下载文档原格式
乳铁蛋白液相方法乳铁蛋白（Lf）是一种富含铁、蛋白质和乳糖的天然物质，具有重要的生物学功能和应用价值。
为了研究Lf的生物活性和理化特性，我们需要可靠的分析方法来定量和检测Lf的含量和纯度。
液相方法是一种常用的分析技术，可以实现对Lf的定量和检测。
液相方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、离子交换层析法（IEC）、凝胶过滤层析法（GFC）等。
其中，HPLC是最常用的液相方法之一，因其高分辨率、高选择性和高灵敏度而被广泛应用于Lf的分析研究。
HPLC方法通常包括样品预处理、进样、色谱分离和检测等步骤。
首先，样品预处理是必要的，它可以去除悬浮物、蛋白质复合物和干扰物，提高样品的纯度和稳定性。
预处理方法包括超滤、浓缩、离心等。
然后，将预处理后的样品进样到色谱仪中进行分离。
色谱分离一般选择反相色谱、离子交换色谱、凝胶过滤层析等柱型。
最后，通过检测器检测样品的荧光、紫外吸收或电化学信号来获得定量结果。
HPLC方法的优点是样品处理简单、分析时间短、分离分辨能力强。
离子交换层析法是通过样品与固定在离子交换柱上的阴阳离子发生相互作用而实现的。
离子交换层析法可以根据不同的性质（如电荷、大小、极性）选择合适的固定相和溶液体系，实现对Lf的分离和纯化。
离子交换层析法的优点是高选择性、高效率、操作简单。
但是，离子交换层析法也有一些限制，如对样品的要求高，易受杂质干扰等。
凝胶过滤层析法是一种基于分子大小的分离技术，通过选择合适的凝胶胶体，可以实现对Lf的纯化和分离。
凝胶过滤层析法主要通过分子尺寸排除作用，较大的分子会被滞留在凝胶中，而较小的分子则可以通过凝胶层析柱。
凝胶过滤层析法的优点是操作简单、不需专门设备。
然而，凝胶过滤层析法对样品要求高，可能会存在渗透力不均匀等问题。
综上所述，乳铁蛋白液相方法是一种可靠的分析手段，可以对乳铁蛋白进行定量和检测。
HPLC、离子交换层析和凝胶过滤层析是常用的液相方法。
HPLC方法具有分辨能力强、操作简单等优点；离子交换层析法具有选择性高、效率高等优点；凝胶过滤层析法具有操作简单、设备要求低等优点。
乳铁蛋白临床文献乳铁蛋白的结构、功能和应用（墨西哥奇瓦瓦大学化工科学院）乳铁蛋白（LF）是一种分子量为80 kDa的铁结合糖蛋白，属于转铁蛋白家族的一员，存在于多种体液组织中，也是哺乳动物体内免疫系统的重要组成部分。
乳铁蛋白对机体的预防作用表现在多个方面，首先是直接抑制多种微生物活性，如细菌、病毒、真菌以及寄生虫等；还包括抗炎症以及防癌等功效。
乳铁蛋白这些生理活性功能的发挥不仅仅是因为其具有结合铁的能力，也在于他能影响宿主或病菌体内某些重要化学成分的分子机制。
本文综述了乳铁蛋白的抑菌机理、临床应用以及外源表达情况。
乳铁蛋白的营养学作用（美国加利福尼亚大学营养学系）Lönnerdal, Bo一直以来，膳食中乳铁蛋白的来源主要是母乳中的人乳铁蛋白。
目前，通过现代技术从牛奶中分离的牛乳铁蛋白，以及利用基因工程技术获得的重组人乳铁蛋白都已经商业化，且可以作为保健成分添加到食品和临床产品中。
本文主要阐述了膳食乳铁蛋白的生理功能。
研究发现通过膳食摄入的乳铁蛋白在人体肠道中具有抗菌、抗病毒的功能，这些功能的实现一方面通过乳铁蛋白直接作用于病原菌，另一方面可能通过影响肠道粘膜的免疫功能而实现。
通过受体结合被摄入细胞的乳铁蛋白主要通过影响肠道粘膜的免疫功能方式发挥作用，它也能影响细胞内的基因转录。
乳铁蛋白一直都被认为能改善婴儿和孕妇的铁缺乏状况，这有可能是通过受体调节的方式实现。
此外乳铁蛋白也可以促进肠细胞的增殖和分化，使肠粘膜组织变大从而加强营养的吸收能力。
乳铁蛋白对正常生长新生儿的作用Artym J, Zimecki M.初乳及乳汁中，除了含有各种营养成分外，还含有对婴儿生长发育至关重要的各种蛋白质。
乳铁蛋白属于铁结合蛋白质家族中的一员，有广泛的抗菌及亲免疫特性。
与乳汁当中的其他蛋白质（比如，酪蛋白）相比，乳铁蛋白（LF）能够有效抵抗在消化道内的降解。
另外，乳铁蛋白衍生肽还具有很强的抗病毒活性。
LF通过结合定位于肠道刷状缘细胞的特异性受体而吸收。
希望能帮到您精选doc乳铁蛋白在肿瘤治疗中的作用机制陈晓泓张博恒A(综述）(复旦大学肝®研究所•复旦大学附属中山医院肝肿瘤内科上海200032)【摘要】乳铁蛋白具有抗肿瘤活性。
乳铁蛋白可通过增强宿主防御、抑制增殖、诱导凋亡，阻断细胞周期、抗血管生成，调控致癌物代谢酶以及洧除铁等机制发挥抗肿瘤作用。
乳铁蛋白的安全无毒性为人类肿瘤的治疗提供了新的选择。
【关键词】乳铁蛋白；肿瘤；机制【中图分类号】K 730.2 【文献标志码】BMechanism of lactoferrin in cancer treatmentCHEN Xiao-hong, ZHANG Bo-heng^(Liver Cancer Institute and Department of Liver Oncology Medicine ，Zhongshan Hospital ，Fudan Unviersity ^ Shanghai 200032, China)【Abstract 】 Lactoferrin has antitumoral activity. Lactoferrin exert.s anti-carcinogenic effects via its ability to modulate host immunity, suppress proliferation, induce a poptosis, block cell cycle, inhibit angiogenesis* regulate carcinogen-metabolizing en zymes and sequester iron, etc. Safety and no toxicity of lactoferrin provide a new se lection for cancer treatment.(Key words] lactoferrin ； cancer? mechanism乳铁蛋白是一种相对分子质为80000的铁结合糖蛋白，属于转铁蛋白家族，因与铁结合后形成的复合物呈红色， 故又称“红蛋白”它主要存在于哺乳动物（人、牛、羊、马、 狗、猪和一些啮齿类）的乳汁中，消化、呼吸和生殖系统等分泌液中也含有一定贵的乳铁蛋白，如胃肠液、胆汁、胰液、唾液、鼻腔分泌液、支气管黏液、宮颈黏液、精液、羊水、泪液、关 节液等.但其含量远远低于乳汁。
乳铁蛋白的研究进展和应用摘要乳铁蛋白是一种具有多种生理功能的铁结合糖蛋白，具有抗菌、抗病毒、免疫调节等生理功能。
本文对LF的基本特性、生理功能的研究进展和与其他牛乳蛋白质的相互作用等方面进行了综述。
关键词：乳铁蛋白；生理功能；免疫调节前言一场肆虐全球的新型冠状病毒肺炎疫情，让更多的人意识到身体健康的重要性，同时，也让人们更加重视身心健康和自身免疫力的提升。
乳铁蛋白(Lactoferrin，简称LF)是哺乳动物体内天然存在的一种结合铁的具有免疫功能的非血源性糖蛋白[1,2]。
1939年Sorensen M和So-rensen SPL从牛乳乳清蛋白中分离出来，因其晶体呈红色，也有人称其为“红蛋白”，主要存在于母乳和牛乳中[1,3]。
目前LF的研究和利用已成为科研的热点，研究正向着保健品、药品和医疗诊疗剂方向发展[2]。
近年的研究表明，LF不仅在非特异性免疫系统中发挥作用，同时还具有抗微生物活性、抗炎症、抗癌症等功能，通过LF的不同功能可以看出其应用前景的广阔。
本文对LF的基本特性、生物功能活性的研究进展和与其他牛乳蛋白质的相互作用等方面作一综述。
1LF的基本概述1.1LF的结构LF是一种具有多种生理功能的铁结合糖蛋白，其分子质量约为70-80千道尔顿[4]。
人LF和牛LF的三级结构经对比后发现，氨基酸序列的同源性达到69 %。
人LF和牛LF的一级结构为单链糖蛋白结构，分别由691和689个氨基酸构成[5,6]。
LF的二级结构主要由α-螺旋和β-折叠交替排列而成，中间由一段螺旋肽链链接，呈“二枚银杏叶型”结构[7]。
LF的三级结构由多肽链折叠成两个极相似的、对称的球状叶结构，称之为N叶和C叶，每一个叶片又分为两个结构域，即N-1、N-2、C-1、C-2[7]，每一个叶片的结构域间形成一个裂缝，是铁离子的结合位点[8,9]。
不同来源的LF氨基酸序列都含有一个双重内部重复序列，如N末端序列与C末2端序列有40%的一致性。
乳铁蛋白检测方法研究进展涂茂林;杨戬;刘猛;石璞洁;王韫;樊凤娇;杜明;张兰威【摘要】乳铁蛋白是一种重要的多功能蛋白,具有抗菌、抗肿瘤、抗过敏、调节免疫等多种生物学活性,相关基础研究及产品开发已经引起了广泛关注.因此,乳铁蛋白检测方法也备受关注.尤其是不同方法各自的优势、灵敏度、准确度及稳定性等方面具有一定的差异,这也直接影响着该方法的适用范围.本研究对适合不同类型生物样品中乳铁蛋白的检测技术进行了阐述,主要有分光光度法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、高效亲和色谱法、高效毛细血管电泳法以及表面等离子共振技术等检测技术,并分析比较了这些检测技术的不同优缺点,以期能为乳铁蛋白的研究与开发实践中选择恰当的检测方法提供一定的参考.【期刊名称】《乳业科学与技术》【年(卷),期】2015(038)001【总页数】6页(P32-37)【关键词】乳铁蛋白;检测方法;研究进展【作者】涂茂林;杨戬;刘猛;石璞洁;王韫;樊凤娇;杜明;张兰威【作者单位】哈尔滨工业大学食品科学与工程学院,黑龙江哈尔滨 150090;哈尔滨工业大学食品科学与工程学院,黑龙江哈尔滨 150090;哈尔滨工业大学食品科学与工程学院,黑龙江哈尔滨 150090;哈尔滨工业大学食品科学与工程学院,黑龙江哈尔滨 150090;哈尔滨工业大学食品科学与工程学院,黑龙江哈尔滨 150090;哈尔滨工业大学食品科学与工程学院,黑龙江哈尔滨 150090;哈尔滨工业大学食品科学与工程学院,黑龙江哈尔滨 150090;哈尔滨工业大学食品科学与工程学院,黑龙江哈尔滨150090【正文语种】中文【中图分类】TS251.5乳铁蛋白；检测方法；研究进展乳铁蛋白是一种极具广阔市场前景的功能性蛋白，又称乳转铁蛋白、红蛋白［1-2］。
它主要存在于哺乳动物的乳汁中，其含量与动物的种属息息相关，以人乳、牛乳为典型代表［3-4］。
研究表明，人乳中乳铁蛋白含量最高，其常乳中的含量为2.0～4.0 mg/mL是牛乳（0.02～0.35 mg/mL）的10 倍，而初乳中含量更高，高达6.0～8.0 mg/mL［3，5］。
血清铁蛋白及其他四种肿瘤标志物检测对肺癌的诊断价值李立青;董振南;田亚平
【期刊名称】《标记免疫分析与临床》
【年(卷),期】2009(016)002
【摘要】研究血清铁蛋白(Serum ferritin,SF)及其他四种肿瘤标志物在肺癌患者中的阳性率有何不同.选取2006年至2007年住院确诊肺癌患者111例,收集血清铁蛋白、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)、肿瘤抗原15-3(CA15-3)和鳞癌相关抗原(SCC)的检测结果,并比较其在肺癌中的阳性率.结果表明, 在肺癌中血清铁蛋白阳性率最高,其次是癌胚抗原,其他三种阳性率很低,而血清铁蛋白和癌胚抗原联合起来后阳性率即可提高到84.82%.因此,血清铁蛋白和癌胚抗原联合起来在肺癌诊断中阳性率很高,可以用于肺癌的诊断.
【总页数】3页(P68-70)
【作者】李立青;董振南;田亚平
【作者单位】解放军总医院生化科,北京,100853;解放军总医院生化科,北
京,100853;解放军总医院生化科,北京,100853
【正文语种】中文
【中图分类】R743.2
【相关文献】
1.联合检测血清中四种肿瘤标志物对肺癌的诊断价值评估 [J], 余洲海;孟伟
2.血清铁蛋白及其他四种肿瘤标志物检测对肺癌的诊断作用 [J], 宋福珍
3.血清铁蛋白及其他四种肿瘤标志物检测对肺癌的诊断价值 [J], 独海玲
4.血清铁蛋白及其他肿瘤标志物检测对肺癌的诊断研究 [J], 姜晓洪
5.四种血清肿瘤标志物联合检测在肺癌中的诊断价值 [J], 宋为娟
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
乳铁蛋白与胂瘤矣系的研究进展.李洪波\周强\滕国新2,许晓曦^(1.东北农业大学食品学院乳品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨150030;2.北京三元食品股份有限公司，北京100085)摘要：乳铁蛋白是一种天然糖蛋白，主要存在于母乳中，其有多种生物学功能。
近年来，一些研究认为，乳铁蚤白具有化学预防和抗肿瘤作用。
本文就乳铁蛋白和肿瘤的关系作一综述。
关键词：乳铁蛋白，乳铁蛋白肽，抗肿痫功能Research progress of relation between lactoferrin and tumorLI Hong-bo' ,ZHOU Qiang1t TENG Guo-xin2 ,XU Xiao-xi''(I.Food College and Key I.a})〇r of Dairy Science of Ministry of Education,Northeast Agriculture University,Harbin 150030,China；2.Beijing San Yuan Foods Co,Ltd..Beijing 100085.China)Abstract：The lactoferrin, a natural iron - binding glycoprotein, exits mainly in mammals with multi - biological function. Lactoferrin is recently reported to have chemoprevention and anti-tumor effects. This review articles provided a relation between lactoferrin and tumor.Key words：lactoferrin；lactoferrcin；anti-tumor function中图分类号:T S252.1 文献标识码：A文章编号：1002-0306(20丨0}0卜0399-03乳铁蛋白（Lactoferrin，以下简称LF)是铁结合糖蛋白，又称乳转铁蛋白，由Groves于1960年首次从牛乳中分离获得，由于LF与铁结合形成红色的复合物，故也称其为“红蛋白”。
乳铁蛋白的国内外研究动态及趋势作者：张东送， 庞广昌， 胡志和， 王彦， 刘萍作者单位：张东送(天津商学院生物工程系,天津,300134;海军后勤学院军需系,天津,300450)， 庞广昌,胡志和(天津商学院生物工程系,天津,300134)， 王彦,刘萍(海军后勤学院军需系,天津,300450)刊名：食品科学英文刊名：FOOD SCIENCE年，卷(期)：2004,25(3)被引用次数：18次1.曹劲松初乳功能性食品 20002.Hiroyuki Tsuda;Kazunori Sekine Milk and dairy products in cancer prevention: focus on bovine lactoferrin 20003.Keiichi S Z Lactoferrin:A marvelous protein in milk 2000(04)4.Masanori Ikeda;AkitoNozaki Characterization ofantiviral activity oflactoferrin against hepatitis C virus infection in human cultured cells 20005.Naidu A S Immobilized lactoferrin antimicrobial agents and the use 20016.DALMASTRI C;Valenti P Enhanced antimicrobial activity of lactoferrin by binding to the bacterial surface 19987.NAIDU A;Satyanarayan Activated lactoferrin a new approach to meat safety 2002(03)8.薛京伦,卢大儒乳腺生物反应器的研究现状[期刊论文]-生物技术通报 1998(3)9.Patrick H C;van Berkel;Mick M;Welling,Large scale production of recombinant human lactoferrin in the milk of transgenic cows 200010.曹阳,高华颖,于黎,袁晓东,李庆伟,汤敏谦,安利佳人乳铁蛋白基因克隆及细胞表达研究[期刊论文]-遗传2002(1)11.凌雪萍,庞广昌,李国强乳铁蛋白的最新研究进展[期刊论文]-食品科学 2003(1)12.张大兵查看详情 199813.Daniel K X;Chong;William H R Expression offull-length bioactive antimicrobial human lactoferrinin potato plants 200014.Liang Q;Richardson T Expression of human lactoferrin in S. cerevisiae 199315.Ward P P;May G S An inducible expression system for the production of human lactoferrin in Aspergillus nidulans 199216.Conneely O M查看详情17.岛崎敬一;黑田清隆限外滤过膜にょるチズホエ中のタン,ヮ质成分の分画につぃて 1989(06)18.DUBOLS E Process tor separate from whey or from milk protein of high molecular mass such as immunoglobulins or lactoferrin 198819.卢蓉蓉,许时婴,王璋,方民预分离初乳中乳铁蛋白的超滤工艺[期刊论文]-无锡轻工大学学报 2002(1)20.凌雪萍,庞广昌,李国强牛初乳中乳铁蛋白的分离及纯化[期刊论文]-食品工业科技 2002(12)21.W Bellarmy M;Takase.H;Wakabayashi Antibacterial spectrum of lactoferricin B, a potent22.王崇道,强亦忠,金坚乳铁蛋白（LF）的提纯及其放射免疫分析在肺癌诊断中的应用[期刊论文]-同位素1999(1)1.乳铁蛋白最新研究进展--结构、特性及生产制备方法(Ⅰ)[期刊论文]-中国乳品工业2000,28(3)2.凌雪萍.庞广昌.邢伟乳铁蛋白的开发利用及其研究进展[期刊论文]-中国乳品工业2002,30(4)3.赵春江.刘兆良.樊宝良.李宁人乳铁蛋白转基因研究进展[期刊论文]-农业生物技术学报2004,12(4)4.唐传核.曹劲松.彭志英.TANG Chuan-he.CAO Jin-song.PENG Zhi-ying乳铁蛋白最新研究进展 --活性多肽以及生理功能(Ⅱ)[期刊论文]-中国乳品工业2000,28(5)5.庞广昌.胡志和.陈庆森.PANG Guang-chang.HU Zhi-he.CHEN Qing-sen乳铁蛋白的抗病毒活性[期刊论文]-食品科学2006,27(1)6.胡源媛.张守文.HU Yuan-yuan.ZHANG Shou-wen乳铁蛋白的功能特性及其国内外的应用情况[期刊论文]-中国乳品工业2005,33(12)7.曹阳.包永明.安利佳.高华颖乳铁蛋白研究现状[期刊论文]-食品科学2002,23(12)8.卢蓉蓉.许时婴.杨瑞金.孙震.LU Rong-rong.XU Shi-ying.YANG Rui-jin.SUN Zhen乳铁蛋白抑菌活性及机理研究[期刊论文]-食品科学2008,29(2)9.杨安树.李欣.陈红兵.刘志勇牛乳中乳铁蛋白的纯化和抗菌活性研究[期刊论文]-食品工业科技2007(4)10.王觐.薛长勇乳铁蛋白的生理功能及研究进展[期刊论文]-中国食物与营养2008(9)1.肖岚,张振宇,王熙,辛松林牛乳中乳铁蛋白的分离纯化[期刊论文]-食品研究与开发 2010(11)2.安娜,朱秀萍泪液乳铁蛋白的研究进展[期刊论文]-国际眼科杂志 2008(05)3.刘传国乳铁素的免疫调节作用机理的研究[学位论文]硕士 20084.冯飞牛乳铁素的制备分离纯化及其抗菌活性的研究[学位论文]硕士 20075.李娜,胡志和,庞广昌,仇菊常用防腐剂对牛乳铁蛋白抗菌活性的影响[期刊论文]-食品科学 2006(12)6.乳铁蛋白的理化性质及其生物学功能[期刊论文]-畜牧兽医科技信息 2005(10)7.王永飞,马三梅,冉艳红,王亚琴利用植物基因工程改良铁营养成分的研究进展[期刊论文]-食品科学 2005(05)8.杨雪峰,王清华,马石楠乳铁蛋白的生理功能及其在畜牧生产中的应用[期刊论文]-安徽农业科学 2006(22)9.于立芹牛初乳中主要活性成分对发炎和抗炎细胞因子平衡的影响[学位论文]硕士 200810.项开合,张乃生,肖连明,聂玉霞奶牛乳房炎的生物学防治[期刊论文]-动物医学进展 2007(03)11.胡轶以牛初乳为原料制备免疫调节乳制品[学位论文]硕士 200912.冯飞牛乳铁素的制备分离纯化及其抗菌活性的研究[学位论文]硕士 200713.陈永艳高效毛细管电泳分析乳铁蛋白的方法研究[学位论文]硕士 200814.金月亭酶解乳铁蛋白制取乳铁素的工艺方法研究[学位论文]硕士 200815.张晓春乳铁蛋白的提取及其在预调理肉保鲜中的应用研究[学位论文]硕士 200816.李翠玲乳铁蛋白的研究现状[期刊论文]-中国奶牛 2011(14)17.张红乳铁蛋白的热变性动力学及热保护剂的研究[学位论文]硕士 200618.蔡佩玲人乳铁蛋白（hLF）cDNA的克隆及生物信息学分析[学位论文]硕士 2005引用本文格式：张东送.庞广昌.胡志和.王彦.刘萍乳铁蛋白的国内外研究动态及趋势[期刊论文]-食品科学2004(3)。
第12卷第1期1999年2月同 位 素Jou rnal of Iso topesV o l.12 N o.1Feb.1999乳铁蛋白(L F)的提纯及其放射免疫分析在肺癌诊断中的应用王崇道 强亦忠(苏州医学院放射医学研究所,215007)金 坚(江苏省原子医学研究所核医学国家重点实验室,无锡214063)摘要 报道了乳铁蛋白(L F)的提纯方法,放射免疫分析法的建立及其在肺癌诊断中的应用。
用改良的萃取法获得相对分子量为75000D的L F,其聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫双扩散结果均呈单一色带,1mL人乳可提取01542m g L F。
放射免疫分析批间及批内变异分别为4177%和13159%,回收率97199%。
对36例肺癌、21例肺部感染和4例正常人的支气管冲洗液中乳铁蛋白(BL F)进行测定,结果表明肺癌组明显高于肺部感染组和正常对照组,其中肺腺癌的检出率最高。
病理分期表明, BL F与肺癌的早、晚期呈负相关。
关键词 乳铁蛋白(L F) 提纯 放射免疫分析(R I A) 肺癌诊断O62917 R8171441乳铁蛋白(L actoferrin,L F)是体内腺上皮细胞与中性细胞分泌的一种糖蛋白,它广泛分布于具有分泌功能的组织及其分泌物中,为人体体液中重要的蛋白成分之一,它的含量变化常与许多病理过程有关[1]。
目前国内对L F的研究甚少,这主要由于大量分离与纯化L F比较困难,步骤繁琐,成本高,产率低[2～4]。
为此,本工作拟对L F的提纯方法进行改良,并建立L F的放射免疫分析方法(L F2R I A),用于肺癌的诊断。
1 实验材料111 主要试剂人初乳,由无锡市第四人民医院提供;磷酸纤维P11,W hatm an公司产品;Sep hadex G50和Sep hadex G100,Pharm acia公司产品;牛血清蛋白第二部分(B SA2 ),Sigm a公司产品;人血清转铁蛋白(T F),上海生物制品研究所产品;蛋白质低分子量测定标准品,上海东风试剂厂产品;125I2N a I溶液,Am ersham公司产品;氯胺T,M erck公司产品;L F抗血清,自行制备;羊抗兔第二抗体,江苏省原子医学研究所产品;其余试剂均为国产分析纯。
王崇道:男,55岁,副教授,放射医学专业收稿日期:1998203217 修改稿收到日期:19982092106同 位 素 第12卷 112 主要仪器Econo低压色谱仪,B i o2R ad产品;E lectrop ho r2117电泳仪,Pharm acia产品;20PR250D 高速离心机,H ITA CH I产品;C5002Χ计数器,Parkard产品。
113 标本采集肺癌与肺部感染组的支气管冲洗液中的L F(L F in the B ronch ial W ash ing F lu id,简称BL F)皆取自临床手术、实验室和特殊检查以及病理学检查证实者;正常人组的BL F由健康男性志愿者提供。
具体操作为:按常规进行纤维支气管镜检查。
纤维支气管镜应插入病变肺段以下的支气管内,然后注入灭菌生理盐水20mL进行冲洗,随后在210×104Pa负压条件下吸出冲洗液,经离心取上清液待测。
冲洗液的平均回收量为4～10mL。
2 实验方法与结果211 L F的提纯与鉴定21111 L F的提纯参照文献[5]的方法,并作了一些改进。
其工艺过程如下:200mL新鲜人初乳经离心、酸化、制得乳清[6]。
将预处理过的磷酸纤维素P11[7]与乳清以1∶10的体积比混合后,用011m o l L N aO H调pH至710,搅拌2h,装Sep hadex G50柱(Υ216c m×10c m)。
以011m o l L、pH= 710的磷酸盐缓冲液(PB S)(含011m o l L N aC l)淋洗至流出液分光光度测定值A280nm<0108;再用012m o l L、pH715PB S(含0125m o l L N aC l)的缓冲液进行洗脱。
收集淋洗峰管,浓缩后上Sep hadex G100柱(Υ1c m×120c m),合并淋洗液分光光度测定值A280nm>110的淋洗峰管。
将其用0101m o l L、pH714的H ep es2N aO H缓冲液(含0105m o l L N aC l)进行透析平衡,真空冷冻干燥,-20℃下保存。
上述操作均在4℃下进行。
21112 L F的鉴定L F的纯度用D avis不连续PA GE体系分析[8],所得产品在电泳上呈单一区带;与L F抗血清的免疫双扩散[9]亦呈单一沉淀线。
SD S2PA GE测得相对分子量为75000D。
Perk in2E le2 m er551型分光光度计连续扫描发现,在460nm左右有最大吸收,410nm左右有最小吸收。
上述结果与文献[10]报道一致,证明本工作纯化的产品确系L F。
L F含量用L ow ry法分析,以B SA2 为标准,1mL人乳中可提取01542m g L F。
本法提纯的L F与人T F间无交叉反应。
212 125I-L F放射免疫法的建立21211 125I2L F的制备用氯胺T标记法制备125I2L F,其步骤如下:取20ΛL L F溶液(含20Λg L F),加3ΛL125I2 N a I(约31219M B q),搅匀后加入氨胺T5ΛL(含氯胺T5Λg),反应50s,用偏重亚硫酸钠15ΛL(30Λg)终止反应。
用Sep hadex G50柱(Υ1c m×30c m)层析,淋洗液为0105m o l L、pH714的PB S缓冲液。
淋洗峰各管用过量L F抗血清检测其免疫活性和非特异性结合(N SB)。
选取免疫活性最高、N SB最低的淋洗管用于L F2R I A测定。
本法标记率为57%。
21212 抗体免疫 抗原:L F;免疫动物:家兔,体重约2kg;免疫量:每次100Λg kg;免疫次数:7次;滴度:1∶4×105。
21213 L F2R I A的加样步骤用含012%B SA的50mm o l L、pH714的PB S为反应缓冲液,按表1进行L F2R I A。
之后吸去上清液,抗体结合的125I 2L F 用Χ计数器测量。
计算结合率,用四参数L ogistic 数据处理程序处理并作标准曲线。
表1 L F -R I A 加样(ΛL )操作步骤试 剂N SB 管B 0管B 1～6管待测样品管缓冲液300200100100标准品100支气管冲洗液100125I 2L F 100100100100L F 抗血清1001001004℃放置20h 1∶5羊抗兔二抗1001001001001∶50正常兔血清50050050050037℃放置2h ,4000r m in 离心25m in 注:N SB 为非特异结合量;B 0为零标准量;B 1～6为不同浓度(10,40,160,320,640,1024Λg L )标准量21214 方法参数图1 L F -R I A 测定的标准曲线(1)L F 2R I A 的特异性:取T F 配制成1Λg L～2m g L 不同浓度的系列样品,代替标准曲线中的L F 标准品进行分析测定。
结果显示,在上述浓度范围内,T F 对125I 2L F 与L F 抗血清之间结合没有抑制作用。
(2)L F 2R I A 的灵敏度、检测范围、批内批间变异系数、非特异结合率、回收率及标准曲线:最小检测限的确定是通过零标准点均数减去两个标准差在标准曲线上所得到的值,为2ng ;检测范围为3个数量级;批内CV 为4177%,批间CV 为13159%;本法回收率为97199%;非特异结合率<5%。
标准曲线示于图1。
3 B L F -R I A 在肺部疾患诊断上的应用 人支气管冲洗液中L F (BL F )的R I A 测定结果列于表2。
各组测定值均数比较采用方差分析;样本率的比较采用ς2检验;两变量关系用相关处理。
诊断效果判断依下列公式处理:敏感性=A (A +B );特异性=D (C +D );准确性=(A +D ) (A +B +C +D )。
式中A 表示肺癌组中真阳性,B 表示假阴性;C 表示肺部感染组中假阳性,D 表示真阴性。
BL F 测定结果列于表2。
表2结果表明肺癌组BL F 含量最高,肺部感染组次之。
肺癌组与肺感染组及正常组比较,差异十分显著(P <0.01)。
在病理分类中,BL F 以肺腺癌为最高,小细胞未分化癌次之,鳞癌最低。
将三种病理类型肺癌组与正常组、肺结核组及肺炎组分别进行比较,除鳞癌组与肺炎组无显著差异外,其它各组间均有显著差异(P <0.01)。
7 第1期 王崇道等:乳铁蛋白(L F )的提纯及其放射免疫分析在肺癌诊断中的应用8同 位 素 第12卷 θ±s)及比较表2 不同肺部疾患的B L F含量(x组 别样本数(n)Θ(BL F) Λg・L-1P正常组44105±3121肺部感染组2115144±15179 肺结核组1214143±19198 肺炎组916178±11117肺癌组3653195±47160<01011),2) 鳞癌组1447136±48180<01011),3),>01054) 未分化癌组850188±46115<01011),3),4) 腺癌组1462129±49132<01011),3),4) 注:1)与正常组比较;2)与肺部感染组比较;3)与肺结核组比较;4)与肺炎组比较按照1978年全国肺癌临床病理分期试行方案,对36例肺癌进行分期,并将各期的BL F 均值进行比较,结果列于表3。
由表3可知, 期肺癌的BL F显著高于 期及 期(P<0105及P<0101),但 期肺癌患者的BL F平均含量虽有高于 期的趋势,但差异不显著(P>0105)。
θ±s)表3 各期肺癌患者B L F含量(x病理分期样本数(n)Θ Λg・L-1P 2362158±45158<01051)627119±21141>01052)716186±16139<01013) 注:1)与 比较;2)与 比较;3)与 比较4 讨 论(1)L F的等电点为817。
本工作采用强酸性的磷酸纤维素,可使L F与呈负电性的乳清蛋白通过离子交换层析得到分离,提高了L F的纯度。
以往的提纯方法得到的L F纯度偏低,可能是由于L F有与乳清蛋白聚合的倾向所致[11]。
(2)通过实验发现,连续盐梯度淋洗或pH梯度淋洗不能提高L F的纯度,改用阶段淋洗,不但能保持L F的高纯度,而且还可明显提高L F的产率。
