脓毒症心肌功能障碍模型大鼠的构建与评价

依达拉奉对脓毒性休克大鼠心肌细胞损伤的作用【关键词】依达拉奉；氧自由基；休克，脓毒性；心肌损伤【Abstract】 AIM: To investigate the effect of edaravone(ED)， a novel free radical scavenger， on cardiac function and myocardial cell injury in rats with septic shock. METHODS: After treatment with three different doses (6.0， 3.0 and 1.5 mg/kg) of ED to rats 1 h after septic shock， changes of MAP， LVESP， LVEDP，±dp/dtmax were determined in 4 different time phases. The activities of SOD， CAT， LDH and the concentrations of MDA， LD in myocardial tissue were measured. The pathologic change of myocardial tissue was observed by HE staining. RESULTS: Compared with septic shock group， MAP，LVESP and +dp/dtmax were increased remarkably in ED treatment groups. The activities of SOD and CAT and the concentration of MDA in ED groups were close to those in normal control group. Histological examination showed congestion， edema and inflammatory cell infiltration in myocardial tissue， while ED treatment attenuated the above pathological changes of myocardium. CONCLUSION: ED has a satisfying therapeutic effect on cardiac dysfunction in rats with septic shock， which may be related to attenuating myocardial injury.【Keywords】 edaravone; Oxygen free radicals; shock， septic; Myocardial injury【摘要】目的：观察氧自由基清除剂依达拉奉（edaravone， ED）对脓毒性休克大鼠心脏功能和心肌损伤的作用. 方法：在大鼠脓毒性休克后1 h用3个剂量ED (6.0， 3.0和1.5 mg/kg)治疗，测定休克后4个时相点平均血压（MAP）、左室收缩末期压力（LVESP）、左室舒张末期压力（LVEDP）、左室压力上升及下降最大变化速率（±dp/dtmax）等心功能指标；取心肌组织测超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、乳酸脱氢酶（LDH）活性和乳酸（LD）、丙二醛（MDA）含量，并观察形态学改变. 结果：与脓毒性休克组比较，ED可显著升高MAP，LVESP和±dp/dtmax，并使SOD，CAT活性增强以及MDA浓度降低接近对照组；组织学观察可见模型组心肌充血、水肿及炎性细胞浸润等，ED可明显改善以上形态学变化. 结论： ED具有抗脓毒性休克心功能不全的作用，其机制与减轻心肌损伤有关.【关键词】依达拉奉；氧自由基；休克，脓毒性；心肌损伤心功能不全和心肌细胞损伤是脓毒性休克的主要致命性并发症，有40%的脓毒症患者出现左、右心功能不全［1-2］. 脓毒症时菌体膜产生的内毒素（lipopolysaccharide， LPS）入血可直接或间接通过细胞因子和自由基的作用引起心肌损伤和心功能不全［3］，实验证实抗氧化剂谷胱甘肽加N乙酰半胱氨酸可明显减少脓毒症休克患者血液中活性氧浓度，改善心功能指数［4］. 依达拉奉［edaravone， ED， 3甲基1苯基2吡唑啉5酮（MCI186）］是新型强效的自由基清除剂，是临床治疗缺血性脑卒中的有效药物［5］. 我们通过观察ED对脓毒性休克大鼠心功能、心肌氧自由基和心肌病理学变化的影响，旨在为该药治疗脓毒性休克提供理论依据.1材料和方法1.2方法1.2.1动物分组及病理模型复制将大鼠分为6组，每组10只. 对照组：仅作手术对照并给予生理盐水；模型组：尾静脉注射LPS， 8 mg/kg致内毒素休克后单纯给予等体积生理盐水；阳性药对照组：以XigrisTM为阳性药对照，根据临床剂量换算剂量为19.34 mg/kg；ED高、中、低剂量组：给予ED的剂量分别为1.6， 0.8， 0.4 mg/kg. 在LPS复制脓毒性休克模型后1 h行药物治疗. 戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉，右颈总动脉插管至左心室，左股动脉导管接血压计检测平均动脉压（MAP），左股静脉导管用于给药和输液.1.2.2心功能检测指标将左心室导管连接8道生理记录仪，应用ChartV4.1.2信号处理软件记录左室收缩末期压力（LVESP），左室舒张末期压力（LVEDP）和左室压力上升及下降最大变化速率（±dp/dtmax）. 记录LPS注射后0， 2， 4， 6 h心功能指标.1.2.3心肌氧自由基测定在LPS后6 h心功能指标测完后，开胸取左心室两块0.5g组织，取其一用冰PBS冲洗干净，在PBS烧杯中剪碎及冰浴下匀浆，匀浆液在4℃下4000 r/min离心15 min，上清按试剂盒说明书应用分光光度仪检验LD， LDH， CAT， MDA及SOD含量.1.2.4心肌病理学观察取上步骤中另一块心肌经100 mL/L多聚甲醛固定，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，连续冠状切片，切片厚度4 μm，HE 染色，显微镜下观察并留存图像.统计学处理：计量资料表示为x±s，用统计学软件SPSS 11.0的ANOVA 法比较组间差异的统计学意义.2结果2.1ED对脓毒性休克大鼠心功能的作用模型组动物在休克4 h时平均动脉压（MAP）明显降低（图1A， P<0.05），并呈继续下降趋势，ED高、中、低剂量均可显著升高MAP（P<0.01），休克6 h后ED升高MAP的效应随剂量增大而增强. 脓毒性休克后大鼠心脏LVESP显著下降（图1B），4 h后下降非常明显（P<0.01），且呈进行性下降趋势，ED高、中、低剂量使LVESP升高并接近对照组水平，与脓毒性休克组比较升高非常显著（P<0.01）. 脓毒性休克大鼠+dp/dtmax也呈进行性下降（图1C），在4 h后下降非常显著（P<0.01），休克后2 h，ED中、低剂量组+dp/dtmax即可明显增强（P<0.05），休克4 h时ED各剂量组均使+dp/dtmax显著升高（P<0.01）并接近相同时相点正常水平. 脓毒性休克时大鼠LVEDP和-dp/dtmax无明显改变，除ED低剂量组在4h明显增强-dp/dtmax外（P<0.05），未见其他各剂量组对-dp/dtmax有影响作用（图1D， E）.aP<0.05，bP<0.01 vs对照组； cP<0.05， dP<0.01 vs模型组. A：平均血压（MAP）；B：左室收缩末期压力（LVESP）；C：左室压力上升最大变化速率（+dp/dtmax ）；D：左室舒张末期压力（LVEDP）；E：左室压力下降最大变化速率（-dp/dtmax）.图1依达拉奉（ED）对脓毒症休克大鼠心功能各项指标的影响2.2ED对脓毒症休克大鼠心肌生化指标的影响模型组大鼠心脏组织中SOD， CAT活性呈不同程度降低(表1)，SOD活性明显低于对照组（P<0.05）；ED 中、高剂量组SOD活性升高非常明显（P<0.05， P<0.01）；ED各剂量组的CAT活性均明显高于模型组（P<0.01）；LDH在脓毒症休克时升高，ED各剂量组对LDH活性有降低作用，但差异不明显. 模型组MDA， LD升高，ED高剂量组能显著降低MDA（P<0.01），其他各治疗组也不同程度地降低MDA，LD水平，但无统计学差异.表1依达拉奉（ED）对脓毒症休克大鼠心肌SOD， MDA， CAT， LD， LDH的影响2.3ED对脓毒症休克大鼠心肌形态学的影响光镜下观察到对照组大鼠心肌着色均匀完整，可见横纹和润盘，未见炎性细胞浸润. 模型组间质充血、水肿，血管扩张，炎性细胞浸润. 经ED治疗后心肌细胞结构完整，可见横纹和润盘，有少量炎性细胞浸润，未见明显细胞变性及坏死病灶. XigrisTM治疗后心肌细胞着色不均，有部分变性坏死，血管扩张，有灶性出血，炎症细胞浸润（图2）.3讨论ED是一种有效的羟自由基清除剂，通过清除氧自由基，抑制脂质过氧化，从而抑制细胞损伤，临床已作为脑保护剂广泛用于急性脑梗死治疗［6］. 研究发现ED可明显降低糖尿病大鼠心肌硫代巴比士酸物质、增加SOD活性并有效维持心肌细胞直径和线粒体结构［7］，也有资料表明ED能明显降低局部缺血再灌注心肌家兔血液中MDA浓度，有效抑制局灶性缺血再灌注损伤［8］. 脓毒性休克时心肌损伤和心功能不全是多种炎症介质共同参与的结果，其中氧自由基被认为是致病的重要原因. 在脓毒症早期，自由基通过激活细胞核转录因子（NFκB或AP1），诱导细胞因子合成而起促炎症作用，继而在自由基和细胞因子的协同作用下激活内皮细胞，促进炎症介质和黏附分子合成，中性粒细胞呼吸爆发(respiratory burst)产生活性氧物质（reactive oxygen species， ROS）并释放溶酶体酶而发挥毒性作用，导致细胞功能丧失和坏死，最终使器官、系统功能失调［9］. 因此脓毒症休克时防治ROS对心功能损伤具有重要意义.LVESP和+dp/dtmax为检测左心功能的指标，我们是国内外首次将ED用于治疗脓毒性休克大鼠的研究单位，发现模型组动物MAP明显降低， LVESP和+dp/dtmax降低非常显著，说明模型组出现明显心功能不全的病理变化，ED治疗后各剂量可显著升高MAP， LVESP和+dp/dtmax，并随剂量增大而增强，表明ED有改善左心功能不全的作用. 模型组的心脏组织中SOD， CAT活性明显降低，氧自由基代谢产物MDA升高，ED可使SOD， CAT活性增强，强度与剂量成正比，并显著降低MDA，表明该药可以增强心肌组织的抗氧化能力，清除氧自由基. 模型组心肌组织水肿、出血及炎性细胞浸润，ED能明显减轻上述病理变化，证明该药通过ROS减少防治了LPS造成的心肌损伤.XigrisTM的有效成分为重组活化蛋白C，是人体内的自然蛋白，其作用可以平衡脓毒血症的凝结（血液凝结）和促进纤维蛋白溶解，该药降低了重度脓毒症患者近20%的死亡风险，但能引起出血等不良反应［10］. 本资料提示该药可以部分改善心功能不全，其机制可能与心肌细胞氧自由基代谢无关，但心肌有较重的出血变化.由于脓毒症休克是临床危重患者的重要死亡原因之一，尚无有效的治疗药物，基于以上试验结果，我们认为ED具有明确的作用机制，对于脓毒症休克的治疗具有进一步研究的价值和一定的开发潜力.参考文献［1］ Turner A， Tssamitros M， Bellomo R. Myocardial cellinjury in septic shock［J］. Crit Care Med， 1999，27(9):1775.［2］ Parrillo JE， Parker MM， Natanson C， et al. Septic shock in humans: advances in the understanding of prognosis， cardiovascular dysfunction， and therapy［J］. Ann Intern Med，1990，113(3):227-242.［3］ Karima R， Matsumoto S， Higashi H， et al. The molecular pathogenesis of endotoxic shock and organ failure［J］. Mol Med Today，1999，5(3):123-132.［4］ Peake SL， Moran JL， Leppard PI. NacetylLcysteine depresses cardiac performance in patients with septic shock［J］. Crit Care Med， 1996，24（12）:1302-1310.［5］阳清伟，刘鸣，张世波，等. 依达拉奉治疗急性脑梗死的系统评价［J］. 中国循政医学杂志，2006，6（1）:26-30.［6］ Wang LF， Zhang HY. A theoretical investigantion on DPPH radicalscavenging mechanism of edaravone ［J］. Bioorg Med Chem Lett，2003，13(21):3789-3792.［7］ Hayashi T， Mori T， Sohmiya K， et al. Efficacy of edaravone， a free radical scavenger， on left ventricular function and structure in diabetes mellitus［J］. J Cardiovase Pharmacol， 2003，41(6):923-929.［8］ Wu TW， Zeng LH， Wu J， et al. Myocardial protection of MCI186 in rabbit ischemiareperfusion［J］. Life Sci， 2002，27(19):2249-2255.［9］ Closa D， FolchPuy E. Oxygen free radicals and the systemic inflammatory respinse ［J］. IUBMB Life， 2004，56(4):185-191.［10］沈芊，曾艳. 严重脓毒症治疗药物重组人活化蛋白C［J］. 药学进展，2003，27（6）：382-383.。

大鼠脓毒症模型建立方法
嘿，你知道咋给大鼠整出脓毒症模型不？先得选好健康的大鼠哇，这就跟挑运动员似的，得挑身强体壮的。

然后给大鼠来点细菌或者毒素啥的，让它感染上。

但这可得小心着点儿，别整太多把大鼠给搞死了。

就像做饭放盐似的，得恰到好处。

这过程安全不？那肯定得小心再小心哇！稍有不慎大鼠可能就一命呜呼了。

稳定性嘛，也得看操作手法。

要是技术不过关，那可就没准儿了。

那这脓毒症模型有啥用呢？哎呀，用处可大了去了。

可以研究脓毒症的发病机制呀，找到治疗的办法。

就好比侦探破案，得先有现场才能找出凶手嘛。

我听说有个实验室就用这方法做脓毒症模型，效果还不错呢。

通过观察大鼠的症状和生理指标，找到了一些治疗的新思路。

这不是超棒嘛！
大鼠脓毒症模型建立虽然有难度，但真的很有意义，值得一试。

内质网应激在脓毒症大鼠心肌损伤中的作用目的：研究内质网应激与脓毒症大鼠心肌损伤的关系。

方法：35只雄性SD 大鼠采用随机数字表法分为假手术组（n=7）和模型组（n=28），模型组下设2、6、12、24 h 四个时相点，每个时相点7只。

采用自动生化分析仪检测大鼠血CK-MB及cTnI水平。

采用HE染色检测心肌损伤情况，免疫组化技术检测心肌组织ERS标志物GRP78蛋白表达。

结果：（1）模型组大鼠6、12、24 h血清CK-MB 及cTnI均较对照组显著升高（P＜0.05）；各时相点病理改变明显；（2）心肌组织中GRP78蛋白表达在2 h即较对照组升高，并呈逐渐增加趋势（P＜0.05）；（3）GRP78表达与心肌损伤具有显著正相关（r=0.711，P＜0.05）。

也与血清cTnI水平呈显著正相关（r=0.612，P＜0.05）。

结论：脓毒症启动了ERS，并且ERS与心肌损伤、血cTnI水平呈正相关关系。

ERS可能在脓毒症大鼠心肌损伤中起重要作用。

脓毒症是指各种致病微生物或其毒素存在于血液或组织中，是机体对感染的一种全身性炎性反应，是严重感染、重度创伤、大手术后、重症胰腺炎和休克等常见的并发症，常导致心、肺、肾、胃肠道、血液系统等重要器官损伤，其中心肌损伤无疑具有至关重要的作用。

而关于脓毒症所致心肌损伤的机制，目前已知的有氧化应激、细胞凋亡、NO水平失调等[1-2]，近年有研究表明，内质网应激反应（endoplasmic reticulum stress ERS）[3]可能参与其中，而GRP78蛋白是ERS 的经典标志物。

本研究旨在观察脓毒症大鼠GRP78蛋白的变化规律及与心肌损伤的关系，为ERS在脓毒症发病过程中的作用奠定实验基础。

1 材料与方法1.1 实验动物清洁级雄性SD大鼠35只，质量150～200 g，由大连医科大学实验动物中心提供。

采用随机数字表法分为对照组（n=7）和模型组（n=28），其中，模型组按照内毒素注射时间不同再设2、6、12、24 h四个时相点，每组7只。

大鼠急性心肌梗死动物模型的建立和评估1 对象与方法?1. 1研究对象清洁级雄性Spreague-Dawley (SC)大鼠20 只，体质量250〜300 g (275± 15. 3) g,由广州中医药大学实验动物中心提供。

随机分为假手术组和心肌梗死组。

1 .2 研究方法?1 . 2. 1 MI 模型的建立[2-3] 氯胺酮( 75 mg/kg )腹腔注射麻醉，经口人工呼吸(导管置于大鼠的舌体与上颌之间)，连接小动物呼吸机予以正压通气，潮气量3〜5 ml/100 g ，呼吸频率60次/min，吸呼比1? : ?1。

左侧胸部备皮，消毒手术区域，经胸骨左缘第4 肋间开胸，钝性分离肌肉，以眼科开睑器撑开肋间肌切口，暴露心脏，剪开心包，于肺动脉圆锥与左心耳之间距主动脉根部2~3 mm处，用7-0眼科无创缝合针，穿过前降支深部连同一小束心肌一并结扎。

根据心电图和心肌组织颜色确定冠脉结扎成功。

逐层缝合胸壁，自主呼吸恢复后拔出通气导管。

大鼠清醒后送动物房饲养,规律照明,自由进食和饮水。

术后连续3 d 予以青霉素40 万U 腹腔注射以预防感染。

假手术对照组除不结扎冠状动脉外，其余步骤相同。

1. 2. 2 超声心动图检查[4]3% 戊巴比妥钠( 45 mg/kg )腹腔注射麻醉，用Philips Sonos 5500型多功能超声诊断仪( S12探头，频率5~12 MHz),在胸骨旁以二维超声和M型超声测量左室收缩末径（LVSd、左室舒张末径（LVDd、舒张期左室后壁厚度（PWd、舒张期左室前壁厚度（AWd Ml组为梗死区室壁厚度）、左室射血分数（LVEF和短轴缩短率（FS）,分别计算梗死区变薄指数（BBZS即舒张期左室前壁厚度/后壁厚度）和非梗死区增厚指数（ZHZS即舒张期左室后壁厚度/前壁厚度）。

所有参数均在3 个连续的心动周期中进行测量并取平均值。

1．2．3 血流动力学检查[5]3%戊巴比妥钠（45mg/kg）腹腔注射麻醉，气管切开插管，保持呼吸道通畅。

辛伐他汀预处理对脓毒症大鼠心肌细胞 ICAM-1表达的影响及意义张立涛;于织波;赵鹤龄【摘要】目的观察心肌细胞间粘附分子-1（ICAM-1）在脓毒症大鼠心肌细胞的表达，同时探讨辛伐他汀预处理对其表达的影响及意义。

方法雌性Wistar大鼠60只随机分为正常组、脓毒症组和辛伐他汀组，每组20例，应用盲肠结扎穿孔法制造脓毒症模型。

辛伐他汀组喂养辛伐他汀20 mg/kg，1次/d，共2周。

2周后辛伐他汀组与脓毒症组大鼠行盲肠结扎穿孔术。

术后48 h取各组大鼠心肌组织制成石蜡切片，采用免疫组织化学染色方法观察心肌细胞ICAM-1的蛋白表达。

结果免疫组织化学染色显示脓毒症组大鼠心肌细胞ICAM-1蛋白表达于术后48 h较正常组明显增加（ P ＜0铑．05），辛伐他汀组大鼠心肌细胞ICAM-1蛋白表达与脓毒症组比较明显减弱（ P ＜0．05），与正常组比较差异有统计学意义（ P ＜0．05）。

%Objective To observe the expressions of ICAM-1 in myocardial cells of rats with sepsis ,and to explore the effect and significance of simvastatin pretreatment on ICAM-1 expression .Methods Sixty female Wistar rats were randomly divided into three groups:control group ( n=20 ) , sepsis group ( n =20 ) and simvastatin group ( n =20 ) .The animal models with sepsis were established by cecal ligation and puncture (CLP).The rats in simvastatin group were treated withsimvastatin ,20mg/kg,once a day for two weeks before CLP.After teo weeks the rats both simvastatin group and sepsis group underwent CLP ,then 48h after operation the myocardium tissues of rats in three groups were collected to be made paraffin section , and the expressions of ICAM-1protein in myocardial cells were detected by immunohistochemistry ( IH ) staining.Results Immunohistochemistry staining showed that the expression levels of ICAM-1 in sepsis group were significantly higher than those in control group at 48h after CLP ( P <0.05),however,which in simvastatin group were significantly decreased,as ompared with those in sepsis group ( P <0.05),and there were significant differences in expression levels of ICAM-1 between simvastatin group and control group ( P<0.05 ).Conclusion Simvastatin can attenuate the expression of ICAM-1 in myocardial cells of rats with sepsis ,as a result,which can partially improve heart function during sepsis .【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2013(000)019【总页数】3页(P2896-2898)【关键词】脓毒症;辛伐他汀;细胞间粘附分子-1;免疫组织化学染色【作者】张立涛;于织波;赵鹤龄【作者单位】050071 石家庄市，河北省人民医院急诊科;050071 石家庄市，河北省人民医院风湿免疫科;050071 石家庄市，河北省人民医院重症医学科【正文语种】中文【中图分类】R59脓毒症是由于感染引起的全身炎性反应综合征，并常导致组织损伤和器官功能异常，进一步发展可导致脓毒症休克、多器官功能障碍综合征。

脓毒症动物模型制作及评价脓毒症动物模型是研究脓毒症发病机制和临床防治的基础。

建立标准的符合临床的脓毒症动物模型是脓毒症研究领域重点课题之一［1］。

本文就脓毒症动物模型制作中动物种类选择、制作方法等，予以综述并进行模型评价。

1 脓毒症动物模型动物以及制作方法的选择近交系小型动物如大鼠、小鼠或豚鼠，自身纯度较高、无特异性病原菌且价格较低。

大型哺乳动物，如猪、羊、狗等动物，可进行血流动力学监测和提供充足标本，便于进行较长试验观察。

灵长类动物免疫系统与人类高度相似，可用于评价炎性细胞因子以及免疫系统反应，但价格昂贵而且受到严格的伦理学制约。

另外，动物自身特点也可供实验利用：如羊对内毒素敏感，只需相当于狗的几十至几千分之一剂量（0.6μg/kg）即可出现肺血管损伤等脓毒症症状［2］。

猪肾脏、心血管和消化系统的生理特点和解剖结构与人类最相似，多用于严重脓毒症器官功能障碍的研究。

具有明确基因特征动物如内毒素耐受型敏感型小鼠，成为从分子水平揭示脓毒症发病机制的重要工具［3］。

脓毒症动物模型使用的制作方法也是需要考虑的重要问题。

不同种属宿主对内毒素或致病菌的敏感性、反应性各异：如啮齿类动物、猫和狗对内毒素具有一定的耐受性，而灵长类动物、兔和羊则对内毒素较敏感。

即使是相同动物对不同细菌侵袭反应也不同：如腹腔注射金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的小鼠，抗生素可诱发前者循环中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的早期释放，而后者TNF-α释放在时间和变化幅度上均无明显影响。

在应用抗TNF-α抗体分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌对感染的大鼠进行治疗时，结果显示对后者的保护作用优于前者［4］。

即使是同一种动物同一种制模病原体，采取的攻击方式和剂量不同，所引起的动物体内细胞等炎性因子反应亦不同。

如给予亚致死量的LPS可诱导动物产生高动力循环特点，而致死量LPS则使动物呈现低动力循环特点。

所以脓毒症动物模型的选择，除了要考虑研究的目的以及路径之外，还要考虑制模所使用的方法以及在研究结果的解释方面考虑模型自身的特点以及局限，作出合理客观的解释。

普伐他汀对脓毒症大鼠模型TNF—α的影响和心肌保护的作用摘要目的探讨普伐他汀对脓毒症大鼠模型TNF-α的影响和心肌保护的作用。

方法100只大鼠，随机分为研究组和对照组，各50只，制作大鼠脓毒症模型。

研究组给予研钵粉碎的普伐他汀，20 mg/（kg·d）加入2 ml生理盐水连续灌胃24 h。

对照组采取生理盐水连续灌胃24 h。

比较两组治疗前、治疗3 h、治疗6 h 肿瘤坏死因子（TNF-α）和心肌肌钙蛋白I含量。

结果两组治疗前TNF-α和心肌肌钙蛋白I比较差异无统计学意义（P>0.05）；研究组治疗3 h、6 h TNF-α（6.34±1.57）、（11.2±8.5）ng/ml和心肌肌钙蛋白I（0.15±0.03）、（0.36±0.22）ng/ml 优于对照组（P＜0.05）。

结论普伐他汀能够减轻脓毒症大鼠体内炎症水平，对减轻心肌损伤有保护作用。

关键词普伐他汀；脓毒症；大鼠模型；肿瘤坏死因子；心肌保护【Abstract】Objective To investigate influence by pravastatin on tumor necrosis factor-α （TNF-α）in sepsis rat model and its myocardial protection effect. Methods A total of 100 rats were randomly divided into research group and control group to establish sepsis rat model，with 50 cases in each group. The research group received crushed pravastatin by 20 mg/（kg·d）in 2 ml normal saline through continuous lavage for 24 h. The control group received continuous lavage for 24 h by normal saline. Comparison was made on TNF-α and cardiac troponin I contents between the two groups before treatment and in 3 and 6 h of treatment. Results There was no statistically significant difference of TNF-α and cardiac troponin I before treatment between the two groups （P>0.05）. The research group had better TNF-α as （6.34±1.57）and （11.2±8.5）ng/ml and cardiac troponin Ias （0.15±0.03）and （0.36±0.22）ng/ml in 3 and 6 h of treatment than those in the control group （P＜0.05）. Conclusion Pravastatin can reduce inflammation level in rat with sepsis，and it contains protective effect for reducing myocardial damage.【Key words】Pravastatin；Sepsis；Rat model；Tumor necrosis factor；Myocardial protection越来越多研究显示，他汀类药物还能改善脓毒症模型及患者的预后，可能降低体内C反应蛋白（CRP）水平、减弱补体活性，调节炎症介质表达而达到保护内皮细胞的作用。

脓毒症相关性脑病大鼠动物模型的建立脓毒症相关性脑病在脓毒症患者是一种常见并发症，合并脓毒症相关性脑病者病死率明显增加。

目前临床对于脓毒症相关性脑病仍是排除性诊断，缺乏客观的诊断指标，如生化指标、影像学指标、电生理学指标等，导致流行病学及发生机制均不明确，因此确立相对客观统一的诊断标准势在必行。

动物模型的选择建立对其机制及治疗方法研究具有重要意义。

研究人员应用脑电图和诱发电位监测早期诊断脓毒症相关性脑病，取得一定效果，但尚未形成统一结论。

本研究根据已有脓毒症相关性脑病模型研究的进展，选用盲肠结扎法（CLP）建立脓毒症模型，通过监测大鼠神经行为学改变、脑电图信号及体感诱发电位改变来早期诊断脓毒症相关性脑病，并对所建立的大鼠脓毒症脑病模型进行分析，为以后的研究提供参考。

1 材料与方法1.1 实验动物清洁级成年雄性SD大鼠30只，体质量200～250 g，由中南大学动物学部提供。

1.2 主要药品、试剂、仪器PBS购自鼎国生物工程公司，水合氯醛为中南大学湘雅医院药剂科化学分析室配制；多聚甲醛购置岳麓区鼎盛实验器材公司；戊二醛、无水乙醇、二甲苯、苏木素、伊红、锇酸等由中南大学病理教研室提供。

套管针购置BD公司。

脑立体定位仪，RM6240生物信号记录器，Olympus BX41型光学显微镜（日本），LKB-Ⅲ型超薄切片机（瑞典），H-7500型透射电镜（日本），石腊切片机（美国），生化培养箱（广东），格兰士微波炉WP700，隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂），荣事达家用冷藏冰箱BCD-202，MIAS医用图像分析管理系统电子摄像。

1.3 实验方法1.3.1 大鼠脑电及诱发电位监测电极放置30只大鼠称质量、编号分别在造模前10 d放置脑电监测电极。

水合氯醛腹腔注射麻醉后，大鼠头部用立体定位仪固定，常规外科消毒，在头颅中间矢状位作3 cm的皮肤切口，将前囟点和其他颅骨缝暴露。

在颅骨面行局麻（10%利多卡因喷雾），移去骨膜。

CLP致脓毒血症大鼠模型建立一、实验目的利用CLP技术建立脓毒血症大鼠模型二、实验原理脓毒血症患者最常见的感染源来自腹腔且易造成腹腔感染，所以腹腔感染模型是目前最常见的动物模型。

鼠类盲肠结扎穿刺（CLP）是临床研究脓毒血症常见模型，是模仿腹腔脓毒血症感染的临床过程，引起多菌群感染，最终导致脓毒血症。

三、实验材料和设备成熟期雄性Sprague-Dawley大鼠，体重400-500g。

外科手术器械：手术台，手术刀，刀片，剪刀，刮毛器，镊子，止血钳，持针器，缝皮针，1号线，4号肠线，18g针头，血管夹，医用胶布，PE50导管（厂家），探针，硬膜外穿刺针，肝素帽，留置针，注射器（规格）。

实验药品：1.5%戊巴比妥钠，2%利多卡因，丁苯诺啡，75%酒精，碘伏，肝素钠（10000U），蒸馏水，生理盐水。

四、实验方法和步骤1.购买SD大鼠，适应性饲养1周，自由饮水，饮食；2.术前禁食12小时；3.称重以1.5%戊巴比妥钠40mg/kg（4%水合氯醛 0.1ml/10g抽取麻药，一般3-5分钟起效，可以维持1小时左右。

），腹腔注射（先将动物固定,腹部用酒精棉球擦试消毒，然后在左或右侧腹部将针头刺入皮下，沿皮下向前推进约0.5厘米，再使针头与皮肤呈45 度角方向穿过腹肌刺入腹腔，此时有落空感，回抽无肠液、尿液后，缓缓推入药液。

），麻醉大鼠，止血钳夹小鼠脚趾确定麻醉深度；4.将大鼠背位固定于手术台上，剪去颈部和腹部被毛；5.取血导管的制备：取PE50导管约15cm，一侧剪契口，另一端平口，对楔面要进行简单打磨处理,以防表面粗糙划破血管外壁。

抗凝处理是将导管用装满肝素钠的注射器灌流、冲洗,保证导管每个部位都充分接触肝素钠。

6.颈静脉置管术：a.用碘伏常规消毒颈部，铺无菌手术单。

b.于胸锁乳突肌连线中点起向颈部垂直延伸15mm,做皮肤切口约1.5cm，暴露皮下结缔组织，用血管钳逐层钝性分离至显露颈静脉(特征是在胸廓入口处，有轻微搏动，直径2～4 mm)，2%利多卡因3-5滴局部浸润1min，完全游离一段长1-1.5cm血管，血管夹分别夹闭远心端和近心端，血管下穿过两根1号线。

脓毒症大鼠心肌细胞凋亡及糖皮质激素的作用脓毒症是临床上常见的急危重症，具有较高的发病率和致死率[1-2]。

脓毒症出现心脏损害时病死率高达到70%[3]。

在重度脓毒症或脓毒症休克患者即使心输出量正常或者升高，心肌抑制或心肌损伤也是很常见[4]。

目前随着对脓毒症的进一步了解以及对凋亡机制的深入研究，调控心肌细胞凋亡可能成为减轻脓毒症心脏损害的重要治疗途径之一。

本实验采用盲肠结扎穿孔法制作脓毒症大鼠模型，来观察心肌细胞抗凋亡蛋白Bcl -2的表达及心肌细胞凋亡率的变化，以及地塞米松对脓毒症大鼠心肌细胞抗凋亡蛋白Bcl -2及心肌细胞凋亡率的影响。

1 材料与方法本实验共用60只雄性健康Wistar大鼠，体质量230～280 g，首都医科大学实验动物中心提供。

注射用头孢哌酮舒巴坦钠（辉瑞制药有限公司，大连，中国）、APES（货号AR0001）、兔抗鼠Bcl-2多克隆抗体（货号BAO412）、即用型SABC （货号SA1052）、DAB显色试剂盒（货号SA2021）（以上试剂均为武汉博士德生物工程有限公司，中国）、0.5%的胃蛋白酶消化液（pH 1.5）（品牌：amresco，北京中生瑞泰科技有限公司，中国）及碘化丙啶500 μg/mL（货号：1122，北京中生瑞泰科技有限公司，中国）、RNA酶100 mg/mL（货号R6513，Sigma公司，美国）、石蜡切片机（美国A0829）、流式细胞仪（型号：FACSCalibur，美国BD 公司）、地塞米松（天津药业焦作有限公司）、磷酸缓冲液（上海双螺旋生物科技有限公司）1.1 实验方法60只雄性健康Wistar大鼠，随机（随机数字法）分为2组（对照组和激素组），每组又依据时间点随机分为3个亚组（6 h、24 h、72 h组）。

每组动物均参照文献报道采用盲肠结扎穿刺法制作动物模型，术后 4 h开始给予舒普深200 mg/kg，2次/d，尾静脉注射。

对照组给予生理盐水尾静脉注射，激素组给予地塞米松0.5 mg/kg尾静脉注射，并于相应时间点处死。

脓毒症大鼠早期心肌损害与功能障碍的实验研究心功能下降是严重烧伤及脓毒症患者常见致命的并发症,50%脓毒症患者出现不同程度的心肌抑制，病死率极高［1］，所以维持正常的心功能是成功救治严重烧伤及脓毒症患者的关键之一。

脓毒症可引起心肌功能抑制即收缩功能损害, 以心脏扩大、射血分数下降、对容量负荷收缩反应差、收缩峰值压力/收缩末期容积比值下降为特征。

本实验通过有创性心肌力学测量，及心肌细胞电镜下观察和血清肌钙蛋白I检测探讨早期脓毒症心肌细胞损害和心肌功能的变化。

1 材料与方法1.1 实验动物与分组清洁级SD大鼠72只，雌雄各半，体质量（250±30）g，购于安徽医科大学动物中心［许可证号：scxk(皖)2005-001］。

72只SD大鼠染色编号，随机（随机数字法）分成3组:正常对照组(A组，n=8);假手术组（B组，n=32）和脓毒症组(C组，n=32)。

假手术组和脓毒症组又分为手术后3、6、12、24 h时相点4个亚组（B1，B2，B3，B4，C1，C2，C3，C4），每时相点亚组8只。

动物分笼饲养。

1.2 动物模型制备试验性饲养一周，术前各组大鼠禁食过夜（自由饮水）。

依照相关文献［2］方法行盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症动物模型。

以10%水合氯醛(0.03 ml/kg)皮下注射麻醉后固定、铺无菌洞巾。

沿腹正中线作约1.5 cm切口，找到盲肠，在盲肠根部结扎盲肠，避免结扎回肠及盲肠系膜血管。

用18 号针穿刺盲肠3次，防止针孔闭合，挤压盲肠致有粪便溢出。

之后，将盲肠还纳腹腔，逐层缝合腹壁切口。

术毕，立即在大鼠皮下注射生理盐水5 ml抗休克。

假手术组打开腹腔找到盲肠后缝合腹壁切口，盲肠不作穿刺。

1.3 心肌力学测量正常对照组在3 h时点，假手术和脓毒症组在3、6、12、24 h 4个时点分批用水合氯醛麻醉大鼠, 经左颈内动脉插入聚乙烯导管至左心室腔内,利用BIOPAC的11A2055型生物机能实验系统, 分别于3、6、12、24 h 4个时点行左室收缩峰压(LVSP)、左室压力最大上升速率(+dp/dtmax)、左室压力最大下降速率(-dp/dtmax)指标测定。

脓毒症（Ｓｅｐｓｉｓ）作为急危重症领域的棘手难题，日益引起临床医师及科研工作者的关注。

近十年来，现代生物科技的飞速发展极大地促进了人们对脓毒症发病机制的认识，并推动了脓毒症治疗措施的改进和更新。

其中，脓毒症动物模型的应用对此起到了十分重要的作用。

脓毒症动物模型的不断发展也反映了人们对脓毒症本质的认识正在逐渐深入，总结和分析现有动物模型，对于如何建立更贴近临床实际的脓毒症动物模型、合理设计实验以及准确解释动物实验数据都具有重要意义。

１ 应用脓毒症动物模型的意义在过去的几年中，人们对感染后炎症反应分子机制的研究已取得显著进展，其中很大部分是利用体外观察的方法对细胞生理学研究的成果。

应明确的是，尽管体外实验的手段先进而且方便，但要更好地了解脓毒症时体内炎症反应的发生、发展过程和其他病理生理变化，还需采用临床相关的脓毒症或脓毒性休克动物模型进行深入的探讨。

一般认为，利用动物模型进行脓毒症研究具有以下优点。

１．１　在进行具有高度创伤性的操作或进行器官离体实验时只能使用动物模型。

特别是在研究脓毒症的病理生理变化时通常需要采集组织标本（如肝、肺、肾等），而这些标本很难从临床获得。

只有利用动物模型才可能方便地采取脓毒症各个阶段的组织标本。

１．２　临床脓毒症病因较复杂，难以判断其确切的发病时间。

很多患者还伴有其他严重的非相关疾病。

并且，临床的脓毒症患者通常接受多种支持治疗，这些治疗不可避免地会影响对脓毒症自然病程的观察。

因此，直接探讨人类脓毒症的病理生理机制相当困难，而采用动物模型进行实验则可免受上述因素的干扰。

１．３　由于临床脓毒症患者的遗传学背景非常复杂，加之患者年龄、性别、同时存在的其他疾病以及支持治疗等因素均可导致临床资料的高度变异性。

而要控制这种变异只能靠加大样本量，这无疑将会耗费更多的时间并给临床脓毒症试验带来很大的经济压力。

由于动物模型的生物学差异较人类要小，因此所需的样本量也明显少于临床观察。

１．４　在探讨脓毒症的发病机制时经常要使用一些药物或试剂（如某种细胞因子的抗体或拮抗剂等），这些制剂可能具有毒性或未经过临床的安全性检验不能用于人体。

革兰氏阳性细菌所致脓毒症大鼠心肌损伤的实验研究革兰氏阳性细菌所致脓毒症大鼠心肌损伤的实验研究摘要：脓毒症是一种严重的全身性感染疾病，导致多器官功能障碍和死亡。

其中，心肌损伤是脓毒症的重要并发症之一。

本研究旨在探讨革兰氏阳性细菌所致脓毒症大鼠心肌损伤的机制，并对可能的治疗方法进行初步评估。

我们使用大鼠模型，将其注射革兰氏阳性细菌引发脓毒症，然后观察其心肌损伤程度和病理学变化。

结果显示，革兰氏阳性细菌引发的脓毒症可导致心肌损伤，表现为心肌细胞水肿、坏死和炎症细胞浸润。

同时，炎症介质如肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6的表达也显著增加。

我们进一步研究了激活Toll样受体-4信号通路对心肌损伤的影响，并发现该信号通路的激活能够进一步加剧心肌细胞损伤。

此外，我们尝试了一种可能的治疗方法，即抑制Toll样受体-4信号通路。

结果显示，抑制该通路可以减轻心肌损伤的严重程度。

综上所述，革兰氏阳性细菌引发的脓毒症可导致心肌损伤，该过程可能与Toll样受体-4信号通路的激活有关。

抑制该通路可能是治疗脓毒症相关心肌损伤的一种潜在策略。

关键词：脓毒症，心肌损伤，革兰氏阳性细菌，炎症，Toll样受体-4引言：脓毒症是一种由于机体对感染过程中产生的病原体毒素和炎症反应过度放大而引起的严重感染疾病。

近年来，脓毒症的发病率和死亡率呈上升趋势，严重影响人类健康。

脓毒症常引起多器官功能障碍，其中心脏是最常受损的器官之一。

革兰氏阳性细菌作为脓毒症的常见病原体之一，在脓毒症中起着重要的作用。

心肌损伤是脓毒症的主要并发症之一，且其机制尚不完全清楚。

因此，本研究旨在通过建立脓毒症大鼠模型，探讨革兰氏阳性细菌所致心肌损伤的机制，并初步评估一种可能的治疗方法。

材料与方法：本研究使用雄性SD大鼠，将其随机分为对照组和实验组。

实验组大鼠经静脉注射革兰氏阳性细菌悬液引发脓毒症，对照组接受生理盐水注射作为对照。

注射后，观察大鼠一系列心肌损伤指标的变化，包括心肌损伤标志物肌钙蛋白T的水平、心肌组织形态学变化以及炎症细胞浸润等。

轻度CLP模型大鼠在脓毒症早期即发生心肌收缩与舒张功能障碍唐翔诩;杨多猛;邢云;李红梅;吕秀秀;王彦平;陆大祥;王华东【摘要】AIM:To observe the time pattern of intrinsic myocardial dysfunction and other organ dysfunction in a rat model of mild cecal ligation and puncture (CLP).METHODS:Male SD rats were randomly divided into sham group and CLP group.At 6 h, 9 h and 12 h after sham operation or CLP, intrinsic myocardial systolic and diastolic functions were determined by Langendorff system.The expression of cardiac tumor necrosis factor (TNF)-α, intercellular adhes ion molecule-1 (ICAM-1) and vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) was measured.In addition, serum activity of aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) as well as blood urea nitrogen (BUN) were analyzed.For evaluating pulmonary edema, the lung wet-dry weight (W/D) ratio was calculated.RESULTS:In mild CLP rats, the mortality rate was 26.7% on day 10 after CLP.At 9 h and 12 h after CLP, the maximum rate of positive and negative changes in left ventricular pressure (±dp/dt) were decreased in CLP group compared with sham group.At 6 h after CLP, cardiac mRNA expression of TNF-α, ICAM-1 and VCAM-1 was increased in septic rats compared with the controls.At 9 h after CLP, cardiac protein levels of TNF-α and VCAM-1 were higher in CLP group than that in sham group (P<0.05).The serum AST activity at 9 h and ALT activity at 12 h after CLP were increased in CLP group compared with sham group.However, nodifference in BUN and lung W/D ratio at 6 h, 9 h and 12 h between CLP group and sham group was observed.CONCLUSION:Our findings highlight the presence of intrinsic myocardial dysfunction at 9 h after CLP in a rat model of mild CLP.Intrinsic myocardial dysfunction occurs earlier than the liver and kidney dysfunctions.%目的:利用轻度盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症大鼠模型,比较脓毒症大鼠心功能与其它器官功能障碍发生的时间.方法:将大鼠随机分为假手术组和盲肠结扎穿孔术组,分别于手术后6 h、9 h和12 h用Langendorff装置检测大鼠心肌收缩与舒张功能,并测定心肌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和血管内皮细胞黏附因子1(VCAM-1)的表达;同时检测血清TNF-α水平以及大鼠肝、肾功能和肺湿/干重比值.结果:轻度CLP术后10 d,大鼠的死亡率为26.7%.CLP术后9 h与12 h左心室内压最大上升与下降速率显著低于假手术组;CLP术后6 h, 心肌TNF-α、ICAM-1和VCAM-1的mRNA 表达显著高于假手术组,CLP术后9 h 心肌TNF-α和VCAM-1的蛋白表达显著升高.CLP术后9 h血清天冬氨酸氨基转移酶活性和12 h丙氨酸氨基转移酶活性高于假手术组.而术后6 h、9 h和12 h,大鼠血尿素氮水平、肺湿/干重比与相应时点的假手术组比较,差异没有统计学显著性.结论:轻度CLP模型大鼠在脓毒症发生后6 h 心肌炎症因子表达增多,9 h后即发生心肌内在收缩与舒张功能障碍,其发生早于肝、肾功能损伤.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2017(033)005【总页数】6页(P832-837)【关键词】脓毒症;心肌功能障碍;离体心脏灌流;多器官功能障碍【作者】唐翔诩;杨多猛;邢云;李红梅;吕秀秀;王彦平;陆大祥;王华东【作者单位】暨南大学基础医学院病理生理学系,国家中医药管理局三级科研实验室,广东广州 510632;暨南大学基础医学院病理生理学系,国家中医药管理局三级科研实验室,广东广州 510632;暨南大学基础医学院病理生理学系,国家中医药管理局三级科研实验室,广东广州 510632;暨南大学基础医学院病理生理学系,国家中医药管理局三级科研实验室,广东广州 510632;暨南大学基础医学院病理生理学系,国家中医药管理局三级科研实验室,广东广州 510632;暨南大学基础医学院病理生理学系,国家中医药管理局三级科研实验室,广东广州 510632;暨南大学基础医学院病理生理学系,国家中医药管理局三级科研实验室,广东广州 510632;暨南大学基础医学院病理生理学系,国家中医药管理局三级科研实验室,广东广州 510632【正文语种】中文【中图分类】R363.2+1;R515.3脓毒症是感染引起的失调的宿主反应导致的致命性器官功能障碍[1]，这种多器官功能障碍，包括肝、肺、肾与心功能障碍等，是重症监护病房(intensive care unit，ICU)患者死亡的重要原因。

大鼠心肌功能障碍模型超声斑点追踪评价体系建立与应用王美霞;薛红红【期刊名称】《陕西医学杂志》【年(卷),期】2022(51)4【摘要】目的:探讨大鼠心肌功能障碍模型的超声斑点追踪评价体系的建立与应用价值。

方法:48只清洁级SD大鼠随机平分为三组:正常组、阿霉素低剂量组、阿霉素高剂量组,其中阿霉素低剂量组、阿霉素高剂量组按12 g/kg给予腹腔注射浓度为1 g/ml、2 g/ml的盐酸阿霉素溶液,正常组按6 ml/kg给予腹腔注射0.9%生理盐水。

结果:三组的室间隔厚度(IVS)、左房内径(LA)、左心室后壁厚度(LVPW)、左心室射血分数(LVEF)等常规超声指标对比差异无统计学意义(均P>0.05)。

阿霉素低剂量组、阿霉素高剂量组的左心室收缩期前壁与后壁径向应变率都低于正常组(均P<0.05),阿霉素高剂量组低于阿霉素低剂量组(P<0.05)。

阿霉素低剂量组、阿霉素高剂量组的血清羟丁酸脱氢酶(HBDH)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平都高于正常组(均P<0.05),阿霉素高剂量组高于阿霉素低剂量组(P<0.05)。

在阿霉素低剂量组、阿霉素高剂量组32只大鼠中,Pearson分析显示左心室收缩期前壁、后壁径向应变率与CK、LDH、HBDH存在负相关性(均P<0.05)。

结论:超声斑点追踪技术能有效评价大鼠心肌功能障碍模型的心功能,左心室收缩期径向应变率与血液心肌功能生化指标存在相关性,具有很好的应用价值。

【总页数】4页(P406-409)【关键词】超声斑点追踪;阿霉素;心肌功能障碍;径向应变率;室间隔厚度;大鼠【作者】王美霞;薛红红【作者单位】西北大学附属神木市医院超声科;延安大学附属医院超声医学科【正文语种】中文【中图分类】R332【相关文献】1.超声二维斑点追踪成像技术评价大鼠急性心肌梗死后局部心肌存活性2.二维超声斑点追踪成像评估大鼠不同程度心肌损伤的应用价值3.传统超声与超声二维斑点追踪技术对小鼠心肌梗死模型评价的比较4.斑点追踪超声心动图在心肌梗死模型大鼠检查中的应用及其意义5.斑点追踪技术评价NaAsO2暴露致大鼠心肌功能障碍模型的构建因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。