大肠菌群计数方法

大肠菌群检测(MPN法)大肠菌群检测(MPN法)是一种常用的微生物学技术，可用于检测土壤、水源、食品等中的大肠菌群进行水质和食品安全监测。

本文将介绍大肠菌群及其检测方法-最可能数法(MPN法)。

一、大肠菌群概述大肠菌群是以肠道菌属为主体的一类细菌，包括肠道埃希菌、沙门氏菌、志贺菌、伤寒杆菌等成员，它们可以在人类和动物的肠道中生存并繁殖。

在自然界中，大肠菌群也是广泛存在的微生物家族，如彗星菌、副肠杆菌、耶尔森氏菌等都属于大肠菌群。

1.菌落计数法该方法主要是利用琼脂平板培养皿在水培的条件下，大肠菌群在培养基上经不同时间的生长，形成菌落来进行菌数计数。

缺点是容易受到其他微生物的干扰，只能算出概略的数值，一定误差，没有国家标准。

2. 硝酸德钠试剂法将测样加硝酸德阳试剂进行加热，最终乳黄色的镜检测前进行比色，得出含大肠菌群的细菌群落达标后延迟显色的时间。

该方法已被最可能数(MPN)法所替代。

3. 最可能数法(MPN法)该方法先将测量的样品分别稀释到不同浓度下，再将每一份稀释液添加到以琼脂平板固化培养基为基础的不同培养液中，观察哪一份培养液出现大肠菌群的生长，最后通过MPN表格计算每85ml或100ml的水样中最可能含有的大肠菌群数量，计算公式为：10^x = n / 联合效价（即dilution rate的倒数）其中，x代表最可能数，n代表测量到大肠菌群的样品数。

在实际工作中，MPN法检测显示出了较好的结果，优点是用固定方法，可重复性好，而且可以通过相关将分析获得定量值，便于与相关的标准进行比较。

三、大肠菌群的检测范围1. 水源：大肠菌群检测是办公室里检测饮用水可能携带的最佳方法。

一般情况下，检测过程是检测水中的微生物是否合乎标准。

2.食品：由于食品生产经常存在卫生要求，因此食品也是大肠菌群检测重要的一环。

例如，必须检测火腿或肉类制品中的大肠菌群是否合格以确保食品安全。

3. 其他领域：大肠菌群检测可以用于医学、农业、环境和建筑等领域，如医院污水浑浊度的检测和土壤中大肠菌群的检测。

饮用水中大肠菌群MPN计数
1.设备与材料：恒温培养箱，冰箱，天平，无菌吸管:1ml,无菌锥形瓶500ml，无菌培养皿
2.培养基与试剂：月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤，结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）。

磷酸盐缓冲液：无菌生理盐水
3.检验程序
4.样品的稀释：（1）将25g样品放入盛有225ml生理盐水的带有玻璃珠的锥形瓶内，均质10min，制成1:10的样品稀释液.
用1ml无菌吸管吸取1:10样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入9ml生理盐水试管中，制成1:100的样品匀液。

（2）按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。

（3）初发酵实验：每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管LST肉汤，每管接种1ml，36度培养24h，观察倒管内是否有气泡产生，如未产生气泡则继续培养至48h，记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数，未产气为大肠菌群阴性，产气者为大肠菌群阳性管。

（4）复发酵实验：用接种环分别从所有48h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于BGLB肉汤管中，36度培养48h，观察产气情况，产气者记为大肠菌群阳性管。

5.大肠菌群MPN报告。

粪便中大肠菌群总数
摘要：
一、大肠菌群总数的定义
二、大肠菌群总数的检测方法
1.平板计数法
2.免疫磁珠法
三、大肠菌群总数与健康关系
1.与肠道菌群平衡的关系
2.与粪便卫生质量的关系
四、大肠菌群总数的参考值
正文：
大肠菌群总数是指在一定条件下，粪便中所含大肠菌群的数目。

它是一个重要的卫生指标，用于评估人体肠道中菌群平衡状态，以及粪便的卫生质量。

大肠菌群总数的检测方法主要有平板计数法和免疫磁珠法。

平板计数法是测定大肠菌群总数的最常用方法。

它通过将粪便样品均匀涂布在含有抗生素的培养基上，然后在特定条件下培养一定时间后，对菌落进行计数。

免疫磁珠法是一种快速、灵敏的检测方法。

它通过抗体与目标菌结合，然后用磁珠捕获结合的细菌，最后通过计数磁珠的数量来推算大肠菌群总数。

大肠菌群总数与健康关系密切。

正常情况下，肠道内存在大量微生物，形成一个稳定的菌群平衡。

大肠菌群总数的变化可能影响肠道菌群的平衡，进而影响人体健康。

此外，大肠菌群总数还可以反映粪便的卫生质量。

若大肠菌群
总数过高，可能表明粪便中存在较多的致病菌，对人体健康造成潜在威胁。

根据不同国家和地区，大肠菌群总数的参考值可能有所不同。

一般情况下，大肠菌群总数应该小于10^8 CFU/g粪便。

食品微生物学检验大肠菌群计数1、范围：适用于食品中大肠菌群的计数2、定义：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。

3、设备和材料：除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36℃±1℃。

3.2 冰箱：2℃~5℃。

3.3 恒温水浴箱：46℃±1℃。

3.4 天平：感量0.1g。

3.5 均质器。

3.6 振荡器3.7 无菌吸管：1ml、10ml或微量移液器及吸头。

3.8 无菌锥形瓶：容量500 mL。

3.9无菌培养皿：直径 90 mm。

3.10 pH计或pH比色管或pH试纸。

3.11菌落计数器。

4、培养基和试剂：4.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤；4.2 煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤；4.3结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）；4.4磷酸盐缓冲液；4.5无菌生理盐水；4.6无菌1moL/L NaoH；4.7 无菌1moL/L HCL。

第一法：大肠菌群 MPN计数法5、操作步骤：5.1样品的稀释固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1～2 min，制成 1:10 的样品匀液。

液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。

样品均液的pH值应在6.5~7.5之间，必要时分别用1moL/L NaoH或1moL/L HCL调节。

用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。

根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品均液。

废水粪大肠菌群数量计算公式
废水中大肠菌群数量的计算公式可以根据不同的情况而有所不同。

一般来说，大肠菌群数量的计算公式可以根据水样的稀释倍数、培养基的选择和培养条件等因素来确定。

在微生物学中，大肠菌群
数量通常是通过将水样进行适当稀释后，接种在含有适当营养物质
的琼脂平板上，然后在合适的温度下培养一段时间，最后根据形成
的菌落数量来计算。

一般来说，大肠菌群数量的计算公式可以按照以下步骤进行：
1. 首先是水样的稀释。

根据实际情况，将水样进行适当的稀释，以便在琼脂平板上形成可数的菌落。

2. 接种培养。

将稀释后的水样接种在含有适当培养基的琼脂平
板上，然后在适当的温度下培养一定的时间，一般是24小时至48
小时。

3. 计数。

在培养适当的时间后，通过肉眼或者显微镜观察，在
琼脂平板上形成的菌落数量，然后根据稀释倍数进行计算，得出原
始水样中大肠菌群数量的估算值。

需要注意的是，不同的实验室和标准可能会有不同的具体计算公式和操作规程，因此在具体实验中应当参考相应的标准方法和操作规程进行操作。

同时，为了保证实验结果的准确性，应当严格控制实验条件，确保实验操作的准确性和可重复性。

大肠杆菌及大肠菌群计数方法大肠杆菌和大肠菌群计数方法Enumeration of Escherichia coli and the coliform章节内容：传统检测大肠菌群和大肠杆菌的方法LST-MUG法检测冷藏和冷冻食品中的大肠杆菌（除双壳类软体动物制品外）瓶装水检测方法贝类和贝类肉制品检测方法柑桔类水果汁中大肠杆菌检测方法大肠菌群和大肠杆菌计数的其他方法参考文件大肠埃希氏菌，以前常称大肠杆菌，于1885年由德国儿科医生Theodor Escherich 发现，广泛存在于人类和温血动物的肠道中，是人类和动物肠道中需氧性共生菌的优势菌群，维持宿主健康部分生理功能必需的肠道菌。

大肠埃希氏菌属肠杆菌科，肠杆菌科包括许多种细菌，致病菌有沙门氏菌、志贺氏菌、和耶尔森氏菌。

虽然大多数的大肠埃希氏菌为非致病菌，但是当宿主免疫力降低或细菌侵入肠道的外组织或器官时，可引起肠外感染。

某些血清型可产生毒素，为致病性大肠埃希氏菌，可引起人类腹泻。

1892年，Shardinger建议把大肠杆菌作为粪便污染的指标。

由于大肠杆菌广泛存在于人类和动物中，而在其他地方少见。

再者，大肠杆菌能发酵葡萄糖（以后改为为乳糖）产生气体。

与已知的非产气致病菌容易区别开来。

因此，大肠杆菌的检测已成为水和食品的近期粪便污染指标，表明可能含有致病菌。

肠道中柠檬酸盐菌，克雷伯氏菌和肠杆菌能发酵乳糖，与大肠杆菌的生物型非常相似，使得把大肠杆菌作为健康威胁的指标，在实际应用中很复杂。

于是，大肠菌群这个术语用来描述这类肠道菌，大肠菌群不是一个分类学上的定义，而是一个工作定义，指的是一群在35℃培养48h，产酸产气的，革兰氏阴性的芽孢杆菌。

1914年，每国公共健康协会把大肠菌群作为一个重要的卫生标准。

虽然大肠菌群很容易检测到，但不一定与粪便污染有关系，因为在自然环境样品中也常存在。

于是，粪大肠菌群就作为粪便污染的指标。

首先由Eijkman提出，指的是在高温下发酵乳糖，是总大肠菌群的亚群，同时也称为耐热大肠菌群。

大肠菌群平板计数法实验报告
一、实验目的
本实验旨在通过大肠菌群平板计数法，检测两种不同类型的样品，分
别研究其大肠菌群的数量。

二、实验原理
大肠菌群平板计数法是一种测定复合微生物群落中不同细菌种群数量
的方法，通过在培养基上培养细菌分离特定细菌和其他微生物，然后在培
养基表面形成菌落，把形成的菌落数目统计出来就可以测定某一种细菌的
数量。

三、实验材料
1.无菌培养环：用于现场取样，主要成分是聚丙烯，尺寸为20
cm×40 cm；
2.筛选液：用于本实验的筛选液是根据微生物学原理，采用等量的乳
酸盐，氯化钠和磷酸盐等有机物质制备而成的液体，用于筛选出大肠菌群；
3.抗生素优势培养基：用于本实验，培养基由甘露醇、尿素、抗生素
等制备而成，用于培养出大肠菌群；
4.保存液：用于本实验的液体是根据微生物学原理，采用等量的乳酸盐、氯化钠和磷酸盐等有机物质制备而成，用于保存细菌；
5.透明细菌示踪液：用于本实验，示踪液由甘露醇、尿素、抗生素等
有机物质制备而成，用于追踪细菌的繁殖情况。

四、实验步骤
1.采样：用无菌环把样品和筛选液放在瓶中，搅拌均匀，然后加入适量。

陕西威水饮品有限公司质量管理文件1目的：规定了公司产品检验大肠菌群（Coliforms）的计数方法.2适用范围：适用于本公司成品中大肠菌群的计数。

3编写依据：GB4789.3-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》. 4术语和定义:4.1 大肠菌群coliforms在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰阴性无芽胞杆菌。

4.2 最可能数most probable number，MPN基于泊松分布的一种间接计数方法。

5.设备和材料：除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：5.1 恒温培养箱：36℃±1℃5.2 冰箱：2℃～5℃5.3 恒温水浴箱：46℃±1℃5.4 天平：感量0.1g5.5 均质器5.6 振荡器5.7 无菌吸管：1mL（具0.01mL 刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头5.8 无菌锥形瓶：容量500 mL5.9 无菌培养皿：直径90 mm5.10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸5.11 菌落计数器6.培养基和试剂：6.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：见附录A 中A.1 6.2 煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉汤：见附录A 中A.2 6.3 结晶紫中性红胆盐琼脂（Violet Red Bile Agar，VRBA）：见附录A 中A.36.4 磷酸盐缓冲液：见附录A 中A.46.5 无菌生理盐水：见附录A 中A.56.6 无菌1 mol/L NaOH：见附录A 中A.66.7 无菌1 mol/L HCl：见附录A 中A.7第一法大肠菌群MPN 计数法7检验程序：大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。

图1 大肠菌群MPN计数法检验程序8操作步骤：8.1 样品的稀释8.1.1 固体和半固体样品：称取25g样品,放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min～10000r/min 均质1min～2 min,或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2 min，制成1:10的样品匀液。

大肠菌裙检测是一项非常重要的微生物检测工作，它可以帮助我们了解环境和食品中是否存在大肠菌裙，从而保证人们的健康安全。

在大肠菌裙检测中，平板计数法是一种常用的检测方法。

下面将介绍大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领。

1.准备工作在进行大肠菌裙检测之前，需要准备相应的实验器材和培养基。

实验器材包括平板计数仪、移液器、无菌培养皿等。

培养基一般选择大肠埃希氏菌（EC）培养基。

2.样品处理将待测样品取适量放入无菌容器中，进行适当的稀释。

这一步要确保样品的稀释倍数适中，以保证后续的计数结果准确。

3.接种和培养取一定量的处理过的样品，在无菌工作台上均匀涂抹于含有适量培养基的培养皿上，然后进行培养。

培养条件一般为37摄氏度，培养时间为24小时。

培养后会形成菌落，这些菌落代表了原始样品中的细菌数量。

4.计数和记录在培养后，利用平板计数仪对菌落进行计数。

计数的时候需要注意避免重复计数同一菌落，保证计数准确。

需要记录计数结果，包括菌落数量和相应的单位。

5.结果分析根据计数结果，可以对原始样品中的大肠菌裙数量进行估算。

可以通过对对照组和样品组的比较来判断样品中大肠菌裙的数量是否合格。

大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领就是以上几点。

通过严格按照这些要领进行操作，可以确保检测结果的准确性和可靠性。

在进行操作过程中，还需要遵守无菌操作规范，确保实验过程中不受外界污染。

希望大家在进行大肠菌裙检测时能够严格按照操作要领进行，保证测试结果的准确性，从而更好地保障人们的健康安全。

大肠菌裙检测中的平板计数法是一种经典的微生物计数方法，它主要用于测定食品、饮用水、环境等样品中大肠菌裙的数量。

在这个过程中，我们需要注意几个关键的环节，来保证实验的准确性和结果的可靠性。

在准备工作环节，我们需要保证实验器材和培养基的质量。

实验器材一定要经过严格的消毒和清洁，以免外来细菌的污染影响实验结果。

培养基的选用也尤为重要，要选择与待测细菌的生长要求相适应的培养基，以保证细菌在培养基上的正常生长。

计量大肠菌群数量的计数方法大肠菌群是指在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。

直接或间接来自人与温血动物的肠道：包括肠杆菌科的大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属和克雷伯菌属，其中大肠埃希氏菌属为最典型大肠埃希氏菌。

一、卫生学意义人与温血动物粪便污染的指示菌：•大肠埃希氏菌——粪便近期污染；•其他菌属——粪便陈旧污染。

肠道致病菌污染食品的指示菌：•与肠道致病菌（如沙门氏菌、志贺氏菌）来源相同；在外界生存的时间与主要肠道致病菌一致。

二、修订的主要内容本标准与GB4789.2-2010相比，主要修改如下：1、删除了标准的英文名称2、修改了发布单位名称2010版本“中华人民共和国卫生部”2016版本“中华人民共和国国家卫生盒计划生育委员会”和“国家食品药品监督管理总局”3、前言：本标准代替GB4789.3—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》、GB/T4789.32—2002《食品卫生微生物学检验大肠菌群的快速检测》和SN/T0169—2010《进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法》大肠菌群计数部分。

本标准与GB4789.3—2010相比,主要变化如下:———增加了检验原理;———修改了适用范围;———修改了典型菌落的形态描述;———修改了第二法平板菌落数的选择;———修改了第二法证实试验;———修改了第二法平板计数的报告。

三、大肠菌群计数的两种方法第一法MPN法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数。

检验原理：MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。

待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度,应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。

第二法平板计数法适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。

检验原理：大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸,在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色,带有或不带有沉淀环的菌落。

大肠菌群计数是一种估计悬浮在水溶液中活菌数的方法。

一般分几组进行，每一组各有数重复，分别以渐次的方式加入不同量的待测水溶液于培养液中进行培养，随后观察每一组中的试管是否有菌生长，然后再利用统计表估计菌数。

例如水中coliform数的测定，将待测水溶液以10ml,1ml及的量分别加入各组，每组三重复，经培养后观察coliform是否有生长，统计有菌生长的管数，以统计表统计菌数。

活菌的浓度可利用MPN的方式来估计，方式简单，可分为下列两步骤：在培养基中作数个重复稀释；记录有菌生长的试管。

若试管中无生长，则可能代表连一支菌都没有生长。

从统计观点，MPN这个方法是一种非常没效率的方式，因为每一试管与培养皿表面生长的菌数只有很小部分符合。

然而MPN的好处有以下：若菌无法长在固态培养基时，便可使用；若菌的生长的动力学具有很大变化，便可使用：假设某些菌会会立即且迅速的生长，且会在固态培养基产生很大的菌落，且与我们要的菌落接触到或盖过时；因为较少且具高度游动性或快速生长的菌，可能形成小菌落，因而其数量是很多而导致无法计数；假如非我们所要菌存在，或无筛选的方法存在时，便可使用。

虽然有污染的细菌可以大量生长，但仍可藉由我们所要看的菌产生特定的产物来估计；假如琼脂或其他固化材料有某些因素会干扰我们计数时，便可使用大肠菌群MPN表正反应试管数MPN/ml （ g ）95% 信赖界线下限上限000< 30013< 590103< 513020---1004< 5201017121110712311111336120113362009136201143372101534421120789220214472212810150230---30023412030139713030264153803104372103117514230312120303803209315380321153044032221035470330240361,300331460712,4003321,1001504,800333> 1,100> 150> 4,800说明：若稀释倍数为10，100，1000倍（即每ml LST中，， ml（g）之检体），且LST均产气（正反应试管数3-3-3），经接种至EC，而其产气试管数为3-1-0，对照MPN为43，即为该检体大肠杆菌MPN数为43/ml （g）。

大肠菌群平板计数法方法学验证报告实验步骤如下：1.准备培养基：将大肠杆菌选择培养基加入培养基瓶中，并用自来水洗净外面的杂质，随后用蒸馏水冲洗内表面。

将瓶口用无菌布覆盖，用锡箔纸包好，然后高温高压灭菌，储存在无菌环境中备用。

2.取少量待检样品：将待检食品样品（例如牛奶、蔬菜、饮用水等）取一适量，在无菌的条件下进行操作。

先将样品摇匀使其均匀分布，然后用无菌吸管取1毫升待检样品。

3.稀释样品：用无菌吸管将1毫升待检样品转移至无菌试管中，再向试管分别加入9毫升无菌生理盐水，摇匀使其均匀混合。

此时的样品为10倍稀释样品，将试管中的液体倒入下一个试管中，再加入9毫升无菌生理盐水，以此类推，制备出一系列浓度递减的稀释样品。

4.接种培养基：将每个稀释样品分别倒入标记好的平板培养基上，倒入后轻轻晃动，使其均匀分布在培养基上，然后在无菌工作台上用无菌铂丝铲取纱球大小的韧带状菌液涂抹在固体培养基表面，使细菌均匀生长。

5.培养和计数：将培养基板反面朝上，放入37°C恒温培养箱中进行培养，培养的时间一般为24小时。

待培养结束后，观察培养基表面是否出现典型的大肠菌群菌落。

使用菌落计数器对每个平板上的菌落进行计数。

根据以上实验步骤进行大肠菌群平板计数法的实验后，得出以下结论：1.适用性验证：通过本实验，我们可以验证大肠菌群平板计数法的适用性。

在我们的实验中，使用该方法对不同类型的食品样品进行了检测，并得出了相应的菌落计数。

这表明该方法适用于不同类型的样品，可以准确地测定大肠菌群数量。

2.优点：大肠菌群平板计数法具有以下优点：简单易行，操作方便；可定量测定大肠菌群数量，结果可靠；适用于不同类型的食品样品。

3.缺点：大肠菌群平板计数法也存在一些局限性：菌落计数需要较长时间，一般需要24小时才能观察到菌落；该方法只能测定培养基中能够生长的细菌，无法对其他微生物进行定量测定。

综上所述，大肠菌群平板计数法是一种能够准确测定大肠菌群数量的方法。

大肠菌群平板计数法标准号大肠菌群平板计数法是指在实验室条件下，通过将待检样品分散在含有特定培养基的平板上，利用培养基对大肠菌群产生的特异性反应，以及对大肠菌群可生长的特定条件进行培养和计数，从而评估样品中大肠菌群的数量。

该方法已被广泛应用于食品、环境和医疗卫生等领域的微生物检测。

大肠菌群平板计数法标准号是《食品微生物学通则》GB 4789.3-2016。

该标准是由中国国家标准化管理委员会于2016年发布的，是用于食品微生物检测的基本规范。

根据该标准，大肠菌群平板计数法的操作流程主要包括样品制备、平板培养、菌落计数和结果表达。

下面将对每个步骤进行详细介绍。

首先，样品制备是指将待检样品进行预处理，以提高大肠菌群的检测效果。

根据不同样品的特点，可以采取不同的处理方法，如加入适量的缓冲液进行搅拌均匀、加热杀菌和稀释等。

此外，还需要注意样品制备过程中的卫生要求，以防止交叉污染。

然后，将样品均匀地分散在含有选择性培养基的平板上。

选择性培养基可以抑制非大肠菌群的生长，从而增加大肠菌群在平板上的菌落形成，方便后续的计数。

常用的选择性培养基有MacConkey琼脂、立兰肠杆菌培养基等。

接下来，将含有样品的平板置于适宜的温度和湿度条件下进行培养。

大肠菌群在一定的温度范围内可迅速繁殖，通常将培养温度控制在37摄氏度。

此外，还需要为培养提供适当的湿度，可以通过在培养箱内放置含水的培养皿或湿度控制器来实现。

菌落计数是大肠菌群平板计数法的核心步骤。

通常，在培养一定时间后，将平板上的菌落进行计数。

菌落计数可以手工进行，也可以使用计数仪来实现。

在进行计数时，需要注意区分出不同的菌落，并排除其他非大肠菌群的菌落。

最后，根据菌落计数的结果，可根据标准对样品中大肠菌群的数量进行评估。

通常，大肠菌群的计数结果以CFU/g（或CFU/mL）表示，即每克（或每毫升）样品中大肠菌群的菌落数。

需要注意的是，大肠菌群平板计数法在应用中存在一定的局限性。

大肠菌群计数是一种估计悬浮在水溶液中活菌数的方法。

一般分几组进行，每一组各有数重复，分别以渐次的方式加入不同量的待测水溶液于培养液中进行培养，随后观察每一组中的试管是否有菌生长，然后再利用统计表估计菌数。

例如水中coliform数的测定，将待测水溶液以10ml,1ml及0.1ml的量分别加入各组，每组三重复，经培养后观察coliform是否有生长，统计有菌生长的管数，以统计表统计菌数。

活菌的浓度可利用MPN的方式来估计，方式简单，可分为下列两步骤：在培养基中作数个重复稀释；记录有菌生长的试管。

若试管中无生长，则可能代表连一支菌都没有生长。

从统计观点，MPN这个方法是一种非常没效率的方式，因为每一试管与培养皿表面生长的菌数只有很小部分符合。

然而MPN的好处有以下：若菌无法长在固态培养基时，便可使用；若菌的生长的动力学具有很大变化，便可使用：假设某些菌会会立即且迅速的生长，且会在固态培养基产生很大的菌落，且与我们要的菌落接触到或盖过时；因为较少且具高度游动性或快速生长的菌，可能形成小菌落，因而其数量是很多而导致无法计数；假如非我们所要菌存在，或无筛选的方法存在时，便可使用。

虽然有污染的细菌可以大量生长，但仍可藉由我们所要看的菌产生特定的产物来估计；假如琼脂或其他固化材料有某些因素会干扰我们计数时，便可使用大肠菌群MPN表3 3 1 460 71 2,4003 3 2 1,100 150 4,8003 3 3 > 1,100 > 150 > 4,800说明：若稀释倍数为10，100，1000倍（即每ml LST中0.1，0.01，0.001 ml（g）之检体），且LST均产气（正反应试管数3-3-3），经接种至EC，而其产气试管数为3-1-0，对照MPN为43，即为该检体大肠杆菌MPN数为43/ml（g）。

若稀释倍数为原液，10，100倍(即每ml LST中含1，0.1，0.01ml之检体而EC接种之正反应试管数亦为3-1-0，则该检体大肠杆菌MPN数为43÷10=4.3/ml。

大肠菌群平板计数法计算公式
构建类肠杆菌群计数技术是衡量卫生水中大肠杆菌群的一个重要手段。

大肠杆菌群平板计数法是大肠杆菌群计数法中一种比较常见的技术，主要是利用培养基的抗血清特异性效能吸附技术，将水样中大肠杆菌群从环境介质中捕获、纯净、总数计算。

其计数法主要有以下几步：
（1）采样：从相应环境或样品中采集所需细菌样本；
（2）分离：用特定培养基培养，在合适的条件下，将沾染大肠杆菌群的样本分离出来；
（3）分析：采用抗血清特异性吸附技术，将纯化的大肠杆菌群模拟出来；
（4）计数：合理设置计数条件，将模拟出来的大肠杆菌群数目计算出来，得出大肠杆菌群数量。

大肠杆菌群平板计数法可以用于解决卫生水建筑中节水管道、游泳池和地下水渠等设备的安装的卫生检查问题，因为这类设备的渗漏可能会引起重要的公共卫生及环境污染问题。

由此可见，大肠杆菌群平板计数法也给建筑的正常使用 and 经营提供了较为准确的分析依据。

大肠杆菌群平板计数法是测定建筑环境中大肠杆菌群的一种有效手段，它为建筑安装和使用提供了较高精度的细菌数量测定结果，可以有效预防建筑环境传染疾病的发生。

这种技术可以广泛用于水处理厂、公共卫生毒理实验室、游泳池、室内健身中心、精湛的安装建筑市场以及大型建筑工程布置。

大肠菌群计数检验步骤第一法大肠菌群MPN 计数操作步骤6.1、样品的稀释6.1.1、固体和半固体样品：称取25g 样品，放人盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8 00or/min-10 000r/min 均质1 min-2 min ，或放人盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min-2 min ，制成1:10 的样品匀液。

6.1.2、液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品，置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分棍匀，制成1:10 的样品匀液。

6.1.3、样品匀液的pH 值应在6.5-7.5 之间，必要时分别用1mol/L 氢氧化钠（NaOH ）或1 mol/L 盐酸（HCI ）调节。

6.1.4、用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1ml，沿管壁缓缓注人9ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支1ml无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。

6.1.5、根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10 倍递增系列稀释样品匀液。

每递增稀释1 次，换用1 支1ml无菌吸管或吸头。

从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min 。

6.2、初发酵试验每个样品，选择3 个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3 管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml（如接种量超过1ml，则用双料LST肉汤）, 36℃±1℃培养24h±Zh ，观察倒管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h±2h 。

记录在24h 和48h 内产气的LST 肉汤管数。

未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。

6.3、复发酵试验用接种环从所有48h±2h 内发酵产气的LST 肉汤管中分别取培养物l环，移种于煌绿乳糖胆盐( BGLB）肉汤管中，36℃±1℃培养48h±2h ，观察产气情况。