大肠菌群最可能数(MPN)检索表1

⾷品中⼤肠菌群的测定含MPN检索表实验六⾷品中⼤肠菌群的测定⼀、概述(⼀)⼤肠菌群的定义及范围根据国家1994年颁布的⾷品卫⽣检验⽅法微⽣物学部分，⼤肠菌群(coliform bacteria)系指⼀群在37℃、24h能发酵乳糖，产酸、产⽓，需氧和兼性厌氧的⾰兰⽒阴性⽆芽胞杆菌。

⼤肠菌群主要是由肠杆菌科中四个菌属内的⼀些细菌所组成，即艾希⽒菌届、拘橼酸杆菌属、克雷伯⽒菌属及肠杆菌属，其⽣化特性分类见表5-4。

表5-4 ⼤肠菌群⽣化特性分类表注：+，表⽰阳性；—，表⽰阴性；+/-，表⽰多数阳性，少数阴性。

由上表可以看出，⼤肠菌群中⼤肠艾希⽒菌I型和Ⅲ型的特点是，对靛基质、甲基红、v-P和拘橼酸盐利⽤四个⽣化反应分别为“⼗⼗⼀⼀”，通常称为典型⼤肠杆菌；⽽其他类⼤肠杆菌则披称为⾮典型⼤肠杆菌。

(⼆)⼤肠菌群的测定意义1、粪便污染的指标细菌早在1892年，沙尔丁格(Schardinger)⽒⾸先提出⼤肠杆菌作为⽔源中病原菌污染的指标菌的意见，因为⼤肠杆菌是存在于⼈和动物的肠道内的常见细菌。

⼀年后，塞乌博⽿德“斯密斯(Theobold．Smith)⽒指出，⼤肠杆菌因普遍存在于肠道内，若在肠道以外的环境中发现，就可以认为这是由于⼈或动物的粪便污染造成的；从此，就开始应⽤⼤肠杆菌作为⽔源中粪便污染的指标菌。

据研究发现，成⼈粪便中的⼤肠菌群的含量为：108个／g⼀109个／g。

若⽔中或⾷品中发现有⼤肠菌群，即可证实已被粪便污染，有粪便污染也就有可能有肠道病原菌存在。

根据这个理由，就可以认为这种含有⼤肠菌群的⽔或⾷品供⾷⽤是不安全的。

所以⽬前为评定⾷品的卫⽣质量⽽进⾏检验时，也都采⽤⼤肠菌群或⼤肠杆菌作为粪便污染的指标细菌。

当然，有粪便污染，不⼀定就有肠道病原菌存在，但即使⽆病原菌，只要被粪便污染的⽔或⾷品，也是不卫⽣的，不受⼈喜欢的。

2．粪便污染指标菌的选择作为理想的粪便污染的指标菌应具备以下⼏个特性，才能起到⽐较正确的指标作⽤。

可编辑修改精选全文完整版大肠菌群技术应知应会试题1、大肠菌群：在一定培养条件下能够（）、（）的需氧和兼性厌氧的革兰氏（）菌。

_________________________________2、VRBA平板计数范围：（）CFU，最低稀释度平板低于（）CFU的记录具体菌落数;_________________________________3、在大肠菌群检测第一法（）法中，如用到双料，则统一用（）进行空白对照；如果用的全部为单料，则统一用（）进行空白对照。

_________________________________4、大肠菌群作业SOP第一法引用的为（），第四法引用的为（）。

_________________________________5、检测过程中，十倍稀释时，手部不要触及（）位置。

_________________________________6、稀释度的选择应严格按照产品质量标准中的限量值进行选择，不得私自进行（）或（）。

_________________________________二、选择题（每题4分）_________________________________1、最可能数MPN是基于泊松分布的一种（D）方法。

A、计算B、计数C、直接计数D、间接计数(正确答案)2、大肠菌群主要来源于（）。

A、人的粪便B、人畜粪便(正确答案)C、粪便D、畜的粪便3、大肠菌群第一法适用于含量（）的食品中大肠的计数。

A、较低(正确答案)B、最低C、较高D、最高4、检样前，确认所检测样品匀液PH是否在（）之间A、6.8-7.8B、6.5-7.0C、6.5-7.5(正确答案)D、6.8-7.25、大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的（），带有或不带有沉淀环的菌落A、紫红色B、红色或紫色(正确答案)C、紫色D、红色6、培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加（）mlVRBA覆盖平板表面。

阳性管数MPN95%可信限阳性管数MPN95%可信限0.10.010.001上限下限0.10.010.001上限下限000<3.0——9.522021 4.542 001 3.00.159.6221288.794 010 3.00.1511222358.794 011 6.1 1.218230298.794 020 6.2 1.218231368.794 0309.4 3.63830023 4.694 100 3.60.1718301388.7110 1017.2 1.3183026417180 10211 3.638310439180 1107.4 1.3203117517200 11111 3.63831212037420 12011 3.64231316040420 12115 4.5423209318420 13016 4.54232115037420 2009.2 1.43832221040430 20114 3.642323********* 20220 4.542330********* 21015 3.742331460902000 21120 4.54233211001804100 212278.794333>1100420——注 1：本表采用 3 个稀释度【 0.1g(mL) 、 0.01g(mL)注 2：表内所列检样量如改用1g(mL) 、0.1g(mL) 和表内数字应相应提高10 倍，其余类推。

和 0.001g(mL)] ，每个稀释度接种0.01g(mL) 时，表内数字应相应降低3 管。

10 倍；如改用0.01g(mL)、0.001g(mL)0.0001g(mL)时，则一种微生物活菌数快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：ａ）样品的选择：检测样品分为固体样品和液体样品；ｂ）采样样品的制备：通过无菌操作取一定量溶液样品进行离心处理后，取上清液，再以更高的速度离心处理，弃去上清液，用移液器取出底部少量溶液；ｃ）微生物活菌数的检测：将移液器取出的底部溶液，涂在载玻片上，经干燥固定，用美兰染色，冲洗后用生物显微镜镜检，记录被美兰染色且呈现空心状态的图像的个数来计数微生物数量。

乳与乳制品微生物检验食品中大肠菌群的检测YLNB 3.21、引用依据：GB/T4789.3-20032、术语和定义大肠菌群：指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。

食品中大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN表示。

3、仪器及器材3.1恒温培养箱：36 ± 1C；3.2 冰箱：0-4 C；3.3恒温水浴锅：46 ± 1C；3.4天平；3.5显微镜；3.6均质器或乳钵；3.7 灭菌平皿：直径90mm3.8 灭菌试管：18X 180 和20X 200；3.9灭菌吸管：1 ml和10 ml ；3.10灭菌广口瓶或三角烧瓶：容量为500ml ；3.11灭菌玻璃珠：直径约5mm 3.12载玻片；3.13酒精灯；3.14试管架；3.15灭菌刀、剪子、灭菌镊子等4、培养基和试剂4.1乳糖胆盐发酵管；4.2伊红美兰琼脂平板；4.3乳糖发酵管；4.4生理盐水；4.5革兰氏染色液。

5、检验程序6、方法6.1检样稀释6.1.1 以无菌操作将检样25ml （或g）放于装有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1: 10的均匀稀释液。

固体检样最好用均质器，以8000〜10000r/min 的速度处理1min，做成1: 10的均匀稀释液。

6.1.2 用1ml灭菌吸管吸取1: 10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1: 100的稀释液。

6.1.3另取1ml灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用一支1ml灭菌吸管。

6.1.4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。

6.2乳糖发酵实验：（通常所说的假定试验：其目的在于检查样品中有无发酵产生气体的细菌）将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。

参照《食品检验与分析》第一版P773-776参照《食品卫生国家标准汇编(3）》第一版GB 4789。

3—941。

原理大肠菌群系指一群在37℃下24h内能发酵乳糖产酸、产气的需氧或兼厌氧性革兰氏阳性无芽孢杆菌。

该菌群主要来自人粪便,以此作为粪便污染指标,来评价食品卫生质量具有广泛的卫生学意义。

食品中的大肠杆菌群数是以每100ml（g）检样内大肠杆菌群最近似数（M.P.N）来表示。

据此含义,所有食品卫生标准中所规定的大肠菌群的最小样品限量（即大肠菌值)为报告标准。

2.设备和材料2。

1温箱:37±1℃2.2 冰箱：0～4℃2.3 恒温水浴：44.5±0.5℃2.4 天平2.5 载玻片2.6 吸管2.7 广口瓶或三角瓶:容量瓶500ml2.8 玻璃珠：直径约5mm2。

9 平皿:直径为90mm2。

10 试管2。

11 显微镜2。

12 酒精灯2。

13 载玻片3。

培养基和试剂3.1乳糖发酵管:按GB 4789.28中4。

9规定。

3。

2伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4。

25规定。

3.3乳糖发酵管：按GB 4789.28中4.10规定。

3.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4。

11规定.3。

5磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。

3。

6生理盐水。

3。

7革兰氏染色液：按GB 4789。

28中2.2规定。

4。

检验程序大肠菌群检验程序如下：5。

方法及步骤 5。

1 检样稀释及培养5。

1。

1 以无菌操作,将检样25g （或25ml ）剪碎放于含有225ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。

固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8000～10000r/min 的速度处理1min ，做成1：10的均匀稀释液.5。

1。

2 用1ml 灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml ，沿管壁徐徐入含有9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀,做成1:100的稀释液。