荧光标记复合扩增

15个常染色体和18个Y染色体STR基因座r复合扩增检测体系及法医学应用顾丽华;杨帆;梅兴林;周怀谷【摘要】目的建立15个常染色体和18个Y染色体STR基因座以及性别基因座的六色荧光标记复合PCR直扩检测体系,并评估其法医学应用价值.方法采用六色荧光标记技术,建立15个常染色体STR基因座(D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D8S1179、D5S818、FGA)和18个Y染色体STR基因座(DYS527a/b、DYS448、DYS456、DYS385a/b、DYS458、DYS391、DYS390、DYS19、DYS438、DYS393、DYS389Ⅰ、DYS439、DYS389Ⅱ、DYS392、GATA、DYS635)以及Amelogenin的复合扩增体系,收集800份无关人员血样进行基因座检测,评估所建复合扩增体系的稳定性、灵敏度、种属特异性、直扩可行性以及抗抑制性.结果本检测体系对800份无关人员血样复合扩增后,结果准确,灵敏度达0.125ng;种属特异性高;38份案件检材全部准确分型.在对照男性与女性的DNA浓度比值大于等于1:4时,男性DNA的所有基因座均能准确分型.若模板DNA中含一定浓度的已知抑制剂时,所有基因座也均准确分型.结论本文建立的复合扩增检测体系可同时检测15个常染色体和18个Y染色体基因座以及性别基因座,结果稳定准确,灵敏度高,可为法医DNA检测分析提供一个新选择.【期刊名称】《刑事技术》【年(卷),期】2018(043)001【总页数】5页(P30-34)【关键词】STR;复合PCR;直扩体系;六色荧光标记;法医遗传学【作者】顾丽华;杨帆;梅兴林;周怀谷【作者单位】上海市公安局物证鉴定中心,法医物证学现场应用技术公安部重点实验室,上海市现场物证重点实验室,上海 200083;上海市公安局物证鉴定中心,法医物证学现场应用技术公安部重点实验室,上海市现场物证重点实验室,上海 200083;无锡中德美联生物技术有限公司,江苏无锡 214174;上海市公安局物证鉴定中心,法医物证学现场应用技术公安部重点实验室,上海市现场物证重点实验室,上海 200083【正文语种】中文【中图分类】DF795.2司法鉴定中，常染色体和Y染色体的STR基因座检测已成为常规手段。

法医学专业知识竞赛试题库第二部分：物证1.下列哪一项不是人类遗传多态性现象。

（B ）A.蛋白酶多态性B.糖的多态性C.抗原多态性D.DNA多态性2.有关理想群体的条件中，哪一项是错误的。

（C ）A.群体无限大B.婚配随机进行C.有自然选择D.没有新的突变E.没有群体的大规模迁移3.下列方法中，哪一种不能确定人类精斑。

(D )A.精子找出法B.P30测定C.抗人精环沉试验D.中和法4.下列常见的检验中，哪一种不属于RBC酶型。

（D ）A.ACPB.PGMC.EsDD.HP5.法医学常见的检材是(A )，占80%以上。

A.血痕B.精斑C.唾液D.毛发6.琼脂糖免疫扩散试验中所用琼脂糖浓度为（ A）A.2%B.0.2%C.20%D.0.05%7.唾液中含有大量水溶性ABH血型物质，常用（B ）法测定。

A.吸收试验B.中和试验C.解离试验D.淀粉-碘试验8.亲子鉴定最主要依据(A )。

A.孟德尔遗传规律B.妊娠期限C.性交能力及生育能力D.当事人的口供9.下列哪项不是免疫扩散试验的优点。

（D ）A.可估计抗原含量B.适用于混浊检材C.易于保存、拍照D.操作简单、快速10.下列毛发中哪一种多呈S状弯曲或呈螺旋状。

(C )A.腋毛B.睫毛C.阴毛D.头发11.以下哪种方法可以降低红细胞动电位（A）A用蛋白水解酶处理红细胞B在反应体系中增加入介质中离子的介电常数的物质.C.用高离子强度溶液为介质.D其他可以增加红细胞表面阳离子数的方法.12.下面哪个试验不用血痕预实验( D )A.联苯胺试验,B.酚酞试验C.无色孔雀绿试验.D.血色原结晶试验13.STR分型在法医物证鉴定中具有许多优势，除了( D )A.高灵敏度B.高鉴别能力C.标准化分型D.非自动化分型14.孟买型红细胞上具有（D ）A.A抗原B.B抗原C.H抗原D.以上抗原都没有15 不属于影响抗原-抗体反应的影响因素是（ D ）A 电解质 B温度 C酸碱度 D 湿度16. 19号染色体上那个基因座编码的是α2-L-岩藻糖转移酶：AA FUT1B FUT2 B FUT3 D A基因17. 下列哪项不是同工酶的分类：DA 复基因座位同工酶 B复等位基因同工酶 C遗传变异体同工酶 D多态同工酶18. PGM1等位基因是由于外显子发生第（ D ）位单个碱基替换和第1320位单个碱基替换A 734B 220 C419 D72319 不属于同工酶的分型方法的是：CA 直接底物显色法B 荧光染色法C 紫外分光光度计测定D 电子转移染料染色法20 应用PH5-7梯度范围的聚丙烯酰胺凝胶技术可将PGM1分为10种亚型，受控于PGM1基因座上的（A）个共显性等位基因A 4B 3 C2 D121. 下列哪个说法是错误的( C )A 杂合度：指群体中某遗传标记所有基因型中杂合子所占的比例B 基因差异度：是指某一遗传标记在某群体中的变异程度C ＤＰ：指在群体中随机抽取两个个体，两者的遗传标记表型相同的概率D 非父排除概率：是指孩子的分亲生父亲的男子，能够被某个遗传标记系统排除的概率22. 常用的DNA定量方法错误的是（ D ）A 凝胶电泳法 B紫外分光光度计测定 C探针杂交法 D 双脱氧核苷酸链终止法23. STR自动分型技术的核心是建立多种基因座复合扩增体系时采用（C）色荧光染料分表标记不同的STR基因座引物A 4~5B 7~8C 3~4D 5~624.荧光标记STR复扩增，采用（ A ）色荧光标记A 4或5色 B7或8色 C2或3色 D3或4色25．不符合PCR技术的特点是（ A ）A 灵敏度低 B特异性高 C适用于降解DNA剪裁 D操作简单时间短26. PCR-ASO分析技术中属于正向杂交的是：AA固定探针，标记产物B固定产物，标记探针C同时固定产物探针 D只固定探针27. 血型抗体中的：“寒冷”抗体最适反应温度为（ D ）A 37℃B 2~10 ℃C 0 ℃D 4~20℃28. Sanger法中标记物是（ C ）A DNA聚合酶 B单链DNA模版 C dNTP D ddNTP29. ddNTP 和dNTP 的区别是（ C ）A C1位置少羟基B C2位置少羟基C C3位置少羟基D C4位置少羟基30.一个基因有n个外显子，则相应有（ B ）个内含子A n个B n-1个C n+1个D n+2个31 乳酸脱氢酶属于（ B ）同工酶A 复等位基因同工酶 B复基因座同工酶 C遗传变异体同工酶重组基因同工酶32. ABO血型抗原均以（ D ）为基础物质A 糖链B 多肽C 脂蛋白D H物质33.下列不属于DNA纹印图谱的基本特征（E ）A.高多态性B.个体组织同一性C.遗传规律D.高突变率E.高识别力34.PCR反应中镁离子在（B ）范围适合A.1.0-2.0mmol/LB.1.5-2.0mmol/LC.2.0-2.5mmol/LD.2.0-3.0mmol/L35.A血型是指人类红细胞膜上含有（ A ）A.A抗原B.B抗原C.既有A又有BD.既无A又无B36.FUT1基因座作用于（ B ）A.一型糖链B.分泌腺细胞C.H物质D.二型糖链.37血痕试验验证的代表反应（C）A.联苯胺试验B.沉淀试验C.血色原结晶试验D.吸收试验38.有一亲自鉴定案，其母亲血腥为A、MN，孩子为O、N，请判断其孩子父亲最可能是一下哪位（C）AB、MN B.O、M C.A、MN D.B、M39.三种PGM热稳定性由大到小排序为（A）A.1、2、3B.2、1、3C.3、1、2D.3、2、140.显示电泳分离片段最简单的方法是（A）A.银染B.P同位素标记C.Hg标记D.荧光标记41.ddNTP与dNTP在DNA合成反应过程中处于一种（C）状态A.互相促进B.互相结合C.互相竞争D.互相排斥42.下列哪项不是法医物证学的基本任务(A)A.伤残鉴定B.亲子鉴定C.精斑鉴定D.尸源鉴定43.母系遗传特点哪项错误(A)A.符合孟德尔遗传规律B.无有丝分裂周期变化C.不受核移植影响D.子代只表现母方特征44.遗传多态性的形成机制(A)A.基因突变B.基因重组C.基因选择D.遗传漂变45.评估遗传多态性的主要参数不包括(A)A.基因库B.基因频率C.基因型频率D.表型频率46.纯合子的基因型频率为(A)A.P²B.1-p²C.2pqD. 1-2pq47.下列说法错误的是(A)A.变异程度越低，法医学应用价值越大B.杂合程度越高，法医学应用价值越大C.遗传标记数越多,个人识别能力越强D遗传标记系统的多态性程度越高，排除非父效能越高48,。

str嵌合率报告解读
方法采集健康献血者外周血按白细胞比例两两混合制备不同供受者比例的体外嵌合体模型,对15个STR位点进行荧光标记复合扩增,扩增产物进行序列分析仪毛细管电泳,计算嵌合率。

结果实验测得嵌合率与扩增前样本嵌合率呈显著直线相关,r=0.999 7,最小检出供者细胞嵌合率1%。

供者嵌合率≥5%的嵌合体模型嵌合率的检测值与理论值差别无统计学意义(P0.05),5%的模型嵌合率检测值与理论值差别有统计学意义(P0.05)。

结论荧光标记复合扩增STR基因结合序列分析仪毛细管电泳检测嵌合率方法个体识别力高,特异,敏感,当供者嵌合率≥5%时能准确反映异基因造血干细胞移植后患者的嵌合状态。

9个Y-STR基因座荧光复合扩增系统的法医学应用石美森;李英碧;邓建强;冀强;于晓军;侯一平【期刊名称】《法医学杂志》【年(卷),期】2006(022)003【摘要】目的建立9个Y-STR基因座的复合扩增系统,提高Y-STR的法医学检测效能.方法6-FAM标记DYS434、Y-GATA-A10、DYS438、DYS439,HEX标记DYS531、DYS557、DYS448,TAMRA标记DYS456、DYS444引物,PCR复合扩增,毛细管电泳得到结果,考察扩增系统的个体识别能力、灵敏度、特异性、组织同一性.结果所建立的9个Y-STR复合扩增系统分型清晰,单倍型多样性达0.9968,特异性好,灵敏度高(0.5ng DNA),并且在男女混合斑检验上较常染色体STR分型更有优势.结论9个Y-STR复合扩增系统具有较高的识别能力,对建立Y染色体STR数据库,研究群体遗传学和进行法医学混合斑物证鉴定有重要意义.【总页数】4页(P204-206,209)【作者】石美森;李英碧;邓建强;冀强;于晓军;侯一平【作者单位】汕头大学医学院法医学教研室,广东,汕头,515031;四川大学华西基础医学与法医学院法医物证学教研室,四川,成都,610041;司法部司法鉴定科学技术研究所,上海,200063;南京医科大学法医学教研室,江苏,南京,210029;汕头大学医学院法医学教研室,广东,汕头,515031;四川大学华西基础医学与法医学院法医物证学教研室,四川,成都,610041【正文语种】中文【中图分类】DF795.2【相关文献】1.DYS19、DYS391、DYS439三个Y-STR荧光标记复合扩增的法医学应用研究[J], 朱传红;杨庆恩;王海生;申成斌;刘成昌2.DYS19、DYS391、DYS439三个Y-STR荧光标记复合扩增的法医学应用研究[J], 王海生;朱传红;杨庆恩;申成斌;刘成昌3.23个STR基因座荧光复合扩增体系的法医学应用评估 [J], 唐建新;李双琳;刘宏;翁玮霞;刘超;杜蔚安;黄杰4.Y染色体短串联重复序列基因座荧光复合扩增体系的法医学应用 [J], 黄艳梅;杨捷;董献红;王洁;陈林;武红艳;伍新尧5.十二个X染色体STR基因座荧光标记复合扩增体系的法医学应用 [J], 任峥;曾祥培;陈文静;吴晓洁;童大跃;李建金;孙宏钰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

实验二十三复合扩增STR基因座的激光荧光自动检测分型一原理：将多个STR基因座的引物同时加入一个扩增管，优化引物设计和扩增条件，可实现对多个STR基因座的同步扩增。

当不同基因座的扩增产物片段大小不同时，可通过电泳分离并区分不同基因座的等位基因片段。

对基因片段大小相近和重叠的基因座引物标记不同的荧光物质，可获得荧光标记的扩增产物，通过识别标记的不同荧光物质，可识别电泳分离时片段大小重叠的不同基因座产物。

荧光物质含有共轭双键，能够吸收激光并被激发至高能量激发态，处于不稳定激发态的荧光物质跃迁回到基态时，多余的能量以光子的形式释放，可用荧光信号识别记录设备记录下荧光染料发出的光信号。

不同的荧光染料具有不同的激发波长和吸收波长，可被光信号检测设备准确识别和记录。

310基因分析仪整合了毛细管电用技术和激光激发荧光检测技术，样品电泳进样采用计算机控制的自动电进样，当荧光标记的复合扩增等位基因片断通过毛细管电泳通过检测窗时，电泳时间和荧光种类与强度被自动收集和记录。

每个样品电泳中加入已知片段大小的分子量内标，测算每个等位基因片段的相对大小，与基因座等位基因分型标准物比较，确定每个基因座的各个等位基因，对样本的各基因座自动分型。

二设备器材与试剂：310基因分析仪，PCR扩增仪，台式高速离心机，恒温水箱，水浴锅；0.5∼2.5µl、0.5∼10µl、10∼100µl、100∼1000µl连续可调移液器，0.5∼10µl、10∼100µl、100∼1000µl高温灭菌塑料吸头，离心管水浴支架，离心管架，0.5ml、1.5ml离心管，0.2ml薄壁PCR扩增管；Chelex，含0.11mmol/L EDTA-Na2的pH8.0、0.005mol/L Tris-HCl缓冲液，荧光标记和非标记的多个基因座混合引物，混合PCR反应液，热启动Taq酶，ROX标记分子量内标，超纯去离子甲酰胺，高温灭菌蒸馏水。

荧光标记复合扩增试剂盒概述一、荧光标记复合扩增检测技术简介DNA分析近十几年来才应用于法医学的鉴定，在这期间，DNA分型技术取得了两次重大突破。

1985年，Jeffereys等学者建立了第一代分型技术——DNA指纹技术，其本质是以DNA分子杂交为核心的限制性片段长度多态性分析，实现了物证鉴定由排除到认定的飞跃口]。

进入20世纪90年代，Mullis和Saiki等学者发明并改进的PCR技术被用于法医DNA 分析，从而建立了以PCR为基础的第二代DNA分型技术。

其本质是应用PCR技术扩增人类基因组DNA中高度多态性位点，扩增产物经过片段长度多态性分析或序列多态性分析研究不同个体间DNA分子水平上的差异及其遗传规律。

此技术一经出现，便在个体识别亲子鉴定中发挥了重要作用。

经过近十多年的发展，法医DNA分析已建立了DNA指纹技术，PCR扩增片段长度多态性分析技术和线粒体DNA测序等三大主要技术，结合在它们基础上发展出的一些新技术方法，如小卫星重复单位多态性分析(PCR—MVR)、单链构象多态性分析(PCR—SSCP)、等位基因特异性引物PCR扩增(PCR—SSP)等，共同形成了目前的法医DNA 分析技术。

在一个PCR体系中同时扩增多个基因座的方法叫做复合扩增(multiplexing PCR)。

单个基因座等位基因数量少，信息量有限，如果多个基因座扩增条件基本相似，就可以将多个基因座的引物加入一个扩增管中进行复合扩增，一次电泳检测，可在短时间内获得多个基因座的分型结果，提高单次检测的信息量，提高个人识别率，也可降低成本和检材的消耗，减少操作强度，对微量检材的鉴定特别有价值，有利于复核鉴定。

STR荧光标记检测技术是指将荧光染料标记到其中一个引物(一般选正链)的5'端,使随后的每一个PCR扩增产物都带有一个荧光染料分子。

这种带有荧光分子的DNA片段在电泳时从阴极向阳极电泳迁移,迁移速度按片段分子量由小到大排列,当片段通过到阳极端的激光扫描窗口时,荧光染料分子的共辄双键受到激发,发出一定波长的荧光,被扫描仪CCD接收,每一个带荧光染料的DNA片段按各自通过激光扫描窗口的实际时间(real time)被记录下来,出现一个荧光吸收峰,以荧光峰来表示每一个片段,峰值高低与扩增片段数量呈正相关,而峰出现的时间与片段大小呈正相关,片段小,出现峰时间短。

法庭科学人类荧光标记str 复合扩增检测试剂质量基本要求
法庭科学人类荧光标记STR复合扩增检测试剂的质量基本要
求如下：
1. 纯度要求：荧光标记STR复合扩增检测试剂应具有高纯度，确保不会引入任何其他无关杂质。

这可以通过高效液相色谱（HPLC）或质谱等分析方法进行验证。

2. 稳定性要求：荧光标记STR复合扩增检测试剂应在储存期
间能够保持稳定，不会出现明显的分解或降解现象。

可以通过长期稳定性试验来验证其稳定性。

3. 敏感性要求：荧光标记STR复合扩增检测试剂应具有较高
的敏感性，能够在样本中检测到低浓度的目标DNA片段。

可
以通过模拟样品进行适当稀释，然后进行验证实验来评估其敏感性。

4. 特异性要求：荧光标记STR复合扩增检测试剂应具有较高
的特异性，能够准确识别目标DNA片段而不受其他杂质的干扰。

可以通过在样本中引入其他DNA样本或杂质，然后进行
验证实验来评估其特异性。

5. 一致性要求：荧光标记STR复合扩增检测试剂的不同批次
之间应具有较高的一致性，即不同批次的产品在性能和质量方面应保持一致。

可以通过批间比对实验来评估其一致性。

6. 检测效率要求：荧光标记STR复合扩增检测试剂应具有较
高的检测效率，能够在较短的时间内完成扩增反应并产生可靠的结果。

可以通过实时荧光定量PCR（qPCR）等方法来评估其检测效率。

总之，法庭科学人类荧光标记STR复合扩增检测试剂的质量要求应包括纯度、稳定性、敏感性、特异性、一致性和检测效率等方面的考虑。

这些要求是确保测试剂在法庭科学人类鉴定中能够提供准确、可靠结果的基础。