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食品中氨基酸的测定方法
《食品中氨基酸的测定方法》
嘿，你知道吗？食品中的氨基酸可是非常重要的呢！那怎么才能知道食品里都有哪些氨基酸以及它们的含量呢？这就涉及到氨基酸的测定方法啦。
有一种常见的方法是高效液相色谱法。
这就像是个超级侦探，能把各种氨基酸都准确地找出来。
它利用特殊的柱子和流动相，让氨基酸在里面乖乖地按顺序跑出来，然后我们就能清楚地看到它们啦。
还有一种方法叫氨基酸自动分析仪法。
这个呀，就好像是个智能小助手，能快速又准确地分析出氨基酸的情况。
它可以把食品中的氨基酸一个一个地分辨出来，并且告诉我们它们的具体信息。
另外呢，还有一些其他的方法，比如茚三酮比色法。
它通过一种特别的反应，让氨基酸显示出颜色来，这样我们就能根据颜色的深浅判断氨基酸的多少啦。
总之，测定食品中氨基酸的方法有很多，每种方法都有它的特点和适用情况。
这些方法就像是我们了解食品营养的钥匙，能帮助我们更好地知道食物里都有什么好东西。
所以呀，学会这些方法真的很重要呢！
我觉得这些测定方法都很神奇，它们让我们能深入了解食品的本质，对于保障我们的健康和饮食安全有着至关重要的作用。
[检验医学]高效液相色谱法检测食品中氨基酸的方法研究仲岳桐,何彩,陈春晓摘要:目的 应用高效液相色谱法测定食品中氨基酸。
方法 使用带自动衍生功能的自动进样器进行在线衍生,梯度分离,利用二极管阵列-荧光检测器串联分析。
结果 在线衍生技术克服了离线手工衍生的偏差,双检测器联用技术能有效提高定性的可靠性和定量的准确性。
结论 研究的方法测定重复性好,灵敏度高,定性定量准确,结果满意。
关键词:高效液相色谱;氨基酸;食品中图分类号:TQ460.7 文献标识码:B 文章编号:1009-9727(2008)1-132-03Determination of amino acids in foods by high performance liquid chromatography.ZHONG Yue-tong,HE Cai,C HEN Chun-xiao.(Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention,Shenzhen518020,Guangdong,P R China) Abstract:Objective To determine amino acids from foods by high performance liquid chromatography Methods Food samples were collected and determined by using autoinjector with online derivati on function,gradient elution program and tandem de tectin g technicque Results The online derivation technicque overcame the deviation arised from manual operating and serial de tectin g technicque could enhance both reliabili ty and accuracy of determinati on Conclusion The method is accurate,quati tativelyand qualitatively as well as a reproductive and satisfactory resultsKey w ords:High performance liquid chromatography;Amino acids;Foods氨基酸分析是食品成份分析的重要组成部分,其研究对象可分为生理体液和食品两大部分,检测方法一般可分为氨基酸分析仪法、离子色谱法、高效液相色谱法等。
一、目的要求1、熟悉高效液相色谱仪的结构、分离原理和操作程序。
2、掌握氨基酸标样的分析方法、原理。
二、实验原理氨基酸与PITC发生反应生成的衍生物，在254nm处有最大吸光值。
氨基酸衍生物进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积可进行定性和定量。
该方法是柱前衍生法中的一种。
PITC方法的反应方程式如下图所示：三、实验仪器和试剂1、仪器：高效液相色谱仪（带紫外检测系统和记录系统）。
2、材料：氨基酸标样3、试剂：衍生液：异硫氰酸苯酯：甲醇：三乙胺：水（V/V）=1：7：1：1正己烷、乙腈、乙酸、乙酸钠以上试剂中乙腈为色谱醇，水为二次蒸馏水，其它为分析醇。
四、实验步骤1、柱前衍生步骤：（1）将100ul衍生液加入100ul氨基酸标样或样品中，震荡使混合均匀，室温放置1小时。
（2）反应液中加入200ul正己烷，充分震荡后放置使分层。
（3）取下层溶液用一次性滤膜过滤器（0.45ul）过滤。
（4）取滤液5ul注入HPLC。
2、分离条件的设定（1）色谱柱：Shim-pack VP-ODS 4.6mm x 15cm保护柱：Shim-pack GVP-ODS4.6 mm x 1cm（2）流动相：A液：0.1M乙酸钠pH6.50（用乙酸调整，500ml乙酸钠中约加2滴乙酸）。
B液：乙腈/水=4/1（3）流量：1ml/min柱温：36℃检测波长：254nm（4）梯度洗脱程序：TIME(min) FUNC VALUE0．01 BCONC 103 BCONC 1021 BCONC 3921.01 BCONC 8025 BCONC 8025.01 BCONC 1035 STOP STOP3、数据采集打开real-time CS analysis软件采集数据并对数据进行分五、实验数据及处理结果六、实验讨论：1、本次实验的注意事项有哪些？结果：①、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um 或更细的膜过滤)。
高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸含量一、本文概述本文旨在探讨高效液相色谱法（HPLC）在大豆中游离氨基酸含量测定中的应用。
作为一种重要的植物蛋白来源，大豆中的氨基酸组成对于其营养价值及食品工业应用具有重要意义。
游离氨基酸作为大豆蛋白质水解的产物，其含量直接反映了大豆的蛋白质质量和营养价值。
因此，准确测定大豆中游离氨基酸的含量对于评估大豆品质及开发高附加值产品至关重要。
高效液相色谱法作为一种高效、准确的分离分析技术，在氨基酸分析领域具有广泛应用。
本文将详细介绍高效液相色谱法的基本原理、样品处理方法、色谱条件优化以及结果计算与分析等方面的内容，并通过实验验证该方法的可行性和准确性。
本文还将讨论高效液相色谱法在大豆游离氨基酸含量测定中的优势及局限性，以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。
二、实验材料与方法（1）大豆样品：选择新鲜、无病虫害、无杂质的大豆作为实验材料，经过清洗、烘干、破碎后备用。
（2）试剂：实验所需试剂包括高效液相色谱仪用流动相（如乙腈、甲醇等）、衍生化试剂（如OPA、FMOC等）、标准品氨基酸等，均为分析纯或更高纯度。
（3）仪器：高效液相色谱仪（配备紫外检测器或荧光检测器）、离心机、涡旋混合器、水浴锅、移液枪等。
（1）样品处理：称取适量大豆样品，加入适量的水或缓冲液，进行匀浆处理。
然后，将匀浆液进行离心，取上清液作为游离氨基酸提取液。
（2）衍生化处理：取一定体积的游离氨基酸提取液，加入适量的衍生化试剂，进行衍生化反应。
衍生化反应的目的是将氨基酸转化为易于检测的衍生物，提高检测灵敏度和准确性。
（3）高效液相色谱分析：将衍生化后的样品进行高效液相色谱分析。
选择合适的流动相和色谱柱，设置合适的检测波长或激发/发射波长，记录色谱图和峰面积。
（4）数据处理：根据标准品氨基酸的色谱图和峰面积，绘制标准曲线。
然后，根据样品的色谱图和峰面积，结合标准曲线，计算样品中游离氨基酸的含量。
本实验采用高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸的含量，通过样品处理、衍生化处理、高效液相色谱分析和数据处理等步骤，实现对大豆中游离氨基酸的快速、准确测定。
高效液相色谱化学发光检测法测定氨基酸1氨基酸氨基酸是类似于蛋白质的有机化合物，也是人体代谢过程中不可或缺的物质，具有重要的生理功能，人们发现它对人体健康有重要作用。
氨基酸分为线粒体氨基酸和细胞质氨基酸，它们可以通过液相色谱（HPLC）和其他技术进行测定。
2高效液相色谱化学发光检测法高效液相色谱化学发光检测法(HPLC-FLD)是一种非常常用的检测方法，是在液相色谱的基础上添加了化学发光探测器。
它具有高灵敏度、高分离度和快速分析等优势，得到了广泛应用。
在研究氨基酸中，HPLC-FLD可以较为准确地检测和分离氨基酸，从而实现对氨基酸浓度的准确测定及调整。
3工作原理HPLC-FLD工作过程是：在分析柱内，将水，乙腈，乙醇等溶剂混合，氨基酸将在柱中混有不同的动力学行为。
当氨基酸离开柱时，经测量氨基酸在化学发光探测器上发出的发光信号，可以计算出它们的相对浓度，从而判断氨基酸含量。
4检测步骤（1）样品准备：样品中含有氨基酸的各种溶液，需经过提取，稀释或洗脱处理等，以便于之后的检测。
（2）色谱层析：把样品按照一定的色谱层析方式，分离不同的成分，从而使不同的成分分离出来。
（3）发光测定：在这一步，人们可以利用HPLC-FLD测定氨基酸。
首先，样品将通过有机溶剂组合作用，激活发光反应，然后将样品通过化学发光探头的发光状态记录下来，并计算概率密度，最终得出样品中氨基酸的含量和比例。
5优势HPLC-FLD在检测氨基酸中有很多优势：（1）可以快速准确地检测氨基酸；（2）可实现高灵敏度和高分离度；（3）化学发光探头具有长寿命、可靠以及易于操作等优势；（4）可克服外界因素对分析结果的影响；（5）可以长时间连续检测，勤奋节约成本。
6结论HPLC-FLD是一种高效的技术，在检测氨基酸方面具有较高的准确性和效率，它不但能够用于氨基酸的检测，还可用于其他有机物分离和测定，在生物和药物领域都有广泛应用。
河 北 医 科 大 学 学 报JO U RN A L OF HEBEI M ED ICA L U NI VER SI T YV o 1.17 No .3 1996高效液相色谱柱前自动衍生法测定氨基酸含量许彦芳 许新民 王永利药理教研室(050017) 摘 要 本文利用高效液相色谱(HP L C )柱前邻苯二甲酝酿(OP A )自动衍生、自动进样程序测定脑组织中谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、牛磺酸和r -氨基丁酸含量。
该法的最低检出限为10nmol /ml ,5种氨基酸峰面积测定值的变异系数平均为2.0±1.3%,线性相关系数平均为0.97±0.03。
关键词 HPL C;氨基酸;OP A ;自动衍生;自动进样HPLC -PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHIC DETERMINATION OFAMINO ACIDS BY AUTOMATIC PRECOLUMN DERIVATIZATIONXu Yan fang Xu Xinmin Wang YongliDep artment of Ph armacologyABSTRACT Glutamate,asparate,glycine,taurine and GABA in brain w ere seperated and determined by HPLC system of the autom atic processes of precolum n o -phthaldialdehydeder iv atization and injection .Average co efficient o f variatio n for peak areas of 5amino acids w as 2.0±1.3%w ith the detectio n lim it o f 50ng.Av erag e line co orelatio n coefficient w as 0.97±0.03.KEY WORDS HPLC ;o -phthaldialdehyde ;amino acids ;automatic derivatizatio n ;au-tom atic injection 生物样品中的微量氨基酸测定在医学领域中占重要地位。
脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案1、仪器与试药1.1 仪器1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters1525型泵，Waters2487型检测器，Waters5CH 型柱温箱，WatersBREEZE数据处理软件，水浴恒温器（精度±0.1℃），旋涡器，微量移液器，衍生专用管；CP225D型分析天平（德国）；4umNora-Pak TM C18（3.9mm×150mm，5μm）色谱柱（美国）1.2 药品与试剂16种氨基酸（门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸）由中国药品生物制品检定所提供。
脑蛋白水解物注射液，云南盟生药业有限公司生产，规格10ml/支。
批号：2013、2013、2013.乙腈（HPLC级）；EDTA（分析纯）；磷酸（分析纯）；二乙胺（分析纯）；三水合乙酸钠（分析纯）。
2、方法与结果2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液；由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍（或按以下方法配制：称19.04g三水合乙酸钠，加1000ml纯化水，搅拌，溶解，用50%H3PO4将pH调至5.2，加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液，加入2.37ml二乙胺，用50%H3PO4滴定至pH4.95，用水溶性过滤器过滤，超声，脱气，备用。
）；流动相B为60% HPLC级乙腈，按梯度表梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为254nm；进样量5μl；柱温38℃。
2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品，用纯化水配制成浓度如下表所示的混合溶液。
取上述溶液0.1ml，加纯化水0.9ml，旋涡器混匀，作为对照品溶液；取脑蛋白水解物注射液，加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液，取0.1ml，加纯化水0.9ml,旋涡器混匀，作为供试品溶液。
高效液相色谱串联质谱法测定人体内30种氨基酸一、本文概述随着现代生物技术和分析化学的飞速发展，对于生物体内复杂化学成分的分析和测定要求越来越高。
氨基酸作为生物体内蛋白质的基本构成单元，其种类、数量及代谢状态的检测对于理解生命活动的本质、疾病的诊断与预防等方面具有重要意义。
高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）作为一种高灵敏度、高分辨率的分析技术，已被广泛应用于生物样品中氨基酸的定量分析。
本文旨在探讨利用高效液相色谱串联质谱法测定人体内30种氨基酸的方法。
文章将首先介绍氨基酸的重要性及其在人体内的代谢过程，随后详细阐述HPLC-MS/MS技术的基本原理及其在氨基酸分析中的优势。
接着，文章将重点描述样品的采集与处理、色谱条件的优化、质谱条件的设定以及数据分析方法等实验步骤。
文章还将对实验结果的可靠性进行验证，并讨论该方法在临床医学、营养学及药物研发等领域的应用前景。
通过本文的阐述，读者可以对高效液相色谱串联质谱法测定人体内30种氨基酸的方法有一个全面、深入的了解，为相关领域的研究提供有益的参考和借鉴。
二、实验原理高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）是一种先进的分析技术，结合了高效液相色谱（HPLC）的高分离能力和质谱（MS/MS）的高灵敏度和高选择性，从而实现对复杂生物样品中多种氨基酸的高效、快速和精确测定。
在HPLC-MS/MS分析中，样品首先通过高效液相色谱进行分离。
高效液相色谱利用不同氨基酸在固定相和流动相之间的分配系数差异，将它们从复杂的生物样品中分离出来。
然后，分离后的氨基酸被引入质谱系统进行进一步的分析和检测。
在质谱系统中，氨基酸分子被离子化并产生带电离子，这些离子在电场的作用下被加速并通过一个或多个质量分析器。
质量分析器根据离子的质荷比（m/z）将它们分离，形成质谱图。
通过对比标准品的质谱图，可以确定样品中氨基酸的种类。
通过选择特定的母离子和子离子对，可以实现多重反应监测（MRM）模式，进一步提高方法的特异性和灵敏度。
食物中氨基酸含量的高效液相色谱法测定
一、简介
测定食物中氨基酸含量一般采用氨基酸分析仪，柱后衍生测定，但氨基酸分析仪价格昂贵，分析时间长，且只能用于分析氨基酸，限制了氨基酸分析技术的广泛应用。
七十年代以来，柱前衍生高效液相色谱法开始应用于氨基酸的测定。
液相色谱通用性强，检测灵敏度高,可用于多种物质的分析。
南京科捷应用研究所采用柱前衍生紫外检测的方法对几种食物中的16种氨基酸进行了测定。
二、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪配置
LC-10Tvp高压恒流泵：2台
SPD-10Tvp紫外检测器：1台
SCL-10Tvp 系统控制器：1台
7725i手动进样阀： 1套
色谱工作站：1套（VI2010、N2000、N3000选用）
液相色谱柱：1支（C18 4.6*250mn,5um）
微量进样器：1支（50ul/100ul）
进样支架：1只（进样阀用）
三、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪特点
LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪是南京科捷分析仪器有限公司为了快速地满足多样化的客户需求，在原有的STI501液相色谱仪的基础上经过优化，利用美国先进技术开发设计，国内加工生产的的一款新型的液相色谱仪。
LC-10Tvp等度高效液相色谱仪实现了人机对话，可实时对仪器的运行状态进行监控，并可对潜在和已出现的故障做出判断，同时提供在线解决方案。
该仪器也全面实现了远程的准无人操作，大大提高了仪器的使用效率，同时通过高精度的AS1000自动进样系统，实现自动化进样，最大程度抑制了样品的交叉污染，提供样品分析精度。
LC-10Tvp等度高效液相色谱仪可广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。
主要特点
丰富的功能——符合客户对分析的不同需求
硬件具有VP功能，记录维护信息和操作记录，符合GLP/GMP要求；系统控制器增具有时钟、温度计、湿度计等人性化设计的功能。
卓越的性能——满足客户对仪器的严格要求
检测器采用进口氘灯、光电池以及1200条/mm凹面光栅组成的双光束单色器；精密加工的双透镜流通池，控制波长调节的高精度微处理器以及双路高速的采样频率，确保了低噪声、低漂移及超高灵敏度等特点。
VI2010工作站符合多种法规要求。
可靠的结果——满足客户对结果的准确要求
与进口仪器做对比试验,分析结果具有高度的一致性。
简便的操作——便于客户对软件的熟练操作
软件采用多窗口模式，操作方便。
精美的外观——满足客户对仪器的视觉要求
外形精美，带来视觉上的享受。
技术指标
LC-10Tvp高压恒流输液泵
输液方式微体积串联双柱塞
最大输液压力0～9999Psi
流量设定范围0.001～9.999ml/min （以0.001ml/min步长调节流量）
流量设定值误差≤0.5%
流量稳定性误差≤0.2%RSD
压力脉动小于15Psi （流量1mL/min，压力600～1600Psi 。
）
泵密封性压力为5400Psi，时间为10min，压降小于400Psi 。
时间程序功能有
尺寸W260×H130×D420mm
重量11kg
使用环境温度范围4～40℃
SPD-10Tvp紫外可见可变波长检测器
波长范围190nm～700nm
波长示值误差≤±1nm
波长重复性误差≤±0.1nm
动态噪声≤ ±0.75×10-5AU （甲醇，1ml/min，254nm，20℃ 。
）
静态噪音≤ ±0.5×10-5AU （空池，响应时间1秒，20℃ 。
）
动态基线漂移≤±1×10-4AU/h （甲醇，1ml/min，254nm，20℃ 。
）
静态基线漂移≤0.5×10-4 （空池，响应时间1秒，20℃ 。
）
线性范围≥104
最小检测浓度≤1×10-9g/mL （萘/甲醇溶液）
定性重复性RSD6≤ 0.1%
定量重复性RSD6≤ 0.5%
光谱带宽6nm
流通池体积8μL
光程10mm
时间程序功能有
尺寸W260×H130×D420mm
重量11kg
使用环境温度范围4～40℃
四、食物中氨基酸含量的检测方法
1、试剂
浓盐酸（优级纯），苯酚（分析纯），混合氨基酸标准液，含17种蛋白水解氨基酸，天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、胱氨酸、酪氨酸、撷氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸，除胱氨酸浓度为1.25mmol/L外，其余16种氨基酸浓度各为2.5mmol/L 流动相A,磷酸盐缓冲液用1：10双蒸水稀释，pH4.95。
亦可自行配制，流动相B：乙睛，流动相C：双蒸水,硼酸盐缓冲液衍生试剂6一氨基喹琳基一N一羟基琥珀酞亚氨基甲酸酯，用时加入1mL乙睛,混匀于55℃烘箱加热10min至溶解
2、仪器
高效液相色谱仪：LC-10Tvp,
紫外检测器：SPD-10Tvp
真空泵
超声波清洗器
涡旋混合器。
3、色谱条件色谱柱,
色谱柱：高效C18色谱柱
柱温：37℃
检测波长：248nm
进样量：10uL
梯度洗脱条件,如表
4、实验方法
4.1衍生反应
衍生试剂（AQC）与氨基酸迅速反应生成在248nm有紫外吸收的高稳定性的脲和羟基琥珀酰亚胺（NHS），过量的试剂可在慢反应中完全水解，过程如下
4.2氨基酸衍生步骤
用微量注射器移取10uL稀释的氨基酸标准液或样品水解液放人6 (50mm样品
管底部加人70uL硼酸盐缓冲液,涡旋混合10s)，边涡旋混合边加入20uL衍生试剂溶液，用封口膜密封样品管,置于55℃烘箱中加热10min，从烘箱中取出样品管冷却至室温,供分析用。
此衍生样品于4℃保存两周。
4.3样品水解
精密称取适量样品约0.5-1.0g于水解管中,加入6mol/L盐酸10-15ml，加入少量新蒸馏的苯酚，抽真空，充高纯氮气，重复3次。
迅速将已充好氮气的水解管拧紧盖子，放入110℃烘箱中水解22h。
水解完毕，将水解液过滤，定容。
取适量，于55℃减压干燥至干，再用适量二次蒸馏水复溶，备用。
工作曲线制作将氨基酸标准液配制成浓度分100,200,400,600,800,1000umol/L 的溶液，每一标准液取10uL依上法衍生后进行测定，色谱分离见图1
4.4结果与讨论
回归方程根据工作曲线，以峰面积（A）与浓度（C）进行回归分析，回归方程结果见表2。
各氨基酸的检测限为0.54umol/L
五、结果
南京科捷研发的采用柱前衍生高效液相色谱法测定氨基酸含具有准确，快速，灵敏度高等优点，此方法简便可行,无需购买昂贵的专用
氨基酸分析仪器即可对氨基酸进行分析。
