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植物总RNA提取实验方法原理通过裂解液β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free H2O将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
实验材料新鲜植物组织试剂、试剂盒β-巯基乙醇乙醇蛋白液RW1 漂洗液RW 蒸馏水无菌水仪器、耗材研钵离心管离心机移液枪移液管收集管吸附柱水浴锅实验步骤一、新鲜植物组织称重后取100 mg迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100 mg放入研钵），加入10体积（1 ml）RLT(请确定已加入β-巯基乙醇)和1体积（100 ul）PLANTaid 室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液RLT立刻充分接触以抑制RNA酶活性。
二、将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡15秒，13 000 rpm离心5-10分钟,沉淀不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid，取450 ul 裂解物上清转到一个新离心管。
三、加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
四、将混合物(每次小于700 ul，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）13 000 rpm离心60秒，弃掉废液。
五、加700 μl 去蛋白液RW1，室温放置30秒，12 000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
如果DNA残留明显，可在加入RW1后室温放置5分钟后再离心。
六、加入500 ul漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇），12 000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
加入500 ul漂洗液RW，重复一遍。
七、将吸附柱RA放回空收集管中，13 000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
植物组织RNA提取的要点与技巧从植物组织中提取RNA 是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。
要进行Northern杂交分析，纯化mRNA 以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR 及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA 。
因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA 是顺利进行上述研究的关键所在。
从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA ，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。
一般认为在这些植物组织中，或富含酚类化合物，或富含多糖，或含有某些尚无法确定的次级代谢产物，或RNase的活性较高。
在完整的细胞内这些物质在空间上与核酸是分离的，但当组织被研磨，细胞破碎后，这些物质就会与RNA 相互作用。
酚类化合物被氧化后会与RNA 不可逆地结合，导致RNA 活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA 的丢失，或形成不溶性复合物；而多糖会形成难溶的胶状物，与RNA 共沉淀下来；萜类化合物和RNase会分别造成RNA 的化学降解和酶解。
对于这些植物材料，用常规的RNA 提取方法（如胍法、苯酚法和十六烷基三甲基溴化胺法等）难以提取出其RNA 。
如Lбpez-Gбmez等在用常规的方法提取芒果果实的RNA 时未能成功，他们的结果分为三种情况：提出的RNA 已被降解；RNA 的得率很低；得到的RNA 不能进行体外翻译。
他们认为在果实成熟时各种酶的活性增强，其中也包含RNase，不溶性的淀粉转化为可溶性的多糖，芒果果实细胞壁中特殊的成份，以及果实中高含量的多酚化合物都是干扰RNA 提取的因素。
Tesniere等在用苯酚法和胍法提取葡萄果实的RNA 时，发现RNA 与某种未知化合物凝聚成不溶性的复合物，并且这种未知化合物在230nm和270nm处有强的光吸收，从而干扰了RNA 紫外吸收的测定。
因此能否有效地去除多糖、酚类化合物、RNase和干扰RNA 提取的其它代谢产物是提取高质量植物RNA 成败的关键。
RNA提取方法1、在超净工作台中取500uL裂解液RLT加入到1.5mL的离心管中，加入5uL β-巯基乙醇，60uL PLANTaid混匀备用；2、在95%乙醇擦过的桌面上用液氮研磨适量植物组织，取50mg 细粉转入上述装有RLT和PLANTaid的离心管中，立即剧烈震荡2-3min充分裂解，将裂解物13000rpm常温离心10min。
3、在新的离心管中加入新开封的无水乙醇250uL，按1:2的比例加入上清液500uL，用移液枪慢慢混匀，13000rpm常温离心60s。
4、每个吸附柱RA中加入750~800uL的上清液，静置后13000 rpm 常温离心1min，弃废液。
可以2管或3管合并到一个吸附柱RA 中。
5、向吸附柱RA中加入350~400uL的去蛋白液RWL，放置5min，12000 rpm常温离心30~60s，弃废液，将吸附柱放回到收集管中。
6、向吸附柱RA膜中央加入50uL DNase I工作液（DNase I 5uL，buffer5uL，无RNase 水40uL），37℃烘箱放置30min。
7、向吸附柱RA中加入350~400uL的去蛋白液RWL，放置5min，12000 rpm常温离心30~60s，弃废液，将吸附柱放回到收集管中。
该步骤可再重复一次。
8、加入漂洗液RW（请先检查是否已加入污水乙醇）500uL，静置后12000 rpm常温离心30s，弃掉废液；加入500uL漂洗液RW，重复一次。
9、将吸附柱RA放回空收集管中，12000 rpm常温离心30s，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留的乙醇抑制下游反应。
10、取出吸附柱RA，放入一个新的RNase free离心管中，加入25uL 灭菌后的RNase free water（事先在80℃水浴中加热），室温放置2min，12000 rpm常温离心1min；将试管中的溶液吸出后再次加到吸附柱中，室温放置2min，12000 rpm常温离心1min。
CTAB法提取植物总RNA一、操作步骤：1.先在65o C水浴中预热适量的CTAB提取液（加入2% B—巯基乙醇）;2.液氮中迅速研磨新鲜的（或—70o C保存的）植物组织样品,充分研磨成均匀的粉末后取0.05-0。
1g置于1。
5mL离心管中（离心管中预先加入1mL CTAB 提取液), 迅速涡旋混匀30-60s, 然后65o C水浴4—5min；3.加入等体积的氯仿/异戊醇(24:1）涡旋混匀,10000x g 离心15min沉淀蛋白质；4.将上清液转移至新的离心管，重复抽提一次，沉淀蛋白质;5.将上清液转移至新的离心管，加入等体积的4mol/L LiCl，4o C条件下沉淀2 h以上使RNA变性.6.4o C， 12000x g离心10min沉淀RNA，弃上清去除DNA，然后分别用500 uL 70％和100％的乙醇洗涤沉淀除去杂质;7.倒掉乙醇，瞬时离心，吸干离心管中的液体,超净工作台晾干沉淀,10 min。
Tips:缓缓倒掉乙醇，避免倒掉沉淀.尽量吸干残留液体，适当调整晾干沉淀的时间，确保乙醇完全挥发.晾干沉淀的时间不宜过长，否则不利于RNA的溶解.8.加入50 μL mixture(44 μL DEPC—H2O，5 μL 10 × DNaseⅠbuffer，1 μLDNaseⅠ）,37 °C孵育30 min。
Tips：配置mixture时应先加DEPC—H2O，再加buffer，最后加DNaseⅠ，配制好的mixture应充分混匀后再分装。
样品较多时，应计算好mixture的需求量,并适当增加配制量，因为分装mixture时会有损耗。
9.加入500 μL DEPC—H2O稀释RNA样品,加入200 μL氯仿/异戊醇（24/1）,缓慢摇匀10min。
Tips:需稀释RNA样品，以利于在氯仿/异戊醇抽提后转移上清液。
10.4 °C，12000 × g,离心10 min。
RNA提取（试剂盒法）1、取适量的植物组织（0.5g）多次加液氮研磨至粉末状，将粉末状样品（50-100mg）加入到含有450uL Buffer RL（使用前加入50×DTT Solution，1mL Buffer RL中加入20uL50×DTT，现用现配）的1.5mL灭菌管中，移液器反复吸打至无明显沉淀2、12,000rpm，5min，4℃3、上清转移到新的1.5mL管4、加入1∕2倍体积的无水乙醇（可能出现沉淀）吸打混匀5、立即将混合液（含沉淀）转入RNA Spin Column（含2mLCollection Tube）中。
（若混合液体积大于600uL，分批加入，每次加入体积不大于600uL）6、12,000rpm，1min，弃滤液，将RNA Spin Column放回2mLCollection Tube7、将500uL Buffer RW A加入RNA Spin Column，12,000rpm，30s，弃滤液8、将600uL Buffer RWB加入RNA Spin Column，12,000rpm，30s，弃滤液（RWB使用前加70mL100％乙醇）（沿RNA Spin Column管壁四周加入Buffer RWB有助于完全冲洗粘附于管壁上的盐分）9、DNase I消化⑴DNase I反应液：5uL 10 × DNase I Buffer，4uL Recombinant DNase I（RNase free，5U∕uL），41uL RNase free dH2O到新的1.5ml RNase free Tube 混匀⑵向RNA Spin Column膜中央加入50uLDNase I 室温静置15min⑶向RNA Spin Column膜中央加入350uL Buffer RWB，12,000rpm，30s，弃滤液10、重复步骤811、将RNA Spin Column重新置于2mLCollection Tube，12,000rpm，2min12、将RNA Spin Column置于1.5mL RNase free Collection Tube上，在RNA Spin Column 膜中央加入50-200uL RNase free dH2O或0.1％DEPC水，室温静置5min13、12,000rpm，2min 洗脱RNA14、若想提高RNA收量可再向膜中央加入50-200uL RNase free dH2O或0.1％DEPC水；若想提高RNA浓度可将第一次的洗脱液重新加回至RNA Spin Column室温静置5min，12,000rpm，2min 洗脱RNA。
Trizol法提取植物总的RNA及反转录可用于RT-PCR【中文版】一、植物总RNA 的提取抽提RNA 所用的研钵酒精灼烧5-10min或灭菌.，器皿均高温高压灭菌，以去除RNA 酶，所有试剂都保证没有RNA 酶污染。
1) 1.5ml 离心管,取0.1g 组织在液氮中研磨至粉末, 立即加入1ml Trizol，涡旋充分混匀后放置2min。
2) 加0.2体积（氯仿Chloroform），剧烈振荡15s（vortex），室温放置3min（或不放置，直接离心）。
3) 4℃，12000rpm 离心5min，样品会分成3 层，取上层水相，取上清。
4) 加等体积的异丙醇，混匀，4℃放置10min以上。
或可以-80℃过夜。
5) 4℃，12000rpm 离心20min，4℃弃上清，管底管侧形成胶状沉淀（可看到白色沉淀）。
6) 加1ml 75%乙醇，充分溶解沉淀。
4℃，12000rpm 离心5min。
倒掉上清，用移液器吸干。
7) 晾干约10 min。
(不要晾太长时间，看不到水就可以加灭菌水)8) 加50μl灭菌的超纯水，65℃溶解，-20℃（最好-80℃）保存。
（注：要是处理DNase就不能加这么多水。
可以加5μl）整个提取步骤最好咋在4℃或冰上完成二、DNase I 处理消化植物总RNA 中的基因组DNA1) 将上述全部提取的植物总RNA 5μl，然后顺序加入1μl 10×缓冲液，1μl DNase，3μl RNase-free水，总体积10μl，充分混匀后，37℃温育30 min。
2）加入300ul 灭菌水提高体积，然后加入300ul PCI，vortex；4℃，12000rpm 离心5min；3) 加入1/10 体积3M 醋酸钠(autoclaved) pH 5.2, 和2倍体积的100% EtOH；（-20℃，10-30min或可以-80℃过夜）4) 4℃，12000rpm 离心15min，6)75% EtOH, 300ul, 12000 rpm 5min7) dry （10-15min）and add 30-50 ul of ddH2O三、反转录cDNA1) 在上述总体积为11μl 反应液中加入1μl Oligo(dT)18 引物4μl 5×缓冲液，2 μl dNTP，1μl 反转录酶，1μl RNase 抑制剂，总体积20μl，充分混匀后，42℃温育1-1.5hr。
西师大版五年级下册《总复习》数学教案一、教学内容二、教学目标1. 熟练掌握分数的乘除法运算，并能解决实际问题。
2. 理解长方形和正方形面积的计算方法，能够运用到实际情境中。
3. 掌握体积的概念和体积单位，能够进行简单的体积计算。
三、教学难点与重点教学难点：分数的乘除法运算，长方形和正方形面积的计算，体积的计算。
教学重点：分数乘除法的运算规律，长方形和正方形面积的计算方法，体积的计算方法。
四、教具与学具准备教具：黑板、粉笔、教学课件、模型。
学具：练习本、铅笔、直尺、量角器。
五、教学过程1. 导入：通过实践情景引入，让学生收集生活中与分数、面积、体积有关的物品，激发学生学习兴趣。
a. 分数的乘除法：以水果切分为例，引导学生理解分数的乘除法运算。
b. 长方形和正方形的面积：以房间铺砖为例，让学生了解面积的概念和计算方法。
c. 体积和体积单位：以水杯倒水为例，让学生感受体积的概念，并认识体积单位。
2. 例题讲解：a. 分数乘除法运算：讲解分数乘除法的运算规律，结合实际例题进行讲解。
b. 长方形和正方形面积计算：以实际图形为例，讲解面积计算方法。
c. 体积计算：通过实际物品的测量，讲解体积计算方法。
3. 随堂练习：针对每个知识点设计练习题，让学生及时巩固所学内容。
六、板书设计1. 分数的乘除法运算规律。
2. 长方形和正方形面积的计算公式。
3. 体积的计算方法。
七、作业设计1. 作业题目：a. 计算分数的乘除法：2/3 × 4/5，1/4 ÷ 2/3。
b. 计算长方形和正方形面积：一个长方形长为6厘米，宽为4厘米，求面积；一个正方形边长为5厘米，求面积。
c. 计算体积：一个长方体长为10厘米，宽为5厘米，高为2厘米，求体积。
答案：a. 2/3 × 4/5 = 8/15，1/4 ÷ 2/3 = 3/8。
b. 长方形面积：6厘米× 4厘米 = 24平方厘米；正方形面积：5厘米× 5厘米 = 25平方厘米。
提叶片rna的方法(二)提叶片RNA的方法1. 介绍在研究植物基因表达和功能时，提取叶片组织中的RNA是一个非常重要的步骤。
利用叶片RNA可以进行基因表达分析、转录组测序以及RNA互作等研究。
本文将介绍几种常用的提取叶片RNA的方法。
2. TRIzol法TRIzol法是一种常用的利用酚和酒精提取RNA的方法。
下面是该方法的步骤：1.准备含RNase抑制剂的TRIzol试剂。
2.将叶片样品加入离心管中，加入适量的TRIzol试剂。
3.使用离心机将样品离心，使细胞破碎释放RNA。
4.加入氯仿并离心，将RNA从其他成分中分离。
5.将上清液转移到新离心管中，加入异丙醇沉淀RNA。
6.离心并去除上清液，使用70%乙醇洗涤RNA。
7.最后将RNA溶解在适量的RNase-free水中。
优点：具有较高的RNA纯度和完整性。
缺点：操作时间较长且操作步骤繁琐。
3. CTAB法CTAB法是一种利用阳离子表面活性剂和高盐浓度提取RNA的方法。
下面是该方法的步骤：1.准备含RNase抑制剂的CTAB提取缓冲液。
2.将叶片样品研磨并加入CTAB提取缓冲液。
3.使用离心机将样品离心，将细胞破碎释放RNA。
4.加入氯仿并离心，将RNA从其他成分中分离。
5.将上清液转移到新离心管中，加入异丙醇沉淀RNA。
6.离心并去除上清液，使用70%乙醇洗涤RNA。
7.最后将RNA溶解在适量的RNase-free水中。
优点：适用于含有较多多糖物质的样品。
缺点：操作时间较长且有一定的毒性。
4. 快速法快速法是一种利用商业试剂盒快速提取RNA的方法。
下面是该方法的步骤：1.准备含RNase抑制剂的快速提取缓冲液。
2.将叶片样品加入离心管中，加入适量的快速提取缓冲液。
3.使用离心机将样品离心，使细胞破碎释放RNA。
4.加入商业试剂盒提供的悬浮液，使RNA与载体结合。
5.将上清液转移到新离心管中，加入洗涤缓冲液洗涤RNA。
6.离心并去除上清液，使用去离子水洗涤RNA。
提取植物和动物的核酸DNA和RNA是生物学研究中的重要步骤，它们可以帮助科学家们更深入地了解生物的遗传信息和基因表达。
本文将介绍植物和动物核酸DNA和RNA的提取方法，让读者对这一过程有一个清晰的认识。
一、植物核酸DNA提取方法1. 细胞破碎：需要将植物组织破碎，以释放细胞内的DNA。
这可以通过磨粉或切碎的方法来实现。
2. 细胞裂解：接下来，使用裂解缓冲液来裂解细胞膜和细胞壁，释放DNA分子。
裂解缓冲液的配方可以根据不同植物的特性进行调整。
3. 蛋白质沉淀：通过向裂解液中加入溴化苯酚等物质，可以沉淀掉大部分蛋白质，使得DNA分子得以分离。
4. 乙醇沉淀：将裂解液中的DNA用乙醇沉淀，这样可以将DNA分子从溶液中提取出来。
5. 溶解和纯化：将沉淀的DNA分子溶解在适当的缓冲液中，并进行进一步的纯化和浓缩处理，得到纯净的DNA溶液。
二、植物核酸RNA提取方法1. 细胞破碎：与DNA提取类似，首先需要将植物组织破碎，以释放细胞内的RNA。
2. 细胞裂解：使用特制的裂解缓冲液来裂解细胞膜和细胞壁，释放RNA分子。
不同植物组织的RNA特性可能有所不同，需要根据具体情况进行优化。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶来降解蛋白质，使RNA得以更好地纯化。
4. 酚-氯仿提取：利用酚-氯仿混合液可以有效地将RNA从裂解液中提取出来，与DNA提取类似。
5. 洗涤和纯化：对得到的RNA进行洗涤和纯化处理，得到纯净的RNA溶液。
三、动物核酸DNA提取方法1. 组织裂解：将动物组织进行细胞破碎，释放细胞内的DNA。
2. 细胞裂解：使用特制的裂解缓冲液来裂解细胞膜，释放DNA分子。
对于硬质组织，可能需要较强的裂解条件。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶来降解蛋白质，使DNA得以更好地纯化。
4. 酚-氯仿提取：利用酚-氯仿混合液可以有效地将DNA从裂解液中提取出来，与植物DNA提取类似。
5. 溶解和纯化：对得到的DNA进行溶解和纯化处理，得到纯净的DNA溶液。
