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红细胞ABO 血型（反定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO 血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用试管法检测红细胞ABO 血型（反定型）。
三、原理用已知的A1、B、O标准红细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。
四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(反定型)确认。
五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：A1、B、O试剂各1支，10ml/支；5、贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻。
6、有效期：自检定合格之日起2个月；7、试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。
3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。
八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管3支，分别标明A1型细胞、B型细胞、O型细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管，再分别用滴管加入A1、B、O型试剂红细胞悬液1滴。
2、，摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s。
3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
红细胞ABO血型（反定型）结果凝集强度判断对照表红细胞凝集反应描述凝集强度镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散混合凝集外观分布溶血，上清液中有游离血红蛋白溶血红细胞凝集成一大块，血清清晰透明4+红细胞凝集成数小块，血清尚清晰3+红细胞凝块分散成许多小块，周围可见到游离红细胞2+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞1+镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细±胞镜下未见凝集，红细胞均匀分布阴性4、ABO 血型（反定型）表现型反应格局表九、质量控制 1、对新进批号的试剂应作亲和力与效价验定。
抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体）包装规格：10ml预期用途：1、专用于定性鉴定人ABO血型（正定型）2、ABO血型系统是临床输血、器官移植中最重要的血型系统，错误的ABO血型定型导致的输血反应将给受血者带来十分严重的后果。
因此，《中国输血技术操作规程》规定，ABO血型鉴定必须通过正反定型。
正定型是用已知的抗A和抗B血型定性试剂测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；反定型是用已知ABO血型的红细胞测定血清中有无相应的抗A抗体或/和抗B抗体。
检验原理：根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A或（和）抗B抗体，可以将红细胞血型分为A型、B 型、AB型和O型。
根据抗A和抗B抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，可以鉴定ABO血型。
ABO血型表现型反应格局表见下表：ABO血型表现行反应格局表主要组成成分：1、本品由抗A血型定型试剂、抗B血型定型试剂各1支组成。
2、本品由法国GIAGAST公司提供的杂交瘤细胞培养上清液和本公司自制的杂交瘤细胞培养上清液按4:1比例混合后，加入适量稳定剂、染色剂、防腐剂配置而成。
贮存条件及有效期:1、储存条件：2-8℃避光保存。
如果长时间储存在高温或反复冻融会使试剂失去活性。
2、有效期：储存条件下有效期24个月。
适用仪器：本品为非仪器配套试剂。
样本要求：按照临床输血技术规范中的血液样本采集步骤，采集患者或供血者、受血者的血液，红细胞抗凝或不抗凝样本。
严重溶血、脂血、污染标本不适用本项检测。
检验方法：1、平板法（玻片法）（1）加1滴抗A或抗B试剂于玻片上。
（2）再加1滴10%的被检红细胞悬液。
该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞。
（3）在圆形的玻片区域中混匀，（直径约为20mm大小），前后缓慢摇晃玻片。
2分钟左右肉眼判读结果，并记录。
2、试管法（1）加1滴抗A或抗B试剂于两支预先标记好的试管中（75*12mm或75*10mm）。
（2）再加一滴2-5%的被检红细胞悬液于试管中。
实验十五 ABO血型鉴定一、正定型法【目的】掌握用盐水介质法进行ABO血型系统(ABO group)正定型(direct typing)的原理、操作方法和结果判断。
【原理】用已知的IgM类特异抗体（标准血清）与被检红细胞在室温条件下、盐水介质中反应，根据红细胞是否出现凝集现象来测定被检红细胞膜上有无与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。
【器材】1. 1.小试管、记号笔、蜡笔、试管架。
2. 2.尖滴管、胶吸头。
3. 3.吸管、吸耳球。
4. 4.载玻片或有凹槽的玻璃板或白瓷板。
5. 5.离心机。
6. 6.显微镜。
【试剂】1．标准抗A、抗B血清（商品）分为人血清ABO血型抗体和人ABO血型单克隆抗体，要求如下：（1）人血清ABO血型抗体：①特异性高。
②凝集效价：抗A不低于1∶128 ，抗B不低于1∶64。
③亲和力：反应开始15s内即出现凝集，3min时明显凝集，血凝块大于1mm2。
④稳定性高。
⑤已灭活补体。
（2）人ABO血型单克隆抗体：①特异性：抗A抗体特异凝集具有A型红细胞抗原的A1、A2、A1B、A2B；抗B抗体只凝集含B抗原的B和AB型红细胞。
②亲和力：以开始反应到出现凝集的时间表示抗血清的亲和力，国家标准是抗A对A1、A2、A2B分别为15s、30s、45s；抗B对B型红细胞为15s。
③凝集效价：国家标准是抗A1、抗B均大于1∶128。
④稳定性：较人血清抗体的稳定性低。
2．生理盐水。
【标本】抗凝静脉血或末梢血。
【操作】制备被检者5％红细胞生理盐水悬液：抗凝血离心或红细胞自然沉降后取试管下层的红细胞2滴于小试管中，加入生理盐水2ml，用尖滴管将红细胞与生理盐水充分混匀。
2 500r/min离心3 min 后弃去上清液，重复洗涤3次。
自管底吸取1滴压积红细胞加入19滴生理盐水中混匀，此即为5％的红细胞生理盐水悬液。
操作示意见图4-1。
图4-15％红细胞生理盐水悬液制备操作示意图1．玻片法（1）标记玻片或白瓷板：取洁净的载玻片或白瓷板1块，用蜡笔画出小格，标明抗A、抗B。
血型配对表
血型配对表指的是血型之间不同类型的配对搭配情况，即根据ABO、Rh血型系统，判断不同血型间输血、妊娠、婚姻等情况下是否兼容的一张表格。
下面是详细的血型配对表。
1. ABO血型系统：
A型血：A型血只能与A型血和O型血配对
B型血：B型血只能与B型血和O型血配对
AB型血：AB型血可以与A型血、B型血、AB型血和O型血配对
O型血：O型血只能与O型血配对
2. Rh血型系统：
Rh阳性血：Rh阳性血可以与Rh阳性血和Rh阴性血配对Rh阴性血：Rh阴性血只能与Rh阴性血配对
3. ABO和Rh血型系统配对：
A型血+Rh阳性血：可以与A型血、O型血、Rh阳性血和Rh阴性血配对
A型血+Rh阴性血：可以与A型血、O型血、Rh阴性血配对
B型血+Rh阳性血：可以与B型血、O型血、Rh阳性血和Rh阴性血配对
B型血+Rh阴性血：可以与B型血、O型血、Rh阴性血配对
AB型血+Rh阳性血：可以与A、B、AB型血、O型血、Rh 阳性血和Rh阴性血配对
AB型血+Rh阴性血：可以与A、B、AB型血、O型血、Rh
阴性血配对
O型血+Rh阳性血：可以与O型血、Rh阳性血和Rh阴性
血配对
O型血+Rh阴性血：可以与O型血和Rh阴性血配对
需要注意的是，配对搭配中并非所有血型都能兼容。
如
果采取不当的输血、妊娠等措施，严重的可能会出现输血反应、新生儿溶血等疾病。
因此，正确地判断血型配对表的兼容情况，就显得尤为重要。
红细胞ABO血型（反定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用试管法检测红细胞ABO血型（反定型）。
三、原理用已知的A1、B、O标准红细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。
四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(反定型)确认。
五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：A1、B、O试剂各1支， 10ml /支；5、贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻。
6、有效期：自检定合格之日起2个月；7、试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。
3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。
八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管3支，分别标明A1型细胞、B型细胞、O型细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管，再分别用滴管加入A1、B、O型试剂红细胞悬液1滴。
2、，摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s。
3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
红细胞ABO血型（反定型）结果凝集强度判断对照表4、ABO血型（反定型）表现型反应格局表九、质量控制1、对新进批号的试剂应作亲和力与效价验定。
