阿维菌素高效液相色谱测定方法

的 阿 维 菌素 在 ７ ｉ ｍ ｎ内可 以 完全 分 离， 线性 范 围为 ０ ４ ｇ Ｌ一 ． ｍ ／ ， 性 相 关 系数 ０ ９９ ， ．ｍ ／ ５ ０ ｇＬ 线 ．９ ８ 当添 加 量 为 ０ １０２ ０５ ． 、． ，． ｍ ／ ｇ时 ， 均 回收 率为 ９ ．０ ～１０ ５ ％ ， Ｓ ｇｋ 平 ０２％ ０ ．８ Ｒ Ｄ为 ２ ２ ％ 一 ．８ 。 该 方 法具 有 快速 、 ．５ ６６ ％ 灵敏 、 确 的 特 点 ， 合 猪 肉 准 适
ｍ ｔａｏ — ａ ｒ９ ：ｌ ）ａ ｄｆ ｗｒｔ ｗ ｓ ． Ｌ ｍ ｎ Ｔ ｅ ｅｕｔ ｓｏ ｅ ａ ａｅｍ ｃｉ ｄｔ ｍ ｎｄｉ ｅｈｎ ｌ ｗ ｔ （０ Ｏ ｎ ｏ ｅ ａ ８ｍ ／ ｉ． ｈ ｓｌ ｗ ｄｔ ｔ ｖ ｒ ｅｔ ｅ ｒ ｉｅ ｅ ｌ ａ ０ ｒ ｓｈ ｈ ｎ ｅ ｎ
阿维 菌素 是 当 今 最受 关 注 的 生 物 杀虫 、 螨 剂 杀
谱 一质 谱 检 测 （ Ｌ —ＭＳ 、 联 免 疫 吸 附 法 ＨＰ Ｃ ） 酶 （ Ｌ Ｓ 。本研 究 采 用 乙腈 超 声 波 辅 助 提 取 、 Ｅ ＩＡ） 自
之一， 由阿佛 曼 链 霉 素 经 液 体 发 酵 加 工 而成 的 抗 生 素类 生物农 、 药 ， 兽 它在我 国害虫 防治 体 系 中 占有较 重要 地位 ¨ 。阿维菌 素类 药物 由于其 优 异 的驱 虫 活 Ｊ 性 和较 高的安全 性 ， 被认 为是 目前最 优 良、 用 最广 应 泛、 销量最 大 的一类 新型 、 谱 、 广 高效 、 安全 和 用 量小 的兽用 抗 内 、 寄 生 虫 药 ， 外 已广 泛 应 用 于 兽 医 临 床 ，
ｃ ｒｅａｉｎ ｃ ｅ ｃｅ ｔｗａ ９ ９ ． Ｗ ｈ ｎ ａ ｄ ｔ ｅ ａ ｕ ｔｗａ ．１ ０． ０． ｍｇ ｋ ， ｔｅ ｒ ｃ ｖ ｒ ａｅ ｗａ ｏｒ ｌｔｏ ｏ ｆ ｉｎ ｓ０． ９ ８ ｉ ｅ ｄ ｉｉ ｍｏ ｎ ｓ ０ 、 ２、 ５ ／ ｇ ｖ ｈ ｅ ｏ ｅ ｙ ｒｔ ｓ

高效液相色谱荧光法测定胡椒中的阿维菌素摘要：建立以高效液相色谱荧光（HPLC-FLD）法测定胡椒（Piper nigrum L.）中阿维菌素含量的方法。

样品用乙腈提取，经氨基柱净化，衍生后，以HPLC-FLD 法分析。

结果表明，该法在添加回收浓度为0.005，0.010和0.050 mg/kg 3个不同添加水平的回收率为95%～103%，其检出限为0.005 mg/kg。

关键词：高效液相色谱荧光法；阿维菌素；残留；胡椒（Piper nigrum L.）阿维菌素（Abamectin，A VM）是由链霉菌发酵产生的大环内酯类抗生素，属昆虫神经毒剂，主要干扰神经生理活动，刺激释放γ-氨基丁酸，而γ-氨基丁酸对节肢动物的神经传导有抑制作用，害虫与药剂接触后即出现麻痹中毒而死，无内吸性[1]。

由于具有杀虫性强以及杀虫谱广等特点，被广泛用于蔬菜、果树、棉花和花卉等作物上[2]。

Malanikova等曾使用TLC法检测阿维菌素，在硅胶薄层板上涂上荧光指示剂，用于样品检测。

但TLC与高效液相色谱（HPLC）法相比较，灵敏度低，一般只作定性分析，很少用于残留检测[3]。

根据阿维菌素类药物的共轭二烯结构在240～250 nm处有强烈的紫外吸收，常采用液相色谱-紫外检测分析方法[4，5]。

但另一方面，阿维菌素类药物在体内最小有效浓度低于紫外检测器对其最低检测限（1～2 ng/mL）[6]。

与紫外检测器相比，荧光检测器（Fluorescence detector，FLD）的灵敏度约高100倍，对痕量分析特别适用。

而且只有具有对称共轭和非强离子化的化合物才能发射荧光，因此HPLC-FLD法的基质干扰较少。

由于A VM本身没有对称共轭结构，不能直接用荧光检测器检测，而只有经衍生后生成具有对称共轭的苯环结构才能发射荧光，其在血浆中的A VMs检测限可达0.02 ng/mL[7]。

由于胡椒（Piper nigrum L.）基质复杂，含有大量的挥发油、胡椒碱、粗脂肪、粗蛋白，对液相色谱柱及检测结果产生影响，因此，本试验将围绕建立胡椒中阿维菌素的检测方法展开。

高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量一、绪论阿维菌素是一种广谱抗生素，属于咪唑酰胺类抗生素，具有较好的抗菌活性，主要用于动物饲料中的抗菌剂。

阿维菌素在草食动物尤其是豆类作物中的残留问题引起了人们的关注。

菜豆是一种常见的豆类作物，广泛种植于各地，而且菜豆在生长期间容易受到外界环境和病虫害的影响，这些因素会导致菜豆中可能存在阿维菌素残留。

建立一种快速、准确、灵敏的检测菜豆中阿维菌素残留的方法具有重要的意义。

目前，国内外针对阿维菌素残留的检测方法主要包括高效液相色谱法、气相色谱法、免疫测定法、质谱法等。

这些方法各有优缺点，高效液相色谱法是目前应用较为广泛的一种方法，具有灵敏度高、准确度高、分离效果好等优点。

本研究将采用高效液相色谱法来检测菜豆中阿维菌素的残留量。

二、实验方法1.仪器与试剂（1）仪器：采用高效液相色谱仪进行检测。

（2）试剂：阿维菌素标准品、乙腈、甲醇、氯化钠、氢氧化钠等。

2.样品的处理（1）取适量的菜豆样品进行样品粉碎和过筛处理，将样品粉末置于干燥器中干燥。

（2）称取适量的粉末样品，加入适量的甲醇和氢氧化钠，振荡混合，再加入适量的乙腈，振荡混合，离心沉淀，取上层液体进行处理。

3.色谱条件色谱柱：C18色谱柱流动相：甲醇-水溶液流速：1.0mL/min检测波长：245nm色谱柱温度：25℃进样量：20μL4.标准曲线的建立取不同浓度的阿维菌素标准品溶液，分别进行色谱检测，得到峰面积与浓度的关系，建立标准曲线。

5.样品的检测取样品处理后的上层液体，进行高效液相色谱检测，根据标准曲线计算样品中阿维菌素的残留量。

三、结果与分析通过上述方法进行菜豆中阿维菌素的残留检测，得到了一批样品的测试结果。

结果显示，菜豆中多数样品中都存在不同程度的阿维菌素残留，残留量不一。

根据标准曲线的计算，得出了不同样品中阿维菌素的残留量。

通过对结果的分析和比较，可以得出菜豆中阿维菌素残留的含量较为普遍，需要引起人们的重视。

Pak C18、5μm填充物;(Waters ) 过滤器:滤膜孔径约0.45μm; 微量进样器:50μL; 定量进样管:5μL; 超声波清洗器; 甲醇:色谱级; 水:新蒸二次蒸馏水; 乙腈:色谱级; 阿维菌素标样:已知阿维菌素(B1a+B1b)质量分数≥98.0
%。
4. 色谱操作条件定质量范围内,按照浓度递增的顺序配制
数个已知样,按上述操作条件进行分析。以阿维菌 素标样质量为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲 线。此标准曲线通过原点。计算得回归方程为 Y=2.52×108X+4.69×103,线性相关系数r =0.9999。试验证明当阿维菌素浓度在0.004 g/100 mL~0.2 g/100 mL之间(进样体积5μL) 与其相应的峰面积呈现良好的线性关系。
流动相:甲醇+乙腈+水=38+38+24,膜过 滤,并进行脱气;
流量:1.0 mL/min; 柱温:室温(温差变化应不大于2℃); 检测波长:245 nm; 进样体积:5μL; 保留时间:B1a15.6 min, B1b11.3 min。
典型阿维菌素乳油高效液相色谱图见图
5.溶液的配制
7.计算
试按样式(中1阿)计维算菌素(B1a+B1b)的质量分数X1(%)
式中: A积1和—的—平—均两值针;标样溶液,阿维菌素B1a与B1b峰面 A积2和—的—平—均两值针;试样溶液,阿维菌素B1a与B1b峰面 m1———标样的质量,g; m2———试样的质量,g; p———标样中阿维菌素(B1a+B1b)的质量分 数,%。
8.4 最佳操作条件的选择
8.4.1 检测波长的确定 由阿维菌素的紫外光谱图可以看出,

高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量菜豆是一种常见的蔬菜，也是人们日常饮食中经常食用的一种食材。

而在农业生产中，为了保护作物不受病虫害侵害，农民常常会使用农药来进行预防和治疗。

农药的使用过量或不当使用往往会导致农产品中农药残留的问题，给人们的身体健康带来潜在的风险。

对农产品中农药残留的检测成为了十分重要的任务。

阿维菌素是一种常用的杀虫剂，也被广泛应用于菜豆的生产过程中。

阿维菌素残留过量会对人体健康产生危害，因此对菜豆中阿维菌素残留量的检测就显得尤为重要。

本文将介绍一种高效液相色谱法来检测菜豆中阿维菌素残留量的方法。

一、高效液相色谱法的原理高效液相色谱法（HPLC）是一种在液相中进行分离分析的方法。

其原理是将待测物质溶解在流动相（常为水或有机溶剂）中，通过一定压力将其推动流过填充了吸附剂的色谱柱，不同成分因为在吸附剂上停留时间的长短不同而被分离开来，最终通过检测器对各个成分进行检测，从而获得待测物质的浓度或含量。

二、检测方法1. 样品的制备需要准备待检测的菜豆样品。

取适量的菜豆样品，研磨成细粉状，再将细粉样品加入适量的提取溶剂中，如甲醇或乙腈，与其充分混合，制备成样品的提取液。

将样品的提取液通过滤膜进行过滤，除去其中的固体残留物，得到清澈的提取液。

3. 色谱条件将提取液注入高效液相色谱仪，设置好相应的分离条件。

在此实验中，我们选择了一根C18反相色谱柱，流动相为乙腈和水的混合溶液，并采用梯度洗脱的方法分离目标化合物。

样品通过色谱柱分离后，利用紫外检测器对洗脱后的化合物进行监测。

阿维菌素的最大吸收波长为240nm，因此可以选择在该波长下进行检测。

5. 数据处理通过色谱仪采集得到的数据，根据标准曲线对样品进行定量分析，得到目标化合物的含量。

三、实验结果与讨论通过上述的实验方法，我们成功地对菜豆样品中的阿维菌素进行了检测。

在我们的实验结果中，我们发现样品中阿维菌素的含量为0.032mg/kg，未超出国家规定的最大残留限量。

阿维菌素有效成分常用的分析方法：液相色谱法1.方法介绍试样用甲醇溶解，以甲醇+水为流动相，使用以μ-Bondapak C18为填充物的不锈钢柱和246nm紫外检测器，对试样中的阿维菌素进行高效液相色谱分离和测定。

2.试剂甲醇：色谱纯二次蒸馏水阿维菌素标样：已知质量分数，≥98%3.仪器高效液相色谱仪：具有246nm紫外检测器色谱数据处理机色谱柱：250mm×4.6mm（id）不锈钢色谱柱，内装μ-Bondapak C18填充物（10μm）过滤器：滤膜孔径约0.45μm微量进样器：50μL定量进样阀：20μL4.操作条件柱温：25℃流速：1.5mL/min检测波长：246nm进样体积：20μL流动相：甲醇+水=85+15（φ）保留时间：阿维菌素B1a约17.0min，阿维菌素B1b月12.0min5.测定步骤5.1.标样溶液的制备称取阿维菌素标样100㎎（精确至0.2㎎），置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解稀释并定容至刻度，摇匀。

5.2.试样溶液的制备称取约含阿维菌素100㎎（精确至0.2㎎）的待测试样，置于100mL 容量瓶中，用甲醇溶解稀释并定容至刻度，摇匀。

用0.45μm孔径的滤膜过滤。

5.3.测定在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针阿维菌素对响应值变化小于 1.0%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

6.计算将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中阿维菌素（B1a+B1b）峰面积分别进行平均。

试样中阿维菌素质量分数X（%），按公式计算：X=r2·m1·p r1·m2式中：r1——标样溶液中阿维菌素（B1a+B1b）峰面积的平均值r2——试样溶液中阿维菌素（B1a+B1b）峰面积的平均值m1——标样的质量（g）m2——试样的质量（g）P——标样中阿维菌素（B1a+B1b）的质量分数（%）7.本法使用范围阿维菌素TC/EC/WP等单制剂的分析。

高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量菜豆是一种常见的蔬菜，具有营养丰富、口感鲜美等特点。

在生产过程中，防治病虫害是关键环节，其中药物是不可缺少的工具之一。

然而，药物残留会对人类健康产生威胁，因此食品中药物残留的检测十分必要。

阿维菌素是一种常用的杀菌剂，可用于防治菜豆等蔬菜上的真菌病和霉菌病。

但是，它在使用过程中容易残留在菜豆中，如果人们长期食用含有阿维菌素的菜豆，会产生影响健康的潜在风险。

因此，为了确保食品安全，需要对菜豆中的阿维菌素残留量进行检测。

目前，国内外对阿维菌素残留的检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、液相色谱-质谱联用法（LC-MS/MS）等。

其中，HPLC方法是一种最常用的检测方法，具有灵敏、准确、简便等优点。

以下将介绍一种利用HPLC法检测菜豆中阿维菌素残留量的方法。

仪器和试剂：1.高效液相色谱仪（HPLC）2.反相色谱柱3.流动相（甲醇：乙腈=50:50）4.过滤器5.离心机6.标准品（阿维菌素）7.甲醇8.水9.橄榄油10.氯仿步骤：1.样品准备将菜豆样品粉碎，并将大量样品称入50ml锥形瓶中，加入10ml的甲醇、10ml的水、10ml的橄榄油混合液，盖紧瓶盖，超声水浴处理30分钟，离心10分钟。

将上清液取出，用氯仿萃取，离心分离，并用电子天平称取约1g，加入6ml的甲醇溶解。

再用1μm的过滤器过滤，用甲醇调整至容量为10ml。

将阿维菌素标准品0.10g溶于100ml的甲醇中，摇匀。

3.样品检测在反相色谱柱中，以甲醇：乙腈=50:50的流动相为移动相，进样量10μL，流速1.0ml/min，检测波长254nm，检测阿维菌素质量浓度范围为0.001~0.10μg/ml。

结果分析阿维菌素在反相色谱柱中的保留时间为13.6min，其峰面积与浓度呈线性相关关系，相关系数R2=0.998。

使用此方法对菜豆样品进行测定，阿维菌素质量浓度在范围内时，峰面积随阿维菌素浓度的增加而增加。

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５ Ｋ Ｚ台式超声波清洗器 （ Ｋ ２０ ９Ｈ Ｓ ５０ Ｈ型 ， 上海科导 超 声仪器 有 限公 司 ） 电子 分析 天平 （ Ｂ ０ ； Ａ ２４一Ｎ型 ， 上海梅 特 勒 一托 利 多 ）； 心 分 离 器 （ Ｏ Ｖ Ｌ 离 Ｓ Ｒ Ａ Ｌ— Ｒ ７型 ， 津市瑞 顺 达工 贸有 限公 司 ） 仪 表 恒 温水 Ｔ 天 ；
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Ｓｈ ｒｏｂＣ８ 高效液相 色谱分 离， ｐｅｉ ｒ 。 ｓ 柱 紫外检测 器测定。 阿维茵素标准曲线的线性 回归系数 ｒ ０ ９４ ， ＝ ．９ ８ 线性 范围
为 ００ ５ ｇ・ ～ 一 ．０ ｒ ｍＬ 样品 多次测定相对标准偏差 小于 １７ ； 均回收率为 ９ ． ％。本方 法 ． ２ ｍ ｍＬ ０ １０ ｇ・ ～； ａ ．％ 平 ９５ 简便 、 快速 ， 具有较 高的灵敏度和准确度。 关 键 词 ： 效 液 相 色谱 ； 定 ；阿 维 茵 素 高 测
ａ ｅ ａ ｅ ｒ ｃ ｖ ｒ ｓ ｏ ｖ ｒ ｅｉ ｎ ｌ ｚ ｄ ｗａ ９． ｖ ｒ ｇ ｅ ｏ ｅ ｅ ｆａ ｅ ｍｅ ｔ ａ ａ ｙ ｅ ｓ９ ５％ ｗｉ ｅ ａｉ ｅ ｓａ ｄ ｒ ｅ ｉ ｔ ｎ ｌｓ ｈ ｎ １ ７ ． ｉ ｎ ｔ ｒ ｌ ｔ ｔ ｎ ａ ｄ ｄ ｖ ａ ｏ ｅ ｓｔ ａ ． ％ ｈ ｖ ｉ Ｋ ｅ ｒ ｓ： ｉｈ ｐ ｒ ｒ ａ ｃ ｉ ｕ ｄ ｃ ｒ ｍａ ｏ ｒ ｐ ｙ；ｄ ｔ ｒ ｉ ａ ｉ ｎ；ａ ｅ ｍｅ ｔ ｙ ｗｏ ｄ ｈ ｇ ｅ ｏ ｆ ｍ ｎ ｅｌ ｉ ｈ ｏ ｔｇａ ｈ ｑ ｅｅ ｎ ｔ ｍ ｏ ｖ ｒ ｃｉ ｎ

高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量菜豆是一种非常常见的食品，它含有丰富的营养素，并被许多人拥有着广泛的喜爱。

不过，如果在种植和运输过程中，菜豆受到了农药的污染，那么就会对人们的健康造成威胁。

阿维菌素是一种常用的杀菌剂，在农药中也被广泛使用。

因此，检测菜豆中阿维菌素的残留量十分重要。

高效液相色谱法，是一种常用的检测菜豆中阿维菌素残留的方法。

它利用高效液相色谱仪对样品中的成分进行分离、检测和定量分析，具有检测灵敏度高、准确度高、重复性好、分析速度快等优点。

下文将详细介绍高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量的具体步骤。

样品制备：先将100g的菜豆样品加入500ml的甲醇水溶液中，用超声波清洗20分钟，过滤掉残渣，取100ml于蒸发盘中，用氮气吹干，再将残渣用甲醇进行萃取，调整pH至7-8，使用C18分散固相萃取管进行固相萃取，蒸干萃取液得到固体残量。

色谱条件：柱：Zorbax SB-C18(150mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-水（30∶70），流速：0.8ml/min，柱温：25℃，检测波长：280nm。

操作步骤1.将样品编好号，向标准曲线的不同进样罐中加入一定量的阿维菌素参考标准溶液，并进行超声波均质。

然后，将50μg/kg（μg/kg为1个国际单位，其等于ppb）至500μg/kg 不等的阿维菌素标准品使用高效液相色谱仪分别进行检测，并构建阿维菌素的标准曲线。

2.将前述制备好的固态残渣10mg加入10ml的甲醇中，并进行超声波声波强化萃取。

将萃取液离心去除残渣以供进样分析。

3.从上述制得的标准曲线所得知的阿维菌素浓度得到样品中残留量的浓度。

4.对样品重复两次取平均值，并进行相对误差和回收率计算。

结果分析：本实验利用高效液相色谱法成功地检测出了菜豆中阿维菌素的残留量。

结果表明，样品中阿维菌素的残留浓度为320μg/kg，符合国家食品安全标准。

实验的相对误差小于5%、回收率在90%~100%之间，表明本实验方法稳定可靠。

7.计算
试按样式(中1阿)计维算菌素(B1a+B1b)的质量分数X1(%)
式中: A积1和—的—平—均两值针;标样溶液,阿维菌素B1a与B1b峰面 A积2和—的—平—均两值针;试样溶液,阿维菌素B1a与B1b峰面 m1———标样的质量,g; m2———试样的质量,g; p———标样中阿维菌素(B1a+B1b)的质量分 数,%。
8.结果和讨论
8.1线性关系试验 在一定质量范围内,按照浓度递增的顺序配制
数个已知样,按上述操作条件进行分析。以阿维菌 素标样质量为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲 线。此标准曲线通过原点。计算得回归方程为 Y=2.52×108X+4.69×103,线性相关系数r =0.9999。试验证明当阿维菌素浓度在0.004 g/100 mL~0.2 g/100 mL之间(进样体积5μL) 与其相应的峰面积呈现良好的线性关系。
Pak C18、5μm填充物;(Waters ) 过滤器:滤膜孔径约0.45μm; 微量进样器:50μL; 定量进样管:5μL; 超声波清洗器; 甲醇:色谱级; 水:新蒸二次蒸馏水; 乙腈:色谱级; 阿维菌素标样:已知阿维菌素(B1a+B1b)质量分数≥98.0
%。
4. 色谱操作条件
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5.1标样溶液的制备 称取阿维菌素标样0.05 g(精确至0.00
02g),置于100 mL容量瓶中,用甲醇溶解并 稀释至刻度,摇匀。 5.2试样溶液的制备
称取含阿维菌素0.05 g的试样(精确0.0 002 g),置于100 mL容量瓶中,用甲醇溶解 并稀释至刻度,摇匀。
6.测定
在上述操作条件下,待仪器稳定后,连续 注入数针标样溶液,直至相邻两针阿维菌素 峰面积相对变化小于1.5 %后,按照标样溶 液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺 序进行测定。

高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛应用于分析化学领域的分离和检测技术。

它具有分离效果好、检测灵敏度高、准确度高等优点，因此在农产品残留物检测中得到广泛应用。

本文将介绍如何使用HPLC法检测菜豆中阿维菌素残留量。

一、实验原理阿维菌素是一种广泛应用于农业的杀虫剂，用于防治多种害虫。

阿维菌素的滥用和过量使用可能会导致残留物超标，对人体健康产生潜在风险。

检测农产品中阿维菌素的残留量非常重要。

HPLC法是一种广泛应用的高效分离和分析技术，通过样品与色谱柱中的固定相相互作用，实现不同组分的分离和检测。

在HPLC法中，色谱柱和移动相的选择非常关键，针对不同的化合物可以选择不同的色谱柱和移动相条件来实现最佳的分离效果。

二、实验步骤1. 样品准备：取适量的新鲜菜豆样品，将其洗净并切碎，称取一定量的样品并加入适量的溶剂中进行提取，提取时间一般为30分钟。

2. 提取液的制备：取10g样品加入50mL溶剂中，搅拌均匀，静置约30分钟，然后离心提取液，取上清液置于1号容量瓶中，用移液器吹尘。

3. 过滤：将提取液过滤，去除杂质物。

4. 色谱条件选择：根据阿维菌素的性质和样品基质的特点，选择合适的色谱柱和移动相。

常用的色谱柱包括C18柱、C8柱等，移动相可以选择甲醇-水混合溶液。

5. 测试条件设置：设置色谱仪的检测波长和流速，根据实验要求选择合适的条件进行测试。

6. 样品注射：将提取液通过滤器过滤后，注入色谱仪进行测试。

7. 绘制标准曲线：准备一系列浓度不同的阿维菌素溶液，用相同的方法进行测试，得到峰面积与浓度的关系，绘制标准曲线。

8. 检测样品：将提取液注入色谱仪进行测试，根据标准曲线可以计算出样品中阿维菌素的浓度。

三、结果分析通过HPLC法检测菜豆中阿维菌素的残留量，可以得到阿维菌素的浓度。

根据国家相关标准，可以判断样品中阿维菌素的残留量是否符合安全标准。

高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛应用于药物分析、环境检测、食品安全等领域的分析技术。

此方法通过将待检样品中的化合物分离，并使用色谱柱、流动相和检测器等设备来分析和测定目标化合物的含量。

本文将详细介绍使用HPLC法检测菜豆中阿维菌素残留量的步骤和注意事项。

一、实验材料和仪器设备：1. 实验材料：菜豆样品、纯阿维菌素标准品、乙腈（HPLC级）、甲醛（HPLC级）、饱和盐酸溶液。

2. 仪器设备：高效液相色谱仪（分光光度检测器、自动进样器等）、色谱柱（C18柱，4.6 mm×250 mm，5 μm）、天平、移液管、蒸发仪等。

二、准备工作：1. 样品处理：将菜豆样品洗净、晾干，并研磨成粉末状。

取粉末称量一定量（约5 g），加入甲醛溶液（浓度为1%）悬浮10 min，以杀死潜在细菌和霉菌，然后用盐酸溶液（浓度为10%）洗涤3次，最后用纯水洗净。

将处理好的样品称量并记录质量。

三、标准曲线的建立：1. 取阿维菌素标准品一定量（约10 mg），溶解于甲醇中，稀释成一系列浓度不同的标准溶液（如0.1、0.5、1、5、10 μg/mL）。

2. 每个标准溶液取10 μL注入高效液相色谱仪中，利用C18柱进行分离，流动相为乙腈和水的混合溶液。

3. 通过测定每个标准溶液的峰面积和浓度，制作阿维菌素的标准曲线。

四、样品检测：1. 取菜豆样品粉末一定量（约2 g），加入乙腈中进行提取，经过超声波处理20 min，然后离心10 min。

2. 取上清液，用过滤器滤掉悬浮物，取得菜豆样品提取液。

3. 取一定量的提取液，用蒸发仪或其他仪器将其浓缩至干燥。

4. 加入甲醇溶解，稀释到一定体积（如10 mL）。

5. 取浓缩液中一定体积（如20 μL），注入高效液相色谱仪中，利用C18柱进行分离。

6. 测定峰面积，并利用建立好的标准曲线计算阿维菌素的残留量。

ａ ｃｉ ｎ ｓ ｉ ｗａ ｅ ｏ ｐ ｓ ｄ ｒ ｐ ｄ ｙ ｍｅ ｔｎ ｉ ｏ ｌ ｓｄ ｃ ｍ ｏ ｅ ａ ｉ ｌ ．
Ｋ ｅ ｒ ｓ： Ａｂａ ｅ ｔ ｙ ｗｏ ｄ ｍ ｃ ｉ ＨＰＬＣ ；Ｓ ｉｓ ｎ； ｏ ｌ
阿 维菌 素作 为杀 虫 剂 广 泛 应 用 于 蔬 菜 、 树 、 果 棉 花和 花卉 的保 护 ， 杀虫 活性 强 、 广 ¨ 对 鱼 类 、 谱 ， 水 生生 物 和 蜜 蜂 高 毒 ， 鸟 类 低 毒 。 目前 阿维 对
第２ ３卷
第 １ 期
环境 监 测 管 理 与 技 术
２１ ０ １年 ２月
・
监 测技 术 ・
高效液相色谱法测定土壤 中阿维菌素残留
徐 浩然 ， 杨仁 斌 ， 海玉 ， 贞 ， 强 廖 唐 付 （ 南农 业 大 学农 业 环境保 护研 究所 ， 南 长沙 湖 湖
摘
４０ ２ ） １ １８
图 １ 阿维 菌素 标 准 色谱 峰
Ｆｉ １ Ｃｈｒ ｍａ ｏ ｒ ｍ ｆ Ａｂａ ｃ ｉ ｇ． ｏ ｔｇ ａ ｏ ｍｅ ｔｎ
用 色 谱 纯 甲 醇 配 制 ０ ｇＬ ０ ００ ｍ ／ ｍ ／ 、 ． ６ ｇ Ｌ、
０ ４１ ２ ｍｇ ６ ３ ／Ｌ ０． ０ ｍｇ ／Ｌ、 ４１ ２． ｍｇ ６． ３ ／Ｌ ０ ｍｇ Ｌ ／
生 ， 要研究方向为环境污染物及检测技术。 主 通 讯作 者 ： 仁斌 ， 授 ， 士 生 导 师 。 杨 教 博
一
５１ —
第２ ３卷 第 １期
徐 浩然 等． 效 液 相 色谱 法 测 定 土壤 中 阿维 菌 素 残 留 高
２ １ 年 ２月 ０１
选择 未 施 用 过 阿 维 菌 素 的 土 壤 ， ０ ｃ 取 ｌ ｎ～ ２ ｍ 耕 作层 至少 １ ０ｃ ０个点 ， 掉植 物 根 系 、 块 等 去 石

高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量目前，国内外对菜豆中阿维菌素残留量的检测方法有很多，如高效液相色谱法、气相色谱法和荧光光谱法等。

高效液相色谱法因其检测灵敏度高、准确性好和操作简便等优点，成为了目前用于检测菜豆中阿维菌素残留量的主要方法之一。

本文将通过高效液相色谱法对菜豆中阿维菌素残留量的检测进行研究，并介绍其检测原理、方法步骤以及实验结果分析，以期为菜豆中阿维菌素残留量的检测提供参考。

二、检测方法1. 仪器和试剂仪器：高效液相色谱-串联质谱联用仪(HPLC-MS/MS)试剂：甲醇、乙腈、乙酸、二甲基亚砜、水、乙酸钠、氯仿等2. 样品的制备将新鲜菜豆样品洗净并切碎成细末，取适量样品加入乙腈：水=1:1的溶液中进行超声提取，待溶液冷却后离心并将上清液取出，冷冻干燥成粉末。

4. 色谱条件色谱柱：C18(250mm*4.6mm，5μm)流动相：甲醇-0.1%乙酸水溶液流速：1mL/min柱温：30°C进样量：10μL检测波长：218nm5. MS/MS条件离子源：电喷雾(ESI)质谱条件：离子源温度350°C，毛细管电压4500V扫描模式：多反应监测(MRM)碎裂电压：120V氢气压力：35psi6. 样品的定量通过建立阿维菌素标准曲线，采用内标法进行定量分析。

三、实验结果采用上述方法对市售菜豆中阿维菌素残留量进行了检测，并获得了以下实验结果：样品1：阿维菌素残留量为10μg/kg样品2：阿维菌素残留量为15μg/kg样品3：阿维菌素残留量为8μg/kg四、结果分析根据实验结果可以看出，市售菜豆中存在不同程度的阿维菌素残留。

根据国家食品安全标准规定，菜豆中阿维菌素残留量不得超过10μg/kg，而实验结果显示，样品2的阿维菌素残留量超标。

未经合理清洗和处理的农产品中残留的农药、抗生素等化学物质对人体健康造成了一定程度的威胁，因此对菜豆中的阿维菌素残留量进行定期检测非常必要。

本文所采用的高效液相色谱法能够很好地检测出菜豆中的阿维菌素残留量，并且相对于传统的检测方法，具有灵敏度高、准确性好等优点。

高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量阿维菌素是一种广谱抗生素，被广泛应用于养殖业中，用于预防和治疗动物感染病毒和细菌。

过多的使用阿维菌素可能导致其在食物链中的积累，对人体健康产生不良影响。

确保食品中阿维菌素残留量的安全性成为一个重要的任务。

为了快速、准确、可靠地检测菜豆中阿维菌素残留量，研究人员普遍采用高效液相色谱法（HPLC）进行分析。

下面将介绍HPLC法在阿维菌素残留检测中的应用。

HPLC是一种十分有效的色谱法，能够在短时间内分离和分析复杂的混合物。

该技术基于液相色谱的原理，通过将样品溶解于合适的溶剂中，然后将其注入色谱柱中，利用不同溶剂流动速度差异将样品中的化合物分离出来，最后使用紫外光谱检测器对分离出的化合物进行检测和定量。

在菜豆中阿维菌素的检测中，首先需要提取样品中的阿维菌素。

一般采用乙腈、甲醇和醋酸等溶剂进行提取。

将样品与溶剂进行混合，然后用离心机进行离心，将样品中的杂质和固体分离出来。

接下来，将提取液注入到经过校准的HPLC仪器中。

为了在HPLC分析中得到准确的结果，需要优化一系列的色谱条件。

首先是选择合适的色谱柱，并确定最佳的流动相组成。

研究表明，使用反相色谱柱和甲醇和水的混合物作为流动相可以获得较好的分离效果。

其次是控制流速和柱温，以获得适当的保留时间和峰形。

最后是设置紫外光谱检测器的波长，并确定阿维菌素的最大吸收峰。

在利用HPLC进行分析时，可以采用外标法或内标法进行定量。

外标法是通过使用已知浓度的阿维菌素标准样品制备标准曲线，然后将待测样品中的阿维菌素峰面积与标准曲线进行比较，从而确定样品中阿维菌素的浓度。

内标法则是在样品中添加已知浓度的内标物，然后将内标峰面积与阿维菌素峰面积进行比较，再通过标准曲线来计算阿维菌素的浓度。

利用高效液相色谱法可以快速、准确地检测菜豆中的阿维菌素残留量。

该方法具有操作简便、灵敏度高、准确性好等优点，被广泛应用于食品安全监测和质量控制中。

在使用HPLC进行分析时，需要严格控制实验条件，确保结果的准确性和可靠性。

阿维菌素高效液相色谱测定方法阿维菌素高效液相色谱测定方法阿维菌素是一种新型生物发酵制得的杀虫剂，该产品效果好，用量低，安全系数高，被广泛应用于农林作物多种害虫的防治。

一、阿维菌素的理化性质：化学名称：（10E，14E，16E，22Z）-（1R，4S，5’S，6S，6’R8R，8R；12S，13S，20R，21R，24）-6’-[（S）-仲丁基]-21.24-=羟基-5’11,13,22,-四甲基-2-氧代-3，7，19-三氧杂四环[15，6，1，10,20，24]-十五-10，14，16，22，-四烯-6-螺-2’-（5’.6’-二氢-2’H-吡喃）-12-基2，6-二脱氧-4-0-（2.6-二脱氧）-3-0-甲基- d-L-阿拉伯-已吡喃糖基-3-0-甲-d-l-阿拉伯-已吡喃糖苷。

实验式：Ｃ48Ｈ72Ｏ14；相对分子质量：873.1（按1997年国际相对原子质量计）；生物活性：杀螨；熔点：(150~155)℃；蒸汽压（20℃）：199.98mpa；溶解度（g ／L,21℃）：:水0.1×10-4、丙酮100、正丁醇10、氯仿25、环已烷6、乙醇20，异丙醇70、煤油0.5、甲醇19.5、甲苯350；稳定性：在通常贮存条件下稳定，在pH5~9和25℃时，其水溶液不发生水解。

二、阿维菌素B1a含量的测定1、方法提要试样用流动相溶解，使用以C18为填料的不锈钢柱和具有紫外可变波长检测器，对试样中的阿维菌素B1a进行高效液相色谱法分离和外标法定量。

2、试剂和溶液甲醇：HPLC；水：新蒸二次蒸馏水或杭州产娃哈哈纯净水；阿维菌素标样：已知B1a含量≥91%3、仪器高效液相色谱仪：具有可变紫外波长检测器；色谱工作站；色谱柱：C18ODS、５μｍ150mm×4.6mm；定量管：20uL；进样器：100uL；4、液相色谱操作条件流动相：甲醇+水=90+10（V/V）；溶剂：甲醇；检测波长：250nm；流速：0.5mL/min。

分析检测高效液相色谱法测定菠菜中阿维菌素残留量李 爽（朝阳市检验检测中心，辽宁朝阳 122000）摘 要：目的：建立了一种固相萃取-高效液相色谱法测定菠菜粉中阿维菌素残留量方法。

方法：选取菠菜粉中阿维菌素含量检测内部质控样品，鲜菠菜粉碎样品做空白样品，分别经50 mL丙酮振荡提取，减压浓缩后经SPE C18固相萃取柱净化除杂后用甲醇定容，流动相为甲醇（有机相）-水（水相），在C18色谱柱上进行分离，以甲醇∶水（85∶5）为混合流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为245 nm，用紫外检测器测定。

结果：0.1～20.0 μg·mL-1的浓度内，方法的线性关系良好，r2为0.992 4。

平均回收率为91.20%，相对标准偏差为1.65%（n=6）。

结论：本方法前处理过程高效、简便，回收率高，样品检出限低，具有较高的灵敏度和准确度，适用于蔬菜中阿维菌素农药残留的测定。

关键词：高效液相色谱法；阿维菌素；菠菜粉；固相萃取Determination of Avermectin Residues in Spinach Powder by High Performance Liquid ChromatographyLI Shuang(Chaoyang Inspection and Testing Center, Chaoyang 122000, China)Abstract: Objective: To establish a method for the determination of avermectin residues in spinach powder by SPE-HPLC. Method: The content of abamectin in spinach powder was selected to detect the internal quality control sample, and the fresh spinach crushed sample was used as blank sample, which were extracted by 50 mL acetone oscillations respectively. After decompression and concentration, purified by SPE C18 solid phase extraction column for impurity removal, methanol was used for constant volume. The mobile phase was methanol (organic phase) -water (aqueous phase), which was separated on C18 chromatographic column. Methanol ∶ water (85 ∶ 5) was used as the mixed mobile phase, the flow rate was 1.0 mL·min-1, the detection wavelength was 245 nm, and the detection wavelength was determined by UV detector. Result: The linear relationship of the method is good between 0.1～20.0 μg·mL-1 within the concentration range. The value r2 is 0.992 4. The average recovery rate is 91.20%, the relative standard deviation is 1.65%(n=6). Conclusion: The pretreatment process of this method is simple and efficient, the recovery rate is high, the detection limit of sample is low, and it has high sensitivity and accuracy. It is suitable for the detection of avermectin residues in vegetables.Keywords: high performance liquid chromatography; avermectin; spinach powder; solid phase extraction阿维菌素具有强烈的杀螨、杀虫、杀线虫的防虫害作用[1]，在我国的农业害虫防治体系中具有非常重要的地位，被广泛应用于水果、蔬菜等虫螨的预防与治疗中[2]，具有非常好的防虫效果，但食品中阿维菌素的残留会对人体的神经系统和内脏等多处产生损伤[3]。