实验1大肠杆菌的培养和分离

大肠杆菌培养的基本操作介绍如下：
1.紫外线灭菌：将需要使用的培养物和培养器具放置在紫外线灯
下，进行消毒处理。

2.制备培养基：制备适当的培养基。

常用的培养基包括LB培养基
和M9培养基等。

3.接种：选取一定数量的大肠杆菌，将其接种到培养基中。

4.培养：将接种后的培养基放置在恒温摇床上，以适当的温度和
湿度条件下进行培养。

5.观察：观察培养物的生长情况，记录生长速度和菌落形态等信
息。

6.分离：将培养物分离，进行纯化处理。

7.储存：将分离后的纯化菌株储存，并进行标记和记录。

以上是大肠杆菌培养的基本操作，需要注意消毒、无菌操作和记录等方面的细节。

一、实训目的1. 熟悉大肠杆菌的生物学特性。

2. 掌握大肠杆菌的纯培养方法。

3. 学习无菌操作技术。

4. 了解大肠杆菌的培养条件及其对实验结果的影响。

二、实训时间2023年X月X日三、实训地点实验室微生物实验室四、实训器材与试剂1. 器材：无菌培养皿、无菌接种环、无菌吸管、无菌试管、酒精灯、酒精棉、无菌滤纸、恒温培养箱、显微镜等。

2. 试剂：大肠杆菌菌种、LB液体培养基、LB固体培养基、无菌水、酚红指示剂、无菌甘油等。

五、实训内容1. 大肠杆菌的纯培养2. 大肠杆菌的形态观察3. 大肠杆菌的生长曲线测定4. 大肠杆菌的接种方法5. 大肠杆菌的保存方法六、实训步骤1. 准备工作- 检查实验器材是否齐全，并进行消毒处理。

- 准备LB液体培养基和LB固体培养基，并调节pH值至7.0。

- 将大肠杆菌菌种从冰箱中取出，恢复至室温。

2. 大肠杆菌的纯培养- 将无菌培养皿打开，用酒精棉擦拭消毒。

- 将菌种接种于LB固体培养基上，用无菌接种环进行划线分离。

- 将培养皿倒置放入恒温培养箱中，培养24小时。

3. 大肠杆菌的形态观察- 取出一部分培养24小时的大肠杆菌菌落，涂片。

- 用酒精灯进行固定，用结晶紫染色。

- 在显微镜下观察大肠杆菌的形态。

4. 大肠杆菌的生长曲线测定- 将大肠杆菌接种于LB液体培养基中，放入恒温培养箱中培养。

- 每隔一定时间取样，测量菌液的吸光度，绘制生长曲线。

5. 大肠杆菌的接种方法- 将无菌吸管插入LB固体培养基中，吸取少量菌液。

- 将菌液滴加于无菌培养皿上，用无菌接种环进行划线分离。

6. 大肠杆菌的保存方法- 将培养24小时的大肠杆菌菌液，加入无菌甘油。

- 将菌液置于-80℃的冰箱中保存。

七、实验结果与分析1. 大肠杆菌的纯培养- 成功分离出纯的大肠杆菌菌落。

2. 大肠杆菌的形态观察- 大肠杆菌呈杆状，两端钝圆，单个或成对排列。

3. 大肠杆菌的生长曲线测定- 大肠杆菌的生长曲线分为四个阶段：迟缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。

分离大肠杆菌的方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，也是微生物学研究中的重要模式生物。

分离大肠杆菌是许多实验室中常见的操作，这里将介绍几种常用的分离方法。

1.无菌技术准备在进行分离大肠杆菌之前，必须保证实验环境的无菌。

操作前要用75%乙醇对操作台面进行消毒，使用无菌培养皿和试管，并佩戴无菌手套。

2.样品采集从目标样品中采集含有大肠杆菌的样品。

常见的样品类型包括食品、水样、粪便等。

采集样品时要注意避免污染，使用无菌容器收集样品。

3.预处理样品将采集到的样品进行预处理，以提高大肠杆菌的分离效率。

常用的预处理方法包括：(1) 粪便样品：将粪便样品稀释于无菌生理盐水中，通过离心操作去除大部分固体颗粒。

(2) 食品样品：将食品样品加入适量的无菌生理盐水中，进行均匀搅拌。

(3) 水样：直接使用无菌容器收集水样，避免污染。

4.选择培养基根据实验需要选择适合分离大肠杆菌的培养基。

常用的培养基包括营养琼脂糖平板（Nutrient Agar Plate）、MacConkey琼脂糖平板（MacConkey Agar Plate）等。

这些培养基含有适合大肠杆菌生长的营养物质，并可以通过某些特殊成分选择性地抑制其他细菌的生长。

5.涂布法涂布法是最常用的分离大肠杆菌的方法之一。

具体操作步骤如下：(1) 取一支无菌的鉴别环，将其蘸取预处理后的样品。

(2) 将鉴别环均匀地涂布在培养基平板的表面上。

(3) 使用无菌铁环或无菌玻璃杆均匀涂布，以保证样品的均匀分布。

(4) 将涂布好的培养基平板放置在恒温培养箱中，以适当的温度（通常为37摄氏度）进行培养。

6.滤膜法滤膜法是一种通过滤膜来分离大肠杆菌的方法。

具体操作步骤如下：(1) 准备无菌滤膜和滤膜培养基。

(2) 将预处理后的样品滤过滤膜，将滤膜放置在滤膜培养基平板上。

(3) 将滤膜培养基平板放置在恒温培养箱中进行培养。

7.生物化学试验分离大肠杆菌后，需要进行进一步的鉴别和确认。

大肠杆菌的培养方法
大肠杆菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然界中，也是一种重要的实验室模式生物。

在生物学、医学、食品工业等领域中，大肠杆菌的培养方法是非常重要的。

下面我们来了解一下大肠杆菌的培养方法。

1. 培养基的选择
大肠杆菌可以在多种培养基上生长，但最常用的是LB培养基。

LB 培养基是一种富含营养物质的培养基，可以提供大肠杆菌所需的所有营养物质。

此外，还有一些特殊的培养基，如M9培养基、TB培养基等，可以根据实验需要选择。

2. 培养条件的控制
大肠杆菌的生长需要一定的温度、pH值和氧气含量等条件。

一般来说，大肠杆菌的最适生长温度为37℃，pH值为7.0左右，需要充足的氧气供应。

因此，在培养大肠杆菌时，需要控制好这些条件，以保证细菌的正常生长。

3. 培养方法的选择
大肠杆菌的培养方法有液体培养和固体培养两种。

液体培养适用于大规模培养，可以在较短时间内获得大量的细菌。

固体培养适用于单个菌落的分离和纯化，可以使不同菌株之间不互相干扰，方便后
续的实验操作。

4. 培养时间的控制
大肠杆菌的生长速度较快，一般在液体培养中可以在12-16小时内达到对数生长期，而在固体培养中需要24-48小时。

因此，在培养大肠杆菌时，需要控制好培养时间，以避免过度生长或过早停止生长。

大肠杆菌的培养方法是实验室中非常重要的一部分。

通过选择合适的培养基、控制好培养条件和时间，可以获得高质量的大肠杆菌菌株，为后续的实验操作提供保障。

大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案实验原理：1、大肠杆菌的性质：大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。

在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。

三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。

生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。

MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。

半固体中沿穿刺线向四周生长。

2、沙门氏杆菌的性质：沙门氏杆菌是G-直杆菌。

在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。

能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。

实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：（1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。

（2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。

（3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。

三、细菌分离培养：（1）取出培养了24小时的麦康凯平板。

挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。

（2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。

四、细菌的鉴定纯化：（1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。

大肠杆菌培养步骤方法大肠杆菌是一种重要的细菌，它在实验室中被广泛用于分子生物学研究和基因工程。

下面是大肠杆菌的培养步骤方法，共50条，并展开详细描述：1. 准备所需的培养基及试剂，包括琼脂、培养基粉、蔗糖、牛肉膏、酵母提取物、氯化钠、磷酸二氢钾等。

2. 将琼脂及培养基粉加入适量蒸馏水中，搅拌均匀后加热至沸腾，然后灭菌。

3. 将灭菌后的琼脂培养基倒入培养皿中，使其凝固成固体琼脂。

4. 取出实验室保存的大肠杆菌菌种，用无菌吸管从存储容器中取出适量菌液。

5. 将菌液均匀地涂布在琼脂培养皿表面，待其吸收后轻轻晃动培养皿使其均匀分布。

6. 将涂布好的培养皿倒置放入孵化箱中，以37℃恒温孵育。

7. 每隔一段时间观察培养皿上的菌落形成情况，选择合适的菌落进行分离和培养。

8. 在培养过程中，注意观察是否有任何异常，如细菌变异、污染等情况。

9. 定期检查培养基的PH值和温度，保持在适宜的范围内。

10. 当需要保存大肠杆菌菌株时，可以将单一菌落悬浮在无菌离心管中，并添加10%甘油保藏在-80℃低温库中。

11. 每次操作前要做好无菌操作，以避免外源菌的污染。

12. 大肠杆菌培养时，应严格控制氧气供应，可以选择静态培养或者摇瓶培养。

13. 在摇瓶培养中，要保持培养液的充分通气，防止细菌缺氧而死亡。

14. 对于含氧厌恶的大肠杆菌菌株，可以选择在含葡萄糖并定期通氮气的缺氧箱中进行培养。

15. 大肠杆菌培养皿观察时，可使用显微镜进行观察，观察菌落形态、大小和颜色等特征。

16. 对于选择性培养基的应用，可以根据需要添加抗生素或者其他选择性物质来筛选感兴趣的菌株。

17. 在进行大肠杆菌培养时，要注意控制培养基的含盐量和碳源，以及其他微量元素的添加。

18. 可以通过PCR或者其他分子生物学方法快速鉴定大肠杆菌的种属和亚种属。

19. 在大肠杆菌的培养中，要注意排放生物危害废弃物，并采取相应的安全防护措施。

20. 大肠杆菌培养时，要做好相关记录，包括菌种信息、培养条件、观察结果等。

大肠杆菌一般培养方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，也是生物学研究中最常用的模式菌株之一、大肠杆菌具有广泛的分布范围，可以在许多环境中生存和繁殖。

本文将介绍大肠杆菌的一般培养方法。

一、培养基的制备大肠杆菌的培养基通常包括两个主要组分：固体培养基和液体培养基。

固体培养基用于菌落计数和细菌分离，并可用于培养单个菌落。

液体培养基则可用于扩大菌种和进行大规模的培养。

1.固体培养基的制备最常用的固体培养基为琼脂培养基。

制备过程如下：（1）称取所需琼脂，加入适量的蒸馏水中，进行均匀搅拌。

（2）加热至100摄氏度，溶解琼脂。

（3）煮沸1-2分钟，消毒琼脂。

（4）冷却至约50摄氏度。

（5）加入所需的培养基成分，如营养物质和抗生素等。

（6）倒入培养皿中，待凝固后即可使用。

2.液体培养基的制备最常用的液体培养基包括LB培养基（Lysogeny Broth）和TB培养基（Terrific Broth）。

制备过程如下：（1）称取所需培养基成分，加入适量蒸馏水中。

（2）加入琼脂和洗涤剂等成分，以调整液体的黏度和表面张力。

（3）调整pH值。

（4）加热并搅拌溶解，待溶解后冷却。

（5）过滤培养基，以去除不溶性杂质。

（6）分装到培养瓶中。

二、大肠杆菌的预培养将保存的大肠杆菌菌种(如冻存菌)挑取一高洁净的培养皿上贴菌，通常可采用菌板上交叉涂布法，用三角稀菌棒反复涂抹菌落。

之后用无菌瓷珠轻压菌落，使其均匀分散于培养皿上。

贴菌后将培养皿倒置，避免水分凝结在盖子上。

培养皿翻转的目的是避免水珠滴入培养基内，影响气体交换。

然后将培养皿放入培养箱中，37℃保温，24小时后进行预培养。

三、大肠杆菌的正式培养预培养后，取适量的大肠杆菌菌落液，加入培养基中，并进行摇床培养。

有时候，还需要在培养基中添加相应的抗生素，以筛选具有特定基因或表现的菌株。

培养条件一般为37摄氏度、摇床转速为200-250转/分钟。

培养时间根据需要和实验目的而定。

专题四选修一生物技术实践必背知识实验一大肠杆菌的培养和分离【考点一】培养基1、培养基配置①微生物的生命活动需要五大营养要素：水、无机盐、碳源、氮源、生长因子；②有的物质既是碳源又是氮源（为微生物生长提供碳元素和氮元素），如：蛋白质、蛋白胨；③有的既是碳源又是生长因子（是微生物生长不可缺少的微量有机物），如：酵母提取物；④“细菌喜荤，霉菌喜素”；细菌喜37℃的温度；霉菌喜25-30℃的温度；⑤细菌的培养基：蛋白胨、酵母提取物、一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压；通常在中性偏碱的环境中生长；⑥霉菌的培养基：一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可；通常在中性偏酸的环境中生长；⑦在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要适宜的pH、温度以及特殊营养物质，以满足微生物生长对的要求。

2、培养基的种类及用途：①液体培养基：呈现液态，用于扩大培养和工业生产；②固体培养基：配制时需加入琼脂（凝固剂），呈固态，用于菌种分离、鉴定、计数等；③我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌，用LB固体培养基来分离大肠杆菌。

【考点二】灭菌和消毒1、无菌技术：人们利用微生物完成一定的反应，必须要求某种微生物是没有被其他微生物污染的，因此，在培养微生物时必须进行无菌操作；2、灭菌是用物理或化学的方法，杀死或除去环境中的一切微生物的方法。

杀死病原菌的方法叫消毒。

如：实验室要对使用前和使用后的培养基、各种容器进行灭菌；要对实验服、对病人的排泄物和衣物进行消毒。

3、干热灭菌法：是利用火焰将接种环和试管上的微生物烧死（又称灼烧灭菌法），或在140-160℃的烘箱中加热2-3h，将微生物的营养体和芽孢杀死。

4、加压蒸气灭菌法（高压蒸气灭菌法）：这是生产和实验室常用的灭菌法，将灭菌锅内通入压力达到1000g/cm2的高压蒸气，锅内温度达121℃，持续15-30min，即可达到灭菌目的；注意：当培养基内有葡萄糖时，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2压力（90℃以上）灭菌30min。

【关键字】报告大肠杆菌培养实验报告篇一：大肠杆菌检测实验报告国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数实验目的实验原理：国标法操作的原理实验器材：培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台实验药品：磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl实验步骤：一：10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml 量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。

灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。

用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min二：1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。

2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。

3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。

4：灭完菌后放入超净台中备用。

三：1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。

3：取4只试管，编号1—44：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。

6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。

9：取4只平皿，编号1—410：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。

缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。

大肠杆菌一般培养方法大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，也是实验室常用的模型菌株之一、它具有许多重要的应用价值，如基因工程、发酵制药和生物学研究等。

因此，了解大肠杆菌的常规培养方法是非常重要的。

大肠杆菌的培养基本上可以分为两个类型：液体培养基和固体培养基。

下面我将为您详细介绍。

1.液体培养基液体培养基是一种将细菌培养在含有养分的液体中的方法。

使用液体培养基可以快速扩大大肠杆菌数量，并且可以用于后续实验，如基因克隆和蛋白表达等。

下面是一种常见的液体培养基配方：- 色氨酸酸盐 (tryptone): 10g/L- 酵母粉 (yeast extract): 5g/L-氯化钠(NaCl):10g/L- 葡萄糖 (glucose): 5g/L-洗涤剂提供的磷酸缓冲溶液(PBS)：500mL，pH值自动调整到7.0将这些成分溶解在适量的去离子水中，并将溶液进行无菌过滤。

然后将无菌培养基分装到培养瓶中，每个瓶子的体积约为250-500mL，用铝箔进行覆盖。

接种数量的大肠杆菌通常为菌液的10-20倍。

将培养瓶放在摇床上以200rpm的速度培养，温度为37°C。

培养时间一般为12-16小时。

2.固体培养基固体培养基是将细菌培养在含有固体化剂（如琼脂）的培养基上的方法。

使用固体培养基可以使大肠杆菌形成菌落，便于分离和挑选单个菌落。

下面是一种常见的固体培养基配方：- 琼脂 (agar): 15g/L- 色氨酸酸盐 (tryptone): 10g/L- 酵母粉 (yeast extract): 5g/L-氯化钠(NaCl):10g/L- 葡萄糖 (glucose): 5g/L-洗涤剂提供的磷酸缓冲溶液(PBS)：500mL，pH值自动调整到7.0将这些成分溶解在适量的去离子水中，并将溶液进行无菌过滤。

然后将无菌培养基分装到试管或平盘中，每个试管或平盘的体积约为10-15mL或20-25mL，用无菌塞子或膜进行封口。

大肠杆菌的保存与培养大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道菌，在许多实验室中用作模型生物。

为了长期保存和使用大肠杆菌，需要进行保存和培养。

本文旨在介绍大肠杆菌的保存和培养方法。

大肠杆菌的保存方法冻存法冻存法是保存大肠杆菌最常用的方法之一。

它使用冻干法或液氮法将菌株保存在低温下，以避免菌株变异或污染。

冻干法冻干法是将菌株在液氮下冷冻后进行干燥。

这种方法需要使用冻干器。

冻干器通过减压将菌株冻干，并将其保存在低温下。

液氮法液氮法是将菌株在液氮中冷冻后进行保存。

菌株存储在液氮罐中，使用时取出并解冻。

非冷冻法非冷冻法也可以用于保存大肠杆菌，例如保存在琼脂板上或制备干粉剂。

不过，这些方法缺乏长期保存和使用的稳定性，更适合短期保存。

鉴定编码大肠杆菌可以根据不同的基因、菌株和形态进行分类。

为了便于记忆和识别，每个菌株都有一个独特的编码。

这些编码可以在数据库中查找，以便进行鉴定和分类。

大肠杆菌的培养方法培养基培养基是生长大肠杆菌的基本食物。

常用的培养基包括肉汤培养基、三蔗糖培养基和Luria Broth培养基。

这些培养基提供大量的营养物质和水分，以支持细菌的生长和繁殖。

培养条件大肠杆菌的生长需要适当的环境条件。

最适宜的温度为37°C，pH值为7.0到7.5。

此外，大肠杆菌需要氧气和适当的紫外线照射。

分离和纯化分离和纯化是从混合菌群中收集大肠杆菌的过程。

这些步骤有助于在单独的培养皿中产生纯种大肠杆菌，并减少混杂菌群带来的影响。

分离大肠杆菌的常用方法是麻醉稀释法，也称为涂片法。

涂片法将混合菌群分散到琼脂板的表面上，并等待菌落生长和扩散。

选出大肠杆菌的单一菌群后，可以将其移植到另一培养皿中进行纯化。

大肠杆菌是实验室常见的菌株之一。

为了存储和使用大肠杆菌，需要使用冻存法或其他方法保存，使用培养基提供必要的营养物质支持生长，根据适宜的生长条件进行培养，加强分离和纯化步骤可以提高培养质量。

这些步骤可以帮助实验人员快速高效地进行大肠杆菌的保存和培养。

分离大肠杆菌的方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，常存在于人和动物的肠道中。

尽管大肠杆菌在正常情况下对人体有益，但某些菌株也可以引起严重的感染和疾病。

因此，分离大肠杆菌并进行进一步研究和鉴定是非常重要的。

本文将介绍几种常用的分离大肠杆菌的方法。

1. 纯培养基分离法纯培养基分离法是分离大肠杆菌的常用方法之一。

首先，可以使用选择性培养基，如MacConkey琼脂培养基，其中含有发酵大肠杆菌的特定物质（如乳糖）。

大肠杆菌能够利用乳糖产生酸，导致琼脂变成红色。

然后，从样品中接种适量的细菌在含有选择性培养基的琼脂平板上进行培养。

大肠杆菌会在琼脂上生长并形成典型的红色菌落。

2. 群体分离法群体分离法是一种通过分离菌落的方法来分离大肠杆菌的有效方法。

首先，将样品均匀涂布在含有琼脂的培养基上，并在适当的温度下进行培养。

大肠杆菌在琼脂上形成单独的菌落，而其他细菌可能形成不同形状或颜色的菌落。

然后，通过挑选典型的菌落进行分离并进行进一步鉴定。

3. 抗生素敏感性试验大肠杆菌对不同抗生素的敏感性有所不同，因此抗生素敏感性试验可以作为分离大肠杆菌的方法之一。

将大肠杆菌接种在含有不同抗生素的琼脂平板上，然后观察菌落的生长情况。

大肠杆菌对某些抗生素具有抗性，因此在含有这些抗生素的琼脂平板上，大肠杆菌的生长会受到抑制，而其他细菌则可能继续生长。

通过观察菌落的生长情况，可以初步判断出含有大肠杆菌的菌落。

4. 生化试验生化试验是一种通过检测大肠杆菌所产生的特定酶或代谢产物来分离和鉴定大肠杆菌的方法。

例如，大肠杆菌能够产生β-半乳糖苷酶，可以将乳糖水解成葡萄糖和半乳糖。

通过将大肠杆菌接种在含有乳糖的培养基上，并添加某种指示剂，如菲嗪红，可以观察到培养基的颜色变化。

如果大肠杆菌存在，培养基会变成黄色。

5. 分子生物学方法分子生物学方法是一种准确且快速的分离大肠杆菌的方法。

通过检测大肠杆菌特有的基因或DNA片段，如16S rRNA基因，可以准确鉴定大肠杆菌。

探讨大肠杆菌的培养及药敏试验摘要:随着社会经济带动养殖业的发展，产生的大量的环境及其他问题也亟待解决[1]。

其中，大肠杆菌属于常发性感染细菌病，其传播范围大、病情严重，给养殖经济带来严重损失，有效预防大肠杆菌病是现代养殖业需要研究的重要课题[2]。

本文研究大肠杆菌的分离纯化培养及对各种抗生素的敏感程度。

得到结论：大肠杆菌对抗生素环丙沙星、头孢唑啉敏感，对氯霉素、庆大霉素、复方新诺明、丁胺卡那、诺氟沙星表现为中度敏感，氨苄西林、红霉素、青霉素则表示为不同程度上的耐药性。

关键词：大肠杆菌分离纯化药敏实验抗生素引言21世纪以来，我国养殖业不断扩大，随着养殖市场规范化、集约化养殖程度的增加，随之而来的动物疾病也越发严重[3]，尤其是大肠杆菌病日益突出[4]。

大肠杆菌可引起鸡、鸭、猪、兔、羊、水貂、狐狸等多种动物的疾病[7]，常见的大肠杆菌病例如：仔猪水肿病、动物肺炎及腹泻等。

为此也给养殖业带来了严重的经济损失。

大肠杆菌是革兰氏阴性兼性厌氧菌，是一种常见的胃肠道细菌和环境污染源。

它是引起人和动物并发症[5]的重要病原体。

目前，抗生素治疗是控制疾病最有效的方法，由于部分药物抗菌活性强、价格低廉、易被口服[6]吸收，但随着抗生素的过度使用，导致耐药严重。

本课题旨在为临床合理用药提供可靠依据[3]。

1材料与方法1.1材料大肠埃希氏菌（ATCC25922标准菌株[8]，斜面菌种，上海鲁微科技有限公司）营养琼脂培养基（杭州微生物试剂有限公司)[9]，LB肉汤培养基（长沙市雨花区加德实验仪器），10种抗生素药敏纸片（氯霉素、庆大霉素、复方新诺明、丁胺卡那、环丙沙星、头孢唑啉、氨苄西林、诺氟沙星、红霉素[10]、青霉素等购于常德比克曼生物科技有限公司）[11]，电热恒温培养箱DNP 型( 上海精宏实验设备有限公司) ; 高压蒸汽灭菌器YX － 280D + ( 合肥市华泰医疗设备有限公司) ; 紫外灯2537A 型( 江苏申星光电医疗器械有限公司)[9]。

大肠杆菌如何培养大肠杆菌（Escherichia coli）是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阴性菌，是常见的肠道菌群中的一种。

大肠杆菌在科研领域和工业领域中非常重要，因为它作为一种模式微生物，广泛应用于基因工程、蛋白表达、酶制备、细胞生物学等领域的研究和应用。

培养大肠杆菌需要一定的培养基和条件，下面将介绍大肠杆菌的培养方法。

一、培养基的准备培养大肠杆菌所需的基本培养基是含有营养物质的培养液，如Luria-Bertani培养基（LB培养基）。

LB培养基的主要成分包括蛋白胨、酵母提取物、氯化钠和葡萄糖。

可以根据需要对LB培养基进行改良，如添加不同的抗生素以筛选转基因菌株。

二、大肠杆菌的分离和保存1.分离方法：（1）从样品中取一小部分，如土壤样品、水样或其他样品，制备10倍稀释系列。

（2）将每个稀释液均匀地涂布到含有LB培养基的琼脂平板上。

（3）将琼脂平板倒置放入37℃恒温培养箱中培养约12-24小时，直到出现菌落。

（4）将不同形态的菌落挑选出来，用成层排样法分离出单斑菌株。

2.保存方法：（1）利用冷冻保存：将单斑菌落接种到含有LB培养基和15%甘油的离心管中，混匀后急速冷冻到-80℃，并进行长期保存。

（2）利用冷冻干燥保存：将单斑菌落接种到含有LB培养基的离心管中，培养后在-80℃的环境下进行冷冻干燥。

三、大肠杆菌的液体培养1.悬浮培养：（1）从保存的冷冻物中，挑选适量的菌落接种到含有LB培养基的培养瓶中。

（2）将培养瓶放入37℃恒温摇床中以200-250rpm的振荡速度摇培养约8-12小时。

2.深层培养：（1）取一定量的培养液接种到含有LB培养基的试管中，将试管倾斜放置，使培养液接触空气。

（2）将试管放入37℃恒温培养箱中培养12-24小时，直到培养液产生沉淀。

四、大肠杆菌的固体培养1.斜面培养：（1）将大肠杆菌接种到含有LB培养基的琼脂平板上。

（2）将琼脂平板倒置放入37℃恒温培养箱中培养约12-24小时，直到出现菌落。