实验一大肠杆菌的培养与分离

《大肠杆菌的培养和分离》实验设计实验目的：1. 掌握大肠杆菌的培养方法和分离技巧。

3. 培养和分离大肠杆菌是许多生物技术实验的基础，通过本实验的学习，同学们可以更好地开展相关生物技术实验工作。

实验原理：大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，在微生物学及相关学科的研究中具有重要意义。

为了能够更好地开展生物技术实验，需要掌握大肠杆菌的培养方法和分离技巧。

在培养大肠杆菌时，我们一般选用LB培养基（Luria-Bertani培养基），它是一种营养丰富的培养基，可以满足大肠杆菌的营养需求。

在制备LB培养基时，需将适量的蛋白胨、酵母提取液和纯化水混合均匀后加热至沸腾约1分钟，然后加入适量琼脂糖，搅拌均匀后装入烧瓶中。

分离纯化大肠杆菌时，需要将样品（如肠道内容物、污水等）进行稀释，使其细菌浓度达到一定范围，然后在LB培养基上进行平板培养。

在培养过程中，需要控制培养温度、时间和氧气浓度等因素，以促进大肠杆菌的生长和繁殖。

随着时间的推移，大肠杆菌会在平板上生长成大量的细菌菌落，此时，我们可以将单个细菌菌落挑选出来进行分离纯化，以得到单一纯化的大肠杆菌。

实验材料与仪器：材料：LB培养基、螺旋细胞均一器、平板培养基、霉菌试验纸、吸管、医用酒精、胶体金离子分离剂等仪器：高压灭菌器、移液管、显微镜、细胞计数板实验步骤：1. 制备LB培养基。

2. 取样和稀释。

取样品（如肠道内容物、污水等），取适量于吸管中，并将其进行稀释，使其细菌浓度达到一定范围。

3. 平板培养。

将LB培养基倒入平板中，恰好覆盖平板的整个表面。

待培养基凝固后，使用螺旋细胞均一器将取样液均匀滴在培养基表面上。

将平板置于37℃恒温箱中，控制温度和氧气浓度等因素，待大肠杆菌细菌菌落生长到足够数量时，进入下一步。

4. 分离纯化。

将平板上的大肠杆菌细菌菌落挑选出来，使用吸管将细菌菌落转移到新的平板中进行分离纯化。

一般建议选择较小的细菌菌落进行挑选，这样可以减少细菌间的竞争，提高挑选单一菌株的成功率。

大肠杆菌培养和分离超净台实验准备工作2灭菌和消毒无菌操作目的：为了避免被杂菌污染。

1对实验操作空间：超净台：紫外线灭菌，过滤风桌面：酒精擦拭，酒精灯外焰附近操作2.操作者衣服和手进行：清洁和消毒，70%酒精3.避免已灭菌处理的材料用具和周围物品的接触消毒的方法1、100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、用70%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒4、氯气、高锰酸钾消毒……（1）消毒：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。

消毒与灭菌的区别（2）灭菌：灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。

以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。

实验1大肠杆菌的培养和分离超净台上紫外灯和过滤风实验过程：准备阶段：1培养基的配制，2灭菌和消毒操作阶段：1倒平板：分装固体培养基倒平板：将已灭菌的固体培养基倒入培养皿的过程。

分装培养基：1倒平板：将灭菌后的固体培养基倒入培养皿培养基冷却到60度时倒入2培养基的分装（试管，三角瓶，培养皿）倒入三角瓶和试管（漏斗法）1.培养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才能用来倒平板。

你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。

2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。

朊病毒就是蛋白质病毒，是只有蛋白质而没有核酸的病毒。

1997年诺贝尔医学/生理学奖的获得者美国生物学家斯垣利·普鲁辛纳(S.B.Prusiner)就是由于研究朊病毒作出卓越贡献而获此殊荣的。

细菌细胞壁的主要成分是肽聚糖，它使得这层壁坚韧并富有弹性。

一旦失去细胞壁，所有的细菌都将变成球形。

细菌细胞壁的主要功能是保护细胞、维持细胞形状、协助鞭毛运动等，而且还与细菌的抗原性、致病性和对噬菌体的敏感性有关。

实验1,大肠杆菌的培养和分离篇一：实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲实验目的1. 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。

2. 进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。

3. 说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。

实验材料1. 配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。

2. 配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。

实验步骤1. 培养基灭菌。

在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB 固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。

既可以通气，又不使细菌进入。

)。

将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。

同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。

2. 倒平板，倒斜面。

灭菌后。

待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。

超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min，关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯。

将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手。

待固体培养基冷却到60℃时（手放上还有些热的时候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜，右手其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约10～20mL倒入1 个培养皿中。

倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底，待凝，使之形成平面。

倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL。

大肠杆菌的分离与培养教案一、教学目标1. 理解大肠杆菌的形态、结构和生长条件。

2. 学会使用无菌技术进行大肠杆菌的分离与培养。

3. 掌握大肠杆菌的鉴别方法。

二、教学重点与难点1. 教学重点：大肠杆菌的形态、结构和生长条件，无菌技术的操作要点，大肠杆菌的鉴别方法。

2. 教学难点：无菌技术的操作要点，大肠杆菌的鉴别方法。

三、教学准备1. 实验室设备：显微镜、培养皿、接种环、试管、试剂等。

2. 实验材料：大肠杆菌菌株、培养基等。

3. 教学课件：大肠杆菌的形态、结构和生长条件，无菌技术操作流程，大肠杆菌鉴别方法。

四、教学过程1. 导入：介绍大肠杆菌的背景知识，激发学生兴趣。

2. 理论讲解：讲解大肠杆菌的形态、结构和生长条件，无菌技术的操作要点，大肠杆菌的鉴别方法。

3. 实验操作：引导学生分组进行大肠杆菌的分离与培养实验，讲解并演示无菌技术的操作流程，解答学生疑问。

4. 结果观察与分析：学生观察实验结果，分析大肠杆菌的生长特点，讨论鉴别方法的正确性。

5. 总结与评价：总结本节课的主要内容，对学生的实验操作进行评价，提出改进意见。

五、教学反思本节课通过讲解和实验操作，使学生掌握了大肠杆菌的分离与培养方法，无菌技术的操作要点和大肠杆菌的鉴别方法。

在实验过程中，学生积极参与，动手操作能力得到提高。

但部分学生在无菌技术操作中仍存在不足，需要在今后的教学中加强练习。

对实验结果的观察与分析能力也需要加强培养。

六、教学评价1. 知识掌握：评估学生对大肠杆菌的形态、结构和生长条件的理解程度。

2. 技能操作：评价学生无菌技术操作的准确性和熟练度。

3. 实验报告：评估学生的实验观察结果、分析能力和鉴别方法的掌握情况。

七、教学拓展1. 介绍其他常见细菌的分离与培养方法。

2. 探讨细菌在自然界中的作用和与人类生活的关系。

3. 简介大肠杆菌在生物技术中的应用，如基因工程、疫苗研发等。

八、教学实践活动1. 组织学生参观实验室，了解实验室设备和细菌培养的基本流程。

.实验1：大肠杆菌的培养和分离一、教学要求二、基本内容1．培养基的种类和化学成份培养基的种类有很多划分标准，按物理性质分：固体培养基和液体培养基（加入琼脂多少）。

液体培养基用于扩大培养和工业生产，固体培养基用于菌种分离，鉴定，计数（菌落数量）。

培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。

按照微生物的同化作用类型是自养还是异养，碳源不同，自养微生物为无机碳源，如硝化细菌是二氧化碳或碳酸盐，异养微生物为有机碳源，如大肠杆菌是葡萄糖等有机物。

2．常见微生物类群原核生物（如细菌大肠杆菌――二分裂、革兰氏阴性、异养兼性厌氧性肠道杆菌、蓝藻、支原体、衣原体、放线菌等）、原生生物（草履虫、变形虫等）、真菌（酵母菌――出芽生殖.异养兼性厌氧性微生物、霉菌、食用菌）、病毒等。

细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，无成型的细胞核，只有一环状DNA分子（拟核）。

以分裂（二分裂）的方式繁殖，分裂速度很快。

用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌（革兰氏染液染色后，再脱色处理，细菌仍保留染色液的颜色）和革兰氏阴性菌两大类，区别在细胞壁的成分不同。

大肠杆菌是革兰氏阴性（细胞壁薄，有荚膜）、兼性厌氧的肠道杆菌。

3．无菌技术对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。

灭菌方法：。

灼烧灭菌法①接种环、接种针、试管口等使用..②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱。

③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。

④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。

4．培养基的配制原则目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。

营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。

pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。