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冷沉淀制备方法及质量影响因素【关键词】冷沉淀; 制备; 质量冷沉淀是用新鲜冰冻血浆为原料制备的一种成分血，主要用于血友病甲、血管性血友病、纤维蛋白原缺乏症患者，也可用于手术后出血、严重外伤及DIC等[1] 。
因冷沉淀中的Ⅷ因子为不稳定因子，受多种因素影响，所以每袋冷沉淀Ⅷ因子含量各不相同，现将本中心的冷沉淀制备方法及质量因素影响分析汇报如下。
1 材料与方法1.1 材料与仪器大容量低温离心机(CrYOFUge6000),日本日立公司生产的速冻冰箱(SanYO ),美国CYTOTHERM公司生产的CT-4T.6C型自动摇摆式恒温水浴溶化箱，日本产SYSMaX(CA-50)凝血因子分析仪，韩国产热合机(SE250)。
1.2 冷沉淀原料浆制备采用费森尤斯卡比(广州)生产的密闭四联袋，采集400ml全血6h内离心分离制成血浆60袋(200±10ml)，将血浆迅速置-80℃速冻机内，冻结后置-30℃冰箱备用。
1.3 制备冷沉淀取60袋血浆置室温中放置3min，待连接两袋的塑料管变软后分两组(A、B)放入低温水浴箱中(4℃~6℃)，A组30袋用水浴虹吸法制备冷沉淀，B组30袋用快速溶化离心法制备冷沉淀，计时。
A组新鲜冰冻血浆融化时固定于恒温摇摆式水浴箱的血袋夹中，垂直浸没于恒温的循环水浴中，水浴箱自动摇摆，血浆溶化，上清液虹吸流入空袋，袋中心剩余(25±5)ml未溶化的血浆及吸附在上面的冷沉淀。
B 组新鲜冰冻血浆融化时去掉固定夹，融化过程中人工给力捏碎血浆冰块，血浆溶解到尚存少许冰碴后，用大容量低温离心机离心，温度4℃，相对离心力3200g,离心20min，分离血浆，袋内存留(25±5)ml血浆冷沉淀，将A、B组冷沉淀快速置于速冻冰箱中冻结。
A组平均用1.2h，B组平均用2.0h。
1.4 质量检测用血凝仪对不同方法制备的冷沉淀进行凝血因子Ⅷ、纤维蛋白原的测定,t检验分析。
2 结果用相同的溶化设备，采用不同制备方法制备所得冷沉淀质量有差异，见表1。
新鲜冰冻血浆与普通冰冻血浆制备冷沉淀的质量分析目的通过对新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆制备冷沉淀Ⅷ因子质量测定，来确定普通冰冻血浆是否合适做冷沉淀原料浆。
方法随机抽取2009～2010年新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆各10份，制备冷沉淀后，利用凝血法，检测其中Ⅷ因子含量并计算FⅧ合格率。
结果新鲜冰冻血浆FⅧ含量为（0.94±0.13）IU/mL，普通冰冻血浆FⅧ含量为（0.42±0.16）IU/mL，两组差异有统计学意义。
结论冷沉淀制备需要用新鲜冰冻血浆。
标签：新鲜冰冻血浆；普通冰冻血浆；冷沉淀；FⅧ冷沉淀是用新鲜冰冻血浆（FFP）制备的成分血，主要用于血友病A，也可用于因大失血、肝功能障碍等凝血因子减少而导致的出血性疾病的辅助治疗[1]，目前本站制备冷沉淀用数字控制水浴式血浆融化箱制备。
笔者分别用新鲜冰冻血浆和普通冰冻血浆制备冷沉淀的情况，报道如下：1 材料与方法1.1 仪器与试剂正常参比血浆（凝血因子Ⅷ含量：1.04 IU/mL）、APTT试剂（凝血因子Ⅷ含量：1.04 IU/mL）、缺凝血因子Ⅷ、稀释液（凝血因子Ⅷ含量：1.04 IU/mL）、0.02 mol/L CaCl2溶液购自中国医学科学院中国协和医科大学输血研究所四川协和生物技术有限责任公司；仪器：全自动血液凝固分析装置清洗液购自德国Dade Behring Marburg公司；数字控制水浴式血浆融化箱CT-4T.6型，热合机SE-250型，全自动凝血仪CA-501型。
1.2 取样新鲜冰冻血浆，10袋，2010年本站体检合格的献血者，用四联袋静脉抽全血400 mL（200 mL）6 h内分离出血浆200 mL±10%，立即放入-50℃以下血浆速冻机速冻后，移至-30℃冰柜中备用。
普通冰冻血浆10袋，2009～2010年本站体检合格的献血者，用四联袋静脉抽全血400 mL（200mL）超过8 h分离出血浆200 mL±10%，放入-50℃以下血浆速冻冰箱速冻后，移至-30℃冰柜中备用。
新鲜冰冻血浆的病毒灭活方法及其应用新鲜冰冻血浆（FFP）几乎含有全部凝血因子，主要用于多种凝血因子缺乏伴有严重贫血的患者，也用于大量失血或凝血试验异常而需要施行侵入性操作的患者以预防出血。
虽然对FFP供者进行了严格的筛选和实验室病毒检测，但经血传播病毒的危险性仍然存在，原因在于：1）检测方法灵敏度有限；2）“窗口期”问题；3）新病毒的出现；4）目前我国检测病毒的种类仅为HIV1/2、HBV、HCV；因此，检测结果阴性并不能排除病毒感染的可能。
据估计，输用血浆的危险程度为10 000 U可发生75次不良反应，每1 000名患者有37起不良反应发生。
1项研究在分析了48年来应用未经病毒灭活血浆和经病毒灭活血浆后发生不良反应需要救治的花费，发现应用病毒灭活血浆至少每年为美国节约200万美元，如果考虑非感染性并发症，如输血相关性急性肺损伤（TRALI），可以为英国每年节约5万英镑［1］。
目前欧洲各国都已禁止使用未经病毒灭活的血浆，国内应用FFP非常广泛，但病毒灭活尚未普遍进行。
目前国内外几种病毒灭活技术正在临床应用，血浆成分及其衍生物主要采用有机溶剂去污剂法（SD）和亚甲兰加可见光法（MBR）,补骨脂素加光照血浆（PLT）已经在欧洲应用。
核黄素加光照（PRT）对血浆、红细胞和血小板3种成分中的病毒可能均有灭活作用，但仍处于研发阶段；除SD法外其它灭活剂的作用都是针对病毒核酸的［2］。
现就血浆病毒灭活的方法和应用作一简介。
1 SD法1.1灭活方法SD法由纽约血液中心发明，通常用磷酸3N丁酯（TNBP）和吐温-80或胆酸钠，二者协同作用可以溶解和去除病毒的脂包膜而使其灭活。
SD法处理血浆是将＜2 500人份的同型、融化的FFP混合与1％TNBP和1％去污剂TritonX100，在37℃孵育4h，用蔬菜油浸出液萃取之后，用C18层析柱清除溶剂和去污剂。
由此制备的血浆经无菌过滤，200ml分装，再次于-30℃冰冻保存。
- 554 -J Clin Transfus Lab M e d, December.2016 , Vol 18，N o.6•论著•不同方法制备新鲜冰冻血浆对冷沉淀凝血因子质量的影响潘淑敏郭颖陈胜于笑难【摘要】目的分析不同方法制备新鲜冰冻血浆对冷沉淀凝血因子中纤维蛋白原（F g)和凝血因子™(F«)含量的 影响。
方法随机选取90份本中心2014年3~6月自愿献血者400 ml全血，按照不同制备流程分成3组，第1组全血滤除白细胞过滤新鲜冰冻血浆（fresh frozen plasma，FFP)，经病毒灭活后制备冷沉淀因子；第2组全血分离FFP，经病毒灭活后制备冷沉淀因子；第3组全血白膜法制备浓缩血小板分离F F P，经病毒灭活后制备冷沉淀因子。
采用水浴融化法，随机抽 取冷沉淀90份，取小辫5~10cm，经37°C水浴融化后留取标本2~3m l，测定F g，F«含量并进行对比分析。
结果3组中Fg (mg/袋，200 m lF F P制备）含量分别为：161.3±29.6，168.5±33.9，156.6±36.5;F™(IU/袋，200 ml FFP制备）为 122.4±34.9，131.5±30.2，101.9±21.7;抽检3组冷沉淀凝血因子中F g、F«含量合格率分别为91.2%、94.3%、80.9%，均达到要求。
抽检结果显示第2组F g、F M含量最高，抽检合格率达94.3°%;3组质量抽检合格率由高到低依次是第2组>1组>3组；3种制备方法组间F g、F«含量比较，差异无统计学意义（P>0.05)。
结论3种不同方法制备新鲜冰冻血浆，冷 沉淀凝血因子质量指标均符合国家标准。
DOI：10.3969/j.issn.1671 -2 587.2016.06.014作者单位：110016辽宁省沈阳军区总医院输血科作者简介：潘淑敏（ 1974—),女，河北清河县人，主管护师，本科，主要从事血液采集与制备的研究工作，（T e l) 181********。
分析新鲜冰冻血浆制备过程中时间与制备方法对冷沉淀中凝血因子水平的影响摘要：目的：分析新鲜冰冻血浆制备过程中的时间和制备方法对冷沉淀中凝血因子水平的影响。
方法：选取2022年3月至2023年3月期间在我站参与无偿献血120人份的无偿献血者全血为观察对象，制备FFP，血浆容量为200ml，将其均分为两袋，其中一袋血浆平铺后放在平板速冻机上冷冻20min作为A组，另一袋血浆平铺后-86。
C下保存2h，使用凝固法检测FⅧ和Fg。
结果：两组冷沉淀中Fib、FV、FIX、FⅧ活性比较显示，A组的凝血因子水平明显高于B组。
在Fibrinogen（Fib）水平方面，A组的平均值为2.3 g/L，而B组为1.8 g/L。
在Factor V（FV）、Factor IX（FIX）和Factor VIII（FⅧ）活性方面，A组的平均值分别为1.5 IU/mL、1.2 IU/mL和1.7 IU/mL，而B组分别为1.0 IU/mL、0.8 IU/mL和1.4 IU/mL。
结论：新鲜冰冻血浆制备过程中的时间和方法对冷沉淀中凝血因子水平具有显著影响。
较短的冷冻时间和采用平板速冻机能够更好地保留凝血因子的活性和含量。
这些结果对于提高新鲜冰冻血浆的质量和临床应用具有重要意义，并为制备工艺的改进提供了依据。
然而，仍需进一步研究来优化制备方法并验证其在临床实践中的可行性和效果。
关键词：新鲜冰冻血浆；冷沉淀；凝血因子；制备时间；制备方法新鲜冰冻血浆是临床血液制品中常用的一种，制备过程中的时间和方法对冷沉淀中凝血因子水平有重要影响。
研究表明，较短的冷冻时间和采用适当的制备方法能够更好地保留凝血因子的活性和含量。
在新鲜冰冻血浆制备过程中，通过控制冷冻时间可以有效保持凝血因子水平的稳定。
较长时间的冷冻会导致凝血因子的失活或降解，从而降低其活性和含量。
因此，合理控制冷冻时间是提高制备血浆质量的关键之一。
此外，制备方法也对凝血因子水平产生影响。
