下载文档原格式
[检验医学]高效液相色谱法检测食品中氨基酸的方法研究仲岳桐,何彩,陈春晓摘要:目的 应用高效液相色谱法测定食品中氨基酸。
方法 使用带自动衍生功能的自动进样器进行在线衍生,梯度分离,利用二极管阵列-荧光检测器串联分析。
结果 在线衍生技术克服了离线手工衍生的偏差,双检测器联用技术能有效提高定性的可靠性和定量的准确性。
结论 研究的方法测定重复性好,灵敏度高,定性定量准确,结果满意。
关键词:高效液相色谱;氨基酸;食品中图分类号:TQ460.7 文献标识码:B 文章编号:1009-9727(2008)1-132-03Determination of amino acids in foods by high performance liquid chromatography.ZHONG Yue-tong,HE Cai,C HEN Chun-xiao.(Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention,Shenzhen518020,Guangdong,P R China) Abstract:Objective To determine amino acids from foods by high performance liquid chromatography Methods Food samples were collected and determined by using autoinjector with online derivati on function,gradient elution program and tandem de tectin g technicque Results The online derivation technicque overcame the deviation arised from manual operating and serial de tectin g technicque could enhance both reliabili ty and accuracy of determinati on Conclusion The method is accurate,quati tativelyand qualitatively as well as a reproductive and satisfactory resultsKey w ords:High performance liquid chromatography;Amino acids;Foods氨基酸分析是食品成份分析的重要组成部分,其研究对象可分为生理体液和食品两大部分,检测方法一般可分为氨基酸分析仪法、离子色谱法、高效液相色谱法等。
高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸含量一、本文概述本文旨在探讨高效液相色谱法（HPLC）在大豆中游离氨基酸含量测定中的应用。
作为一种重要的植物蛋白来源，大豆中的氨基酸组成对于其营养价值及食品工业应用具有重要意义。
游离氨基酸作为大豆蛋白质水解的产物，其含量直接反映了大豆的蛋白质质量和营养价值。
因此，准确测定大豆中游离氨基酸的含量对于评估大豆品质及开发高附加值产品至关重要。
高效液相色谱法作为一种高效、准确的分离分析技术，在氨基酸分析领域具有广泛应用。
本文将详细介绍高效液相色谱法的基本原理、样品处理方法、色谱条件优化以及结果计算与分析等方面的内容，并通过实验验证该方法的可行性和准确性。
本文还将讨论高效液相色谱法在大豆游离氨基酸含量测定中的优势及局限性，以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。
二、实验材料与方法（1）大豆样品：选择新鲜、无病虫害、无杂质的大豆作为实验材料，经过清洗、烘干、破碎后备用。
（2）试剂：实验所需试剂包括高效液相色谱仪用流动相（如乙腈、甲醇等）、衍生化试剂（如OPA、FMOC等）、标准品氨基酸等，均为分析纯或更高纯度。
（3）仪器：高效液相色谱仪（配备紫外检测器或荧光检测器）、离心机、涡旋混合器、水浴锅、移液枪等。
（1）样品处理：称取适量大豆样品，加入适量的水或缓冲液，进行匀浆处理。
然后，将匀浆液进行离心，取上清液作为游离氨基酸提取液。
（2）衍生化处理：取一定体积的游离氨基酸提取液，加入适量的衍生化试剂，进行衍生化反应。
衍生化反应的目的是将氨基酸转化为易于检测的衍生物，提高检测灵敏度和准确性。
（3）高效液相色谱分析：将衍生化后的样品进行高效液相色谱分析。
选择合适的流动相和色谱柱，设置合适的检测波长或激发/发射波长，记录色谱图和峰面积。
（4）数据处理：根据标准品氨基酸的色谱图和峰面积，绘制标准曲线。
然后，根据样品的色谱图和峰面积，结合标准曲线，计算样品中游离氨基酸的含量。
本实验采用高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸的含量，通过样品处理、衍生化处理、高效液相色谱分析和数据处理等步骤，实现对大豆中游离氨基酸的快速、准确测定。
食品中氨基酸含量的测定方法研究简介：氨基酸是构成蛋白质的基本组成部分，对人体发育和生理功能发挥着重要作用。
因此，准确测定食品中氨基酸的含量对于评估食品的营养价值至关重要。
本文将对目前常用的几种测定食品中氨基酸含量的方法进行综合介绍，包括高效液相色谱法、薄层色谱法和气相色谱法。
一、高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是当前测定氨基酸含量最常用的方法之一。
该方法利用氨基酸在固定相中的差异分离，再利用紫外光检测器定量测定各个氨基酸的峰面积，并与标准品进行比对，从而计算出样品中各个氨基酸的含量。
该方法具有分离度好、灵敏度高和操作简便等优点，但是对于一些疏水性氨基酸的分离效果较差。
二、薄层色谱法薄层色谱法（TLC）是一种简单而快速的氨基酸测定方法。
该方法将样品溶液点于薄层层板上，通过溶剂的作用下，使不同种类的氨基酸在薄层上分离。
然后，利用显色试剂使各个氨基酸显示出色斑，根据色斑的形成程度和位置来判断各个氨基酸的含量。
虽然该方法操作简单快速，但是它的分离效果相对较差，对于样品中含量较低的氨基酸测定不太适用。
三、气相色谱法气相色谱法（GC）是一种基于气相色谱技术测定氨基酸含量的方法。
通过将样品中的氨基酸经过酸性水解处理，将其转化成相应的酰氨基酸衍生物。
接着，将衍生物注入气相色谱仪进行分离，并利用检测器测定各个氨基酸的峰面积或峰高。
在该方法中，氨基酸的酸性水解和衍生反应是关键步骤，正确的选择反应物和反应条件对于提高测定的准确度非常重要。
气相色谱法的优点是分离度高、灵敏度好，但是需要复杂的样品处理步骤，操作难度相对较大。
比较和总结：在上述三种方法中，高效液相色谱法是最常用和成熟的测定氨基酸含量的方法，具有分离度好、灵敏度高和操作简便等优点。
薄层色谱法简单而快速，适用于大量样品的测定，但是它的分离效果相对较差，仅适用于氨基酸含量较高的样品。
气相色谱法分离度高、灵敏度好，但需要复杂的样品处理步骤。
因此，在选择测定氨基酸含量的方法时，应根据具体的情况和需要选取合适的方法。
《饲料中氨基酸的测定高效液相色谱法》河南省地址标准编制说明一、编制的目的和意义氨基酸是羧酸碳原子上的氢原子被氨基取代后的化合物，氨基酸分子中含有基和氨羧基两种官能团。
与羟基酸类似，其可依照氨基连在碳链上的不同位置而分为α-，β-，γ-...w-氨基酸，但经蛋白质水解后取得的氨基酸都是α-氨基，它们是组成动物营养所需蛋白质的大体物质，是维持动物生长所必需的营养物质，其种类和含量是评判饲料蛋白质营养价值的全然指标，测定饲料中的氨基酸具有超级重要的意义。
随着畜牧养殖业的迅猛进展，对饲料营养成份分析也提出了更高的要求。
饲料分析已从比较单一的高含量营养成份，如蛋白质、脂肪等的总量分析，深切到比较复杂的微量营养素，如多种氨基酸、维生素、微量元素及饲料中的有害物质等分析。
目前，饲料产品国标中氨基酸的测定采纳的是离子互换柱后茚三酮衍生色谱法。
但众所周知，该方式利用的氨基酸自动分析仪价钱昂贵（约70万左右），专属性强，只能分析氨基酸，且分析速度慢。
而采纳高效液相色谱法测定氨基酸，具有价钱廉价，分析速度快、灵敏度高、操作简便的特点，第二，目前很多实验室都配置了高效液相色谱仪，其价钱易于同意（约10万左右），而且它的分析范围很广，可测定饲料中的氨基酸、维生素、碳水化合物、脂肪酸、有机酸、添加剂(风味剂、防腐剂等)和有害物质(如黄曲霉素、棉酚和农药残留等)，因此实现了一机多用的可能。
相较于目前国标方式GB/T 18246-2000《饲料中氨基酸的测定》规定的氨基酸分析方式，高效液相那么具有较好的通用性，应用范围广且市场占有率高，利于推行。
随着高效液相色谱技术的日趋成熟和普及，高效液相色谱法必将成为各检测机构测定氨基酸含量的要紧方式。
二、任务来源及编制原那么和依据任务来源依照河南省质量技术监督局文件《河南省质量技术监督局关于下达2017年第四批河南省地址标准制修订打算的通知》豫质监标发〔2017〕355号的要求，由河南海瑞正检测技术负责对项目编号为667的河南省地址标准《饲料中氨基酸的测定高效液相色谱法》的起草、制定工作。
河 北 医 科 大 学 学 报JO U RN A L OF HEBEI M ED ICA L U NI VER SI T YV o 1.17 No .3 1996高效液相色谱柱前自动衍生法测定氨基酸含量许彦芳 许新民 王永利药理教研室(050017) 摘 要 本文利用高效液相色谱(HP L C )柱前邻苯二甲酝酿(OP A )自动衍生、自动进样程序测定脑组织中谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、牛磺酸和r -氨基丁酸含量。
该法的最低检出限为10nmol /ml ,5种氨基酸峰面积测定值的变异系数平均为2.0±1.3%,线性相关系数平均为0.97±0.03。
关键词 HPL C;氨基酸;OP A ;自动衍生;自动进样HPLC -PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHIC DETERMINATION OFAMINO ACIDS BY AUTOMATIC PRECOLUMN DERIVATIZATIONXu Yan fang Xu Xinmin Wang YongliDep artment of Ph armacologyABSTRACT Glutamate,asparate,glycine,taurine and GABA in brain w ere seperated and determined by HPLC system of the autom atic processes of precolum n o -phthaldialdehydeder iv atization and injection .Average co efficient o f variatio n for peak areas of 5amino acids w as 2.0±1.3%w ith the detectio n lim it o f 50ng.Av erag e line co orelatio n coefficient w as 0.97±0.03.KEY WORDS HPLC ;o -phthaldialdehyde ;amino acids ;automatic derivatizatio n ;au-tom atic injection 生物样品中的微量氨基酸测定在医学领域中占重要地位。
高效液相色谱技术在食品检验中的应用研究高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）技术是一种高精度、高灵敏度的分析技术，已经广泛应用于食品检验中。
本文主要探讨HPLC技术在食品检验中的应用研究。
一、氨基酸测定氨基酸是构成蛋白质的基本组成部分，也是评价蛋白质品质的重要指标之一。
传统的氨基酸测定方法需要复杂的样品准备和分离纯化，测定时间长，精度和准确度有限。
而HPLC技术可以通过蛋白质水解和衍生化，得到高精度和高灵敏度的氨基酸分析结果，同时可以同时检测多个氨基酸。
因此，HPLC技术在食品中氨基酸含量的快速、准确测定中得到了广泛应用。
二、增塑剂测定增塑剂是一类广泛应用于食品包装材料中的化学物质，但它们可能会迁移至食品中，对人体健康造成潜在风险。
HPLC技术可以快速、准确测定食品中的增塑剂含量，对于保护人体健康具有重要意义。
HPLC技术可以选择不同的列材以获得高分离、高灵敏度的测定结果，如用C18列进行反相液相色谱分离。
三、维生素测定维生素是人体必需的营养物质，也是食品中常见的添加剂。
HPLC技术被广泛应用于食品中维生素的分析和确认中，具有准确、高灵敏度、高分辨率和多项维生素同时分析的优势。
通过HPLC技术的应用，可以准确测定食品中的不同类型维生素的含量，为食品加工提供科学依据。
四、农药残留测定农药残留是一个严重的安全问题，直接关系到人类健康。
HPLC技术被广泛应用于农药残留测定中，可以对不同类型的农药进行定性和定量分析，如氨基甲酸酯和氯氰菊酯等。
HPLC技术可以在较短时间内准确判断食品中农药带来的潜在风险。
总之，HPLC技术在食品检验中的应用研究丰富多样，可以解决多种复杂分析问题。
随着技术的不断进步， HPLC技术必将在实践中不断完善，为食品药品安全提供更为重要的保障。
T logy科技分析与检测随着我国经济能力的不断提升，健康饮食已经成为了我国民生话题的重要组成部分。
目前，人们正在由“吃得饱”向“吃得好”转变。
通过食物摄入人体必需的各类营养成分是健康饮食的重要基础。
氨基酸作为人体成长的重要物质，其吸收和补充一直是饮食领域的重要研究内容。
为了保证人们能够摄入足够量的氨基酸，需要对不同食品中的氨基酸含量进行检测。
经过多年发展，我国逐步建立了比较成熟的食品氨基酸检测体系。
由于相关技术发展的限制，现有的食品氨基酸检测方法存在着一定的问题和不足。
高效液相色谱法是氨基酸检测的重要方法之一。
在现有技术的基础上，推动高效液相色谱法在食品中氨基酸的检测中的应用具有重要意义[1]。
1 实验准备高效液相色谱法的应用对食品氨基酸含量的检测有着重要的意义[2]。
为了推动 高效液相色谱法的应用发展，本文分析了检测过程中需要应用到的仪器与试剂，并对其预处理方法进行了总结研究。
1.1 检测仪器与试剂的准备高效液相色谱法是一种常用的色谱检测方法[3]。
其基本工作原理是采用液体作为流动相，将不同的溶剂等输入到装有固定相的色谱柱中。
在完成待检测物的成分分离后，利用相关设备进行检测，完成对试样的分析。
目前，高效液相色谱法已经在化学、医学等诸多领域中得到了广泛的应用。
随着高效液相色谱法的广泛应用，其技术设备等也在不断更新。
目前常用的高效液相色谱法设备包括Agilent1100 型高效液相色谱仪、赛多利斯天平 TB-215D等。
这些设备应用灵活，精确度也比较高，能够满足日常检测的需求。
目前高效液相色谱法常用的试剂主要包括含10 mg/mL的邻苯二甲醛溶液，浓度为0.4 N、pH为10.4的硼酸缓冲溶液。
这些试剂配置比较简单，也能够满足人们的日常检测需求。
此外，还需要准备三乙胺等试剂用品，该用品是目前常用的试剂溶剂和催化剂之一，在高效液相色谱法的应用中发挥着重要的作用。
1.2 样品预处理方法分析在利用高效液相色谱法检测之前，需要进行必要的预处理活动，以保证检测工作的顺利进行和结果的有效性。
高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化及应用一、前言氨基酸是构成生物体蛋白质的基本单元，具有重要的生物学功能，如构建细胞结构、参与免疫反应以及转运、储存等多种生命活动。
而测定氨基酸含量的方法有很多种，其中，高效液相色谱法（HPLC）具有高灵敏度、高分辨率、快速分离、定量准确、重现性好等特点，因此被广泛应用于氨基酸分析领域。
本文重点介绍了高效液相色谱法测定氨基酸含量的原理、优化及应用。
二、方法原理高效液相色谱法是利用固体相、液相以及流动相间相互作用的分离技术，它通过改变固体相和液相的化学性质和物理性质，通过不同流动相的渗透能力与氨基酸分子的分子量、极性、结构特征等因素的相互作用，实现对氨基酸化合物分离、检测和定量的目的。
三、优化方案1.色谱柱的选择色谱柱的选择直接影响着 HPLC 法测定氨基酸含量的敏感度和分离效果。
常用的色谱柱有离子交换柱、反相柱、手性柱。
2.氨基酸样品的制备氨基酸的提取方法主要有：硫酸-氯化氢法、热酸解法和酶切法。
其中前两种方法操作简单，容易控制，常用于高精度测定。
3.流动相的优化流动相中添加适量的酸或碱，有利于提高分离度和氨基酸的稳定性。
同时加入有机物质类的前处理，在未来进行样品的提取、清洗等操作，有助于减少基础样品产生。
4.色谱条件的优化尽量缩短柱温度，降低流速，减少相互扰动，提高分辨率。
通常，正向向柱洗液的浓度可逐渐提高，也可采用反向洗液以加速洗脱。
四、实验结果分析实验结果显示，优化后的 HPLC 法测定氨基酸含量其灵敏度、准确度、重现性等指标均有了明显的提高，特别是样品前处理及流动相的优化方案都有利于提高样品的稳定性和可检出性。
五、应用展望高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化方案在氨基酸分析领域具有广泛的应用前景。
在临床医学、食品安全、环境污染等领域，测定氨基酸含量对于人类健康与生产活动具有重要意义，因此优化后的 HPLC 法测定氨基酸含量将被广泛应用于相关领域。
总之，高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化方案既有理论指导又有实验可行性，为实现准确测定氨基酸含量提供了新思路和新途径。
食品中氨基酸的分析方法和定量测定氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，对于人体的健康起着重要作用。
因此，食品中氨基酸的分析方法和定量测定是食品科学领域中的一个重要课题。
本文将介绍几种常用的氨基酸分析方法，并探讨其优点和局限性。
1. 紫外光谱法紫外光谱法是一种常用的氨基酸分析方法，它通过检测氨基酸溶液在特定波长下的吸收情况来定量测定氨基酸的含量。
这种方法的优点在于操作简单、快速方便，并且需要的设备简单，成本较低。
但它的局限性在于只能测定氨基酸的总含量，无法对不同种类的氨基酸进行定量测定。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种常用的氨基酸分析方法，它通过样品与色谱柱中的固定相相互作用，分离出不同种类的氨基酸，并通过检测各种氨基酸在特定条件下的保留时间来定量测定其含量。
这种方法的优点在于可以对不同种类的氨基酸进行定量测定，并且具有较高的灵敏度和准确度。
但它的操作比较复杂，需要较为昂贵的设备和试剂，成本较高。
3. 毛细管电泳法毛细管电泳法是一种基于氨基酸在电场下的迁移速率不同而分离的分析方法，它通过检测氨基酸在毛细管中的迁移时间和峰面积来定量测定其含量。
这种方法的优点在于分离效果好，分辨率高，并且需要的样品量较少。
但它的操作相对复杂，需要特殊的设备和技术，成本较高。
除了上述的几种常用方法之外，还有其他一些新兴的氨基酸分析方法值得关注。
4. 质谱法质谱法是一种基于氨基酸分子的质量-电荷比不同而分离的分析方法，它通过检测样品中氨基酸分子的质量谱图来定量测定其含量。
这种方法的优点在于能够对不同种类的氨基酸进行定量测定，并且具有很高的灵敏度和准确度。
但它的设备成本较高，并且操作复杂，需要有一定的专业知识和技术。
5. 生物传感器法生物传感器法是一种利用生物体内的特定分子与目标物质结合反应产生一定信号来测定目标物质含量的分析方法。
对于氨基酸的定量测定，可以利用特定的酶或菌种来产生与氨基酸结合反应的信号，进而定量测定其含量。
