常用试剂的配制总结
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高中生物物质检测的试剂总结
1。
斐林试剂检测可溶性还原糖
原理:还原糖+斐林试剂→砖红色沉淀
注意:斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用,而且是现用现配,条件需要水浴加热。
2。
苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ检测脂肪
原理:苏丹Ⅲ+脂肪→橘黄色;苏丹Ⅳ+脂肪→红色注意:脂肪的鉴定需要用显微镜观察。
3.双缩脲试剂检测蛋白质
原理:蛋白质+双缩脲试剂→紫色
注意:双缩脲试剂在使用时,先加A液再加B液,反应条件为常温(不需要加热).
4.碘液检测淀粉
原理:淀粉+碘液→蓝色
注意:这里的碘是单质碘,而不是离子碘。
5.DNA的染色与鉴定
染色原理:DNA+甲基绿→绿色鉴定原理:DNA+二苯胺→蓝色
应用:可以显示DNA在细胞中的分布。
6.吡罗红使RNA呈现红色
原理:RNA+吡罗红→红色
应用:可以显示RNA在细胞中的分布。
注意:在观察DNA和RNA在细胞中的分布时用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂,而不是单独染色。
7。
线粒体的染色
原理:健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料,可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色,而细胞质接近无色。
8.酒精的检测
原理:橙色的重铬酸钾溶液在酸性条件下与酒精发生化学反应,变成灰绿色。
9。
CO2的检测
原理:CO2可以使澄清的石灰水变混浊,也可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿在变黄。
10。
染色体(或染色质)的染色
原理:染色体容易被碱性染料(如龙胆紫溶液或醋酸洋红溶液)染成深色。
溶液的配制知识点总结一、实验室常用的溶液配制方法1. 一般常用的溶液配制方法有称量法、容量法、稀释法和溶解法等。
2. 称量法是以称量原料或溶质的固体质量为基础进行的配制方法。
一般是先称取固体溶质,然后溶解在适量水中,最后通过加水至所需体积。
称量法适用于精确配制浓溶液,如标准溶液。
3. 容量法是将一定体积的液体容器作为固定标准,向其中加入一定的溶质质量,配制所需浓度溶液。
容量法适用于精确配制稀溶液和标准溶液。
4. 稀释法是将浓溶液通过加入适量的溶剂稀释至所需浓度的溶液。
稀释法适用于大容量的常用溶液的制备。
5. 溶解法是将一定物质溶解在一定量的溶剂中,调整浓度以得到所需的溶液。
溶解法适用于一些易溶于水的化合物,如盐酸、硫酸等。
二、溶液配制中的注意事项1. 必须使用准确的称量器具和标定过的量筒、瓶口样品瓶,避免实验操作中的误差,以获得准确的结果。
2. 在称量试样时,应使用分析天平,掌握其精确误差,保证称取样品的准确性。
3. 在配制溶液时,应按配制的要求逐步加入试剂,并用加热或者搅拌等方法辅助溶解(如需)。
4. 在溶解固体试样时,应用少量溶剂先将试样湿润,然后加入余量溶剂继续溶解,以达到均匀溶解的效果。
5. 配制标准溶液时,必须使用精密的电子天平和标定过的量筒,严格按照标准操作步骤进行。
6. 在配制酸碱溶液时,要注意操作安全,必须佩戴防护装备,避免酸碱飞溅伤人。
7. 配制有毒、易挥发、易揮发、强臭、强酸、强碱等有害试剂时,应准备好防护措施,如通风设施、防护服等。
三、常用的溶液计算方法1. 浓度的计算:溶液的浓度通常用摩尔浓度(M)或质量浓度(g/L)表示,计算公式为C=n/V或C=m/V。
2. 溶液的稀释计算:浓度为C1的溶液,向其中加入V1体积的溶剂后,溶液的浓度变为C2,按C1V1=C2V2进行稀释计算。
3. 溶质的质量计算:获得溶液质量m,浓度C,溶液体积V后,可以按m=C×V进行溶质质量的计算。
实习期间的样品处理与试剂配制总结1. 概述在实习期间,我负责了样品处理与试剂配制的工作。
这项工作在实验室中起着至关重要的作用,是保证实验准确性和可靠性的基础。
通过实践与学习,我掌握了一系列的样品处理和试剂配制技巧,并对其中的一些关键点进行了总结和思考。
2. 样品处理2.1 样品提取样品提取是样品处理中的关键步骤。
在进行样品提取时,我学会了正确的样品采集方法,并注意遵守相关实验室操作规范。
我发现对于不同类型的样品,合适的提取方法是不同的,需要根据实验目的进行选择。
同时,充分了解样品特性也是提取过程中不可忽视的一点,这有助于避免实验过程中的误差。
2.2 样品预处理样品预处理是样品处理过程中的重要环节。
通过实践,我熟悉了不同样品的预处理方法,并学会了如何选择适当的样品处理方法,以提高样品的纯度和稳定性。
在过去的实习经验中,我遇到了一些样品处理中的困难,包括样品溶解问题和固相杂质的去除等。
我通过查阅文献和请教导师解决了这些问题,加深了对样品处理的理解和掌握。
3. 试剂配制3.1 试剂存储试剂存储是试剂配制过程中的重要环节。
我明白了试剂的储存与保管对实验结果的影响,因此在实习期间,我严格按照实验室规范进行了试剂存储操作。
我学会了正确选择试剂的储存条件,了解了对于不同试剂的储存温度、光照条件和密闭性的要求。
在试剂存储中,我特别注重试剂的有效期检查和标签贴附,以确保实验结果的准确性和可重复性。
3.2 试剂配制的准确性在试剂配制过程中,准确度是一个非常重要的因素。
我意识到了试剂配制过程中所需的仪器和操作的敏感性。
我学会了使用精密的称量仪器和试剂瓶针来准确配制试剂。
同时,我还学习了使用各种容量瓶和移液器的正确操作方法,确保了试剂配制的准确性和可靠性。
4. 实习心得通过实习期间的样品处理与试剂配制工作,我深刻认识到实验室工作中的细节和严谨性对实验结果的重要影响。
在未来的工作中,我将继续严格遵守操作规范,注重细节的处理,并不断提高自己的实验技术和专业知识。
试剂生产个人工作总结范文在试剂生产工作中,我通过不懈的努力和努力学习,取得了一定的成绩。
以下是我个人在试剂生产工作中的总结:首先,我深刻了解了试剂生产的整个流程和操作规程。
我学会了化学试剂的配制、质控、包装和储存,掌握了各种化学试剂的危险性及相应的防护措施。
通过严格的操作规范和标准化流程,我保证了试剂的质量和稳定性。
其次,我在工作中不断精益求精,提升了自己的操作技能和分析能力。
我学会了如何准确称量和混合化学试剂,如何正确操作实验设备,如何快速准确地进行质量检测和问题分析。
我注重细节和实验数据的准确性,确保生产的试剂符合标准要求。
在团队合作方面,我善于与同事协作,互相帮助和学习。
在试剂生产过程中,我们之间要密切配合,确保试剂生产的质量和效率。
我提倡团队精神,帮助同事解决问题,共同完成生产任务。
最后,我注重安全和环保意识,在试剂生产过程中,我严格遵守操作规程和安全程序,防止事故发生。
我提倡节约资源和减少废物排放,保护环境,为企业的可持续发展做出贡献。
总的来说,我在试剂生产工作中取得了很大的进步,不仅提高了自己的专业技能和工作能力,也为企业的生产质量和效率作出了贡献。
我会继续努力学习和提升自己,为试剂生产工作做出更大的贡献。
在试剂生产的工作中,我还要反思自己在一些方面还需要提升。
首先,在与同事协作方面,我要更加主动地与团队成员交流和沟通,了解他们的需求和困难,共同寻求解决问题的方法。
其次,在安全和环保方面,我要建立更加严格的责任意识,严格按照操作规程和安全程序进行操作,做好防范措施,防范各种事故的发生。
此外,在实验数据的记录和分析方面,我要更加仔细认真地进行记录,确保实验数据的准确性。
同时,我还要不断学习新的技术和理论知识,丰富自己的专业知识,为试剂生产提供更好的支持。
在今后的工作中,我还将不断努力,在质量控制、生产效率、安全环保等方面力求更加完善,做到精益求精。
我将充分发挥自己的创造力和创新能力,努力开发新的生产技术和方法,提高生产的质量和效率。
实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液配方有很多种,下面将介绍一些常用的试剂和缓冲液的配方:一、试剂的配方1. Tris缓冲液:- 3 M Tris-Cl,pH 7.4(准备方法:将121.1 g Tris粉末溶解在800 mL去离子水中,使用HCl调节pH值至7.4,并将溶液体积加至1 L)2.NaCl溶液:-5MNaCl(准备方法:将287.7gNaCl溶解在800mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)3.验血试剂:-4%NaOH溶液(准备方法:将40gNaOH溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)-5%CuSO4溶液(准备方法:将50gCuSO4溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)-2%K4[Fe(CN)6]溶液(准备方法:将20gK4[Fe(CN)6]溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)4.PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液):-10×PBS缓冲液(准备方法:将80gNaCl,2gKCl,11.5gNa2HPO4,2gKH2PO4溶解在800mL去离子水中,并将溶液体积加至1L。
pH值可以调节至7.4左右)5. Tris-EDTA缓冲液(TE缓冲液):- 10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA,pH 8.0(准备方法:将12.1 gTris溶解在800 mL去离子水中,然后加入0.37 g EDTA,使用HCl调节pH值至8.0,并将溶液体积加至1 L)二、缓冲液的配方1. Tris-HCl缓冲液:- 50 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,1% Triton X-100,pH 7.4(准备方法:将6.05 g Tris,5.8 g NaCl,0.1 g Triton X-100溶解在800mL去离子水中,使用HCl调节pH值至7.4,并将溶液体积加至1 L)2. Tris-Borate缓冲液(TBE缓冲液):- 89 mM Tris,89 mM boric acid,2 mM EDTA,pH 8.3(准备方法:将10.81 g Tris,5.49 g boric acid,3.72 g EDTA溶解在800 mL去离子水中,使用NaOH或HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)3. Tris-Glycine缓冲液:- 25 mM Tris,192 mM glycine,0.1% SDS,pH 8.3(准备方法:将3.03 g Tris,14.35 g glycine溶解在800 mL去离子水中,使用HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)4. Tris-Acetate缓冲液(TAE缓冲液):- 40 mM Tris,20 mM acetic acid,1 mM EDTA,pH 8.3(准备方法:将4.84 g Tris,1.86 g acetic acid,0.37 g EDTA溶解在800 mL去离子水中,使用NaOH或HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)5. Phosphate缓冲液:- 100 mM sodium phosphate,pH 7.0(准备方法:根据目标pH值使用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠调节溶液pH至7.0,并将溶液体积加至1 L)以上只是一些常用的试剂和缓冲液的配方,并不是全部。
一、实验目的1. 掌握试剂配置的基本原理和方法。
2. 熟悉实验室常用试剂的配制过程。
3. 培养实验操作技能,提高实验数据处理能力。
二、实验原理试剂配置是指将一定量的纯试剂溶解于溶剂中,配制成所需浓度的溶液。
根据稀释定律,溶液稀释前后溶质的物质的量保持不变。
因此,可以通过计算得到所需浓度和体积的溶液。
三、实验器材1. 电子天平2. 烧杯3. 量筒4. 玻璃棒5. 容量瓶6. 实验记录本四、实验步骤1. 计算所需试剂的物质的量(n)。
n = C × V其中,C为所需溶液的浓度,V为所需溶液的体积。
2. 计算所需纯试剂的质量(m)。
m = n × M其中,M为纯试剂的摩尔质量。
3. 称取所需纯试剂。
4. 将称取的纯试剂溶解于一定量的溶剂中。
5. 将溶液转移到容量瓶中,用溶剂洗涤烧杯和玻璃棒,将洗涤液也转移到容量瓶中。
6. 加溶剂至刻度线,摇匀。
7. 将配制好的溶液倒入试剂瓶中,贴上标签。
五、实验数据及结果1. 实验数据:| 试剂名称 | 所需浓度(mol/L) | 所需体积(mL) | 纯试剂摩尔质量(g/mol) | 纯试剂质量(g) || -------- | ----------------- | -------------- | ---------------------- | -------------- || NaOH | 0.1 | 100 | 40 | 2.0 |2. 实验结果:配制成功,所得溶液浓度为0.1 mol/L,体积为100 mL。
六、实验讨论1. 在实验过程中,应确保称取的纯试剂质量准确,避免因称量误差导致溶液浓度不准确。
2. 在溶解纯试剂时,应选用适当的溶剂,以保证溶解度。
3. 在转移溶液时,应尽量减少溶液的损失,确保溶液的浓度准确。
4. 实验过程中,注意操作规范,确保实验安全。
七、实验总结通过本次实验,我们掌握了试剂配置的基本原理和方法,熟悉了实验室常用试剂的配制过程。
硫酸钾乙醇溶液配制方法硫酸钾乙醇溶液是一种常用的化学试剂,在实验室中广泛应用于化学分析、有机合成以及其他领域。
本文将介绍硫酸钾乙醇溶液的配制方法。
一、实验室中配制硫酸钾乙醇溶液的方法如下:1. 准备所需材料和设备:硫酸钾、乙醇(酒精)、蒸馏水、容量瓶、滴定管、搅拌棒等。
2. 按照所需配制浓度计算所需硫酸钾和乙醇的质量或体积。
3. 在干净的容量瓶中先加入一定量的蒸馏水,约为总体积的一半。
4. 将硫酸钾逐渐加入容量瓶中,同时用搅拌棒搅拌溶解。
5. 加入适量的乙醇,继续搅拌溶解。
6. 最后,将剩余的蒸馏水加入容量瓶中,使总体积达到所需的最终体积。
7. 用滴定管取适量溶液,进行浓度检测,如果浓度不符合要求,可以根据需要进行调整。
二、在配制硫酸钾乙醇溶液时需要注意以下几点:1. 安全操作:硫酸钾是一种腐蚀性物质,乙醇具有易燃性,所以在操作过程中要注意安全,戴好防护手套和眼镜,避免接触皮肤和眼睛,避免与火源接触。
2. 溶解效果:硫酸钾在蒸馏水中的溶解度较高,但在乙醇中的溶解度较低,因此在配制过程中要先溶解硫酸钾,再加入乙醇。
3. 搅拌均匀:在加入硫酸钾和乙醇时要充分搅拌,以保证溶液的均匀性。
4. 浓度检测:配制完成后,可以用滴定管取适量溶液,进行浓度检测,如果浓度不符合要求,可以根据需要进行调整。
5. 储存注意:配制好的硫酸钾乙醇溶液应密封保存,避免与空气接触和受潮。
三、总结硫酸钾乙醇溶液是一种常用的化学试剂,在实验室中配制方法简单,但在操作过程中需要注意安全,并确保溶解均匀和浓度准确。
配制好的溶液可以广泛应用于化学分析、有机合成等实验中,为科研工作提供了重要的支持。
硫酸钾乙醇溶液的配制方法是实验室中常见的操作之一。
通过合理的配比和搅拌溶解,可以得到所需浓度的溶液。
在实验操作中要注意安全,并进行浓度检测,确保溶液质量。
硫酸钾乙醇溶液的配制为化学实验提供了重要的基础条件,对于实验结果的准确性和可靠性具有重要意义。
质粒提取试剂配制和操作步骤试剂配制(小量)1. 1M(M代表摩尔浓度即mol∕L)NaOH (400ml ):分子量为40,秤取16g NaOH, 溶于400ml DDW中。
2. 2M Tris—HCl (500ml):分子量为121.14, 秤取121.14g Tris,放入干净的500ml烧杯中,加400 ml DDW,置于搅拌器上搅拌溶解,用HCl调节pH 值为8.0(首先直接加12M的浓盐酸约20ml,接近8。
0时再用1M HCl 调节),定容至500ml,4℃保存。
3. 10%SDS (200ml):称量20gSDS,放入干净的烧杯中,加100 ml DDW,定容到200ml,室温保存。
(SDS具有较强的刺激性,称量时一定带好口罩,动作轻柔)。
4。
Buffer P1 (500ml): 用50ml离心管量取10ml 0。
5M的EDTA,然后量取12。
5ml 2M 的Tris-HCl,放入干净的烧杯中,加入300ml DDW,置于搅拌器上搅拌溶解,用HCl调节pH值为8。
0(大约加12M的浓盐酸1ml ),定容至500ml,4℃保存。
5.Buffer P2(100ml): 20ml 1M NaOH和10ml 10%SDS放入200ml的玻璃瓶中,然后加入70ml DDW,混匀,室温放置过夜,使其自溶,最后室温保存.(注:不需要定容,严格按步骤操作)。
6. Buffer P3 (500ml):秤取147.21g乙酸钾,溶于300ml DDW中,置于搅拌器上搅拌溶解,用冰醋酸调节pH值为5.5,(约加80–100ml冰醋酸),定容至500ml,4℃保存.7. Buffer QBT(500ml):分别称取NaCl 21。
915g, MoPS 5。
23g,放于干净的500ml烧杯中,加入300ml DDW,置于搅拌器上搅拌溶解,用1M NaOH 调节pH值为7。
0(约加10–15ml NaOH),然后加入75ml 异丙醇,定容至500ml,4℃保存。
实验室常用试剂和缓冲液配方PBS(磷酸盐缓冲液)是一种常用的生物化学缓冲液,用于洗涤和稀释生物化学试样。
配方:-NaCl:8g-KCl:0.2g-Na2HPO4:1.42g-KH2PO4:0.24g将上述物质溶解在1升蒸馏水中,调节pH值至7.4、用1M(摩尔浓度)盐酸或1M氢氧化钠进行调节。
2. Luria-Bertani (LB) 培养基配方LB培养基是微生物学研究中常用的培养基,适用于大多数细菌和酵母菌的培养。
配方:- 水解酪蛋白(tryptone):10 g- 酵母粉(yeast extract):5 g-NaCl:10g将上述物质溶解在1升蒸馏水中,用1M盐酸或1M氢氧化钠调节pH 至7.0。
可以选择添加洗涤剂Tween-20(0.1%)以提高溶解度。
SSC缓冲液广泛用于核酸杂交实验等生物学研究中。
配方:-NaCl:175.3g- Na3Citrate·2H2O:88.2 g-EDTA:37.2g将上述物质溶解在1升蒸馏水中,调节pH值至7.0-7.2、可以选择添加DEPC(二硫酰二甲酯)处理,增强其功能。
4.甲醛溶液甲醛溶液常用于生物样品固定以及染色实验。
配方:-甲醛:37%-PBS或水将适量的甲醛加入PBS或水中,制备所需浓度的甲醛溶液。
5. β-羟丁酸钠(β-Hydroxybutyrate)溶液β-羟丁酸钠是一种常用的减少剂,用于生物化学实验中。
配方:-β-羟丁酸钠:1M根据需求将适量的β-羟丁酸钠溶解在合适的溶剂中。
这里只是列举了几个常见的试剂和缓冲液配方,实验室试剂和缓冲液种类丰富多样,具体使用取决于研究目的和实验要求。
在进行实验之前,建议仔细阅读相关文献和制造商提供的说明书,并按照正确的比例和步骤配制试剂和缓冲液。
实验常用试剂缓冲液的配制方法实验室中经常使用各种试剂和缓冲液进行实验。
下面我将介绍一些常用试剂和缓冲液的配制方法。
1.磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液一般有三种类型的配方:PBS(磷酸盐缓冲盐溶液)、PBST(含Tween-20的磷酸盐缓冲盐溶液)和TBS(三氯甲烷缓冲盐溶液)。
配制PBS缓冲液:-加入适量的8.0g/L氯化钠和0.2g/L磷酸氢二钠到1L去离子水中。
-调整pH值至7.4,采用10M氢氧化钠(NaOH)或者盐酸(HCl)。
-用去离子水稀释至1xPBS。
配制PBST缓冲液:-配制1xPBS。
- 加入0.1%(v/v)Tween-20。
-混合均匀。
配制TBS缓冲液:-加入2.42g/L三氯甲烷到1L去离子水中。
-加入20g/L三甲基氯化胺到溶液中。
-调整pH值至8.0,采用盐酸(HCl)。
-用去离子水稀释至1xTBS。
2.毛细管电泳缓冲液毛细管电泳缓冲液的配制方法取决于电泳类型,一般包括凝胶和毛细管电泳。
配制凝胶电泳缓冲液:-加入8g/L琼脂糖和0.4g/L硼酸到1L去离子水中。
-用热板搅拌器加热,搅拌至溶解。
-冷却至室温后,调整pH值至8.3,采用盐酸(HCl)或氢氧化钠(NaOH)。
-用去离子水稀释至所需浓度。
配制毛细管电泳缓冲液:-加入10mM氢氧化钠(NaOH)和1mM二硼酸氢钠到500mL去离子水中。
-调整pH值至9.2,采用盐酸(HCl)。
-加入1mM十二烷基硫酸钠。
-用去离子水稀释至所需浓度。
3.蛋白质含量测定蛋白质含量测定一般采用BCA法、Lowry法或Bradford法。
BCA法配制试剂:-在15mL玻璃试管中加入BCA试剂(提取液A)。
-加入0.1M硫酸(提取液B)。
-混合提取液A和提取液B,即得到试剂。
Lowry法配制试剂:-加入白蛋白标准品和Na2CO3/NaOH缓冲液(A液)到250mL锥形瓶中。
-混合硫酸/磷酸/酒精试剂(B液)。
-将A液倒入B液中混合,待用。
Bradford法配制试剂:-加入试剂A到450mL去离子水中。
常用溶液的配制信息来源:生物谷更新时间:2004-12-21 1:33:00一、常规溶液(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution,PBS)甲液:1/15mol/L Na2HPO4溶液Na2HPO49.465g蒸馏水加至1000ml乙液:l/15mol/L KH2PO4溶液KH2P049.07g蒸馏水加至1000m1分装在棕色瓶内,于4℃冰箱中保存,用时甲、乙两液各按不同比例混合,即可得所需pH的缓冲液,见下表:pH 甲液ml 乙液mI pH 甲液ml 乙液mI5.29 5.595.916.24 6.47 6.64 2.55.010.020.030.040.097.595.090.080.070.060.06.816.987.177.387.738.0450.060.070.080.090.095.050.040.030.020.010.05.0(二)0.3%台盼兰染液称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克,溶于100ml生理盐水中,加热使之完全溶解,用滤纸过滤除渣,装入瓶内室温保存。
(三)0.5%酚红指示剂酚红0.5g0.1N(0.4%)NaOH 15ml双蒸水85ml将0.5克酚红置研钵中,缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨,并不断吸出已溶解的酚红液,直至全部溶解,然后加入85ml双蒸水,颜色为深红,经粗滤纸过滤后使用,室温保存。
(四)5.6%NaHCO3溶液称NaHCO35.6克,溶于100ml蒸馏水中,室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌,4℃冰箱保存)(五)10μg/ml秋水仙素秋水仙素lOmg生理盐水100ml装入茶色瓶中,为贮备液,4℃冰箱中保存。
甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。
(六)0.4%KCl-0.4%柠檬酸钠低渗液将0.4%KCl和0.4%柠檬酸钠两液等量混合即可,室温保存。
(七)2%柠檬酸钠称取柠檬酸钠2克,加100ml双蒸水即可,室温保存。
(八)0.2%次甲基兰染液称次甲基兰(Methylene blue)0.2克,加蒸馏水100ml,室温保存。
(九)0.5%醋酸洋红(Aceio Carmine)染液洋红lg醋酸90ml蒸馏水 110ml将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸,然后将火焰移去,立即加入1克洋红,使之迅速冷却过滤,加饱和氢氧化铁(媒染剂)水溶液数滴,直到呈葡萄酒色。
室温保存。
加铁使洋红沉淀于组织而着色。
此染液室温存放时间越长效果越好,室温保存。
(十)1%甲苯胺兰(Toluidine blue)称取甲苯胺兰1克,加蒸馏水lOOml。
(十一)1/3000中性红染液取中性红(Neutral red)0.1克,加蒸馏水300ml。
室温保存。
(十二)Giemsa染液1.贮备液Giemsa粉1g纯甘油66ml甲醇66ml先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油,充分研磨,呈无颗粒的糊状。
再将全部甘油加入,放入56℃温箱中2小时,然后加入甲醇,保存于茶色瓶中。
一般两周后使用为好。
2.工作液临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。
(十三)埃利希(Ehrlich)苏木精染液苏木精 1.0g乙醇50ml醋酸5ml甘油50ml硫酸铝钾5g蒸馏水50ml将苏木精溶于少量的乙醇中,再加醋酸并搅拌,以加速其溶解。
当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器,同时加入其余的乙醇;硫酸铝钾需研磨并加热,然后溶解于蒸馏水中,将其一滴滴地加入上边的溶液,并不断摇动,此液配好后,将瓶口用纱布盖好,置通风处,经常摇动以加速其成熟,成熟约需4周左右,成熟的染液为深红色。
二、细胞化学和细胞组分分离溶液(一)M一缓冲液眯唑(Imidazole) 3.404gKCI 3.7gMgCl2·6H2O 101.65mgECTA 380.35mgEDTA 29.224mg巯基乙醇0.07ml甘油297ml蒸馏水加至1000ml用lNHCl调pH至7.2室温保存。
(二)2%Triton X一100溶液量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液,加M缓冲液98ml 即可。
(三)0.2%考马斯亮兰R-250染液甲醇46.5ml醋酸7.0ml考马斯亮兰0.2g蒸馏水加至100ml(四)A.0.1%碱性固绿染液(pH8.0~8.5)1.0.1%固绿水溶液固绿(Fast green) 0.1g蒸馏水100ml2.0.05%Na2C03溶液Na2C0350mg蒸馏水100ml用时按1:1体积混合即可。
B.0.1%酸性固绿染液(pH2.2)1.0.1%固绿水溶液。
2.mol/L×75盐酸液盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml 用时按l:1混合。
(五)甲基绿一哌咯宁染液1.1mol/L醋酸缓冲液(pH4.8):(1)醋酸17ml蒸馏水加至200ml蒸馏水加至lOOml用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。
2.甲基绿一哌咯宁(methyl green—Pyrcnln)5%哌咯宁水溶液6ml2%甲基绿水溶液 6ml蒸馏水 16mllmol/L醋酸缓冲液16mllmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。
(六)Schiff试剂将碱性品红0.5克加入lOOml沸水,持续煮沸5分钟,并随时搅拌,待冷却到50℃时过滤到棕色瓶中,加1N HC11O毫升,冷却至25℃时加入1克NaHSO3,此时需很好的振荡,避光过夜。
次日取出(呈淡黄色)加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。
过滤后即得Schiff试剂。
避光低温保存。
(七)联苯胺混合液联苯胺(4.4 Diamino benzidine) 0.2g95%乙醇lOOml3%过氧化氢2滴此液临用时配制。
(八)l%番红水溶液番红(Safranin) 1.0g(九)1%SDS(十二烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS)SDS 10g45%乙醇100ml(十)1mol/LTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8Tris 12.114g蒸馏水 lOOml先将Tris溶于少量蒸馏水,用HCI调pH至7.8,然后加水至100ml (十一)Ringer Solution氯化钠(冷血动物用0.65克) 0.9克氯化钾0.042克氯化钙0.025克蒸馏水100ml(十二)淀粉肉汤培养基蛋白 2g淀粉6g牛肉汤100ml用10%NaHCO3调pH至7.0~7.2(十三)0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液蔗糖85.5g氯化钙0.33g(十四)1%詹纳斯绿B染液取詹纳斯绿(Janus green B)1.0g Ringer氏液100ml(十五)1%刚果红染液刚果红1g蒸馏水100ml(十六)Gomori硝酸铅作用液0.05mol/L醋酸缓冲液(pH5) lOOml0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其42ml醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml,取其158ml共200mlB-甘油磷酸钠2g醋酸铅2g5%氯化镁5ml以上作用液在临用时配制,最终在pH5~5.2,过滤使用。
(王世藩汇编)三、细胞培养和细胞融合溶液(一)0.01mol/LPBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline,PBS)pH7.2。
0.2mol/L磷酸氢二钠液(甲液):NaH2PO4·12H2O 35.814g双蒸水加至500ml0.2mol/L磷酸二氢钠液(乙液):NaH2PO4·12H2O 15.601g双蒸水加至500ml取甲液36ml,乙液14ml和NaCl8.2克,加双蒸水至1000ml。
混匀待完全溶解分装,经高压灭菌后保存于4℃冰箱备用。
(二)50%PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500)称取0.5克PEG,用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化,加入等量37℃予热的MEM培养液,混匀,保温在37℃水浴中待用。
(三)MEM培养液(含10%小牛血清)MEM培养液(日本制药株式会社) 9.4g双蒸水1000mlNaHCO3 1.5g谷氨酰胺(L-glutamin) 0.292g56℃灭活30分钟的小牛血清110mlMEM粉末加水溶解后,用NaHCO3调pH到7.1(因在抽滤过程中pH升高0.2~0.3),然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺,待完全溶解后,立即用G6抽滤除菌,分装,置4℃冰箱保存备用。
(四)0.25%胰蛋白酶一0.02%EDTA混合消化液胰蛋白酶(Trypsin)粉0.25gEDTA粉20.0mg0.01mol/L PBS 100ml先用少量PBS溶解胰蛋白酶,然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合,置37℃水浴中1小时左右(待彻底溶解,液体呈透明为止),用G5抽滤,分装置4℃冰箱中保存。
(五)Hanks液1.原液甲NaCl 160gKCl 8gMgSO4·7H2O 2gMgCI2·6H2O 2g溶于800ml馏水中。
CaCl2(无水) 2.8g溶于100ml蒸馏水中。
将两种液体混合后,加水至1000ml用滤纸滤过,再加2ml氯仿防腐,置4℃冰箱备用。
原液乙Na2HPO4·12H2O 3.04gKH2PO4 1.2g葡萄糖20.0g溶于800ml蒸馏水中,用滤纸过滤,然后加0.5%酚红80ml,再加水至1000ml,最后加入2ml氯仿防腐,置4℃冰箱备用。
2.使用液甲乙两液各1份,双蒸水18份,混匀分装包扎好瓶口,经10磅15分钟高压灭菌后置4℃冰箱中保存。
使用时用5.6%NaHCO3调pH 值到所需要求。
(六)1640培养液(含lO%小牛血清)RPMI-1640粉10.39g双蒸水加至1000ml通入适量的C02气体,边通入CO2边慢慢搅拌,使其(呈透明)完全溶解。
用NaHCO31.5克调pH值到7.2。
双抗1万u/ml 10ml灭活小牛血清110ml混匀上述液体,立即用G6抽滤除菌分装,置4℃冰箱备用。
(七)青、链霉素溶液青霉素钠盐(40万u/瓶) 5瓶链霉素(100万u/瓶) 2瓶将两者溶于200ml0.9%的无菌生理盐水,分装小瓶,-30℃保存。
双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。
(八)二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。
4%。
(九)BrdU溶液(200ug/m1)用无菌青霉素瓶,在室温下称取1.0mg,在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml,溶解,混匀,用黑纸包严,避光置冰箱冰格中保存。
最好用时现配。
(十)2×SSC溶液用分析天平称取氯化钠17.53克,柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中,加蒸馏水至1000毫升。