微生物学实验10分析17页PPT

器材与试剂的选用原则
03
如无菌操作、适用性、经济性等
02
细菌形态与结构观察
细菌培养及形态特征
01
02
03
细菌培养方法
包括需氧培养、厌氧培养 和兼性厌氧培养等，不同 种类的细菌需要不同的培 养条件。
细菌菌落特征
观察细菌在固体培养基上 形成的菌落，了解其形状、 大小、颜色、透明度等特 征。
细菌细胞形态
05
微生物代谢活性测定
生长曲线测定方法
直接计数法
通过显微镜直接观察并计数微生物数量，适用于较大微生物如细 菌、酵母菌等。
比浊法
利用微生物生长引起培养液浊度变化来测定生长曲线，操作简便 但易受杂质干扰。
平板菌落计数法
将待测样品稀释后涂布于固体培养基表面，培养后计数形成的菌 落数，适用于可形成菌落的微生物。
原理
病毒必须寄生在活细胞内才能增 殖，通过提供适宜的细胞环境， 使病毒在细胞内复制并产生子代
病毒。
病毒检测技术及应用
免疫学方法
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过酶联免疫吸附试验 （ELISA）、免疫荧光技术等检测病毒抗原或抗体。
分子生物学方法
基于病毒核酸的特异性，利用PCR、实时荧光定量PCR等技术扩增 并检测病毒核酸。
微生物学实验ppt课件
contents
目录
• 实验基础知识 • 细菌形态与结构观察 • 真菌形态与结构观察 • 病毒培养与检测技术 • 微生物代谢活性测定 • 微生物遗传与变异研究 • 微生物生态学及环境因子影响研究
01
实验基础知识
微生物学概述
类生活中的作用：如 生态平衡、发酵工业 等
生理生化鉴定
利用真菌的生理生化特性，如营养需 求、代谢产物等，进行进一步的分类 鉴定。

厚标本和薄标本
4 - 5 um 2um
基础知识
三、 实验步骤
•
(一) 显微镜的使用
(1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要 双眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。 (2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备 好。 (3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否 完整和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上
微生物学实验( 详细介绍)
课程组人员: 王淑军 暴增海 马桂珍
王洪斌 陈静
制作人员: 马桂珍
暴增海
课 程 简 介
微生物学实验课是微生物学课程教学中的一个重要环节。
本课程总计36学时，使用教材是沈萍主编的《微生物学试验》
（第三版）。通过本课程的学习，使学生了解微生物学的基 本知识；巩固和加深所学理论知识；掌握微生物学最基本的
DIC显微镜下的硅藻
（伪彩色）
8. 倒置显微镜
9. 透射电子显微镜
莱卡超薄切片机
JEM-1011透射电子显微镜
内质网透射电镜图（伪彩色）
冰冻蚀刻电镜照片
10. 扫描电子显微镜
JEOL扫描电子显微镜
人类血细胞SEM照片
11. 显微操作技术
尼康NT-88NE显微操作/注射 仪
显微镜的分辨率: 也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离， 分辨距离越大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨
操作技能。同时，通过实验，培养学生培养学生独立思考和
理论联系实际能力；养成实事求是、严肃认真的科学态度， 以及敢于创新的开拓精神；并在实验中进一步提高学生的科 学素质修养。
实 验 内 容

实验一 显微镜使用及微生物形态观察

实验六
实验五 培养基的制备、 器具包扎和灭菌
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1
目的要求
了解培养基的配制原理和方法，掌握其 配制过程。
了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和 加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
熟悉分离、培养微生物前的有关准备工 作及操作方法。
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2
实验原理
培养基
据组成成分可分为:
1.合成培养基ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质 配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
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8
紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开 紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射 紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强 灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透 力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫 外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。
化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲 醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、 漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是 杀菌剂，有的是抑菌剂。
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可 溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O
等。
高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀 菌灯。
其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、 刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角 瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、 各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。
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16
高氏一号培养基

基础生物学r footer
实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验原理
在我们周围环境中存在着种类繁多、数量庞大的微 生物，他们很小，人们用肉眼看不到，将他们在一定 的温度下培养一段时间，可繁殖成一个个肉眼可见的 细胞群体，就可以进行鉴别。
接种是指在无菌操作条件下，将某种微生物的纯种 移接到适合微生物其生长的新鲜培养基中或生物体内 的一种操作过程。
分装时不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免引起污 染。
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
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实验一 培养基的配置、分装与灭菌 思考题
1.思考牛肉膏蛋白胨培养基属于何种培养基？
2.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
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表面（根霉点一点，曲霉、酵母可点3-4点）。 （2）平板接斜面
实验二 环境中微生物的监测与菌落识别
实验目的 实验原理 实验器材 实验方法 实验结果 注意事项 思考题
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
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实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验目的
掌握各种微生物接种的基本操作技术； 初步了解周围环境中微生物的分布状况； 熟悉四大类微生物菌落的形态特征。
穿刺接种
用接种针挑取菌种后，插入固 体培养基内（不要刺到底部）， 再沿原路拔出。 此法用于厌气性细菌接种、检 查细菌的运动能力。
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
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实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验方法

神经毒素： 细胞毒素 肠毒素
内毒素毒性作用
致热作用 白细胞反应 内毒素血症及内毒素性休克 弥漫性血管内凝血（DIC）
细菌内、外毒素的比较
区别要点 来源
化学成分 稳定性 抗原性
毒性作用
外毒素
内毒素
G+菌和少数G－菌，多分 G－菌细胞壁，菌
泌至菌体外
体裂解后释放
蛋白质
脂多糖
不稳定，
稳定
强，刺激机体产生抗毒素，经甲醛处理不能制 可被甲醛脱毒制成类毒素 成类毒素
革兰阳性菌 染色结果图
革兰阴性菌
染色原理
★渗透学说：与肽聚糖结构有关 ★化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐
有关 ★等电点学说：与细菌所带电荷有关
革兰染色意义
★有助于鉴别细菌 ★有助于选择用药 ★有助于了解细菌的致病性
影响革兰染色的因素
操作因素 ★涂片的厚薄 ★脱色时间的长短
染液因素 ★卢戈碘液放置时间过长 ★ 95％乙醇挥发 ★结晶紫与草酸铵混合时间太长
对胞内寄生菌感染的免疫：主要依靠细胞 免疫抗感染
医院感染
医院感染的概念
广义上讲，医院内感染包括在医院内各 类人群所获得的感染，主要指病人在住 院期间有又发生的其它感染。
感染率：
发生感染的病人数
感染率＝
出院病人数
×100％
一、二、三级医院总的医院感染率应低于 7％、8％、10％
医院感染的流行病学
败血症：病原菌侵入血流，生长繁殖，造成明显 损害，出现全身中毒症状。
脓毒血症：化脓性细菌由病灶侵入血流后，在其 中大量繁殖，并随血流向全身扩散，在组织中形 成多发性化脓性病灶。
毒血症：病原菌在机体局部生长繁殖，不入血， 但其释放的毒素可入血，引起特殊临床症状。

微生物的基因突变
介绍微生物的染色体、质粒等遗传物质及其 特点。
阐述基因突变的概念、类型、特点以及在微 生物育种中的应用。
微生物的基因重组
微生物遗传变异在工业生产中的应用
介绍基因重组的概念、类型以及在微生物遗 传育种中的应用实例。
探讨如何利用微生物的遗传变异特性改良菌 种，提高工业生产效率。
2024/1/29
代谢组学技术
代谢组学技术可以分析微生物的代谢产物，为微生物的生理生化特 性和分类鉴定提供重要依据。
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06
微生物学实验的拓展与应 用
2024/1/29
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环境微生物学实验拓展
土壤中微生物的分离与鉴定
利用选择性培养基分离土壤中的不同种类微生物，并通过生化试验和分子生物学方法进行鉴 定。
水体中微生物的检测与评估
针对不同类型的临床标本，设计相应的分离培养基和鉴定方法，准确鉴定病原微生物种
类。
药物敏感试验与耐药性监测
对分离得到的病原微生物进行药物敏感试验，指导临床合理用药；同时监测病原菌的耐 药性变迁情况，为防控策略提供依据。
2024/1/29
免疫学诊断方法的建立与应用
利用免疫学原理和技术手段，建立针对特定病原体的免疫学诊断方法，提高诊断的准确 性和时效性。
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微生物的代谢与发酵
微生物的代谢类型
包括发酵、呼吸等，以及不同代谢类型的比较 与特点。
重要的微生物代谢产物
如乙醇、丙酮酸、乳酸等，以及这些代谢产物 在工业生产中的应用。
2024/1/29
发酵过程控酵过程中污染的控制与防治。
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微生物的呼吸作用与氧化磷酸化
严格遵守实验室安全规定和 操作规程
认真预习和复习实验内容， 明确实验目的和要求

医院感染
分为内源性感染（由体内正常菌 群引起的感染）和外源性感染（ 由外界环境中的微生物引起的感
染）。
感染类型
局部感染局限于某一部位，而全 身感染则涉及多个器官和系统。
局部感染与全身感染
在医院等医疗机构内获得的感染 ，多由耐药菌引起，治疗难度较 大。
微生物感染的预防与治疗
预防措施
包括个人卫生、环境卫生、疫苗接种等，以 降低感染风险。
无菌操作
进行微生物实验时，要保 持无菌操作环境，避免杂 菌污染。
实验记录
详细记录实验过程和结果 ，包括培养基的配制、接 种方法、培养条件、观察 结果等。
实验后处理
实验结束后，要对实验器 材进行清洗和消毒处理， 保持实验室的整洁和卫生 。
2023
REPORTING
THANKS
感谢观看
食品工业
利用微生物发酵技术生产酒类、面 包、酸奶等食品。
03
02
农业应用
利用微生物制剂防治植物病害、促 进作物生长等。
生物能源
利用微生物发酵产生沼气、生物柴 油等可再生能源。
04
2023
PART 05
微生物的免疫与感染
REPORTING
微生物的免疫机制与特点
先天性免疫
通过遗传获得的非特异性免疫，包括皮肤、黏膜 屏障、吞噬细胞等。
病原学检查
通过直接涂片镜检、分离培养等方法确定病 原微生物种类。
免疫学检查
利用抗原抗体反应等免疫学原理检测病原微 生物及其产物。
2023
PART 06
微生物学实验技术与方法
REPORTING
微生物学实验室常用设备与器材
培养箱
提供适宜的温度和湿度条件， 用于培养微生物。

荚膜大小与菌体的 关系 芽胞在菌体上的位 置、大小 鞭毛的形态、数量、 位置
芽胞
鞭毛
变形杆菌
谢 谢 大 家

湿热灭菌效果好于干热灭菌，原因如下： ①湿热情况下菌体蛋白容易凝固变性; ②湿热穿透力比干热大； ③湿热的蒸汽具有潜热。
2）辐射灭菌法
紫外线（ultraviolet ray, UV):波长240～300nm
原理 作用于DNA，使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶（T） 共价结合形成二聚体，干扰 DNA 的复制和转录，导致细菌 的变异和死亡。 特点
1.物理消毒灭菌法
2.化学消毒灭菌法
3.生物学消毒灭菌法
1.物理消毒灭菌法
1）热力灭菌法
① 干热灭菌法
焚烧：直接点燃或用焚 烧炉焚烧 烧灼：直接用火焰灭菌 干烤：用干烤箱灭菌 红外线：1～10μm波长
② 湿热灭菌法
巴氏消毒法:61.1～62.8℃ 30min或71.7℃ 15～30s 煮沸法:100℃水煮沸 高压蒸气灭菌法：103.4kPa， 121.3℃，15～20min
医学Байду номын сангаас生物学实验
《医学微生物学》课程设置
1. 学时：
总学时（36）：大班理论课（28），小班实验课（8）,
2. 授课方式： 大班讲课、小班讲课+实验、自学 3. 教学效果检查： 提问、实验操作及写报告、期末测验
4. 成绩计算：
平时（实验操作及实验报告）30%，期末考试70%
医学微生物实验目的
巩固基础理论、基本概念
内容
一、概念：灭菌、消毒、抑菌、防腐、清洁、无
菌、无菌操作
二、消毒灭菌的方法
三、影响消毒灭菌效果的因素

蔗糖（sucrsoe）
海藻（trehalose）
纤维二糖（cellobiose）
蜜二糖（melibiose）
多糖类（（C6H10O5）3 ） 菊糖（inulin） 淀粉（starch）
肝糖（glycogen）
糊精（dextrin）
.
18
糖类
名称
三元醇（C3H5（OH）3） 甘油（glycerol） 四元醇（C4H6（OH）4） 赤霉糖醇（erythitol） 五元醇（C5H7（OH）5） 核糖醇（adonitol） 六元醇（C6H7（OH）6） 阿拉伯胶醇（Arabitol）
甘露醇（mannitol）
半乳糖醇（dulcitol）
山梨醇（sorbitol）
环己六醇（（CHOH）8） 肌醇（inositol）
糖苷类
水杨苷（salicin）
七叶苷（aescukin）
松柏苷（.coniferin）
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（二）甲基红（MOR）试验 （三）V－P（Voges-Proskauer）试验 （四）β－半乳糖苷酶试验
常用培养基
基础培养基 选择性培养基 鉴别培养基
. 特殊培养基
10
二、微生物接种与培养
（一）微生物接种
常用方法：涂布法、划线法、倾注法、点植法、 穿刺法和浸洗法等。
（二）微生物的培养
需养培养 厌氧罐法
加组织的培养基培养法
厌氧培养 焦性没食子酸法 共栖培养法
享盖特厌氧操作技术
二氧化碳培养法 .
11
三、培养结果观察
二、蛋白质及氨基酸代谢试验
（一）靛基质（吲哚）试验 （二）硫化氢试验 （三）尿素酶 （四）氨基酸脱氢酶试验 （五）苯丙氨酸脱氨试验
.

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2
一.药品的微生物限度检查（一）
1.口服药物的微生物检查: ①大肠杆菌的检查： ②细菌总数的检查
2.外用药物的微生物检查: ①绿脓杆菌的检查： ②金黄色葡萄球菌的检查：
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3
药品的微生物限度检查实验方法（一）
1.药品的预处理
口服药 外用药
2克药品加20毫升生理盐水， 研磨制成悬液
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32
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1、制片 涂片、干燥、固定
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2.结晶紫初染 1min——水洗
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3. 碘液媒染
1min——水洗
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4. 95% 酒精脱色 30s——水洗
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5.沙黄复染 1min——水洗、滤纸吸干
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※革兰染色步骤
• 1.制片：取标本（球杆混合物、牙垢） 涂片、干燥、固定
• 2.初染：结晶紫——1min——水洗 • 3.媒染：碘液——1min——水洗 • 4.脱色：95% 酒精——30s——水洗 • 5.复染：沙黄——1min—水洗、滤纸吸干 • 6.油镜观察：
对照菌
(产气杆菌)
蛋白胨水培养 接种1支管 基2支管
接种1支管ห้องสมุดไป่ตู้
葡萄糖蛋白胨 接种2支管 水培养基4支管
接种2支管
枸橼酸盐培养 接种1支管 基2支管
接种1支管
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抗酸染色步骤