实验室常用试剂配制
- 格式:doc
- 大小:4.96 MB
- 文档页数:39
实验室常用试剂、缓冲液的配制1 MTris-HCI(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度1 MTris-HCI配制量1 L配制方法1.称量121.1 gTris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 咼温咼压火菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1 C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
1.5 MTris-HCl(pH8.8)组份浓度1.5 MTris-HCl配制量1 L配制方法1.称量181.7 gTris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压火菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1 C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
10 X TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度100 mMTris-HCl,10 mMEDTA配制量1 L配制方法1.量取下列溶液,置于 1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800ml的去离子水,均匀混合3. 将溶液定容至1 L后,高温高压火菌。
4. 室温保存。
3 M醋酸钠(pH5.2)组份浓度配制量配制方法PBSBuffer 组份浓度137 mMNaCl,2.73 M琴磁柚IQO ml1. N.1OAC - 3H.OH于100-200 m:疑杯中.加人對40讪的去两子水披扌半渚孵2、加入冰酯敌讷帑pH值至43加去离子庆粕増液證容至20ml.mMKCl,10 mMNa2HPO4,2 mMKH2PO4配制量1 L配制方法1.称量下列试剂,置于 1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
实验室常用试剂缓冲液配制方法一览表实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1MTri-HCl□组份浓度1MTri-HCl(pH7.4,7.6,8.0)□配制量1L□配置方法1.称量121.1gTri置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值浓HCl7.4约70mL7.6约60mL8.0约42mL4.将溶解定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tri溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5MTri-HCl□组份浓度1.5MTri-HCl(pH8.8)□配制量1L□配置方法1.称取181.7gTri置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.用浓盐酸调pH值至8.8。
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tri溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10某TEBuffer□组份浓度100mMTri-HCl,10mMEDTA(pH7.4,7.6,8.0)□配制量1L□配置方法1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1MTri-HClBuffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL500mMEDTA(pH8.0)20mL2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。
3.将溶液定至1L 后,高温高压灭菌。
4.室温保存。
4、3M醋酸钠□组份浓度3M醋酸钠(pH5.2)□配制量100mL□配置方法1.称取40.8gNaOAc3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。
3.加入去离子水将溶液定容至100mL。
4.高温高压灭菌后,室温保存。
5、PBSBuffer□组份浓度137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4□配制量1L□配置方法1.称量下列试剂,置于1L烧杯中。
实验室常用药品试剂的制备与使用(一)认识药品规格纯度规格简写标签颜色级别特点(二)染色试剂的配制1.甲基绿(DNA—绿色)和吡罗红(RNA—红色)染色剂配制:a)A液:取甲基绿2 g溶于98 mL蒸馏水中,取吡罗红G 5 g溶于95 mL蒸馏水中。
取6 mL甲基绿溶液和2 mL吡罗红溶液加入到16 mL蒸馏水中,置于棕色瓶中备用。
b)B液:是一种缓冲液,由乙酸钠和乙酸混合而成。
先取乙酸钠16.4 g,用蒸馏水溶解至1000 mL备用;再取乙酸12 mL,用蒸馏水稀释至1000 mL备用。
取配好的乙酸钠溶液30 mL和稀释的乙酸20 mL,加蒸馏水50 mL,配成pH为4.8的B液(缓冲液)。
c)取A液20 mL和B液80 mL混合,就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。
应该注意的是该试剂应现用现配。
2.I2-KI溶液(淀粉—蓝紫色,蛋白质—黄色)配制:将碘化钾3g溶于蒸馏水中,待全部溶解后加入碘1g,振荡使其溶解,将此液保存在棕色玻璃瓶内。
3.苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ(木栓化、角质化细胞壁—红色,脂肪、挥发油、树脂等—红色或淡红色)配制:苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ干粉0.1g与95%乙醇10 mL混合,过滤后再加入10 mL甘油。
4.1% 醋酸洋红染料(染色体—紫红色)配制:将洋红1 g与45% 醋酸100 mL煮沸2h 左右,并随时注意补充加入蒸馏水到原含量。
冷却后过滤,加入4% 铁明矾溶液1~2滴,放入棕色瓶中备用。
5.龙胆紫酸性染料(染色质—紫色)配制:取龙胆紫1 g,溶于少量2% 醋酸溶液中,滴加2% 醋酸溶液,直至溶液不呈深紫色为止。
6.卡宝染色剂(染色体—红色,着色深,保存性好)又名苯酚-品红染色剂配制:a)原液A:将3g碱性品红溶于100 mL 70% 的乙醇中。
b)原液B:取原液A 10 mL 加入到90 mL 5% 苯酸水溶液中。
(两周内有效)c)原液C:取原液B 55 mL,加入6 mL福尔马林和6 mL冰醋酸。
实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液配方有很多种,下面将介绍一些常用的试剂和缓冲液的配方:一、试剂的配方1. Tris缓冲液:- 3 M Tris-Cl,pH 7.4(准备方法:将121.1 g Tris粉末溶解在800 mL去离子水中,使用HCl调节pH值至7.4,并将溶液体积加至1 L)2.NaCl溶液:-5MNaCl(准备方法:将287.7gNaCl溶解在800mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)3.验血试剂:-4%NaOH溶液(准备方法:将40gNaOH溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)-5%CuSO4溶液(准备方法:将50gCuSO4溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)-2%K4[Fe(CN)6]溶液(准备方法:将20gK4[Fe(CN)6]溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)4.PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液):-10×PBS缓冲液(准备方法:将80gNaCl,2gKCl,11.5gNa2HPO4,2gKH2PO4溶解在800mL去离子水中,并将溶液体积加至1L。
pH值可以调节至7.4左右)5. Tris-EDTA缓冲液(TE缓冲液):- 10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA,pH 8.0(准备方法:将12.1 gTris溶解在800 mL去离子水中,然后加入0.37 g EDTA,使用HCl调节pH值至8.0,并将溶液体积加至1 L)二、缓冲液的配方1. Tris-HCl缓冲液:- 50 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,1% Triton X-100,pH 7.4(准备方法:将6.05 g Tris,5.8 g NaCl,0.1 g Triton X-100溶解在800mL去离子水中,使用HCl调节pH值至7.4,并将溶液体积加至1 L)2. Tris-Borate缓冲液(TBE缓冲液):- 89 mM Tris,89 mM boric acid,2 mM EDTA,pH 8.3(准备方法:将10.81 g Tris,5.49 g boric acid,3.72 g EDTA溶解在800 mL去离子水中,使用NaOH或HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)3. Tris-Glycine缓冲液:- 25 mM Tris,192 mM glycine,0.1% SDS,pH 8.3(准备方法:将3.03 g Tris,14.35 g glycine溶解在800 mL去离子水中,使用HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)4. Tris-Acetate缓冲液(TAE缓冲液):- 40 mM Tris,20 mM acetic acid,1 mM EDTA,pH 8.3(准备方法:将4.84 g Tris,1.86 g acetic acid,0.37 g EDTA溶解在800 mL去离子水中,使用NaOH或HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)5. Phosphate缓冲液:- 100 mM sodium phosphate,pH 7.0(准备方法:根据目标pH值使用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠调节溶液pH至7.0,并将溶液体积加至1 L)以上只是一些常用的试剂和缓冲液的配方,并不是全部。
实验室常用试剂配制方法实验室中,常用试剂的配制方法非常重要,准确的配制方法可以确保实验的准确性和可重复性。
以下是几种常用实验室试剂的配制方法:1.缓冲溶液的配制:缓冲溶液常用于调节实验的酸碱度,常见的缓冲溶液有Tris缓冲液、PBS缓冲液等。
以Tris缓冲液为例,其配制方法如下:1) 称取所需量的Tris氯化物(Tris-HCl)。
2) 将Tris氯化物溶解于去离子水中,搅拌使其彻底溶解。
可以加热水浴促进其溶解。
3)调整溶液的pH值至所需的酸碱度。
可以使用酸(如盐酸)或碱(如氢氧化钠)来调节pH值,同时使用pH计监测溶液的pH值。
4)将溶液转移到容量瓶中,用去离子水稀释至最终体积。
2.浓度溶液的配制:浓度溶液的配制需要准确计算溶质的质量以及溶液的体积。
以下以NaCl浓度溶液的配制为例:1) 根据所需的NaCl浓度和溶液体积,计算所需的NaCl质量。
可以使用以下公式进行计算:质量(g)=浓度(mol/L)×体积(L)×摩尔质量(g/mol)。
2)称取所需质量的NaCl。
3)加入去离子水溶解NaCl,搅拌使其溶解。
4)如果需要,通过使用pH计校正溶液的pH值。
3.酶溶液的配制:酶溶液常用于生物学实验中。
以下以酶的配制为例:1)根据酶的活力或浓度,计算所需酶的质量或体积。
2)称取所需量的酶,可以在低温环境中操作以保持酶的活性。
3)加入合适的缓冲液溶解酶,并按需添加其他辅助试剂,如辅酶等。
4)将溶液通过滤器过滤以去除可能存在的杂质。
5)根据需要,将溶液分装至小容器中,如冰盒中保存。
4.染色剂的配制:染色剂常用于细胞培养、组织切片,或者蛋白质凝胶电泳等实验中。
以下以伯克氏液的配制为例:1) 称取所需质量的碱性苏丹黑(Fast Green FCF)和亚甲蓝(Methylene Blue)。
2)加入足够的去离子水,用搅拌棒搅拌使其均匀溶解。
3)使用滤纸或滤器将溶液过滤以去除杂质。
4)将溶液分装至小容器中,并用铝箔纸覆盖以避免溶液暴露于光线中。
实验室试剂配制1、0.083M KOH:0.1M KOH稀释12倍(PH必须大于12)2、酸性半饱和硫酸铵:取硫酸铵((NH3)2SO4)400g加蒸馏水500mL.置于37℃水浴24h不时搅拌,使达饱和,再冷至25℃,搅拌一次,使过量的(NH3)2SO4析出,上清液为饱和液,取上清夜400mL加1M HCL20mL。
蒸馏水加至800mL,混匀室温保存(PH必须大于3)3、17%异丙醇溶液:17mL异丙醇加0.1mol/L Tris 缓冲液(7.4)至100mL。
PH〉7.2方可。
4、10g/L(1%)联苯胺:1.0g联苯胺溶于90mL 冰醋酸内,然后加蒸馏水至100mL,贮于棕色瓶,置冰箱内可使用数周。
5、1%H2O2:30%H2O2新鲜配制(稀释30倍)6、100g/L(10%)醋酸溶液:取10mL冰醋酸,加蒸馏水至100mL7、标准Hb溶液:取以生理盐水洗涤过三次的压积红细胞与等体积蒸馏水,0.5倍体积四氯化碳混合,剧烈振荡5min后,离心20min(2,500r/min),吸取上层Hb液,用氰化高铁Hb法准确测定其浓度,稀释成100g/L(10%)Hb浓度,于低温冰箱保存,用时取0.01mL,加生理盐水至10g/L。
即为100mg/L(10mg%)应用标准液。
8、12.5g/L亚硝酸钠—葡萄糖溶液:亚硝酸钠:1.25葡萄糖:5加蒸馏水至100mL,用棕色瓶,4℃保存一个月。
9、0.0004mol/L美蓝溶液:美蓝(次甲基蓝,亚甲基蓝)15mg,加蒸馏水100mL,室温1~2个月。
10、0.02mol/L磷酸盐缓冲液(PH7.4):Na2HPO4·12H2O:229.5mg(1.1475g)KH2PO4:52.2mg(0.261g)加蒸馏水100mL(500mL)11、PH8.5 TEB缓冲液:Tris:10.2g(5.1g)EDTA:0.6g(0.3g)硼酸:3.2g(2.6g)加蒸馏水至1000mL(500mL)12、PH8.5硼酸缓冲液:硼酸5.56g硼砂(四硼酸钠)6.87g加蒸馏水至1000mL13、0.09%丽春红:丽春红S或G:1.8g三氯醋酸:26.8g磺柳酸:26.8g加蒸馏水至100mL用前将上液以蒸馏水稀释20倍使用14、氨基黑:氨基黑10B: 0.5g甲醇50mL冰醋酸:10mL蒸馏水:40mL溶解而成贮棕色瓶内15、漂洗液:甲醇(乙醇)45mL冰醋酸:5mL蒸馏水:50mL溶解而成16、透明液:无水乙醇:70mL冰醋酸:30mL混合而成17、PH6.5磷酸盐缓冲液:KH2PO4:3.11g Na2HPO4: 1.49g(Na2HPO4·2H2O 1.87g)蒸馏水900mL校正PH后稀释至1,000mL18、0.4NaOH:1M →稀释19、0.1Tris缓冲液(PH7.4):Tris: 1.21g 0.1N HCL 40mL加蒸馏水至100mL20、1.0mol/L盐酸标准液:浓盐酸MW=36.465,比重1.18,含HCL 36%~38%。
实验室常用试剂和缓冲液配方PBS(磷酸盐缓冲液)是一种常用的生物化学缓冲液,用于洗涤和稀释生物化学试样。
配方:-NaCl:8g-KCl:0.2g-Na2HPO4:1.42g-KH2PO4:0.24g将上述物质溶解在1升蒸馏水中,调节pH值至7.4、用1M(摩尔浓度)盐酸或1M氢氧化钠进行调节。
2. Luria-Bertani (LB) 培养基配方LB培养基是微生物学研究中常用的培养基,适用于大多数细菌和酵母菌的培养。
配方:- 水解酪蛋白(tryptone):10 g- 酵母粉(yeast extract):5 g-NaCl:10g将上述物质溶解在1升蒸馏水中,用1M盐酸或1M氢氧化钠调节pH 至7.0。
可以选择添加洗涤剂Tween-20(0.1%)以提高溶解度。
SSC缓冲液广泛用于核酸杂交实验等生物学研究中。
配方:-NaCl:175.3g- Na3Citrate·2H2O:88.2 g-EDTA:37.2g将上述物质溶解在1升蒸馏水中,调节pH值至7.0-7.2、可以选择添加DEPC(二硫酰二甲酯)处理,增强其功能。
4.甲醛溶液甲醛溶液常用于生物样品固定以及染色实验。
配方:-甲醛:37%-PBS或水将适量的甲醛加入PBS或水中,制备所需浓度的甲醛溶液。
5. β-羟丁酸钠(β-Hydroxybutyrate)溶液β-羟丁酸钠是一种常用的减少剂,用于生物化学实验中。
配方:-β-羟丁酸钠:1M根据需求将适量的β-羟丁酸钠溶解在合适的溶剂中。
这里只是列举了几个常见的试剂和缓冲液配方,实验室试剂和缓冲液种类丰富多样,具体使用取决于研究目的和实验要求。
在进行实验之前,建议仔细阅读相关文献和制造商提供的说明书,并按照正确的比例和步骤配制试剂和缓冲液。
1.常用PBS:称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可,高压灭菌。
2.常用PBS(不含K盐):8.5g NaCl、0.8736g NaH2PO4•2H2O、5.531g Na2HPO4•12H2O,800ml三蒸水搅拌,无需调PH,1L定容。
3.DMEM培养基:DMEM干粉溶入800ml三蒸水中,加入3.7g NaHCO3,搅拌后调PH至7.2~7.4,最终用1000ml容量瓶定容,无菌层流间中过滤分装。
4.1640培养基:1640干粉溶入800ml三蒸水中,加入2.0g NaHCO3,搅拌后调PH至7.2~7.4,最终用1000ml容量瓶定容,无菌层流间中过滤分装。
5.胰酶:浓度为0.25%~0.4%,通常是用生理盐水或PBS等平衡盐溶液作为溶剂。
6.胰酶(含EDTA):普通胰酶中额外加入0.01%~0.02%的EDTA7.细胞冻存液:多数细胞配方为10%DMSO+20%血清+70%细胞培养基,也有介绍直接10%DMSO加90%含血清培养液,部分细胞需10%DMSO+90%血清。
理论上血清越多冻存效果越好。
8.谷氨酰胺:标准的谷氨酰胺100×液为200mmol/L(29.22g/L)。
通常培养液中浓度为1~4mmol/L (0.146~0.5844g/L),4o C下半衰期为7天,两周以上需要重新加入。
9.双抗:青霉素—100IU/ml(通常培养液中终浓度为20~100IU/ml均可),链霉素—100ug/ml(通常培养液中浓度为50ug/ml)。
多数体外培养都是使用青霉素和链霉素,上述的工作浓度可在37o C长时间控制轻度污染而对细胞无毒性作用。
10.MTT:0.5克MTT,溶于无酚红的培养基中(就用培养细胞的培养基),浓度为5mg/ml,过滤除菌,4℃避光保存。
实验室常用试剂、缓冲液的配制1 MTris-HCl,,组份浓度1 MTris-HCl配制量1 L配制方法1.称量121.1 gTris置于1 L烧杯中;2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解;3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值;4.将溶液定容至1 L;5.高温高压灭菌后,室温保存;注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低个单位;1.5 MTris-HCl组份浓度1.5 MTris-HCl配制量1 L配制方法1.称量181.7 gTris置于1 L烧杯中;2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解;3.用浓盐酸调节pH值至;4.将溶液定容至1 L;5.高温高压灭菌后,室温保存;注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低个单位;10×TEBuffer,,组份浓度100 mMTris-HCl,10 mMEDTA配制量1 L配制方法1.量取下列溶液,置于1 L烧杯中;2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,均匀混合;3.将溶液定容至1 L后,高温高压灭菌;4.室温保存;3 M醋酸钠组份浓度配制量配制方法PBSBuffer组份浓度137mMNaCl,2.7mMKCl,10 mMNa2HPO4,2 mMKH2PO4配制量1 L配制方法1.称量下列试剂,置于1 L烧杯中;2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解;3.滴加浓盐酸将pH值调节至,然后加入去离子水将溶液定容至1 L;4.高温高压灭菌后,室温保存;注意:上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mMCaCl2和0.5 mMMgCl2; 10 M醋酸铵组份浓度10 M醋酸铵配制量100ml配制方法1.称量77.1 g醋酸铵置于100~200ml烧杯中,加入约30ml的去离子水搅拌溶解;2.加去离子水将溶液定容至100ml;3.使用mm滤膜过滤除菌;4.密封瓶口于室温保存;注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌;Tris-HCl平衡苯酚配制方法1.使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验;但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用;同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等;因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验;2.操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等;所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇;3.苯酚平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到以上,苯酚平衡操作方法如下:①液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈结晶状态;从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分融解;②加入羟基喹啉8-Quinolinol至终浓度%;该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色,有助于方便识别有机相;③加入等体积的1 MTris-HCl,使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相;④重复操作步骤③;⑤加入等体积的0.1 MTris-HCl,使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相;⑥重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相;⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于;⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存;苯酚/氯仿/异戊醇25:24:11.说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇25:24:1;氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡;2.配制方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇24:1混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存;10%W/VSDS2NNaOH组份浓度2NNaOH配制量100ml配制方法1.量取80ml去离子水置于100~200ml塑料烧杯中NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂;2.称取8 gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌;3.待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液定容至100ml;4.将溶液转移至塑料容器中后,室温保存;组份浓度配制量100ml配制方法1.在的去离子水中加入的浓盐酸,均匀混合;2.室温保存;5 MNaCl组份浓度5 MNaCl配制量1 L配制方法1.称取292.2 gNaCl置于1 L烧杯中,加入约800ml的去离子水后搅拌溶解;2.加去离子水将溶液定容至1 L后,适量分成小份;3.高温高压灭菌后,4℃保存;20%W/VGlucose组份浓度20%W/VGlucose配制量100ml配制方法1.称取20 gGlucose置于100~200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水后,搅拌溶解;2.加去离子水将溶液定容至100ml;3.高温高压灭菌后,4℃保存;Solution I质粒提取用组份浓度25 mMTris-HCl,10 mMEDTA,50 mMGlucose配制量1 L配制方法1.量取下列溶液,置于1 L烧杯中;2.高温高压灭菌后,4℃保存;3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA20mg/ml;Solution II质粒提取用组份浓度配制量配制方法Solution III质粒提取用3 MKOAc,5 MCH3COOH组份浓度500ml配制量1.称量下列试剂,置于500ml烧杯中;配制方法2.加入300ml去离子水后搅拌溶解;3.加去离子水将溶液定容至500ml;4.高温高压灭菌后,4℃保存;0.5 MEDTA组份浓度0.5 MEDTA配制量1 L配制方法1.称取186.1 gNa2EDTA·2H2O,置于1 L烧杯中;2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌;3.用NaOH调节pH值至约20 gNaOH;注意:pH值至时,EDTA才能完全溶解;4.加去离子水将溶液定容至1 L;5.适量分成小份后,高温高压灭菌;6.室温保存;1 MDTT组份浓度1 MDTT配制方法1.称取3.09 gDTT,加入到50ml塑料离心管内;2.加20ml的0.01 MNaOAc,溶解后使用0.22 mm滤膜过滤除菌;3.适量分成小份后,-20℃保存;10 mMATP组份浓度10 mMATP配制量20ml配制方法1.称取121mgNa2ATP·3H2O,加入到50ml塑料离心管内;2.加20ml的25 mMTris-HCl,搅拌溶解;3.适量分成小份后,-20℃保存;组份浓度10 mMATP配制量20ml配制方法1.称取121mgNa2ATP·3H2O,加入到50ml塑料离心管内;2.加20ml的25 mMTris-HCl,搅拌溶解;3.适量分成小份后,-20℃保存;蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法30%W/VAcrylamide组份浓度30%W/VAcrylamide配制量1 L配制方法1.称量下列试剂,置于1 L烧杯中;2.向烧杯中加入约600ml的去离子水,充分搅拌溶解;3.加去离子水将溶液定容至1 L,用mm滤膜滤去杂质;4.于棕色瓶中4℃保存;注意:丙烯酰胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套等;聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份;40%W/VAcrylamide组份浓度40%W/VAcrylamide配制量1 L配制方法1.称量下列试剂,置于1 L烧杯中;2.向烧杯中加入约600ml的去离子水,充分搅拌溶解;3.加去离子水将溶液定容至1 L,用0.45 mm滤膜滤去杂质;4.于棕色瓶中4℃保存;注意:丙烯酰胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套等;聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份;10%W/V过硫酸铵组份浓度配制量配制方法5×Tris-GlycineBufferSDS-PAGE电泳缓冲液组份浓度0.125 MTris,1.25 MGlycine,%W/VSDS2.加入约800ml的去离子水,搅拌溶解;3.加去离子水将溶液定容至1 L后,室温保存;5×SDS-PAGELoadingBuffer组份浓度配制量5ml配制方法 1.量取下列试剂,置于10ml塑料离心管中;2.加去离子水溶解后定容至5ml;3.小份500ml/份分装后,于室温保存;4.使用前将25ml的2-ME加到每小份中;5.加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右;考马斯亮蓝R-250染液组份浓度%W/V考马斯亮蓝R-250,25%V/V异丙醇,10%V/V冰醋酸配制量1 L配制方法1.称取1 g考马斯亮蓝R-250,置于1 L烧杯中;2.量取250ml的异丙醇加入上述烧杯中,搅拌溶解;3.加入100ml的冰醋酸,搅拌均匀;4.加入650ml的去离子水,搅拌均匀;5.用滤纸除去颗粒物质后,室温保存;考马斯亮蓝染色脱色液组份浓度10%V/V醋酸,5%V/V乙醇配制量1 L配制方法1.量取下列溶液,置于1 L烧杯中;2.充分混合后使用;凝胶固定液SDS-PAGE银氨染色用组份浓度50%V/V甲醇,10%V/V醋酸配制量1 L配制方法1.量取下列溶液,置于1 L烧杯中;2.均匀混合后室温保存;凝胶处理液SDS-PAGE银氨染色用组份浓度配制量配制方法凝胶染色液SDS-PAGE银氨染色用度%W/VAgNO3,1%V/V浓组份浓NH3·H2O,%W/VNaOH配制量100ml配制方法 1.量取下列试剂,加入100~200ml的试剂瓶中;2.均匀混合;该溶液应为无色透明状;如氨水浓度过低时溶液会呈混浊状,此时应补加浓氨水,直至透明;3.本染色液应现用现配,不宜保存;显影液SDS-PAGE银氨染色用组份浓度%W/V柠檬酸,%V/V甲醛2.加入1 L去离子水后,摇动混合溶解;3.室温保存;核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAEBuffer组份浓度2 MTris-醋酸,100 mMEDTA配制量1 L配制方法1.称量下列试剂,置于1 L烧杯中;2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解;3.加入的醋酸,充分搅拌;4.加去离子水将溶液定容至1 L后,室温保存;10×TBEBuffer组份浓度配制量配制方法10×MOPSBuffer200 mMMOPS,20 mMNaOAc,10 组份浓度mMEDTA配制量1 L配制方法1.称量41.8 gMOPS,置于1 L烧杯中;2.加约700mlDEPC处理水,搅拌溶解;3.使用2NNaOH调节pH值至;4.再向溶液中加入下列试剂;5.用DEPC处理水将溶液定容至1 L;6.用滤膜过滤除去杂质;7.室温避光保存;注:溶液见光或高温灭菌后会变黄;变黄时也可使用,但变黑时不要使用;溴乙锭10mg/ml组份浓度10mg/ml溴乙锭配制量100ml配制方法1.称量1 g溴乙锭,加入到100ml容器中;2.加入去离子水100ml,充分搅拌数小时完全溶解溴乙锭;3.将溶液转移至棕色瓶中,室温避光保存;4.溴乙锭的工作浓度为m g/ml;注意:溴乙锭是一种致癌物质,必须小心操作;Agarose凝胶1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液通常是×TBE或1×TAE;2.根椐制胶量及凝胶浓度,准确称量琼脂糖粉,加入适当的锥形瓶中;3.加入一定量的电泳缓冲液总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量;注:用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一;4.在锥形瓶的瓶口封上保鲜膜,并在膜上扎些小孔,然后在微波炉中加热熔化琼脂糖;加热过程中,当溶液沸腾后,请戴上防热手套,小心摇动锥形瓶,使琼脂糖充分均匀熔化;此操作重复数次,直至琼脂糖完全熔化;必须注意,在微波炉中加热时间不宜过长,每次当溶液起泡沸腾时停止加热,否则会引起溶液过热暴沸,造成琼脂糖凝胶浓度不准,也会损坏微波炉;熔化琼脂糖时,必须保证琼脂糖充分完全熔化,否则,会造成电泳图像模糊不清;5.使溶液冷却至60℃左右,如需要可在此时加入溴乙锭溶液终浓度ml,并充分混匀;注:溴乙锭是一种致癌物质;使用含有溴乙锭的溶液时,请戴好手套;6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中,然后在适当位置处插上梳子;凝胶厚度一般在3~5 mm之间;7.在室温下使胶凝固大约30分钟~1小时,然后放置于电泳槽中进行电泳;注:凝胶不立即使用时,请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存,一般可保存2~5天;琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围6×LoadingBufferDNA电泳用组份浓度配制量配制方法10×LoadingBufferRNA电泳用组份浓度配制量10ml配制方法 1.称量下列试剂,置于10ml离心管中;2.向离心管中加入约4ml的DEPC处理水后,充分搅拌溶解;3.加入5ml的甘油Glycerol后,充分混匀;4.用DEPC处理水定容至10ml后,室温保存;核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法20×SSC组份浓度3.0 MNaCl,0.3 M柠檬酸钠配制量1 L配制方法1.称量下列试剂,置于1 L烧杯中;2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解;3.滴加14NHCl,调节pH值至后,加去离子水将溶液定容至1 L;4.高温高压灭菌后,室温保存;20×SSPEBuffer组份浓度3.0 MNaCl,0.2 MNaH2PO4,0.02 MEDTA配制量1 L配制方法1.称量下列试剂,置于1 L烧杯中;2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解;3.加NaOH调节pH值至约的10NNaOH;4.加去离子水将溶液定容至1 L;5.高温高压灭菌后,室温保存;50×Denhardt's溶液组份浓度配制量500ml配制方法1.称量下列试剂,置于500ml烧杯中;2.加去离子水约400ml,充分搅拌溶解3.加去离子水将溶液定容至500ml;4.用0.45 m m滤膜过滤后,分装成每份25ml;5.-20℃保存;0.5M磷酸盐Buffer组份浓度0.5 MNa2HPO4配制量1 L配制方法1.称量134 gNa2HPO4·7H2O置于1 L烧杯中;2.加入约800ml的去离子水充分搅拌溶解;3.加入85%的H3PO4浓磷酸调节溶液pH值至;4.加去离子水定容至1 L;5.高温高压灭菌后,室温保存;组份浓度10mg/mlSalmonDNA配制量约100ml配制方法1.称取鲑鱼精DNA2 g置于500ml烧杯中,加入约200ml的TEBuffer;2.用磁力搅拌器室温搅拌2~4小时,溶解后加入4ml的5 MNaCl,使其终浓度为0.1 M;3.用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次;4.回收水相溶液后,使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20次,以切断DNA;5.加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀;6.离心回收DNA后,溶解于100ml的去离子水中,测定溶液的OD260值;7.计算溶液的DNA浓度后,稀释DNA溶液至10mg/ml;8.煮沸10分钟后,分装成小份1ml/份;-20℃保存;9.使用前在沸水浴中加热5分钟后,迅速冰浴冷却;组份浓度配制量配制方法组份浓度配制量约100ml配制方法1.称量下列试剂,置于200ml烧杯中;组份浓度配制量100ml配制方法1.称量下列试剂,置于200ml烧杯中;2.充分混匀后,使用滤膜滤去杂质后使用;组份浓度39 mMGlycine,48 mMTris,%W/VSDS,20%V/V甲醇配制量1 L配制方法1.称量下列试剂,置于1 L烧杯中;2.向烧杯中加入约600ml的去离子水,充分搅拌溶解;3.加去离子水将溶液定容至800ml后,加入200ml的甲醇;4.室温保存;组份浓度20 mMTris-HCl,150 mMNaCl,%V/VTween20配制量1 L配制方法1.称量下列试剂,置于1 L烧杯中;2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解;3.加入后充分混匀;4.加去离子水将溶液定容至1 L后,4℃保存;组份浓度5%W/V脱脂奶粉/TBSTBuffer配制量100ml配制方法1.称量5 g脱脂奶粉加入到100ml的TBSTBuffer中,充分搅拌溶解;1.4℃保存待用本封闭液应该现配现用;实验室常用培养基的配制方法Ampicillin100mg/ml组份浓度100mg/mlAmpicillin配制量50ml配制方法1.称量5 gAmpicillin置于50ml离心管中;2.加入40ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50ml;3.用0.22 mm过滤膜过滤除菌;4.小份分装1ml/份后,-20℃保存;IPTG24mg/ml组份浓度24mg/mlIPTG配制量50ml配制方法1.称量1.2 gIPTG置于50ml离心管中;2.加入40ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50ml;3.用0.22 mm过滤膜过滤除菌;4.小份分装1ml/份后,-20℃保存;X-Gal20mg/ml组份浓度配制量配制方法-20℃避光保存;组份浓度配制量配制方法组份浓度配制量1L配制方法1.称取下列试剂,置于1 L烧杯中;2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解;3.滴加5NNaOH约,调节pH值至;4.加去离子水将培养基定容至1 L;5.高温高压灭菌后,冷却至室温;6.加入1mlAmpicillin100mg/ml后均匀混合;7.4℃保存;组份浓度配制量1L配制方法1.配制磷酸盐缓冲液0.17 MKH2PO4,0.72 MK2HPO4100ml;溶解2.31 gKH2PO4和12.54 gK2HPO4于90ml的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100ml,高温高压灭菌;2.称取下列试剂,置于1 L烧杯中;3.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解;4.加去离子水将培养基定容至1 L后,高温高压灭菌;5.待溶液冷却至60℃以下时,加入100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液;6.4℃保存;组份浓度配制量1L配制方法组份浓度配制量1L配制方法1.配制250 mMKCl溶液;在90ml的去离子水中溶解1.86 gKCl后,定容至100ml;2.配制2 MMgCl2溶液;在90ml去离子水中溶解19 gMgCl2后,定容至100ml,高温高压灭菌;3.称取下列试剂,置于1 L烧杯中;4.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解;5.量取10ml250 mMKCl溶液,加入到烧杯中;6.滴加5NNaOH溶液约,调节pH值至;7.加入去离子水将培养基定容至1 L;8.高温高压灭菌后,4℃保存;9.使用前加入5ml灭菌的2 MMgCl2溶液;组份浓度配制量100ml配制方法1.配制1 M葡萄糖溶液;将18g葡萄糖溶于90ml去离子水中,充分溶解后定容至100ml,用0.22 mm滤膜过滤除菌;2.向100mlSOB培养基中加入除菌的1 M葡萄糖溶液2ml,均匀混合;3.4℃保存;组份浓度配制量配制方法组份浓度配制量配制方法组份浓度配制量1 L配制方法 1.称取下列试剂,置于1 L烧杯中;2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解;3.滴加5NNaOH约,调节pH值至;4.加去离子水将培养基定容至1 L;5.高温高压灭菌后,4℃保存;组份浓度配制方法NZYM培养基除不含CasaminoAcid酪蛋白氨基酸外,其他成份与NZCYM培养基相同;组份浓度配制方法NZM培养基除不含YeastExtract酵母提取物外,其他成份与NZYM培养基相同;1.按照液体培养基配方准备好液体培养基,在高温高压灭菌前,加入下列试剂中的一种;2.高温高压灭菌后,戴上手套取出培养基,摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀此时培养基温度很高,小心烫伤;3.待培养基冷却至50~60℃时,加入热不稳定物质如抗生素等,摇动容器充分混匀;组份浓度配制量1 L配制方法1.称取下列试剂,置于1 L烧杯中;2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解;3.滴加5NNaOH约,调节pH值至;4.加去离子水将培养基定容至1 L后,加入15 gAgar;5.高温高压灭菌后,冷却至60℃左右;6.加入1mlAmpicillin100mg/ml、1mlIPTG24mg/ml、2mlX-Gal20mg/ml后均匀混合;8.4℃避光保存;组份浓度配制量1 L配制方法1.配制磷酸盐缓冲液0.17 MKH2PO4,0.72 MK2HPO4100ml;溶解2.31 gKH2PO4和12.54 gK2HPO4于90ml的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100ml,高温高压灭菌;2.称取下列试剂,置于1 L烧杯中;3.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解;4.加去离子水将培养基定容至1 L后,加入15 gAgar;5.高温高压灭菌后,冷却至60℃左右;6.加入100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mlAmpicillin100mg/ml、1mlIPTG24mg/ml、2mlX-Gal20mg/ml后均匀混合;8.4℃避光保存;。
实验室常用试剂、缓冲液的配制方法蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法SDS-PAGE分离胶配方表PAGE凝胶配方表(核酸电泳用)各种缓冲液的性质对照表离心机转子的转速与相对离心力RCF(g)间的换算关系相对离心力RCF值(g值)取决于转子的转速(rpm)和旋转半径(r,以mm计算),可用如下公式表示:此外,根据RCF值(g值)、rpm值、r值之间的关系,可从图A、图B中大致读出各种数值。
图A高速转子的相对离心力列线图要确定某一列上的未知值时,用尺子排列其他两列的已知值,所需值落在尺子与第三列的交切处。
如:转子速度为80,000 rpm,旋转半径为20 mm时,相对离心力RCF值约为150,000 g。
图B低速转子的相对离心力列线图要确定某一列上的未知值时,用尺子排列其他两列的已知值,所需值落在尺子与第三列的交切处。
如:转子速度为5,000 rpm,旋转半径为40 mm时,相对离心力RCF值约为1,100 g。
密码子表色素在聚丙烯酰胺凝胶中的移动速度*大肠杆菌的基因型野生的大肠杆菌(E.coli)的基因组DNA中有470万个碱基对(bp),内含4288个基因。
E.coli基因组中还包含有许多插入序列,如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段,这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的,由此表明了基因组具有它的可塑造性。
利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造,使其中的某些基因发生突变或缺失,从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化,这种能观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型 (Phenotype),把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基因型(Genotype)。
具有不同基因型的菌株表现出不同的特性。
这些不同基因型特性的菌株在基因工程的研究和生产中具有广泛的应用价值。
大肠杆菌基因型的表示方法有如下几种:1.根据基因产物或其作用产物的英文名称的第一个字母缩写成三个斜体字母来表示。
例如:DNA Adenine Methylase→dam。
2.变异基因不同,导致的结果相同时,用其作用结果的英文名称的前三个字母斜体后加上一个大写字母来表示区别。
例如:Recombination→recA、recB、recC。
3.某个基因或某个领域缺失时,在其基因型前面加上“∆”表示。
例如:lac-proAB基因缺失时它的基因型表示为∆(lac-proAB)。
4.野生的大肠杆菌具有F因子(质粒)和噬菌体插入片段,当这些质粒或噬菌体片段变异或缺失时,用“()”或“/”等以区别。
例如:/F' [traD36、proAB、lac I q、lacZ∆M15]。
5.由于某种基因的变异导致大肠杆菌可以明显观察到特征变化,有时也用其表现型代替基因型进行表示。
例如:某些抗药性的获得或丧失,用如下方式表示:Streptomycin抗性→Str +或Str r,Ampicillin敏感性→Amp-。
(第一个字母要大写,“+”或“r”表示有抗性,“-”表示无抗性或敏感)。
6.根据某些特异性蛋白的变异及其导致的结果变化进行表示。
例如:TH2菌株上有一种基因型表示如下:hsdS20 (rB-、mB-),其中S20代表特异性识别蛋白发生变异,()中的rB-、mB-表示由于S20的变异而导致B株来源的hsdR和hsdM的功能缺失。
使用时注意:基因工程中,经常使用的大肠杆菌几乎都来自于K-12菌株,最近也经常使用由B株及C株来源的大肠杆菌。
大肠杆菌B株原来就为lon-,另外MV1184株不具有琥珀抑制基因(Amber supperssor free),由于这些都是原始菌株所不具备的基因,因此不在基因型中加以表示,要注意。
主要的基因型说明基因重组相关的基因型recA (Recombination)Map position: 58 min功能:recA基因表达ATP依赖型DNA重组酶,它在λ-噬菌体与基因组DNA的溶原重组时起作用,同时具有对DNA放射性损伤的修复功能。
由recA基因的变异所产生的基因型使同源或异源DNA的重组不能进行,保持插入DNA的稳定性,对DNA的转化有利。
recB (Recombination)Map position: 61 min功能:recB基因表达ATP依赖型DNase和核酸外切酶V的一个亚基,对recA的DNA重组酶起辅助和促进作用。
DNase 催化双链DNA的解旋和解链,核酸外切酶V催化单链DNA的裂解,在DNA的重组和损伤修复中发挥重要作用。
recB基因的变异导致其DNA重组和修复功能丧失,保证了外源DNA的稳定,有利于DNA转化。
recC (Recombination)Map position: 61 min功能:recC基因表达四种酶,即核酸外切酶V,ATP依赖型的核酸内切酶,解旋酶及ATP酶,它们和recA, recB所表达的酶相互协调作用,在DNA的重组及放射性损伤的修复中发挥作用。
recC基因的变异导致DNA重组功能缺失,保证外源DNA的稳定性。
甲基化相关的基因型dam (DNA adenine methylase)Map position: 74 min功能:dam基因表达DNA腺嘌呤甲基化酶,它能催化特异序列GATC中A的甲基化,保证DNA免受限制性核酸内切酶Mbo I的切断,同时在DNA复制时也起一定的辅助作用。
dam基因的变异导致腺嘌呤(A)甲基化酶活性的缺失,使腺嘌呤(A) 不被甲基化,易于获得非甲基化质粒。
dcm (DNA cytosine methylase)Map position: 43 min功能:dcm基因表达胞嘧啶甲基化酶,它能特异性识别DNA双链上的CCWGG序列,并使第二个C甲基化,即C m CWGG,避免DNA受到相关限制酶的切断。
dcm基因的变异导致胞嘧啶甲基化酶活性缺失,使外源DNA上的C不被甲基化,易于获得非甲基化质粒。
mcrA (Modified cytosine restriction protein a)Map position: 26 min功能:mcrA基因表达大肠杆菌防御体系中起重要作用的mcrA酶,这种酶能特异性地作用于外来DNA上的被甲基化的胞嘧啶序列,即C5m CGG特异序列,使之分解,对大肠杆菌本身起保护作用。
mcr A基因的变异,导致上述功能缺失,对外来DNA 中被甲基化的胞嘧啶特异序列(C5m CGG)失去作用,有利于限制酶及甲基化酶的克隆体的稳定。
mcrB, C (Methyl cytosine-specific restriction)Map position: 98 min功能:mcrB, C基因表达两种特异性蛋白,即mcrB蛋白和mcrC蛋白,它们在大肠杆菌的防御系统中起重要作用。
一般情况下,只有这两种蛋白同时存在时才表现出活性,mcrC具有识别和调节功能,它能特异性的结合到外源DNA上被甲基化的胞嘧啶(C)的特异序列G5m C上,然后由mcrB蛋白切断(mcrB蛋白是特异性切断外来DNA中G5m C序列的限制性核酸内切酶),防御外来DNA的侵入。
mcrB, C基因的变异,使上述的对外来DNA的防御作用缺失,对质粒的转化有利。
mrr (Methylation requiring restriction)Map position: 98 min功能:mrr基因是大肠杆菌细胞防御系统中重要的基因之一,它能严格限制被甲基化的外源DNA的介入。
另外,它对限制酶Acc I,Cvi R I,Hin f I (Hha II),Nla II,Pst I以及N6-腺嘌呤甲基化酶和C5-胞嘧啶甲基化酶活性有明显的抑制作用。
mrr欠损株(基因型)可用于含有N6-m A和C5-m C的DNA的转化。
另外,含有此基因型的菌株也可用于限制酶和甲基化酶的克隆体。
hsdM(Host specificitive defective)Map position: 99 min功能:hsdM基因所表达的DNA甲基化酶是I型限制酶复合体(具有对DNA切断和修补的双重功能)的一部分,它能使DNA 双链上的AA (双腺嘌呤) 甲基化,保护宿主DNA不被分解。
hsdM的变异使细胞内的DNA不被甲基化,易于获得非甲基化质粒。
点突变相关的基因型mutS (Mutator)Map position: 59 min功能:mutS基因表达的蛋白具有识别DNA上错配序列的功能,并能修复其错配序列(GC→AT),防止基因突变。
mutS基因的变异导致DNA的错配序列不能得到修复,容易发生基因突变,这对于利用点突变进行基因改造是有利的。
mutT(Mutator)Map position: 3 min功能:野生大肠杆菌在进行DNA复制时,细胞中的8-OXO-dGTP插入模板DNA中的DA位点的效率几乎与插入DC位点的效率相同,导致A-T转换成G-C,使DNA产生变异。
而mutT蛋白就是特异性地降解8-OXO-dGTP成为单磷酸盐(8-OXO-dGMP),这种单磷酸盐状态的G (鸟嘌呤) 不能作为底物进行DNA合成,从而防止了上述的基因突变。
mutT基因的变异使细胞中8-OXO-dGTP浓度增高,A→C的突变几率增大,有利于利用点突变进行基因改造。
dut (dUTPase)Map position: 82 min功能:dut基因表达脱氧尿嘧啶三磷酸核苷酸水解酶(dUTPase),它能水解dUTP成为dUMP,使细胞体内dUTP的浓度维持在较低的水平,尿嘧啶(U)就不易掺入到DNA中,避免了基因发生A→U的突变。
dut基因发生突变使dUTPase活性缺失,导致dUTP浓度升高,碱基U(尿嘧啶)极易掺入到DNA中,使其发生A→U的基因突变,有利于利用点突变进行基因改造。
ung (Uracil DNA glycosylase)Map position: 56 min功能:ung基因表达尿嘧啶-N-糖苷酶,这种酶能特异性识别DNA单链或双链上发生突变的尿嘧啶残基,并从DNA上水解去除尿嘧啶残基,防止DNA发生突变。
ung基因的变异导致上述功能缺失,有利于点突变。
uvrB (Ultraviolet)Map position: 18 min功能:uvrB基因表达核酸外切酶中的b亚基,这种核酸外切酶具有DNA的切补功能,对紫外线损伤的DNA有修补作用。
uvrB基因的变异使细胞中核酸外切酶切除变异碱基的活性缺失,有利于点突变。
核酸内切酶相关的基因型hsdR (Host specificity defective)Map position: 99 min功能:hsdR基因表达I型限制酶Eco K (K12株) 或Eco B (B株),在大肠杆菌细胞中起到一种“抗体”的作用,对外来的各种DNA有严格的限制。