大肠杆菌的分离以及药敏试验

1.3.2细菌的生化鉴定挑取可疑菌落纯培养物，分别接种于蔗糖、葡萄糖、阿拉伯糖、卫矛醇、乳糖、山梨醇、甘露醇、麦芽糖、鼠李糖、精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸柠檬酸钠、乳糖胆盐、M.R 试验、靛基质、侧金盏花醇、肌醇、水杨苷、尿素、明胶、半固体及H2S培养基中37 ℃培养24～48 h。

1.3.3致病力试验将分离到的细菌接种普通肉汤培养基，37℃培养24h。

选择日龄、体重、性别、精神状态相似的小白鼠12只，分为三组。

第一组与接种所分离到的大肠杆菌，每只腹部皮下接种0.3ml。

第二组接种等同量的肉汤作为对照。

能致小白鼠发病死亡，并从试验小白鼠体内分离细菌，再经生化试验鉴定为性大肠杆菌的菌株用于药敏试验。

1.4药敏试验采用纸片琼脂扩散法（K-B法）。

大肠埃希氏菌菌液浓度标化后15min之内接种于药敏培养基，以无菌棉拭子蘸取已制备好的菌液，并在管壁上拧压除去多余的菌液后，向一个方向均匀涂布接种于M-H琼脂平板表面，然后将平板每转动60度涂布一次，共涂三次，最后沿平板边缘涂布一圈。

盖上平皿盖，置室温干燥3~5min待平皿面稍干后用无菌镊子或纸片分配器将含药纸片平放于含菌琼脂平板表面，并轻压使其紧贴在上面。

纸片应贴得均匀，各纸片中心距离不小于24mm，纸片距平板内缘应不少于15mm。

直径为90mm 的平皿可贴6~7张纸片。

纸片贴牢后避免再次移动，因为有些药物立刻就可扩散于琼脂内。

平板经室温放置15min再倒置于35℃培养箱中，培养16~18h后阅读结果。

1.5防治措施对猪舍进行全面的消毒；病猪硫酸卡那霉素等敏感药物进行治疗对与病弱的仔猪进行补液、强心等支持疗法；对与临床水肿症状明显的猪进行消肿利尿、镇静等治疗。

对病猪使用以下处方：卡那霉素(25万单位／毫升)2毫升、5％碳酸氢钠30毫升、25％葡萄糖液40毫升，混合后1次静注，每日2次；同时肌肉注射维生素C(0.l克)2毫升，每日2次。

2.试验结果2.1病原菌的分离培养与鉴定结果2.1.1菌落形态与涂片、染色、镜检结果普通琼脂平板上形成圆形、隆起、边缘整齐、湿润、中等大小、灰白色的半透明菌落。

DOI:10.3969/j.issn.1003-1650.2024.15.028为探究青海省犊牛腹泻的优质治疗方案，本次试验依据当地牛养殖场内的犊牛腹泻发病案例，收集患病犊牛新鲜粪便为病料，采取实验室细菌分离法将病料中的大肠杆菌分离出，并明确大肠杆菌的致病性。

同时采取纸片扩散法对提取出的大肠杆菌实施药敏试验，筛选出对大肠杆菌表现敏感的药物。

研究结果表明：在本次病例中共分离出大肠杆菌致病菌株15种，且不同的菌株对药物的敏感性不同。

其中对恩诺沙星、头孢噻呋钠敏感率较高，分别为87%、80%，对链霉素、阿莫西林、四环素耐药性较高，为67%。

因此，建议该养殖户在实施犊牛腹泻治疗时，可使用恩诺沙星及头孢噻呋钠交替轮换治疗，并对发病严重的犊牛群体加以辅助药剂治疗，减少犊牛腹泻治疗的盲目性，以提升治疗效果。

一、青海省犊牛腹泻发生现状青海省作为养殖大省，牛羊养殖为当地牧民的重要经济来源。

在牛养殖期间，犊牛腹泻属于一种较为常见的传染性疾病，致病因较为复杂，通常包含环境因素、饲料因素、自身免疫因素等。

犊牛在出生之后，由于其自身的消化道系统发育不完善，对致病原的抗性差，当养殖环境不良、营养供应不足、初乳不足或无法吃上初乳的情况下，均会导致犊牛的肠胃消化功能异常，较易受各种致病原的侵染，出现腹泻病症。

通过对青海省的犊牛腹泻的发生与流行特征调查，青海省犊牛腹泻发生率逐年提升，且发病后持续周期长，药物治疗效果不佳，并且犊牛腹泻病症在经过治疗后，无法达到痊愈的效果，常表现出周期性、顽固性的传播与流行。

为更好的防治青海省犊牛腹泻疾病，降低其对犊牛养殖的影响，需加强对致病原的研究与调查，并采取致病原分离鉴定、药敏试验，分析出最佳的药物治疗方案，以期能够在犊牛腹泻发病之初，短时间内控制出病情的恶化与传播，减轻其对牛养殖产业的不良影响。

二、犊牛腹泻大肠杆菌病原分离鉴定与药敏试验1、试验材料与方法（1）病情分析在青海省格尔木市的一个肉牛养殖场内，共有牛104头，其中犊牛21头。

Veterinary clinical science | 兽医临床科学56 ·2022.010 引言犊牛腹泻性大肠杆菌病是新生犊牛群体中发病流行率较高的一类细菌性传染性疾病，有时发病率高达90%，致死率高达30%。

犊牛腹泻性大肠杆菌病主要表现为严重的腹泻和败血症，机体严重脱水，短时间内死亡，即便是能够渡过急性期，也会表现为生长发育不良，甚至停止生长，使犊牛的淘汰率显著升高，危及到养殖场的经济效益。

随着牛养殖业的迅猛发展，需要养殖户高度重视犊牛腹泻性大肠杆菌病的针对性防控，及时采取措施做好有效的病原分离鉴定，并筛选出敏感的药物，确保短时间内将病情控制住，避免病原产生耐药性，保证防治的针对性、合理性。

1 养殖场发病情况青海省海西州的某种牛场以养殖牦牛为主，2020年3月13日，在新生犊牛群体中出现一类腹泻疾病，患病牛表现为严重的腹泻，排出的腹泻物中夹杂很多没有消化的凝乳块和饲料，身体迅速脱水，眼球向内凹陷，并表现出不同程度的败血症症状，短时间内出现了死亡病例。

发病后种牛场的兽医按照细菌性腹泻开展抗生素治疗，选择青霉素、链霉素、庆大霉素等药物进行治疗，没有取得很好的效果，随后将病情上报上级的兽医站，兽医到达养殖场后结合整体的发病情况和典型的病理解剖，初步判定犊牛为大肠杆菌引发的腹泻，随后采集了病死牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、淋巴结组织进行病原分离鉴定。

2 病原分离鉴定及药敏试验大肠杆菌分离鉴定主要涉及到营养琼脂培养基、革兰氏染色液、恒温培养箱、载玻片、药敏试验纸片、光基金项目：财政部和农业农村部，国家现代农业产业技术体系资助作者简介：李国良（1976-）男，土族，青海大通人，大专，助理兽医师，研究方向：兽医。

犊牛大肠杆菌分离鉴定与药敏试验李国良，吉春花（青海省大通种牛场，青海 大通 810102）摘要：犊牛腹泻通常是由致病性的大肠杆菌侵染引发的一种威胁严重的消化道疾病，短时间内引发大量的新生犊牛死亡，造成的经济损失不可估量。