柠檬酸盐脱钙液

格式：pdf
大小：183.00 KB
文档页数：2

下载文档原格式

病理组织脱钙液传统组方的比较分析

病理组织脱钙液传统组方的比较分析赵宝忠;张毅;刘志兰【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2014(030)006【总页数】2页(P699-700)【关键词】组织脱钙;盐酸脱钙液;硝酸脱钙液【作者】赵宝忠;张毅;刘志兰【作者单位】天津市北辰区宜兴埠镇社区卫生服务中心,天津300402;天津医科大学药学院,天津300070;天津市第二医院检验科,天津300141【正文语种】中文【中图分类】R-33病理组织脱钙液传统组方种类繁多，组分剂量差异较大。

本文就相关溶质、溶剂、溶液的性质及对病理组织成分的作用，对各种传统组方质量进行比较分析(传统组方组分剂量的统一换算以100 ml溶液量计，组织钙盐以碳酸钙计)。

传统组方:(1)Ⅰ组方［1，2］:浓硝酸 5 ml，去离子水 95 ml;(2)Schaffer组方［3］:浓硝酸5 ～7.5 ml，去离子水 92.5 ～95 ml;(3)Ⅱ组方［1，2］:浓硝酸 10 ml，去离子水90 ml;(4)Ⅲ组方［2］:浓硝酸 4.8 ml，尿素 3 ～ 5 g，去离子水95 ml;(5)Clayden 组方［4］:浓硝酸5 ～10 ml，尿素0.1 g，去离子水90 ～95 ml;(6)Haug 组方［3］:浓硝酸 16.7 ml，邻苯三酚 1.7 g，去离子水83.3ml;(7)Ⅳ组方［4］:浓硝酸7.5 ～15 ml，37%甲醛5 ml，去离子水 80 ～87.5ml;(8)Alexander组方［3］:浓硝酸6.2 ml，37%甲醛4.5 ml，去离子水 89.3 ml;(9)Schridde 组方［3］:浓硝酸 16.7 ml，37% 甲醛 8.3 ml，去离子水 75 ml;(10)Ⅴ组方［2］:浓硝酸 4.3 ml，37% 甲醛 4.3 ml，甘油 4.3 ml，去离子水87 ml;(11)Thoma 组方［3］:浓硝酸 15.4 ml，37%甲醛 7.7 ml，95%乙醇 77 ml;(12)Perenyi组方［4］:浓硝酸 4 ml，浓铬酸 0.15 ml，30% 乙醇 96 ml。

EDTA 脱钙液使用说明书

EDTA脱钙液使用说明书储存条件：常温保存，有效期1年。

产品内容：Components SL1500 EDTA脱钙液（pH7.2-7.4）500mL说明书1份产品说明：1.在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。

由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。

骨组织含钙量最多。

除了骨组织之外其它组织也可发生钙化，在组织中形成钙化区，所以需要经过脱钙过程。

脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。

2.为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织中的抗原不受破坏，需要对含钙的组织固定之后再进行脱钙。

然后再行常规制片。

3.EDTA与羟基磷灰石结晶的外层钙结合，形成可溶性的非离子化合物，同时又促进晶体内层的结合钙向外转移。

借助这种连续性的作用使羟基磷灰石晶体逐渐融解，pH中性时可起螯合作用。

其特点是脱钙时间长，对骨组织的损伤少，酶活性(碱性磷酸酶)和细胞抗原性保存较好，制作的切片可用于组织化学和免疫组化分析。

4.主要用途：用于骨组织、牙齿等脱钙。

使用说明：1.骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。

2.组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。

3.组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。

4.组织转移至20～30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10～30天或更长时间。

如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。

如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周～3个月即可，每周更换一次，直至终点。

亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3～5min，中间间隔3～5min。

5.用蒸馏水冲洗数次。

6.常规脱水、包埋。

注意事项：1．为使脱钙更为充分，每次最好更换新液，这既弃去脱掉的钙盐，增加脱钙强度，又起到降低脱钙的温度。

2．脱钙时间以大头针能刺进骨密质为完成脱钙标准。

3．脱钙温度不要太高，一般以室温(25℃)为宜，高温可加快脱钙速度，但可破坏组织中的核酸而影响染色效果。

认识枸橼酸什么是柠檬酸盐透析液PPT课件

目前，在ＣＲＲＴ等领域，枸橼酸抗凝已经得到广泛的到应用，从目前的结果来看，是十分有前景的。
柠檬酸盐透析时钙离子浓度问题
使用柠檬酸盐透析液时柠檬酸浓度很低，即使在进行高通量透析过程中，也无需时刻对游离钙离子的浓度值进行监察，亦无需额外对回流血液中钙离子进行管理。柠檬酸在机体内最终代谢为碳酸氢根。与醋酸相比，有着更短的半衰期，在结束透析１５分钟内，枸橼酸将代谢完毕，钙离子水平就恢复正常水平，抗凝血作用也随即结束。所以不会长期影响钙离子水平和凝血状态。
在八十年代后期，由于传统纯醋酸盐的诸多缺点，逐渐被碳酸氢盐透析液取代。
但是目前应用的碳酸氢盐透析液均保留了 3~8mmol/L醋酸盐和醋酸盐。
原因：配制纯碳酸氢盐pH值为8.6，此时 CO32-与透析液中的Ca2+、Mg2+结合，形成不可溶性沉淀。醋酸盐加入使pH保持在6.87.5，防止形成沉淀形成。
复合物（TAT-复合物）以及F1 + F2凝血酶原片段值进行测量，其值没有显著变化。相似的结果出现在Leimbach
et al. 对7例病患治疗前后活化凝血时间测定（ACT）值
的观测结果中。Ahrenholz et al. 进一步证实了以上结论，并特别指出在他的实验中，当降低肝素使用剂量50%的情况下，ACT值下降，并且实验中没有出现体外循环凝血现象。
柠檬酸盐对凝血参数的影响
由于柠檬酸盐中只含有1.75-0.8mmol/l 的柠檬酸，因此其抗血凝活性只能在透析过程中得以彰显，而不将它当作全身性的抗血凝剂来使用。
正如前文提到的Gabutti et al.对由普通碳酸氢盐透析法转为使用柠檬酸透析法的病患总计共375例透析治疗实验的
观察结果显示，透析治疗前与透析治疗后对抗凝血酶Ⅲ

柠檬酸过滤的步骤分享

柠檬酸过滤的步骤分享
柠檬酸的发酵因菌种、工艺、原料而异，但在发酵过程中还需要掌握一定的温度、通风量及pH值等条件。

柠檬酸过滤的过程大家可能不是十分了解。

下面，就来为大家介绍一下柠檬酸的过滤步骤。

1.原料澄清和过滤：橙汁、梅子汁中含有大量的果胶和杂质，需要澄清，以促进杂质的沉淀，然后用压滤机过滤。

2.中和：预先用碳酸钙或石灰中和，优先加入15%碳酸钙进行中和。

具体方法是：当将橙汁、梅子汁和其他咸酸水加热到75摄氏度时，逐渐加入碳酸钙浆液，继续加热2小时，初始温度控制在5摄氏度左右，可以升至100摄氏度，溶液当它是青色时，意味着中和反应已经完成。

然后使沉淀物静置，沉淀物是柠檬酸钙(主要是柠檬酸钙)。

3.脱盐：得到的柠檬酸钙含有盐，可以用水洗涤，加热至70-80℃，重复几次直至盐被除去，并干燥使用。

4.酸脱色：将柠檬酸钙浆液加热至60-70摄氏度，加入35%硫酸，煮沸约3小时，直至柠檬酸钙完全分解，即静置沉淀，上清液为柠檬酸溶液。

将深红色柠檬酸用1%至2%活性炭脱色半小时，得到无色透明溶液。

德兰梅勒利用膜分离技术为生物制药、食品饮料、发酵行业、农产品深加工、植物提取、石油石化、环保水处理、空气除尘、化工等
行业提供分离、纯化、浓缩的综合解决方案，满足不同客户的高度差异化需求。

帮助客户进行生产工艺的上下游技术整合与创新，帮助企业节省投资、降低运行费用、减少单位消耗、提供产品质量、清洁生产环境，助力企业产业升级。

骨组织脱钙技术及其应用

骨组织脱钙技术及其应用张绪斌;熊正文;张华东;解放军第【摘要】@@ 骨组织不同于一般的软组织,是一种坚硬的结缔组织,由粘多糖和一些胶原纤维样骨胶纤维构成的骨样组织和沉着于其中的无机盐(骨盐)形成的.【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2011(024)011【总页数】4页(P1264-1267)【关键词】骨组织;脱钙技术;应用【作者】张绪斌;熊正文;张华东;解放军第【作者单位】解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000【正文语种】中文【中图分类】R954.65;R392.1骨组织不同于一般的软组织,是一种坚硬的结缔组织,由粘多糖和一些胶原纤维样骨胶纤维构成的骨样组织和沉着于其中的无机盐(骨盐)形成的。

无机盐以羟基磷灰石结晶的形式存在,其中绝大部分为水合磷酸钙,此外还包括微量碳酸盐和柠檬酸盐等[1,2],因此骨和其他一些已钙化的组织在脱水、透明等制片前必须将组织中的钙盐用脱钙剂除去,才能制成4～5μm厚的切片。

目前,常用的脱钙剂主要有单纯酸类、混合酸类、螯合剂、离子交换树脂和电解脱钙等方法[3～6],尤其是近年来应用微波技术辅助脱钙明显缩短了脱钙时间,改善了HE、组织化学、免疫组织化学染色和原位杂交[7～11]。

现将骨组织的脱钙技术及应用等有关内容简介如下。

1 骨组织的组织学特点[1,2]骨组织由骨基质和骨细胞组成,骨基质是由有机物质和无机物质紧密结合而成,主要成分有:(1)胶原纤维:为Ⅰ型胶原;(2)粘蛋白:为胶原纤维间的无定型物质;(3)骨盐:主要是羟基磷灰石;(4)酶:包括碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和胶原酶等。

软骨基质是由软骨母细胞分泌丰富的蛋白多糖组成的,HE染色呈淡蓝色,A lcian蓝染色阳性(蓝色),甲苯胺蓝呈异染性反应(紫红色),软骨的胶原属Ⅱ型胶原。

免疫组化技术规范

5．冲洗：常用的冲洗液为PBS或TBS缓冲液，要严格执行冲洗步骤，防止因冲洗不净引起的背景着色，缓冲液中加入Tween20可以增强冲洗效果。
6．检测系统：通用的检测系统有生物素标记的ABC、SP、LSAB等，此类检测系统较为经济，日前仍有不少医院在使用。非生物素类检测系统价钱较贵，由于不需通过生物素的结合，可以避免内源性生物素的干扰，其特点：敏感、省时、方便、背景低。
一、免疫组化成功的要素
病理科医生要有相当的免疫组化诊断知识和免疫组化技术经验，要清楚认识免疫组化技术是一门实验性、技术性非常强的技术，要多了解多种抗体在组织中的表达情况，以及影响免疫组化结果的各种因素，只有提高医生的免疫组化诊断水平才能避免错误的判断，才能确保免疫组化诊断的准确性。病理技术人员是免疫组化实验成功的关键因素，操作人员要有丰富的免疫组化的理论知识及熟练的免疫组化染色技术，十分清楚每一个步骤的应用原理，使实验结果更具可靠性。可靠的实验试剂和实验方法是每个实验室的必备条件。由于实验方法多种多样，抗体的品种繁多，每个实验室都应当确保高质量高效价的试剂，并摸索出最佳的实验条件。优质的免疫组化取决于有效的抗原修复、敏感的检测系统、合适的实验质控对照及熟练和有责任心的技术人员。
2．固定：在众多的组织固定液中(如甲醛、乙醇、戊二醛、多聚甲醛等)，不同的实验方法在使用上各有千秋。但在保持组织细胞结构的完整性、抗原可测定性、组织渗透性以及试剂的价格上，福尔马林是最好、既经济又通用。而含酸或含汞的固定液对抗原保存均不理想。组织离体后固定一般不要超过30分钟，在常温条件下固定时间为8-24小时。同时还要注意避免福尔马林过度固定造成的组织抗原丢失，有研究发现新鲜组织经过福尔马林一周固定后组织抗原丢失严重，抗原几乎不能被检测，因为组织固定后会引起蛋白或蛋白分子之间形成交联，导致抗原位点遮盖，可以通过抗原修复方法来修正，若加抗体前不采用抗原修复，则免疫组化染色常不能到达理想结果或不成功。组织同样不能长时间放置在70%的乙醇中，酒精固定后的组织形态不如福尔马林固定的组织。脱钙液对抗原破坏较为严重，因此在组织脱钙前最好在福尔马林液中固定48小时，若组织没有固定透则酸会破坏抗原，脱钙液中酸的浓度与脱钙时间都必须尽量控制在最低的限度。

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。

方法选择12例骨组织，随机分为3组。

A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA 脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。

结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。

PLANK 脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。

结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。

但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK 脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。

硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。

标签：脱钙液；骨组织；免疫组化染色骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。

如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。

本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。

1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。

1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。

③脱钙液Ⅲ：PLANK脱钙液，配制方法为氯化铝10 g，甲酸50 mL，10%福尔马林10 mL，冰乙酸1.5 mL，加蒸馏水至总体积100 mL。

柠檬酸的提取工艺

5.影响过滤速度的主要因素
（1）发酵醪的性质（2）温度（3）过滤的推动力（4）过滤介质
（5）助滤剂
（1）培养基液化不良、发酵质量不佳、
染菌后的发酵醪和被杂菌污染了的 “陈发酵醪”以及醪中悬浮颗粒的大小、含纤维量的多寡、保持良好的菌球体或菌球体被破坏都影响过滤速度。（2）温度对过滤速度影响很大。（3）柠檬酸发酵醪中的固体颗粒所形成的滤饼属可压缩性滤饼，注意压力要逐渐增加，特别开始过滤时。
（2）pH的控制
中和终点pH对柠檬酸钙的质量有决定性的影响， pH在偏酸性范围时，柠檬酸钙的质量比偏碱性条件下纯的多，但溶解度也相应增加，在接近和达到碱性范围时，发酵醪中固有的可溶性有机杂质（主要是蛋白质和碳水化合物），会形成胶黏性物质而析出，许多弱酸络合物也会变成不溶性化合物，这些杂质都会混入钙盐沉淀中。因而造成与因素（1）中所述的同样后果。
V Vh = t(过滤+洗涤+装拆+准备) = 式中
V
∑ t
Vh----生产能力，即每1h平均所得的滤液量（m3） V ----一循环操作（四个阶段）周期所的滤液量（m3） ∑ t----整个循环周期的总时间（h）
过滤机的生产能力主要受过滤速度
所控制。由上式求得的Vh的量，除以该过滤机的总面积，即该机的平均过滤速度。

（5）在固体颗粒细小、胶体较多、粘度大的物料中加助滤剂是提高过滤速度的较好方法。助滤剂本身必须是颗粒均匀、性质坚硬、理化性能稳定的不可压缩性物质。助滤剂可以在过滤机上形成预涂层，作为过滤介质使用，也可以按一定比例均匀地混于被滤液中，然后一起被送入过滤机中，可形成较疏松的滤饼，降低其可压缩性，使滤液能顺畅通过。过滤结束后被除去。需要回收利用的滤饼，不能加助滤剂。

一种用于制作骨骼组织切片的新脱钙液

、
℃
。
in
后二甲苯脱蜡依次经过梯
。
对照组
30 ％
盐酸脱钙液制备的切片：布满波纹染色偏红对
，，
度乙醇由高到低至
m
7 0 ％乙醇后水洗
，
(5 ) 人苏木精染液
、
10
。
比度及整体观不佳
in
后水洗
、
1％
盐酸乙醇分化水洗
m
1％
、
氨水返蓝水洗
，
( 6 ) 入 1 ％水溶性伊红染液 2
in
后水洗梯度乙醇脱水由低
。
3
讨论
到高至无水乙醇溶液
间
、
二
甲苯透明中性树胶封固
，
注意事项： ( 1 ) 脱钙的骨骼体积若加大应延长脱钙时
。
在 Et 常病理技术工作中有多种对骨骼的脱钙方法和脱
、
、
在捞片前载玻片上薄层涂抹蛋白甘油
( 4 ) 切片在烤箱中烤
30
m
捞片水温
44
用新脱钙液制备的切片：骨小梁形态完整骨髓染色适中
、
图3 图
4
用新脱钙液制备的切片：骨小梁形态完整骨髓显示清晰
，
脱钙液制备的切片布满波纹染色偏红颜色对比度及切片
整体观不佳 ( 图

脱钙方法总结

缺：
（1）该液对细胞核作用较慢，使细胞核着色较差。
（2）要用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少12小时。
4．Perenyi’s液：
10%硝酸4份，0.5%铬酸3份，无水乙醇3份。
5mm厚的骨组织块脱钙时间需要2-7天。
优点：
（1）该液是一种暖和的脱钙液，可能由于铬酸和乙醇的存在可以抑制组织泡软。
厚度5mm骨组织块脱钙3-7天。
优点：
（1）细胞核染色相当好。
（2）不需要水洗，脱水时酸就会首先被脱出来。
缺点：使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
6．甲酸液：
甲酸10ml，10%福尔马林盐90ml。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要3-7天。
优点：
（1）脱钙同时可以对组织固定。
（2）对细胞核染色比较好。
（2）细胞核和细胞浆细微结构着色均好。
（3）推荐该液作为常规脱钙使用。
（4）组织脱钙后不需要碱性液中和和流水冲洗。脱钙组织直接移到90%乙醇中。
缺点：
（1）脱钙较慢，因此，紧急情况下不能使用。
（2）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
5．Von Ebener’s液：
饱和水溶液氯化钠50ml，蒸馏水50 ml，浓盐酸8 ml。
9．AFIP甲酸-柠檬酸钠液：
A液：甲酸25ml，蒸馏水25ml。B液：枸橼酸钠（结晶）10g，蒸馏水50ml。
临用时A液和B液等量混合，每日换1次，因为柠檬酸钠可以和钙离子螯合，具有促进脱钙的作用。
10．蒋维中（Jangweizhong’s）液：
盐酸80ml。甲酸70ml，三氯化钙50g，冰醋酸25ml甲醛100ml，生理盐水900ml。
缺点：脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

柠檬酸盐脱钙液
简介：
在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。

这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。

对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。

然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。

用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。

Leagene 柠檬酸盐脱钙液是缓冲脱钙液，属于缓慢脱钙液，主要由柠檬酸、柠檬酸盐、硫酸锌等组成。

其优点是：①经柠檬酸盐脱钙液的组织染色结果好；②对组织的结构损害小。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm 。

2、组织固定后，用PBS 清洗3次。

3、组织用蒸馏水洗清洗3次。

4、组织转移至20~30倍体积的柠檬酸盐脱钙液中，脱钙天或更长时间。

如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。

如果必要，更换新的柠檬酸盐脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周～3个月即可，每周更换一次直至终点。

5、用蒸馏水冲洗数次。

6、常规脱水、包埋。

注意事项：
1、厚度5mm 的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可，大多数在14～60天即可。

2、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。

脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。

3、脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。

4、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。

5、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。

编号名称 DD0002 Storage 柠檬酸盐脱钙液 500ml RT 避光使用说明书 1份
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

附录：
脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。

物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。