JYT024—1996高效液相色谱方法通则

高效液相色谱仪检定规程JJG 024--19961前言本规程参照国际法法制计量组织（OIML ）技术工作导则第二部分：OIML国际建议和国际文件起草与表述规则、JJG1002-84国家计量检定规程编写规则和GB3100-93国际单位制及其应用编写的。

2范围适用于新安装、使用中和修理后的具有紫外-可见光、荧光和示差折光率检测器的高效液相色谱仪（以下简称仪器）的检定。

2.1原理本仪器用于分离和测定有机混合物中的化学成分。

样品以溶液状态进入色谱柱后，在流动相的推动下，逐步被分离成单个的组分。

然后依次通过色谱检测器进行检测。

根据各组分的保留时间和响应峰值而进行组分的定性和定量分析。

2. 2构成输液做一进样罪充分离薇一-检器疏器打F卩绘图机——记求仪或色诸埼图1元素分析仪构成方框图3计量单位参见GB3100-93国际单位制及其应用中的有关条文。

4计量要求其计量特性和指标应符合表1中的规定。

5技术要求5. 1外观要求5. 1.1仪器应有下列标志：仪器名称、型号、制造厂名、出厂仪器系列编号、产品合格证书及操作使用说明书，仪器外表完好，面板字迹清晰。

5. 1 . 2仪器整机部件：调节旋纽、按键、开关及指示灯应能正常工作，电缆线插件应接触良好。

5. 2安装条件5. 2 . 1仪器应平稳地安装在牢固的操作台上，电缆接插件紧密配合，接地良好。

5. 2 . 2高压气瓶与仪器连接应使用专用管道和接头。

*带星号的项目为必须鉴定的项目5. 3检定环境5. 3. 1室内环境：应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，室内排风良好，且不应放置与测定无关的其他杂物。

5. 3. 2室内温度：10 C ~30C（温度波动应不大于出C /操作期间；使用折射率检测器时应不大于2C）。

5. 3. 3室内相对湿度： < 85%5. 3. 4 电源：电压（220 ±2）V;频率：（50 ±）.5）Hz。

5. 4检定设备和试剂5. 4. 1分析天平：最大称量100g，最小分刻度O.lmg,或其它微量自动电子天平。

JY/T 017—1996元素分析仪方法通则碳、氢、氮、硫元素分析标准范围：本通则规定了用元素分析仪测定有机物中碳、氢、氮及硫或氧(C、H、N、S/O)元素含量的方法，适用于吸附分离和色谱分离式的微量型元素分析仪。

方法原理：有机物中的碳、氢、氮及硫或氧(C、H、N、S/〇〉元素，经催化氧化〈或裂解)一还原后分别转变成二氧化碳、水蒸气、氮气及二氧化硫或一氧化碳(CO2，H2O,N2，SO2/CO)。

.然后在载气的推动下，用吸附分离一热导差检法依次测定各个组分;或用色谱法将混合气体分离后，用热导检测器或红外吸收检测器分别测定组分的响应信号值。

根据组分的信号值(或色谱峰值)和对应元素的灵敏度(或校正）因子K值，分别计算样品中各种元素的含量。

样品要求：样品应是不含吸附水分的均勻固体微粒或液体。

挥发性样品用低熔点合金容器密封称量。

腐蚀性液体用低熔点玻璃毛细管密封称量，氧化时应有防爆措施。

仪器性能：仪器的主要性能及技术指标应符合JJG/TOX X—1996元素分析仪计量检定规程规定的技术要求。

见表格。

分析步骤：1.开机。

按仪器操作规程开机。

检查整机操作条件及电子天平的性能。

让整机逐步达到样品测定的条件。

2.仪器校正。

3.灵敏度（或校正）因子K值。

4.样品测定。

5.测定后仪器的检查安全注意事项：1.仪器电源应良好接地。

2.仪器出口气体应排放至室外或通风处。

3.使用高压钢瓶，应遵守(79)劳总锅字第18号《气瓶安全监察规程》。

范围：原料、产品职责：检验室对本规程的实施负责正文：1.原理——高效液相色谱法是将具一定性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。

——高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。

2.操作前的准备2.1流动相的制备用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水。

凡规定PH值的流动相、应使用精密PH计进行调节。

配制好流动相应通过适宜的0.45µm滤膜滤过，用前脱气，应配制足量的流动相及时待用。

2.2供试溶液的配制供试品用规定溶剂配制成供试溶液定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。

供试溶液在注入色谱仪前，一般应经适宜的0.45µm滤膜滤过。

必要时在配制供试溶液前，样品需经提取净化。

以免对色谱系统产生污染或对色谱干扰。

3.系统适用性试验——按各品种项下要指法训练对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。

3.1色谱柱理论板数（n）在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半峰高宽（Wh/2），按n=5.54(tR/ Wh/2)2计算色谱柱的理论板数。

如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。

3.2分离度定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。

分离度（R）的计算公式为：2（tR2- tR1）R=W1+W2式中tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间；tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间；W 1及W2为此相邻两峰的峰宽。

高效液相色谱我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表：鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多，因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。

I．概论 (3)一、液相色谱理论发展简况 (3)二、HPLC的特点和优点 (4)三、色谱法分类 (5)四、色谱分离原理 (5)II．基本概念和理论 (10)一、基本概念和术语 (10)二、塔板理论 (17)三、速率理论（又称随机模型理论） (19)III．HPLC系统 (22)一、输液泵 (23)二、进样器 (27)三、色谱柱 (29)四、检测器 (35)五、数据处理和计算机控制系统 (41)六、恒温装置 (42)IV．固定相和流动相 (43)一、基质（担体） (43)二、化学键合固定相 (46)三、流动相 (49)1．流动相的性质要求 (49)2．流动相的选择 (50)3．流动相的pH值 (51)4．流动相的脱气 (52)5．流动相的滤过 (53)6．流动相的贮存 (54)7．卤代有机溶剂应特别注意的问题 (54)8．HPLC用水 (55)V．HPLC应用 (56)一、样品测定 (56)二、方法研究 (58)附件：高效液相色谱法（HPLC）复核细则 (58)一、对起草单位的要求： (58)二、对复核单位的要求： (59)I．概论一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。

又称为色层法、层析法。

色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。

后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。

高效液相色谱法高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。

1.对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪。

色谱柱的填料和流动相的组分应按各品种项下的规定.常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。

后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用,辛基键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料,用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等，用于分子排阻色谱等。

注样量一般为数微升。

除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。

在用紫外吸收检测器时,所用流动相应符合紫外分光光度法项下对溶剂的要求。

正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变,以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。

一般色谱图约于20分钟内记录完毕。

2.系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整,应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子.(1)色谱柱的理论板数(n)在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t和半高峰宽,按n＝(t ／W)计算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件，使理论板数达到要求。

(2)分离度定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。

分离度的计算公式为：2(t－t)R＝──W＋W式中t为相邻两峰中后一峰的保留时间；t为相邻两峰中前一峰的保留时间；W 及W为此相邻两峰的峰宽。

MV_RR_CNJ_0014热分析方法通则1.热分析方法通则的说明编号JY/T 014—1996名称(中文)热分析方法通则(英文) General rules for thermal analysis归口单位国家教育委员会起草单位国家教育委员会主要起草人梁国眉 黄和孝批准日期 1997年1月22日实施日期 1997年4月1日替代规程号无适用范围本标准规定了差热分析仪(DTA)、差示扫描量热仪(DSC)和热重仪(TG)测试的一般方法，适用于通用的DTA、DSC和TG仪对物质进行热分析。

主要技术要求 1.定义2. 方法原理3. 试剂和材料4. 仪器5. 样品6. 分析步骤7. 分析结果的表述是否分级无检定周期(年)附录数目 6出版单位科学技术文献出版社检定用标准物质相关技术文件备注2.热分析方法通则的摘要本标准规定了差热分析仪(DTA)、差示扫描量热仪(DSC)和热重仪(TG)测试的一般方法，适用于通用的DTA、DSC和TG仪对物质进行热分析。

3 定义本通则等同采用GB 6425—86热分析术语。

玻璃化转变温度(Tg) glass transition temperature物质比热容易发生不连续变化，DSC(或DTA)曲线向吸热方向转折或称阶段状变化时的温度。

4 方法原理物质在一较宽的温度范围内变化时，会发生某种物理变化或化学变化。

这些变化会引起系统温度和热焓不同程度的改变，并伴随有热量形式的吸收或释放，某些变化还涉及到物质质量的增加或减少。

热分析就是研究这些与温度有关的物性的变化，热分析技术是在程序温度(升温或降温)下，测量物质的物理性质与温度关系的一种技术。

按测量的物理性质不同，有各种热分析技术。

常用的有基于测量物质与参比物之间温度差变化的DTA法、基于测量体系热焓变化的DSC法和测量物质质量变化的TG法。

5 试剂和材料5.1参比物常用煅烧过的α-Al2O3作参比物。

5.2标准物选择的标准物质应在化学上足够稳定和惰性，在储存过程中没有变化，升温时不与坩埚材料反应、材料易得、所取的特征转变温度足够明显、分立和重复等。

“高效液相色谱法”资料合集目录一、高效液相色谱法同时测定食品中的糖精钠、苯甲酸钠、山梨酸钾的含量二、高效液相色谱法在药品检验中的应用效果三、高效液相色谱法同时测定饮料中苯甲酸和山梨酸四、高效液相色谱法检测甜菜红色素的方法研究五、应用高效液相色谱法测定茶叶多糖六、酶联免疫吸附法和免疫亲和柱高效液相色谱法在检测饲料中黄曲霉毒素B1含量中的比对研究七、免疫亲和层析净化高效液相色谱法同时测定牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2八、高效液相色谱法测定牛肉干制品中10种杂环胺九、超高效液相色谱法测定传统发酵酸粥的游离氨基酸含量高效液相色谱法同时测定食品中的糖精钠、苯甲酸钠、山梨酸钾的含量一、引言食品添加剂的使用是为了改善食品的品质、口感和保存性。

然而，不合理的使用或过量添加某些食品添加剂可能对人体健康造成潜在威胁。

因此，准确测定食品中添加剂的含量对于确保食品安全具有重要意义。

本文将介绍如何使用高效液相色谱法（HPLC）同时测定食品中的糖精钠、苯甲酸钠、山梨酸钾的含量。

二、实验方法1、仪器与试剂所需仪器包括高效液相色谱仪、离心机、超声波清洗器、混合器。

试剂包括：糖精钠、苯甲酸钠、山梨酸钾的标准品，甲醇，乙酸铵，磷酸，以及实验用水。

2、样品处理将食品样品进行称重，加入适量的混合溶剂进行溶解。

然后，将溶解后的样品进行离心，取上清液进行进样分析。

3、HPLC分析条件色谱柱：C18柱；流动相：甲醇+乙酸铵；流速：1.0mL/min；检测波长：230nm；柱温：30℃；进样量：10μL。

4、定量分析通过对比样品与标准品的色谱图，根据峰面积进行定量分析。

三、结果与讨论1、分离效果使用上述HPLC分析条件，糖精钠、苯甲酸钠、山梨酸钾均能得到较好的分离，无干扰峰出现。

2、线性范围与检出限通过实验，得到三种添加剂的线性范围和检出限如下表所示：3、精密度与准确度通过添加标准品到样品中进行加标回收实验，得到三种添加剂的精密度和准确度如下表所示：四、结论本文介绍了一种使用高效液相色谱法同时测定食品中糖精钠、苯甲酸钠、山梨酸钾含量的方法。

高效液相色谱法检验操作规程一、范围：本标准规定了使用高效液相色谱法的检验方法和操作要求；适用于本公司检品采用高效液相色谱法的质量检测。

二、引用标准：中华人民共和国药典（2000年版二部附录）三、仪器的组成和一般要求：1、仪器的组成：高压输液泵；色谱柱；检测器；积分仪；打印机。

2、对仪器的一般要求：所用的仪器为高效液相色谱仪。

色谱柱的填充剂和流动相的组分应按各品种项下的规定。

常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学健合硅胶，后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。

离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂用于分子排阻色谱等。

除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。

在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（药典2000年版附录IV A）项下对溶剂的要求。

正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。

一般色谱图约于20分钟内记录完毕。

2.1 紫外分光光度法项下对溶剂的要求：用1cm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质），测定其吸收度。

溶剂和吸收池所吸收度，在220~240nm范围内不得超过0.40，在241~250nm范围内不得超过0.20，在251~300nm范围内不得超过0.10，在300nm以上时不得超过0.05。

四、系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求，或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。

1、色谱柱的理论板数（n）在先定的条件下，注入供试品溶液或品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t R（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半峰高宽（W h/2），按n=5.54（t R/W h/2）2计算色谱柱的理论板数。

高效液相色谱检查法标准操作规程、一、目的：建立高效液相色谱检查法标准操作规程，使其操作规范化。

二、依据：中国药典2010版二部附录28。

三、适用范围：适用于高效液相色谱检查法标准操作。

四、责任者：质量部检验人员。

五、正文：1.简述高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。

由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。

高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。

有的药品需在色谱分离前或后经过衍生化反应方能进行分离或检测。

常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱；离子交换填料，用于离子交换色谱；具一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。

高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。

检测器最常用的为可变波长紫外可见光检测器，其他检测器有如示差折光检测器和蒸发光散射检测器等。

色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。

梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。

2高效液相色谱仪的使用要求2.1按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705-90）”的规定作定期检定，应符合规定。

2.2仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。

2.3具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。

3.操作前的准备3.1流动相的制备用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水。

高效液相色谱我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表：鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多，因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。

I．概论 (2)一、液相色谱理论发展简况 (2)二、HPLC的特点和优点 (2)三、色谱法分类 (3)四、色谱分离原理 (3)II．基本概念和理论 (5)一、基本概念和术语 (5)二、塔板理论 (8)三、速率理论（又称随机模型理论） (9)III．HPLC系统 (10)一、输液泵 (11)二、进样器 (13)三、色谱柱 (14)四、检测器 (17)五、数据处理和计算机控制系统 (20)六、恒温装置 (20)IV．固定相和流动相 (20)一、基质（担体） (20)二、化学键合固定相 (22)三、流动相 (23)1．流动相的性质要求 (23)2．流动相的选择 (24)3．流动相的pH值 (24)4．流动相的脱气 (25)5．流动相的滤过 (25)6．流动相的贮存 (26)7．卤代有机溶剂应特别注意的问题 (26)8．HPLC用水 (26)V．HPLC应用 (27)一、样品测定 (27)二、方法研究 (27)附件：高效液相色谱法（HPLC）复核细则 (28)一、对起草单位的要求： (28)二、对复核单位的要求： (28)I．概论一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。

又称为色层法、层析法。

色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。

后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。

高效液相色谱法：系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。

色谱柱内径一般为3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10μm。

超高液相色谱仪：是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。

（1）色谱柱反相色谱柱：以键和非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。

常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂优十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。

正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。

常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。

氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反向色谱。

离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。

有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。

手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。

色谱柱的内径和长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。

温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。

为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。

残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相的pH值一般应在2～8之间。

残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。

（2）检测器最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。