奉在脓毒症大鼠中对肾损伤的保护作用及其机制。

具体研究内容包括：通过建立脓毒症大鼠模型，观察依达拉奉对脓毒症大鼠肾功能的影响；研究依达拉奉对脓毒症大鼠肾组织炎症细胞浸润、肾小管损伤程度和肾细胞凋亡的影响；分析依达拉奉对脓毒症大鼠中肾损伤相关的分子信号通路的影响，探讨其保护作用的机制。

三、研究方法1.实验动物及建模选用SPF级SD大鼠随机分组为正常组、脓毒症组、依达拉奉治疗组。

建立脓毒症大鼠模型，采用腹腔注射大肠杆菌脂多糖（LPS）诱导，注射剂量为10mg/kg，同时与对照组随机分组。

2.实验干预方案依达拉奉治疗组采用依达拉奉注射液，剂量为10mg/kg，腹腔注射给药，一天一次，治疗连续3天。

正常组和脓毒症组给予等体积的注射用生理盐水。

3. 实验指标观察大鼠肾功能：采用血清肌酐、尿素氮进行检测。

观察组织病理学变化：通过HE染色观察肾组织炎症细胞浸润、肾小管损伤程度和肾细胞凋亡情况。

检测肾组织相关信号通路：通过Real-time PCR和Western blotting 技术，检测NF-κB、JNK信号通路相关指标。

四、预期结果预计本研究将明确依达拉奉在脓毒症大鼠中对肾损伤的保护作用及其机制。

我们预期结果将呈现出，依达拉奉可以显著降低脓毒症大鼠中的肾功能障碍和肾组织病理学变化，能够减轻肾组织炎症细胞浸润、肾小管损伤程度和肾细胞凋亡。

乌司他丁对脓毒症大鼠急性肾损伤保护作用的研究的开题报告题目：乌司他丁对脓毒症大鼠急性肾损伤保护作用的研究一、研究背景急性肾损伤（Acute Kidney Injury，AKI）是临床常见的疾病，其病因主要包括肾脏缺血、毒性损伤和感染等因素。

其中，感染是造成AKI 的常见原因，而脓毒症（Sepsis）是感染后最常见的严重病理生理反应之一。

其临床表现为全身炎症反应综合征（Systemic Inflammatory Response Syndrome，SIRS），导致多器官功能障碍综合征（Multiple Organ Dysfunction Syndrome，MODS）的发生。

目前临床治疗脓毒症AKI的方法有限，因此寻找一种有效的药物治疗手段具有重要意义。

乌司他丁（Ulinastatin）是一种广泛应用于临床的蛋白酶抑制剂，具有抗炎、抑制凝血和保护内皮功能等多种作用。

已有相关研究表明，乌司他丁可以在一定程度上缓解脓毒症引起的器官功能障碍，但其在脓毒症AKI方面的作用机制仍不十分清楚。

二、研究问题与目的本研究旨在探讨乌司他丁在脓毒症大鼠急性肾损伤中的作用机制及其保护作用。

具体研究问题如下：1、乌司他丁对脓毒症大鼠急性肾损伤的保护作用如何？2、乌司他丁能否通过调节炎症反应和凝血功能等途径降低脓毒症大鼠的器官损伤？3、乌司他丁在脓毒症中是否存在剂量依赖性？三、研究方法1、动物模型的建立：选择健康雄性SD大鼠，随机分为正常对照组、模型组和乌司他丁处理组。

采用腹腔注射革兰氏阴性菌（Escherichia coli）滴度为1x108 CFU/mL，建立脓毒症大鼠急性肾损伤模型。

2、药物干预的设计：在脓毒症建模后，将乌司他丁按不同剂量（10、20、40 mg/kg）分别注射到乌司他丁处理组的大鼠体内，模型组和正常对照组注射等量生理盐水。

3、检测指标的采集：在模型建立4小时、24小时和48小时后，分别采集大鼠血液和肾脏组织，检测炎症因子和凝血指标的水平；采用肾脏形态学方法和生化指标（尿素氮、肌酐等）评估肾脏损伤的程度。

《中国组织工程研究》 Chinese Journal of Tissue Engineering Research1249·研究原著·张胜，男，1989年生，河北省沧州市人，回族，宁夏医科大学在读硕士，医师，主要从事重症医学研究。

通讯作者：王晓红，博士，主任医师，副教授，硕士生导师，宁夏医科大学总医院ICU 科，宁夏回族自治区银川市 750004文献标识码:B投稿日期：2019-07-03 送审日期：2019-07-05 采用日期：2019-08-21 在线日期：2019-10-23Zhang Sheng, Master candidate, Physician, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, ChinaCorresponding author: Wang Xiaohong, MD, Chief physician, Associate professor, ICU, General Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China脓毒症心肌功能障碍模型大鼠的构建与评价张 胜1，白吉佳2，徐艳萍3，王晓红2 (1宁夏医科大学，宁夏回族自治区银川市 750004；宁夏医科大学总医院，2ICU 科，3心脏中心功能检查部，宁夏回族自治区银川市 750004)DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2464 ORCID: 0000-0002-9840-8260(张胜)文章快速阅读：文题释义：脓毒症心肌功能障碍：是脓毒症或脓毒症休克最严重的并发症之一，其特征为心脏整体可逆的功能障碍，但心功能障碍的严重程度仍是影响脓毒症预后的重要因素之一，若不能及时有效地改善脓毒症心肌功能障碍将显著增加脓毒症患者病死率。

营养代谢分子发挥脓毒症营养治疗和免疫调节作用的研究进展脓毒症是宿主对感染反应失调导致的危及生命的器官功能障碍。

脓毒症具有高发病率和高病死率的特点，是全球危重症患者的主要死亡病因之一。

虽然早期炎性因子"风暴"导致器官损伤，后期免疫抑制与预后不良紧密相关，但是炎性因子抗体疗法及静脉注射免疫球蛋白等并未能显著降低脓毒症病死率。

2020年"拯救脓毒症运动"儿童脓毒性休克国际指南提出：细胞能量耗竭是诸多脓毒症治疗方式失败的潜在原因，脓毒症代谢治疗（营养治疗和免疫干预）是必要的。

现就营养代谢分子在脓毒症营养治疗和免疫调节方面的最新研究进展进行综述，以期为脓毒症辅助代谢治疗提供新思路。

1 脓毒症与免疫细胞代谢异常脓毒症发生发展伴随机体代谢紊乱，最终导致器官功能障碍。

近五年来，脓毒症免疫代谢备受关注，改善免疫细胞代谢紊乱有望为治疗脓毒症带来新的希望。

1.1 脓毒症代谢紊乱与器官功能障碍：脓毒症早期应激激素和促炎因子诱导糖异生及胰岛素抵抗，表现为应激性高血糖；随后，糖酵解、肝糖原分解和脂解作用增强，脂肪酸氧化增强，肌肉组织蛋白质分解，出现恶病质倾向；最终，多器官功能障碍时，细胞代谢表现为适应性速率减慢。

1.2 脓毒症免疫细胞内代谢紊乱与免疫功能失调：抗炎与促炎反应在脓毒症进展中同时存在，免疫细胞代谢途径与炎症反应状态（促炎或抗炎）紧密相关。

脓毒症早期，先天免疫细胞内氧化磷酸化转换为葡萄糖摄取和糖酵解增加，呈高炎症状态。

乳酸是糖酵解的产物，是诱导巨噬细胞M1极化，发挥促炎作用的主要调节因子[6]。

脓毒症急性期巨噬细胞糖酵解由缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）介导；免疫耐受时，HIF-1α通路受抑制，促进代谢途径由糖酵解向脂肪酸β氧化转换，抗炎反应增强；该过程受Toll样受体（Toll -like receptor，TLR）、转录因子、代谢物质及激酶等调节。

脓毒症相关性脑病大鼠动物模型的建立脓毒症相关性脑病在脓毒症患者是一种常见并发症，合并脓毒症相关性脑病者病死率明显增加。

目前临床对于脓毒症相关性脑病仍是排除性诊断，缺乏客观的诊断指标，如生化指标、影像学指标、电生理学指标等，导致流行病学及发生机制均不明确，因此确立相对客观统一的诊断标准势在必行。

动物模型的选择建立对其机制及治疗方法研究具有重要意义。

研究人员应用脑电图和诱发电位监测早期诊断脓毒症相关性脑病，取得一定效果，但尚未形成统一结论。

本研究根据已有脓毒症相关性脑病模型研究的进展，选用盲肠结扎法（CLP）建立脓毒症模型，通过监测大鼠神经行为学改变、脑电图信号及体感诱发电位改变来早期诊断脓毒症相关性脑病，并对所建立的大鼠脓毒症脑病模型进行分析，为以后的研究提供参考。

1 材料与方法1.1 实验动物清洁级成年雄性SD大鼠30只，体质量200～250 g，由中南大学动物学部提供。

1.2 主要药品、试剂、仪器PBS购自鼎国生物工程公司，水合氯醛为中南大学湘雅医院药剂科化学分析室配制；多聚甲醛购置岳麓区鼎盛实验器材公司；戊二醛、无水乙醇、二甲苯、苏木素、伊红、锇酸等由中南大学病理教研室提供。

套管针购置BD公司。

脑立体定位仪，RM6240生物信号记录器，Olympus BX41型光学显微镜（日本），LKB-Ⅲ型超薄切片机（瑞典），H-7500型透射电镜（日本），石腊切片机（美国），生化培养箱（广东），格兰士微波炉WP700，隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂），荣事达家用冷藏冰箱BCD-202，MIAS医用图像分析管理系统电子摄像。

1.3 实验方法1.3.1 大鼠脑电及诱发电位监测电极放置30只大鼠称质量、编号分别在造模前10 d放置脑电监测电极。

水合氯醛腹腔注射麻醉后，大鼠头部用立体定位仪固定，常规外科消毒，在头颅中间矢状位作3 cm的皮肤切口，将前囟点和其他颅骨缝暴露。

在颅骨面行局麻（10%利多卡因喷雾），移去骨膜。

维生素D辅助治疗危重症疾病的作用机制及研究进展作者：宋会杰王玉吴方方杜帆帆来源：《中国医学创新》2024年第19期【摘要】危重症疾病往往伴随着全身炎症反应综合征，此期间活性氧及一氧化氮等氧化产物增加，而抗氧化剂浓度降低。

失衡的氧化应激反应可导致细胞、组织和器官损伤，增加危重患者的死亡率。

维生素D（VD）作为人体新陈代谢所必需的营养物质，在诸多生理过程中发挥着重要作用，而且VD在辅助治疗危重症疾病方面的作用也不容忽视。

最近研究表明，补充VD可有效改善危重症患者的预后，是辅助治疗危重症疾病颇具潜力的手段之一。

本文现对VD在危重症疾病治疗中的相关文献进行总结，希望能对进一步提高危重症疾病预后提供帮助。

【关键词】危重症维生素D 预后Mechanism and Research Progress of Vitamin D Adjuvant Therapy for Critical Illness/SONG Huijie， WANG Yu， WU Fangfang， DU Fanfan. //Medical Innovation of China， 2024， 21（19）： -184[Abstract] Critical illness is often accompanied by systemic inflammatory response syndrome. During this period， oxidative products such as reactive oxygen species and nitric oxide increase，while the concentration of protective antioxidants decreases. Imbalanced oxidative stress can lead to cell， tissue and organ damage and increase the mortality of critically ill patients. As an essential nutrient for human metabolism， vitamin D （VD） plays an important role in many physiological processes， and the role of VD in the adjuvant treatment of critically illness cannot be ignored. Recent studies have shown that VD supplementation can effectively improve the prognosis of critically ill patients and is one of the potential means for adjuvant treatment of critically illness. In this paper， the related literature of VD in the treatment of critical illness is summarized， hoping to provide help for further improving the prognosis of critical illness.[Key words] Critical illness Vitamin D PrognosisFirst-author's address： Department of Pediatrics， People's Hospital of Henan University，Zhengzhou 450003， Chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2024.19.041隨着社会的发展和医学的不断进步，我国人民健康水平得到了大幅度提高，但仍有一些危重症疾病对人体生命造成了严重的威胁。

㊃基础研究㊃基金项目:天津市医学重点学科(专科)建设项目(TJYXZDXK⁃009A);天津医科大学肿瘤医院肿瘤转化医学种子基金(1910);天津市中医药管理局中医中西医结合科研课题(2021206㊁2023157)作者单位:300202　天津医科大学肿瘤医院重症监护科(武玉琳㊁王东浩),中西医结合科(崔亚萌);天津市中西医结合医院感染性疾病科(王翠菡);天津市河东区直沽中医医院中医内科(周钧)作者简介:武玉琳(1991-),硕士,住院医师㊂研究方向:肿瘤危重症的中西医结合诊疗㊂E⁃mail:wuyulin718@ 通信作者:王东浩(1970-),本科,主任医师㊂研究方向:肿瘤重症的临床及基础工作㊂E⁃mail:donghaow@清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤大鼠的治疗作用及对铁死亡的影响武玉琳　王翠菡　崔亚萌　周钧　王东浩【摘要】　目的　研究清瘟败毒饮对盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)脓毒症肺损伤大鼠的治疗作用及机制研究㊂方法　取75只SD 健康雄性大鼠,按随机数字表法分为假手术组,模型组,清瘟败毒饮低㊁中㊁高剂量组,共5组㊂假手术组只切开腹壁并缝合,不进行CLP,灌胃等体积生理盐水,其余各组运用CLP 建立脓毒症肺损伤大鼠模型㊂检测治疗后各组大鼠生存率㊁肺组织的湿干重比㊁肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)总蛋白含量㊁BALF 总细胞数㊁肺组织脂质过氧化水平及肺组织HE 染色,研究清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤的治疗作用㊂运用Western⁃Blot 法,检测各组大鼠肺组织中铁蛋白重链(ferritin heavy chain,FTH)㊁铁蛋白轻链(ferritin light chain,FTL)㊁转铁蛋白(transferrin)㊁谷胱甘肽过氧化酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白表达情况,探讨清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤大鼠模型中铁死亡相关因子的影响,初步研究其作用机制㊂结果　模型组生存率为40.00%,清瘟败毒饮低㊁中㊁高剂量组生存率分别为53.33%㊁60.00%㊁73.33%;同假手术组相比,模型组能明显增加脓毒症肺损伤大鼠肺湿干重比(W /D)(P <0.01),模型组BALF 上清液总蛋白含量显著增多(P <0.01),总细胞数显著增多(P <0.01)㊂同模型组相比,清瘟败毒饮中㊁高剂量组能减少脓毒症肺损伤大鼠肺W /D(P <0.05,P <0.01),清瘟败毒饮低㊁中㊁高剂量组均能显著减少BALF 上清液总蛋白含量(P <0.05,P <0.01),减少总细胞数(P <0.05);同假手术组相比,模型组大鼠白细胞介素⁃6(interleukin⁃6,IL⁃6)㊁白细胞介素⁃1β(interleukin⁃1β,IL⁃1β)㊁肿瘤坏死因子⁃α(tumor necrosis factor⁃α,TNF⁃α)㊁丙二醛(malondialdehyde,MDA)㊁4⁃羟基壬烯醛(4⁃hydroxide,4⁃HNE)㊁总谷胱甘肽(total⁃glutathione,T⁃GSH)㊁氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)和二价铁离子(Fe 2+)水平显著升高(P <0.01)㊂同模型组相比,清瘟败毒饮中剂量和高剂量组大鼠IL⁃6㊁IL⁃1β和TNF⁃α水平显著降低(P <0.01),清瘟败毒饮高剂量组大鼠MDA 和4⁃HNE 水平显著降低(P <0.01);清瘟败毒饮各剂量组均能降低GSSG 和Fe 2+水平,尤其以清瘟败毒饮高剂量组更为显著(P <0.01)㊂同假手术组相比,模型组大鼠中T⁃GSH㊁GSH 水平和GSH /GSSG 比值明显降低,清瘟败毒饮各剂量组均能显著提高T⁃GSH㊁GSH 水平和GSH /GSSG 比值(P <0.01),模型组大鼠FTH㊁FTL㊁Transferrin 蛋白表达量显著增加(P <0.01),GPX4蛋白表达明显下降(P <0.01)㊂同模型组相比,经各剂量清瘟败毒饮干预后FTH㊁FTL 的蛋白表达量显著降低(P <0.01),而中㊁高剂量清瘟败毒饮干预同样可以降低Transferrin 的蛋白表达量(P <0.01);此外,清瘟败毒饮各剂量组可明显升高GPX4蛋白表达(P <0.01)㊂结论　清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤大鼠的治疗作用明确,其治疗机制可能同抑制铁死亡相关㊂【关键词】　脓毒症肺损伤;　铁死亡;　清瘟败毒饮;　铁蛋白重链;　铁蛋白轻链;　转铁蛋白;　谷胱甘肽过氧化酶4【中图分类号】　R285.5　【文献标识码】　A　doi:10.3969/j.issn.1674⁃1749.2024.05.005The therapeutic effect of Qingwen Baidu Decoction sepsis⁃induced lung injury in rats and its influence on ferroptosisWU Yulin,WANG Cuihan,CUI Yameng,ZHOU Jun,WANG DonghaoIntensive Care Unit of Tianjin Medical University Cancer Institute&Hospital,Tianjin300202,China Corresponding author:WANG Donghao,E⁃mail:donghaow@【Abstract】　Objective　To investigate the therapeutic effect and mechanism of Qingwen Baidu Decoction on sepsis⁃induced lung injury in rats with cecal ligation and puncture(CLP).Methods　A total of75healthy male SD rats were randomly divided into sham operation group,model group,and low, medium,and high dose Qingwen Baidu Decoction groups,with30rats in each group.The sham operation group only underwent laparotomy and suture without CLP and was orally administered with an equal volume of normal saline.The remaining groups underwent CLP to establish a sepsis⁃induced lung injury rat model. The therapeutic effect of Qingwen Baidu Decoction on sepsis⁃induced lung injury was investigated by detecting the survival rate,wet⁃to⁃dry weight ratio of lung tissue,total protein content and total cell count in bronchoalveolar lavage fluid(BALF),lung tissue lipid peroxidation level,and HE staining after treatment.In addition,the method of western blot was used to detect the expression of FTH,FTL, transferrin,and GPX4proteins in lung tissue of each group of rats,to explore the effect of Qingwen Baidu Decoction on iron death⁃related factors in sepsis⁃induced lung injury rat model,and to preliminarily study its mechanism of action.Results　Qingwen Baidu Decoction intervention could effectively reduce the lung W/D ratio,total protein content,and total cell count in BALF of sepsis⁃induced lung injury rats.It could also decrease the levels of IL⁃6,IL⁃1β,TNF⁃α,MDA,and4⁃HNE in sepsis⁃induced lung injury rats, reduce the levels of GSSG,and Fe2+,increase the level of T⁃GSH,GSH,and improve the GSH/GSSG ratio.Moreover,Qingwen Baidu Decoction could reduce lung tissue pathological changes such as alveolar rupture or fusion and inflammatory cell infiltration caused by sepsis⁃induced lung injury.In addition, Qingwen Baidu Decoction could reduce the protein expression levels of iron death⁃related factors FTH,FTL and transferrin,while increase the protein expression level of GPX4.Conclusion　Qingwen Baidu Decoction has a clear therapeutic effect on sepsis⁃induced lung injury in rats,and its therapeutic mechanism may be related to the inhibition of iron death.【Key words】　sepsis⁃induced lung injury;　ferroptosis;　Qingwen Baidu Decoction;　ferritin heavy chain;　ferritin light chain;　transferrin;　glutathione peroxidase4 脓毒症是机体在重症感染㊁严重创伤等情况下常见的并发症,可累及肺㊁肾㊁心等多个器官㊂肺脏作为脓毒症病理变化中最易受损害的靶器官之一,有高达68.2%的脓毒症患者合并肺损伤,若不及时救治,死亡率可达43%[1]㊂因此,脓毒症肺损伤是脓毒症器官衰竭中最主要的致死性并发症之一,也是当今急危重病医学面临的重大难题㊂脓毒症肺损伤发病机制错综复杂,致病环节层出不穷㊂因此,寻找安全有效的干预措施改善脓毒症肺损伤至关重要㊂研究发现,脂质过氧化物的堆积引起肺泡上皮细胞铁死亡,是脓毒症肺损伤的重要环节[2]㊂在脓毒症肺损伤小鼠肺组织中,铁离子和转铁蛋白水平较正常小鼠显著升高[3],脂质过氧化产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平上升[4]㊂在脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤模型中,同样发现总铁离子㊁活性氧(reactive oxygen species,ROS)㊁MDA处于较高水平㊂由此可见,通过调控铁死亡,抑制肺泡上皮细胞铁死亡,缓解脓毒症肺损伤可能是新的治疗手段㊂大量研究表明,中药复方及其有效成分在改善脓毒症肺损伤炎症反应,减轻脓毒症肺损伤等方面具有明显优势㊂研究发现,四逆汤可以通过调节ACE2⁃Ang(1⁃7)⁃Mas轴和抑制丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号通路来改善脓毒症诱导的急性肺损伤[5]㊂甘草酸作为甘草的主要活性成分,能明显降低脓毒症小鼠炎症因子的表达,并可通过抑制HMGB1/TLR9通路,减少肺组织中中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)的形成,缓解脓毒症小鼠的肺损伤[6]㊂在脓毒症小鼠模型中,五味子甲素可以通过减少炎症因子的产生和细胞的异常凋亡而发挥抗炎作用,进一步减轻肺损伤[7]㊂清瘟败毒饮是清代著名温病学家余师愚在1794年所创制的名方,具有 清热解毒,凉血泻火”之功,广泛应用于脓毒症肺损伤的治疗[8]㊂临床研究表明,清瘟败毒饮可显著缓解脓毒症患者肺损伤症状,延缓疾病进展,有利于长期预后[9⁃10]㊂清瘟败毒饮缓解脓毒症肺损伤的作用不言而明,但是其具体作用机制尚不明确㊂基于此,本研究首先采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)法建立脓毒症肺损伤大鼠模型,灌胃不同剂量的清瘟败毒饮,明确清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤的治疗作用,并研究清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤大鼠铁死亡相关因子表达的影响,另外初步探讨清瘟败毒饮是否为通过调控铁死亡治疗脓毒症肺损伤的作用机制㊂1　材料和方法1.1　实验动物SPF级健康雄性SD大鼠75只,6~8周龄,体质量(200±20)g,购买于北京华阜康生物科技股份有限公司,合格证号:110322210100331916㊂饲养环境温度保持在(25±2)℃,相对湿度为(50±15)%,明暗周期12小时/12小时的环境下,自由饮水和进食㊂该实验经天津市肿瘤医院伦理委员会批准,批准号:NSFC⁃AE⁃2023135㊂1.2　实验药物及制备按原方比例,称取生石膏24g㊁生地黄6g㊁黄连3g㊁栀子9g㊁桔梗4.5g㊁黄芩9g㊁知母9g㊁赤芍9g㊁玄参9g㊁连翘9g㊁竹叶6g㊁甘草4.5g㊁牡丹皮9g,加入8倍体积水煎煮30分钟,浓缩成2g生药/mL, 4℃冷藏备用㊂1.3　主要试剂和仪器白细胞介素⁃6(interleukin⁃6,IL⁃6),批号:H007⁃1⁃1;白细胞介素1β(interleukin⁃1β,IL⁃1β),批号H002⁃1⁃2;MDA,批号C003⁃1⁃2;谷胱甘肽(glutathione,GSH);批号C006⁃2⁃1;总谷胱甘肽(total⁃glutathione,T⁃GSH)/氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG),即T⁃GSH/GSSG,批号:A061⁃1⁃2;铁离子浓度测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所㊂铁载蛋白重链(ferritin heavy chain,FTH),批号:ab75973;铁载蛋白轻链(ferritin light chain,FTL),批号:ab75973;转铁蛋白(transferrin),批号:ab278498;谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase4,GPX4),批号:ab252833;β⁃肌动蛋白(β⁃actin),批号:ab179467;β⁃actin相应的二抗均购自Abcam公司;8%~12%SDS⁃PAGE,货号:P1200,购于Solarbio㊂PVDF膜,货号: YA1701,购于Solarbio㊂Eclipse Ci显微镜,日本Nikon公司;Infinite F50酶标仪,瑞士Tecan公司;全自细胞计数仪,美国BIO⁃RAD公司,506BR1436;5810型台式冷冻离心机,德国Eppndorf公司;DYCZ⁃24DN型垂直电泳槽,北京六一仪器厂;SH⁃523型化学发光成像系统,杭州申花科技有限公司㊂1.4　实验分组㊁造模及给药方法将75只大鼠,根据随机数字表法分为假手术组,模型组及清瘟败毒饮低㊁中㊁高剂量组5组,每组15只㊂除假手术组外,其余各组运用CLP法建立脓毒症肺损伤大鼠动物模型,CLP术后12小时插管监测大鼠平均动脉压,当平均动脉压下降30%或以上,认为造模成功[11]㊂造模过程中,模型组存活6只;清瘟败毒饮低剂量组存活8只;清瘟败毒饮中剂量组存活9只;清瘟败毒饮高剂量组存活11只㊂全部造模成功后,假手术组只切开腹壁并缝合,不进行CLP,用等体积生理盐水灌胃,按照人 大鼠体表面积给药剂量换算表计算,清瘟败毒饮组低㊁中㊁高剂量组每天给药剂量分别为0.7g/kg㊁1.3g/kg㊁2.5g/kg,每天1次,连续7天㊂末次给药24小时后,戊巴比妥麻醉动物,颈椎脱臼法予以安乐死,取肺组织备用㊂1.5　观察指标及检测方法1.5.1　大鼠生存率　造模给药后,每天统计各组大鼠存活的数量,连续观察7天㊂生存率(%)=存活大鼠数量/15×100%㊂1.5.2　肺组织的湿干重比　造模给药24小时后,取肺脏,生理盐水洗净吸干后,进行肺湿干重(W/ D)比测定㊂取右中叶肺组织称重(W)后,置于烤箱中,60℃烘烤至恒重后称干重(D),计算W/D㊂1.5.3　大鼠肺泡灌洗液总蛋白(total protein,TP)含量检测　造模给药24小时后,运用腹腔注射戊巴比妥钠(50mg/kg)麻醉大鼠并后仰卧固定于操作台,进行颈部解剖充分暴露气管和肺部,行气管插管并固定㊂随后用5mL无菌生理盐水分3次经导管注入轻轻按摩肺部30秒并收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),BALF回收率大约为85%~90%㊂用双层纱布过滤,以3000r/ min离心(离心半径=15cm)15分钟后,取上清液保存于-20℃冰箱内,采用ELISA法测定BALF中TP 的含量㊂1.5.4　大鼠BALF总细胞数检测　用500μL4℃预冷的PBS将BALF离心后得到的细胞沉淀重新悬浮,轻柔吹散混合均匀,取10μL细胞悬浮液注入细胞计数板中,使用全自动细胞计数仪测定总细胞数㊂1.5.5　肺组织脂质过氧化及铁离子水平检测　造模给药24小时后,收集各组大鼠肺组织,试剂盒检测造模给药后各组大鼠肺组织中IL⁃6㊁IL⁃1β㊁MDA㊁GSH和GSSG水平,并分别计算GSH总量(T⁃GSH =GSH+GSSG)和GSSG/T⁃GSH比值,免疫组化法检测脂质过氧化产物,4⁃羟基壬烯醛(4⁃hydroxide, 4⁃HNE)表达水平㊂同时试剂盒检测造模给药后各组大鼠肺组织中二价铁离子(Fe2+)水平㊂1.5.6　肺组织病理染色　各组大鼠肺组织经10%福尔马林溶液固定24小时,水洗20分钟后梯度酒精脱水,随后二甲苯透明后石蜡包埋,切片5μm,随后将肺组织石蜡切片于60℃烘烤,于二甲苯和梯度酒精中脱蜡并水化㊂苏木精染细胞核,伊红染细胞质,脱水封片后在光学显微镜下观察各组肺组织形态㊂1.5.7　肺组织中铁死亡相关因子表达　Western blot检测大鼠肾组织中FTH㊁FTL㊁Transferrin㊁GPX4蛋白的表达㊂收集大鼠肾组织,并加入150μL RIPA裂解缓冲液,匀浆离心后留取蛋白上清液㊂采用BCA蛋白测定试剂盒测定TP浓度,将样品蛋白浓度进行均一化㊂每个样品取等量蛋白20μg,8% ~12%SDS⁃PAGE电泳后分离的蛋白质转移到PVDF膜㊂将膜在室温下用5%脱脂奶粉封闭2小时后,分别加入不同的兔抗大鼠一抗FTH(稀释比例1∶3000)㊁FTL(稀释比例1∶3000)㊁Transferrin (稀释比例1∶2000)㊁GPX4(稀释比例1∶3000)㊁β⁃actin(稀释比例1∶5000),4℃孵育过夜㊂洗膜后加入二抗(羊抗兔IgG稀释比例按1∶9000),室温孵育2小时㊂TBST洗膜后加ECL化学发光法显影检测,之后使用Image Pro Plus6.0软件对条带灰度值进行量化分析㊂计量原理根据目的蛋白的着色深浅及分布面积来确定目的蛋白的表达量,通过测量出每张图片的累积光密度值(integrated option density,IOD)以及区域面积(area)值,再计算出平均光密度值(mean density),即mean density=IOD/ area,此值反映了目标蛋白的单位面积浓度㊂最后取每个样本的5个随机区域mean density的平均值作为此样本值㊂1.6　统计学方法采用SPSS25.0统计软件进行数据统计,计量数据以均数±标准差(x±s)表示,各组数据符合正态分布且方差齐,组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD⁃t检验㊂P<0.05代表有统计学差异㊂2　结果2.1　各组大鼠生存率造模后24小时假手术组生存率100.00%,存活数量15只;模型组生存率为40.00%,存活数量6只;清瘟败毒饮低剂量组生存率53.33%,存活数量8只;清瘟败毒饮中剂量组生存率60.00%,存活数量9只;清瘟败毒饮高剂量组生存率73.33%,存活数量11只㊂见表1㊂表1　各组大鼠生存率组别初始数量(只)24小时后存活数量(只)存活率(%)假手术组1515100.00模型组15640.00清瘟败毒饮低剂量组15853.33清瘟败毒饮中剂量组15960.00清瘟败毒饮高剂量组151173.33 2.2　清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤大鼠肺屏障功能的影响2.2.1　清瘟败毒饮对各组大鼠肺组织的湿干重比的影响　造模给药后,与假手术组相比,模型组能明显增加脓毒症肺损伤大鼠肺W/D值(P<0.05, P<0.01)㊂与模型组相比,清瘟败毒饮各剂量组均能一定程度减少脓毒症肺损伤大鼠肺W/D值(P<0.05,P<0.01),但清瘟败毒饮低剂量组无明显差异(P>0.05)㊂见表2㊂2.2.2　清瘟败毒饮对各组大鼠BALF总蛋白的影响　造模给药后,与假手术组相比,模型组BALF上清液TP含量显著增多(P<0.01)㊂与模型组相比,清瘟败毒饮低㊁中㊁高剂量组均能显著减少TP含量(P<0.01)㊂见表2㊂2.2.3　清瘟败毒饮对各组大鼠BALF总细胞数的影响　造模给药后,与假手术组相比,模型组BALF 的总细胞数显著增多(P<0.01)㊂与模型组相比,清瘟败毒饮各剂量组均能一定程度减少BALF中的总细胞数,其中清瘟败毒饮中㊁高剂量组有统计学差异(P<0.01)㊂见表2㊂2.3　清瘟败毒饮对各组大鼠脂质过氧化及铁离子水平的影响造模给药后,与假手术组相比,模型组大鼠IL⁃6㊁IL⁃1β㊁TNF⁃α㊁MDA和4⁃HNE水平显著升高(P<0.01)㊂与模型组相比,清瘟败毒饮中剂量和高剂量组大鼠IL⁃6㊁IL⁃1β和TNF⁃α水平显著降低(P<0.01),清瘟败毒饮高剂量组大鼠MDA和4⁃HNE水平显著降低(P<0.01)㊂另外,同假手术组相比,模型组大鼠GSSG和Fe2+水平显著升高(P<0.01),清瘟败毒饮各剂量组均能降低GSSG和Fe2+水平,尤其以清瘟败毒饮高剂量组更为显著(P<0.01)㊂同时,与假手术组相比,模型组大鼠中T⁃GSH㊁GSH水平和GSH/GSSG 比值明显降低(P<0.01),清瘟败毒饮各剂量组均能显著提高T⁃GSH㊁GSH水平和GSH/GSSG比值(P<0.05,P<0.01)㊂见表3㊂2.4　清瘟败毒饮对各组大鼠肺组织病理学形态的影响结果发现,正常组大鼠肺组织结构正常,肺间质未见明显炎性细胞浸润;模型组大鼠肺组织结构严重破坏,呈弥漫性病变,肺泡形状发生改变,肺泡膨胀不全,部分肺泡断裂或融合,肺泡间隔变厚,肺间质充满大量炎性细胞浸润;与模型组相比,清瘟败毒饮各组肺组织见肺泡间隔逐渐变薄,肺泡壁完整,肺泡腔逐渐清晰,肺间质间隙炎症细胞浸润逐渐减少㊂见图1㊂表2　清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤大鼠肺屏障功能的影响(x±s)组别鼠只肺组织W/D BALF中的TP(mg/mL)BALF中的总细胞数(×105/个)假手术组15 4.90±0.548.62±0.6170.00±4.79模型组68.15±0.69a25.19±1.21a195.00±18.51a清瘟败毒饮低剂量组87.92±1.0720.43±1.01c174.50±10.19清瘟败毒饮中剂量组97.15±0.57b14.51±1.06c156.22±10.43c清瘟败毒饮高剂量组11 6.20±0.62c12.17±1.03c141.27±13.63c注:与假手术组相比,a P<0.01;与模型组相比,b P<0.05,c P<0.01㊂表3　清瘟败毒饮对各组大鼠脂质过氧化及铁离子水平的影响(x±s)组别鼠只IL⁃6(pg/mL)IL⁃1β(pg/mL)TNF⁃α(pg/mL)MDA(μmol/L)4⁃HNE(μmol/L)假手术组1595.31±11.9475.21±13.6582.81±9.59 1.53±0.4276.14±45.60模型组6688.24±106.99a405.53±102.21a646.72±86.79a 3.68±0.69a232.83±83.06a 清瘟败毒饮低剂量组8642.60±87.95397.90±393.45547.93±108.29b 3.28±0.42248.29±54.06清瘟败毒饮中剂量组9398.23±76.98c242.27±33.31c425.72±63.41c 2.72±0.59c203.21±34.58清瘟败毒饮高剂量组11298.46±45.09c194.87±27.43c292.26±47.30c 2.19±0.52c147.17±44.65c 组别鼠只T⁃GSH(μmol/L)GSH(μmol/L)GSSG(μmol/L)GSH/GSSG Fe2+(μmol/L)假手术组1514.59±3.7411.82±3.46 1.38±0.6211.04±7.61 1.00±0.18模型组6 6.17±1.40a 1.21±0.93a 2.48±0.57a0.52±0.35a 2.35±0.17a 清瘟败毒饮低剂量组89.98±2.19c 5.50±2.21c 2.24±0.71 2.86±1.49c 2.18±0.27清瘟败毒饮中剂量组910.04±3.02b 6.69±2.79c 1.68±0.68b 4.88±3.04c 1.44±0.28c 清瘟败毒饮高剂量组1112.07±3.88c9.00±3.73c 1.53±0.56c 6.88±4.22c 1.38±0.26c 注:与假手术组相比,a P<0.01;与模型组相比,b P<0.05,c P<0.01㊂ 注:A 假手术组;B 模型组;C 清瘟败毒饮低剂量组;D 清瘟败毒饮中剂量组;E 清瘟败毒饮高剂量组㊂图1　各组大鼠肺组织病理学形态学观察(HE,×100)表4　清瘟败毒饮对大鼠肺组织中FTH㊁FTL㊁Transferrin㊁GPX4表达的影响(x ±s )组别鼠只FTH /b ⁃actin FTL /b ⁃actin Transferrin /b ⁃actin GPX4/b ⁃actin 假手术组150.34±0.030.44±0.02 1.05±0.04 1.25±0.12模型组6 1.55±0.10a 1.53±0.04a 2.26±0.14a 0.57±0.02a 清瘟败毒饮低剂量组8 1.23±0.06b 1.12±0.03b 2.05±0.17 1.05±0.09b 清瘟败毒饮中剂量组9 1.21±0.08b 1.03±0.04b 1.71±0.10b 1.08±0.10b 清瘟败毒饮高剂量组111.06±0.02b0.98±0.03b1.20±0.15b1.26±0.13b注:与假手术组相比,a P <0.01;与模型组相比,b P <0.01㊂2.5　清瘟败毒饮对各组大鼠肺组织中铁死亡相关因子表达的影响与假手术组相比,模型组大鼠FTH㊁FTL㊁Transferrin 的蛋白表达量显著增加(P <0.01),GPX4蛋白表达明显下降(P <0.01);与模型组相比,经各剂量清瘟败毒饮干预后FTH㊁FTL 的蛋白表达量显著降低(P <0.01),而中㊁高剂量清瘟败毒饮干预可以降低Transferrin 的蛋白表达量(P <0.01);此外,清瘟败毒饮各剂量组可明显升高GPX4蛋白表达(P <0.01)㊂见表4和图2㊂注:A 假手术组;B 模型组;C 清瘟败毒饮低剂量组;D 清瘟败毒饮中剂量组;E 清瘟败毒饮高剂量组㊂图2　各组大鼠肺组织中FTH㊁FTL㊁Transferrin㊁GPX4蛋白表达Western Blot 结果3　讨论本研究通过运用CLP 建立脓毒症肺损伤大鼠动物模型,灌胃不同剂量的清瘟败毒饮,以明确清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤大鼠的治疗作用,探讨清瘟败毒饮治疗脓毒症肺损伤大鼠的作用机制㊂肺屏障功能与肺损伤程度密切相关,肺W /D㊁BALF 总蛋白和BALF 总细胞数是直接反映肺屏障破坏情况的重要指标[12]㊂结果发现,清瘟败毒饮各组均能一定程度减少脓毒症肺损伤大鼠肺W /D㊁BALF 中的TP 含量和BALF 中的总细胞数㊂此外,当脓毒症肺损伤发生时,机体会释放大量的炎症细胞和ROS,这些物质会导致脂质分子中的不饱和脂肪酸受到氧化损伤,从而引发脂质过氧化反应,生成大量过氧化脂质㊂这些过氧化脂质可破坏细胞膜,影响细胞的结构和功能,进而影响细胞的生存能力[13]㊂IL⁃6㊁IL⁃1β㊁TNF⁃α㊁MDA 和4⁃HNE 与脂质过氧化有密切关系,T⁃GSH㊁GSH㊁GSSG㊁GSH /GSSG 是与细胞内氧化还原状态相关的指标,可以反映细胞内抗氧化能力和氧化应激水平[14⁃16]㊂Fe 2+的存在可以促进脂质过氧化反应的进行,从而导致细胞及组织的损伤㊂结果表明,清瘟败毒饮干预后可降低脓毒症肺损伤大鼠IL⁃6㊁IL⁃1β㊁TNF⁃α㊁MDA㊁4⁃HNE㊁GSSG 和Fe 2+水平,提高T⁃GSH㊁GSH 水平和GSH /GSSG 比值㊂最后,病理检查也发现清瘟败毒饮各剂量组可明显改善脓毒症肺损伤大鼠肺组织相关病理形态变化㊂由此可见,清瘟败毒饮各剂量组可不同程度上改善脓毒症肺损伤大鼠相关生化指标,缓解肺组织病理学变化,提示清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤具有治疗作用㊂铁死亡是一种由铁依赖的不饱和脂肪酸磷脂氧化累积导致的细胞死亡方式,与脓毒症肺损伤的发生发展密切相关[17]㊂结果发现,清瘟败毒饮可以降低铁死亡相关因子FTH㊁FTL和Transferrin 的蛋白表达水平,同时升高GPX4蛋白表达水平㊂研究发现尿嘧啶(uridine)可以通过抑制巨噬细胞的铁死亡来缓解脓毒症所引起的急性肺损伤[18]㊂粘蛋白1是一种大分子跨膜糖蛋白,研究发现粘蛋白1通过GSK3抑制铁死亡可以减轻脓毒症诱导的急性肺损伤[19]㊂体外试验发现,异质核核糖核蛋白(AU⁃rich binding factor1,AUF1)作为一种RNA结合蛋白质,可以通过调控NRF2和ATF3来保护细胞免受铁死亡所导致的氧化损伤,从而减轻脓毒症所引起的急性肺损伤[20]㊂铁蛋白(ferritin)是人体内最主要的铁储存仓,可以通过储存细胞内的游离铁离子维持细胞铁稳态[21]㊂ferritin由铁蛋白轻链和重链(FTL㊁FTH)两种多肽链组成,其中FTL主要参与铁的储存,它能够与FTH结合形成二聚体,进而形成四聚体和八聚体的铁蛋白团簇,将多余的铁离子以安全㊁可控的方式储存㊂FTH主要参与铁的释放,它能够将铁蛋白团簇中的铁离子释放出来,以满足机体对铁的需求[22]㊂转铁蛋白(transferrin)是一种铁结合蛋白,主要由两个相同的多肽链组成,每个链上含有一个铁结合位点,能够结合两个三价铁离子㊂在体内,转铁蛋白通过循环系统运输铁离子,以满足机体各种细胞的铁需求㊂此外,转铁蛋白还与细胞表面的转铁蛋白受体结合,进入细胞内部,在细胞质中释放铁离子,以参与细胞内的生化反应[23]㊂GPX4是已知的唯一能够直接清除脂质过氧化物的酶,在铁死亡的过程中发挥核心调控的作用㊂抑制GPX4活性或使其表达缺失,都会引发不受控制的多不饱和脂肪酸氧化和脂肪酸自由基生成,随后进一步通过脂质ROS依赖性方式促进铁死亡的发生㊂反之,通过上调GPX4的表达则可以减少脂质ROS诱导的细胞铁死亡[24]㊂综上所述,本研究揭示了清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤大鼠的治疗作用,同时研究发现,清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤的作用机制可能与调节细胞中FTH㊁FTL㊁Transferrin和GPX4铁死亡相关因子水平相关,揭示了清瘟败毒饮通过调控铁死亡治疗脓毒症肺损伤的作用机制㊂参考文献[1]　Zambon M,Vincent J L.Mortality rates for patients with acutelung injury/ARDS have decreased overtime[J].Chest,2008,133(5):1120⁃1127.[2]　LIU P,FENG Y,LI H,et al.Ferrostatin⁃1alleviates lipopo⁃lysaccharide⁃induced acute lung injury via inhibitingferroptosis[J].Cellular&Molecular 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CLP致脓毒血症大鼠模型建立一、实验目的利用CLP技术建立脓毒血症大鼠模型二、实验原理脓毒血症患者最常见的感染源来自腹腔且易造成腹腔感染，所以腹腔感染模型是目前最常见的动物模型。

鼠类盲肠结扎穿刺（CLP）是临床研究脓毒血症常见模型，是模仿腹腔脓毒血症感染的临床过程，引起多菌群感染，最终导致脓毒血症。

三、实验材料和设备成熟期雄性Sprague-Dawley大鼠，体重400-500g。

外科手术器械：手术台，手术刀，刀片，剪刀，刮毛器，镊子，止血钳，持针器，缝皮针，1号线，4号肠线，18g针头，血管夹，医用胶布，PE50导管（厂家），探针，硬膜外穿刺针，肝素帽，留置针，注射器（规格）。

实验药品：1.5%戊巴比妥钠，2%利多卡因，丁苯诺啡，75%酒精，碘伏，肝素钠（10000U），蒸馏水，生理盐水。

四、实验方法和步骤1.购买SD大鼠，适应性饲养1周，自由饮水，饮食；2.术前禁食12小时；3.称重以1.5%戊巴比妥钠40mg/kg（4%水合氯醛 0.1ml/10g抽取麻药，一般3-5分钟起效，可以维持1小时左右。

），腹腔注射（先将动物固定,腹部用酒精棉球擦试消毒，然后在左或右侧腹部将针头刺入皮下，沿皮下向前推进约0.5厘米，再使针头与皮肤呈45 度角方向穿过腹肌刺入腹腔，此时有落空感，回抽无肠液、尿液后，缓缓推入药液。

），麻醉大鼠，止血钳夹小鼠脚趾确定麻醉深度；4.将大鼠背位固定于手术台上，剪去颈部和腹部被毛；5.取血导管的制备：取PE50导管约15cm，一侧剪契口，另一端平口，对楔面要进行简单打磨处理,以防表面粗糙划破血管外壁。

抗凝处理是将导管用装满肝素钠的注射器灌流、冲洗,保证导管每个部位都充分接触肝素钠。

6.颈静脉置管术：a.用碘伏常规消毒颈部，铺无菌手术单。

b.于胸锁乳突肌连线中点起向颈部垂直延伸15mm,做皮肤切口约1.5cm，暴露皮下结缔组织，用血管钳逐层钝性分离至显露颈静脉(特征是在胸廓入口处，有轻微搏动，直径2～4 mm)，2%利多卡因3-5滴局部浸润1min，完全游离一段长1-1.5cm血管，血管夹分别夹闭远心端和近心端，血管下穿过两根1号线。

-综述.中医药调节肠道菌群治疗脓毒症研究进展9汪磊刘阳李慧陈清峰张宇卢笑晖：(山东中医药大学附属医院，山东济南250011)中图分类号:R631文献标志码:A文章编号：1004-745X(2021)05-0924-04doi：10.3369/j.issn.l004-745X.3221.35.355【摘要】肠道菌群在维持机体内环境稳定方面非常重要,中医药对肠道菌群具有调节作用。

本文综述了肠道菌群与脓毒症的关系，以及中医药调节肠道菌群治疗脓毒症的最新进展，以期为中医药在脓毒症防治上的临床应用提供一定的参考。

【关键词】脓毒症中医药肠道菌群研究进展综述脓毒症是指因感染引起宿主反应失调而导致危及生命的器官功能障碍I0。

脓毒症由于其急性发作、预后差、住院费用高，已成为影响人类生命健康的重要疾病。

自古以来中医药就擅长治疗热证，中医药治疗感染性发热有其独特的优势，并且往往能收到满意的疗效。

近些年来，越来越多的研究发现脓毒症与肠道菌群有着密切的联系，肠道菌群逐渐成为国内外学者研究的热点之一。

微生态制剂、菌群移植是现代医学治疗肠道菌群紊乱的主要措施。

中医药在改善肠道菌群紊乱，维持肠道内环境稳态方面也具有一定的优势。

现就近年来中医药调节肠道菌群治疗脓毒症的相关研究做一综述，以期为中医药防治脓毒症提供参考。

1脓毒症概述脓毒症是危重症患者最主要的死亡原因之一，其病理生理机制比较复杂。

病原体入侵机体，激活机体的细胞免疫及体液免疫，发生促炎和抗炎反应，释放大量的炎性介质导致脓毒症，甚至发展为多器官功能障碍。

其病理改变涉及炎症反应、免疫抑制、代谢紊乱、血流动力学障碍等多个方面[22]O目前脓毒症的西医治疗方案主要是早期液体复苏、抗感染、血管活性药物、糖皮质激素、肺保护通气等[32]O虽然现代医学技术有了长足进步，但脓毒症患者的死亡率仍然偏高，如何治疗脓毒症改善预后是危重症医学亟待解决的难题。

2肠道菌群与脓毒症的关系肠道菌群是一个复杂的生态系统，人体肠道中定植着约1000余种微生物，由3500余种细菌构成叫正常的肠道微生物群在宿主营养代谢、药物代谢、维持肠道黏膜屏障结构完整性、免疫调节和抵御病原体等*基金项目：山东省中医药科技发展计划项目(2019-0121)△通信作者(电子邮箱:**************)方面发挥着特殊的功能[6]o它会在一定范围内保持相对动态平衡，即肠道微生态平衡，一旦肠道微生物的结构发生变化，可能会引起人体各方面代谢的紊乱14。

《丙泊酚对脓毒症大鼠肝损伤保护作用的实验研究》篇一一、引言脓毒症是一种由感染引起的全身性炎症反应综合征，常常导致多器官功能衰竭，其中肝脏损伤是常见的并发症之一。

目前，对于脓毒症的治疗仍以药物治疗为主，而丙泊酚作为一种常用的麻醉药物，近年来在临床上的应用逐渐增多。

本研究旨在探讨丙泊酚对脓毒症大鼠肝损伤的保护作用，以期为临床治疗提供新的思路和方法。

二、材料与方法1. 材料实验动物：健康成年SD大鼠，体重约200-250g。

药品与试剂：丙泊酚、脓毒症造模所需细菌、血清生化指标检测试剂等。

仪器设备：手术器械、离心机、酶标仪、显微镜等。

2. 方法（1）动物分组与造模：将大鼠随机分为正常对照组、脓毒症模型组、丙泊酚治疗组。

通过细菌感染法建立脓毒症大鼠模型。

（2）药物处理：丙泊酚治疗组在造模后给予丙泊酚治疗，正常对照组和脓毒症模型组给予等量溶剂处理。

（3）指标检测：检测各组大鼠的肝功能指标（如ALT、AST等）、炎症因子水平、组织形态学变化等。

（4）统计分析：采用SPSS软件进行数据分析，比较各组间的差异。

三、实验结果1. 肝功能指标变化实验结果显示，脓毒症模型组大鼠的ALT、AST等肝功能指标明显升高，而丙泊酚治疗组的大鼠肝功能指标较模型组有所降低，接近正常对照组水平。

2. 炎症因子水平变化脓毒症大鼠体内炎症因子水平升高，而丙泊酚治疗可以显著降低炎症因子水平，减轻炎症反应。

3. 组织形态学变化显微镜下观察发现，脓毒症模型组大鼠肝脏组织损伤严重，而丙泊酚治疗组的大鼠肝脏组织损伤程度较轻，与正常对照组相似。

四、讨论本实验研究表明，丙泊酚对脓毒症大鼠肝损伤具有保护作用。

这可能与丙泊酚的抗炎、抗氧化、稳定细胞膜等作用有关。

丙泊酚通过抑制炎症反应、减轻氧化应激、保护肝细胞膜的完整性等机制，从而减轻肝脏损伤。

此外，丙泊酚还可能通过调节免疫功能、改善微循环等途径，进一步发挥其保护作用。

五、结论本实验研究结果表明，丙泊酚对脓毒症大鼠肝损伤具有明显的保护作用。

脓毒症大鼠血清炎性介质的变化及己酮可可碱的干预作用牛卫兵【期刊名称】《中国实用医刊》【年(卷),期】2004(031)018【摘要】目的:利用动物实验方法探讨己酮可可碱对脓毒症大鼠的治疗作用.方法:90只SD大鼠随机分为3组,每纽30只.即假手术组(A组),脓毒症模型组(B组),己酮可可碱治疗组(C纽).A组除不结扎盲肠,不刺穿盲肠外,余操作同B组;B组成功后不做任何处理;C组盲肠结扎穿孔后立即腹腔注射己酮可可碱并每隔8h追加1次.各组大鼠在术后3、12、24h分次处死,每次10只,取下腔静脉血检测血中炎性细胞因子水平,并取肝、肾组织行病理检查.结果:B组大鼠血中炎性细胞介质水平显著升高,肝肾功能与形态出现损伤性变化;C组血中炎性细胞介质水平明显降低,肝肾功能与形态损伤减轻.结论:己酮可可碱对大鼠脓毒症有治疗作用,其机制可能是通过减少机体炎症介质的释放引起.【总页数】2页(P3-4)【作者】牛卫兵【作者单位】河南洛阳轴承集团有限公司总医院,471039【正文语种】中文【中图分类】R5【相关文献】1.参麦注射液对早期脓毒症大鼠血清C反应蛋白和促炎性介质水平的影响 [J], 郭海雷;赵遵江;方林森;胡德林;余又新;王春华2.佐剂性关节炎大鼠血清IL-2、TNFα、Cort的变化及电针干预作用的研究 [J], 李辉;李晓泓;张露芬3.丹参酮ⅡA对脓毒症小鼠脑软膜微血流速度和脑组织炎性介质水平的干预作用[J], 张友平;占大钱;陈华文;吕青;祝伟4.脓毒症性肺损伤大鼠炎性细胞因子的变化及己酮可可碱的干预作用 [J], 徐剑铖;毛宝龄;钱桂生5.大豆苷元对异丙肾上腺素所致心肌肥厚时炎性介质变化的干预作用 [J], 吴丽珍;连磊凡;李良东;黄志华;钟星明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

-研#报告-抗炎合剂减轻脓毒症致急性肺损伤大鼠肺组织程序性坏死的实验研究6汪海慧闫国良7楼丹飞郑天虹(上海中医药大学附属上海市中医医院，上海200071)中图分类号:R285.5文献标志码:A文章编号：1004-745X(2021)05-0762-04doi：10.3969/j.issn」004-745X.2021.05.003【摘要】目的观察通腑中药抗炎合剂对脓毒症致急性肺损伤大鼠肺组织细胞程序性坏死的干预作用。

方法清洁级SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、凋亡抑制剂组,造模前3d及造模后，中药组灌胃抗炎合剂药液14g/kg,凋亡抑制组腹腔注射Necr/tain-10.6mg/kg,每日1次。

采取盲肠结扎穿孔术法(CLP)制备脓毒症致急性肺损伤大鼠模型,并于造模后24h取材，采用Tunel染色及免疫组化法检测大鼠肺组织细胞程序性坏死情况，同时测定大鼠血清炎症因子白细胞介素-ip(lL-ip),白细胞介素-6(4-6)及肿瘤坏死因子-R(TNF-r)含量。

结果模型组大鼠血清IL-1Q、IL-6、TNF-R含量较假手术组明显增高(!<0.61)冲药组和凋亡抑制剂组较模型组降低(！<0.01),而其中凋亡抑制剂组较中药组降低得更为显著(！<0.01);模型组大鼠肺组织Tunel染色细胞凋亡百分比及PCNA水平较假手术组明显增高(!<0.61)，中药组和凋亡抑制剂组较模型组降低(!<0.61),且两组之间无显著差异性(！>0.05)>结论通腑中药抗炎合剂可通过减轻炎症因子的释放及肺组织细胞程序性坏死,有效减轻大鼠肺组织的损伤程度>【关键词】脓毒症急性肺损伤抗炎合剂程序性坏死大鼠Experimental Study on Anti-inflammatory Decoction in Alleviating Necrosis of Lung Tissue in Rats withSepsis Induced Acuta Lung Injury Wang Haihui)Yan Guoliang,Lou Danfei, Zheng Tianhong.Shanghai Mu­nicipal Hospital of Tradihonni Chinese Medhhe,Shanghai University of Tradihonni Chinese Medhhe,Shanghai2200611ChPa.【Abshoct】Objective：To observe the interveetion effect of traditional Chinese ants-inflammatory decoction onnecrosis of lung tissue colls in rats with sepsis indnceC ncoto lung injury.Methodu：Clean grade healthy male SDrats were randomty divinep into sham operation group,mo b et group ,TCM group and Nco-1group(apoptosis inhini-too gronp).3days before anf Ptca moneling,the corresponnine drups wero used in these groups respectively.Sep­sis indncep aceto lung injura moOel was estaplishep by cecci lination and perforation(CLP).Thc rats were knlep24hoors ttea the moOel was estaplishep.TUNEL staining and immunohistochemistra were usel to detect the ne­crosis of lunn tissue-and the levels of serum inflammators factom IL-IQ,tL-6and TNF-a were measuree.Re-sultu:The levels of serum IL-IQ,t L-6ann TNF-a in the moOel were significantly higher than those in thesham operation,1X0^(!<0.61),while those in the TCM gmup and Ncc-1gmup were lowca than those in the moO-ei group(P<0.61);the Ncc-1group was more sinnificantly lower than the TCM group(P<0.61);the leveis ofapoptosis pemeptaae of Tunee stainel ceUs ant PCNA in lunn tissue of mobel group were sinnificantly highea thanthose in sham operation group(P<0.61),while those in TCM group and Ncc-1group were lower than those inmobel group(P<0.61),and there was no sinnificant dinerence betweel the two groups(P>0.05).Conclusion:An-ti-inOammatora decoction can electively renpcc the decree of lune injura by renpcinf the release of inflammatorsfactors ant apoptosis of lune tissue cclis.【Key words】Sepsis;Acute lune injurs.Anti-inflammators decoction;Necroptosis;Rats脓毒症是急危重症医学尚待攻克的重要临床难题*基金项目：上海市卫生和计划生育委员会面上项目(201740012);上海中医药大学预算内科研项目(2019LK092)△通信作者(电子邮箱：137****************)之一。