常见微生物性食物中毒PPT课件

实验室检查
常见中 毒食品
在斜视光下观察,菌落表面呈现珍珠样虹彩,
这种光泽区可随蔓延生长扩散到不规则边 缘区外的晕圈。菌株纯化培养,在分离培养 平板上选择5个肉毒梭菌可疑菌落,分别接种 卵黄琼脂平板,35℃±1℃,厌氧培养48h,按 5.3.2.3观察菌落形态及其纯度。鉴定试验：
染色镜检为革兰氏阳性粗大杆菌、芽胞卵
份加等量多型混合肉毒毒素诊断血清,混
匀,37℃孵育30min;第二份加等量明胶磷
酸盐缓冲液,混匀后煮沸10min;第三份加
等量明胶磷酸盐缓冲液,混匀。将三份混
合液分别腹腔注射小鼠各两只,每只0.5mL,
三、肉毒梭菌食物中毒
致病 潜伏 原期
临床特点
诊断参考
实验室检查
常见中 毒食品
肉毒 梭菌
1h-7d
头晕、无
力、视力
模糊、复
视、眼睑
下垂、咀
嚼无力、 张口或伸 舌困难、 咽喉阻塞 感、饮水 发呛、吞 咽困难、
食品、血 液、粪便 中检出肉 毒毒素， 食品检出 肉毒梭菌
呼吸困难、
头颈无力、
垂头等。
病死率较
高。
观察96h内小鼠的中毒和死亡情况。结果判 定:若注射第一份和第二份混合液的小鼠未 死亡,而第三份混合液小鼠发病死亡,并出现 肉毒毒素中毒的特有症状,则判定检测样品 中检出肉毒毒素。
分解乳糖的典型菌落为砖红色 至桃红色,不分解乳糖的菌落为 无色或淡粉色;在EMB琼脂平板 上,分解乳糖的典型菌落为中心
粪便中有大量粘液但无血，检出 紫黑色带或不带金属光泽,不分
熟肉制 品、蛋 及其制
有类似感冒症状；肠道出 血清 解乳糖的菌落为无色或淡粉色。 品、奶、
血型EHEC：潜伏期长，3- 型相 生化试验：TSI斜面产酸或不产 奶酪、
常见微生物性食物中毒PPT课件
前言
• 常见细菌性食物中毒
沙门氏菌属（鼠伤寒 猪伤寒 肠炎）、副溶血 性弧菌（嗜盐菌）、肉毒梭菌、葡萄球菌（金 黄色葡萄球菌）、致泻性大肠埃希菌、产气荚 膜梭菌、蜡样芽孢杆菌、志贺氏菌、单增李斯 特菌、变形杆菌、椰毒假单孢菌酵米面亚种、 其他致病性弧菌（河弧菌、创伤弧菌等）。
肉制品、 低酸性 罐头等
定型试验,毒素确证试验阳菌型别。
3.结果报告：（1）报告25g(mL)样品中检出 或未检出肉毒毒素，（2）报告25g(mL)样 品中检出某型肉毒毒素。（3）报告样品中
检出或未检出肉毒梭菌或检出某型肉毒梭
肉毒梭菌及肉毒毒素检验程序
粪便 注冷却至50 ℃的TSC琼脂，充分混匀，静置凝固后，正置
检出 于厌氧培养装置内，36 ±1 ℃培养20 h～24 h。典型的产气
产气 荚膜梭菌在TSC 琼脂平板上为黑色菌落。确证试验：从单
荚膜 梭菌， 粪便
个平板上任选5 个（小于5 个全选）黑色菌落，分别接种到 FTG 培养基，36 ±1 ℃厌氧培养18 h～24 h。培养液涂片革 兰氏染色镜检并观察其纯度。生长旺盛的FTG 培养液1 mL 接种于含铁牛乳培养基，在46 ±0.5 ℃水浴中培养2 h 后，
圆形、大于菌体、位于次端,菌体呈网球拍 状。毒素基因检测（PCR检测）阴性对照和
发酵豆、
空白对照均未出现条带,阳性对照出现预期 谷类制
大小的扩增条带，判定本次PCR检测成立; 品（面
待测样品出现预期大小的扩增条带,判定为 酱、臭
PCR结果阳性，,待测样品未出现预期大小 豆腐）、
的扩增条带,判定PCR结果为阴性。菌株产 毒试验 将PCR阳性菌株或可疑肉毒梭菌菌 株接种庖肉培养基或TPGYT 肉汤(用于E型肉 毒梭菌),厌氧培养5d，进行毒素检测和(或)
2.肉毒梭菌检验 增菌培养与检出试验：庖
肉培养基4支和TPGY 肉汤管2支,隔水煮沸 发酵豆、
10min~15min,排除溶解氧,迅速冷却,切勿摇 谷类制
动,在TPGY 肉汤管中缓慢加入胰酶液至液体 品（面
石蜡液面下肉汤中,每支1 mL,制备成TPGYT。 酱、臭
按要求进行培养。肉毒梭菌培养物为产气、 肉汤浑浊(庖肉培养基中A 型和B型肉毒梭菌 肉汤变黑)、消化或不消化肉粒、有异臭味。
考
实验室检查
常见中 毒食品
蜡样 芽孢 杆菌
816h
呕吐型：
恶心、 呕吐伴 头晕、 四肢无 力等； 腹泻型： 腹痛和 腹泻为 主。病 程8-
亚硫酸铋（BS）琼脂上菌落为黑色有金属光泽、
恶心、呕
吐、腹痛、食品、
腹泻，黄 呕吐
672h （一 般 1236h）
绿色水样 物或 便，便中 粪便 有时带脓 中检 血和粘液，出血 高热，大 清学 于38℃， 型别 重者有寒 相同
战、惊厥、的沙
抽搐、昏 门菌
迷
棕褐色或灰色,菌落周围培养基可呈黑色或棕色; 有些菌株形成灰绿色的菌落,周围培养基不变。 HE琼脂上蓝绿色或蓝色,多数菌落中心黑色或几 乎全黑色;有些菌株为黄色,中心黑色或几乎全 黑色。木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂上菌 落呈粉红色,带或不带黑色中心,有些菌株可呈 现大的带光泽的黑色中心,或呈现全部黑色的菌 落;有些菌株为黄色菌落,带或不带黑色中心。 三糖铁琼脂：斜面产碱（K）底层产酸（A）产 气+（-）硫化氢+（-）血清学鉴定：多价菌体 抗原(O)鉴定，多价鞭毛抗原(H)鉴定 分型：被 A-F多价O 血清凝集者,依次用 O4;O3;O10;O7;O8;O9;O2和O11因子血清做凝集 试验。属于A-F各O 群的常见菌型,依次用H 因子
下垂、咀嚼 无力、张口 或伸舌困难、 咽喉阻塞感、 饮水发呛、 吞咽困难、 呼吸困难、
食品、血 液、粪便 中检出肉 毒毒素， 食品检出 肉毒梭菌
头颈无力、
垂头等。病
死率较高
实验室检查
常见中 毒食品
样品制备：液态5mL，固态与半固态 25g+25mL(或50mL)明胶磷酸盐缓冲液。 离心、胰酶处理制备毒素液。
氏菌。大肠埃希氏菌为革兰氏 阴性杆菌,氧化酶阴性。PCR 确
水果、 饮料等
2d、婴幼儿为2周以上的
认试验：取生化反应符合大肠
持续性腹泻
埃希氏菌特征的菌落进行PCR确
认试验。
致泻大肠埃希氏菌检验程序
六、产气荚膜梭菌食物中毒
致病 潜伏 临床 诊断 原 期 特点 参考
实验室检查
常见中 毒食品
产气 荚膜 梭菌
• 常见霉菌性食物中毒
霉变谷物（黄曲霉：黄曲霉毒 雪腐镰刀菌： 脱氧雪腐镰刀菌稀醇）、霉变甘蔗（节菱孢属： 3-硝基丙酸）
一、沙门氏菌属食物中毒
致病 原
潜伏 期
临床特点
诊断 参考
实验室检查
常见中 毒食品
沙门 菌属
预增菌：缓冲蛋白胨水（BPW） 增菌：四硫磺
酸钠煌绿(TTB)、亚硒酸盐胱氨酸(SC)分离特征：
1.肉毒毒素检测 分别取离心上清液和胰
酶处理上清液腹腔注射小鼠3只,每只
0.5mL,观察和记录小鼠48h内的中毒表现。
典型肉毒毒素中毒症状多在24h内出现,通 常在6h内发病和死亡,其主要表现为竖毛、 四肢瘫软,呼吸困难,呈现风箱式呼吸、腰
发酵豆、 谷类制
腹部凹陷、宛如峰腰,多因呼吸衰竭而死 品（面
10d，突发性腹部痉挛， 同的 酸,底层产酸,靛基质阳性,H2S阴 蔬菜、
类似阑尾炎的疼痛，水样 致泻
便继而转为血性腹泻，可 性大
引起多器官损害，病死率 肠埃 高；肠聚集性粘附型EAEC：希菌 成年人中度腹泻，病程1-
性和尿素酶阴性的培养物为大 肠埃希氏菌。TSI斜面底层不产 酸,或H2S、KCN、尿素有任一项 为阳性的培养物,均非大肠埃希
肉、禽、 蛋、鱼、 奶类及 其制品 等
血清检查第1相和第2相的H 抗原。用Vi因子血
清检查，已知具有Vi抗原的菌型有:伤寒沙门氏
菌,丙型副伤寒沙门氏菌,都柏林沙门氏菌。
副溶血性弧菌检验程序
三、肉毒梭菌食物中毒
致病 原
肉毒 梭菌
潜伏 期
临床特点
诊断参考
1h-7d
头晕、无力、
视力模糊、
复视、眼睑
成乳色沉淀晕圈(E型较宽,A 型和B型较窄)，
三、肉毒梭菌食物中毒
致病 原
肉毒 梭菌
潜伏 期
临床特点
诊断参考
1h-7d
头晕、无 力、视力 模糊、复 视、眼睑 下垂、咀 嚼无力、 张口或伸 舌困难、 咽喉阻塞 感、饮水 发呛、吞 咽困难、 呼吸困难、 头颈无力、 垂头等。 病死率较 高。
食品、血 液、粪便 中检出肉 毒毒素， 食品检出 肉毒梭菌
检出 每小时观察一次有无“暴烈发酵”现象，该现象的特点是
肉类、 水产品、 熟食、 奶等
产气 乳凝结物破碎后快速形成海绵样物质，通常会上升到培养
荚膜 基表面。5 h 内不发酵者为阴性。产气荚膜梭菌发酵乳糖，
梭菌 凝固酪蛋白并大量产气，呈“暴烈发酵”现象，但培养基
毒素 不变黑。用接种环（针）取FTG 培养液穿刺接种缓冲动力-
豆腐）、 肉制品、
取增菌培养物阳性管的上清液进行毒素检 低酸性
出和确证试验，阳性结果可证明样品中有 罐头等
肉毒梭菌存在。分离与纯化培养：取增菌
培养物和经乙醇处理的增菌液分别划线接
种至卵黄琼脂平板,35 ℃±1 ℃厌氧培养
48h。肉毒梭菌菌落隆起或扁平、光滑或粗
糙,易成蔓延生长,边缘不规则,在菌落周围形
四、葡萄球菌食物中毒
致病 原
潜伏 期
临床特点
诊断 参考
实验室检查
常见中 毒食品
葡萄 球菌
增菌：金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生
食品
长。分离：增菌后的培养物,分别划线接种于血平板 36 ±1 ℃ 18h~4h，Baird-Parker平板36±1℃ 24h~48h。