活性氧检测试剂盒 Reactive oxygen species assay kit使用说明

产品号 BB-4104 BB-4105 BB-4106 BB-4107 BB-4108 BB-4112 BB-4123 B箱：bestbio@
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
使用方法：
使用注意事项： ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液 体洒落。 ● 荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。 ● 探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标 记情况是否正常。 ● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。 ● 对于药物作用时间较短(2 小时以内)的细胞，先标记探针，后用药物刺激细胞。对于药物作用时 间较长(6 小时以上)的细胞，先用活性氧阳性对照诱导剂或相应的药物刺激细胞，后标记探针。 ● 阳性对照诱导剂可以按照 1:1000 的比例使用。例如标记好探针的细胞共 1 毫升，可以加入 1 微升 的阳性对照诱导剂刺激。通常刺激后 20-30 分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于 不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后 30 分钟内观察不到活性氧 的升高，可以适当提高活性氧阳性对照诱导剂的浓度。如果活性氧升高得过快，可以适当降低活 性氧阳性对照诱导剂的浓度。 ● DHR 在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。 ● 对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察 ROS 的变化，很多细胞内的 ROS 绝 对水平较低，需要根据实际情况适当延长孵育时间。 ● DHR 探针可以根据需要的用量分装后冻存，避免反复冻融。 ● DHR 不可以一次性全部稀释后长期保存不用，稀释后稳定性变差，有效期缩短。

植物样品的吸光度值和 0.5mM 的 Fe2+的吸光度值相同，则该血浆(血清)样品的总抗氧化 能力为 0.5mM/(0.5g/5ml)=0.5mmol/100g；
血浆(血清)样品的吸光度值和 0.7mM 的 Fe2+的吸光度值相同，则该血浆(血清)样品的总抗 氧化能力为 0.7mM；
细胞(组织)匀浆样品的吸光度值和 0.3mM 的 Fe2+的吸光度值相同，该匀浆液蛋白浓度为 0.2mg/ml，则该细胞(组织)样品的总抗氧化能力为 0.3mM/0.2mg/ml=0.15mmol/g； 0.3mM 的抗氧化物质，其吸光度值和 0.6mM 的 Fe2+的吸光度值相同，则其相对总抗氧化能力为 0.6mM/0.3mM=2。
注意事项： 1、 实验材料应尽量新鲜，样品提取的整个过程最好在 4℃条件下进行；如取材后不能立即 检测，也可以-80℃冻存后再进行测定(应在 1 个月内测定完毕)。 2、 亚铁标准溶液如变为黄色或棕黄色应弃用。 3、 测定 593nm 如有困难，亦可在 585~605nm 范围内进行测定。 4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒(FRAP 微板法)即 Total Antioxidant Capacity Assay Kit with FRAP method，简称 T-AOC Assay Kit，是一种采用铁离子还原能力(Ferric Reducing Ability of Plasma,FRAP)来测定样品抗氧化活性的方法，其原理是在酸性条件下样品中的抗 氧化物质还原 Fe3+-TPTZ 产生 Fe2+-TPTZ，呈现出明显的蓝色(紫色)，于 593nm 处有最大 的光吸收，在 Fe3+-TPTZ 过量的情况下测定蓝色物质的生成量即可获得待测样品的还原能 力即总抗氧化能力，由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素，并且由 于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于 10μM，因此血浆等样品中的铁离 子或亚铁离子不会显著干扰 FRAP 法的检测反应，本方法可以对血浆、血清、尿液等各种体 液，细胞或组织裂解液、植物或中草药抽提液或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力进行检测。 该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

活性氧的检测方法摘要活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS）是一类在细胞内广泛存在且具有高度活性的分子。

活性氧对细胞膜、蛋白质和核酸等生物分子造成损伤，并参与了多种生物学过程。

因此，准确测量活性氧的水平对于揭示其生物学功能以及相关疾病的发生机制具有重要意义。

本文将介绍几种常见的活性氧检测方法，并对其优缺点进行讨论。

1. 化学染料法化学染料法是一种简单、直观的活性氧检测方法。

目前常用的化学染料包括二苯基四氮唑盐 (DAB)、硝基蓝色苯胺盐 (NBT)和氧化铁氰化钠 (FeCN) 等。

这些染料可与活性氧发生特异性反应，并在反应过程中产生可定量分析的颜色变化。

然而，化学染料法存在一些局限性。

首先，染料的选择与操作条件对实验结果有很大影响，如pH值、温度等。

其次，该方法只能提供活性氧的总量，而无法分辨各种活性氧物种的相对含量。

此外，由于染料具有较强的选择性，所检测的活性氧种类也较为有限。

因此，在应用化学染料法时需要小心考量其适用性。

2. 荧光探针法荧光探针法是一种广泛应用于活性氧测定的方法。

该方法利用已知产生荧光信号的探针与活性氧发生特异性反应，通过测量荧光信号的强度来间接测定活性氧的水平。

常见的荧光探针包括二苯基巴比妥酸 (DABCO)、二羟基联苯 (DPBF) 和二苯并硼菊酯 (DCFH-DA) 等。

这些荧光探针表现出高度选择性和灵敏性，可以用于监测不同活性氧物种的生成和消除动力学过程。

然而，荧光探针法也存在一些限制。

例如，某些荧光探针可能因自身的不稳定性而导致误差。

此外，荧光信号的测量需要专业设备的支持，且荧光信号也易受环境因素的影响。

因此，在选择荧光探针时需要根据实际需求进行权衡。

3. 电化学法电化学法是一种可探测活性氧的敏感、定量且实时的方法。

该方法是通过将活性氧还原为可测电流来测定其浓度。

电化学法常用的电极包括铂电极、碳电极和金电极等。

电化学法的优势在于其高灵敏度、实时性和可定量性。

北京索莱宝科技有限公司
活性氧检测试剂盒 Reactive oxygen species assay kit
货号：CA1410
规格：100-500T
产品内容：
10 mM DCFH-DA in DMSO 活性氧供体 说明书
0.1 ml 1 ml 1份
20 ºC 保存 20 ºC 保存
产品简介：
活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化
物(O2•−, H2O2, •OH, ONOO−, •NO)等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过
程。采用 2,7-dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA)是迄今常用也是较灵敏的细胞内活性氧检探针。
DCFH-DA 没有荧光，进入细胞后被酯酶水解为 dichlorofluorescin (DCFH)。在活性氧存在时 DCFH 被氧化
3. PBS 洗涤细胞 2 次。 三、荧光检测
采用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜图像检测照相，绿色荧光强度代表活性氧水平。也可进行微板荧 光分析仪(multiwell fluorescence plate reader)实时或每 10 分钟分时逐点检测荧光强弱。对于流式细 胞仪可将细胞用胰酶消化 PBS 洗涤后重悬检测。
1. 加入 DCFH-DA 于培养基，推荐初始工作浓度为 10 µM。对不同的细胞和处理，DCFH-DA 工作浓度可 为 100 nM~20 µM，需进行预实验确定合适的浓度。总体稀释倍数应在 1:500~1000 以上以避免 DMSO 对细胞 的影响。以 DMSO 作为溶剂对照。
2. 37 ºC 孵育细胞 30min~至几个小时，通常 30-60min 即可。孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、 DCFH-DA 浓度有关。

3、荧光检测： ①、将上述收集好的细胞沉淀用 PBS 重悬，并用于检测；
②、波长设置：最佳激发波长 500(50015nm)，最佳发射波长 525 (53020 nm)。也可按照 FITC 荧光检
测条件检测。 ③、结果以荧光度值表示。
四、细胞样本操作步骤：（可用激光共聚焦显微镜观察，也可用于流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光分光度 计测定）
二、试剂组成及保存： 1、0.1ml 10mM DCFH-DA in DMSO，20℃保存。 2、1ml 活性氧供氢体，4-8℃保存。
三、组织样本操作步骤：（可用激光共聚焦显微镜观察，也可用于流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光分光度 计测定）
1、单细胞悬液制备： 方法 1、采用单细胞悬液制备仪制备单细胞悬液。 方法 2、酶消化法： 方法 3、机械法（网搓法）：
本试剂盒仅用于科研实验
1、直接将探针加入培养液中： ①、直接将 DCFH-DA 探针加入无血清培养基中：一般按照 1 ：1000 用无血清培养液稀释 CFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜， 通常对于 6 孔板的一个孔加入稀释好的 DCFH-DA 不少于 1ml。 ②、取一份不加探针，只加入培养基的细胞设为阴性对照管。阳性对照管：取一份已加入探针的细胞，同 时加入活性氧供氢体诱导细胞，推荐该试剂的工作浓度为 20～100µM。 ③、37℃孵育细胞 30min～几小时，通常为 30～60min 即可，孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、DCFH-DA 浓度有关。一般阳性对照在刺激细胞 30 分钟左右，即可观察到明显的绿色荧光。 ④、吸去培养液，利用无血清培养液或者 0.01MPBS 反复吹打，肉眼观察瓶底由半透明(细胞单层连接成 片)转为透明，细胞层几乎全部吹打到 PBS 中。 ⑤、将细胞悬液全部收集到 1.5ml 离心管中。用无血清培养液或者 PBS 洗涤 2 次，以充分去除未进入细 胞内的 DCFH-DA。1000rpm/min，5min，吸净上清后加入 PBS 重新悬浮细胞进行测定。

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-168-3301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号脂质氧化(MDA)检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0131S 脂质氧化(MDA)检测试剂盒 100次 S0131M脂质氧化(MDA)检测试剂盒500次产品简介：碧云天的脂质氧化(MDA)检测试剂盒(Lipid Peroxidation MDA Assay Kit)采用一种基于MDA 和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，随后通过比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中MDA 进行定量检测，广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation) 水平检测的试剂盒。

丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物。

动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。

一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA 。

此时通过检测MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA 的测定被广泛用作脂质氧化的指标。

生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA ，例如thromboxane synthase 也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。

丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA 发生反应，形成红色的MDA-TBA 加合物，相应的反应原理图如下：MDA TBA MDA-TBA AdductMDA-TBA 加合物在535nm 处有最大吸收，据此可以通过比色法进行检测。

另外，MDA-TBA 加合物也可以在535nm 被激发产生最大发射波长553nm ，据此也可以进行荧光检测。

特点：本试剂盒中采用了特殊的抗氧化剂，可以有效地抑制样品在检测过程中产生新的MDA ，使检测更加准确。

ros检测试剂盒原理
ros检测试剂盒的原理主要是通过特定的荧光探针来检测细胞或组织中的活性氧(Reactive Oxygen Species, ros)水平。

活性氧是一类具有高度反应性的化学物质，包括超氧阴离子、过氧化氢和羟自由基等。

它们在生物体内产生并参与许多生理和病理过程，如免疫反应、炎症、氧化应激和衰老等。

ros检测试剂盒通常包含以下几种主要成分：
1. 荧光探针：荧光探针是一种能够与活性氧发生特异性结合的化合物，其分子结构中通常含有一个或多个荧光基团。

当荧光探针与活性氧结合时，荧光基团的结构和/或位置发生改变，导致荧光强度发生变化。

这种变化可以通过荧光光谱仪或其他相关设备进行实时监测和定量分析。

2. 缓冲液：缓冲液用于维持试剂盒内溶液的pH值稳定，以保证荧光探针与活性氧的结合效果。

3. 酶抑制剂：酶抑制剂可以抑制某些可能影响ros水平的酶活性，从而确保检测结果的准确性。

4. 标准品：标准品是一种已知活性氧浓度的溶液，用于建立ros 浓度与荧光强度之间的标准曲线。

通过将待测样品的荧光强度与标准曲线进行比较，可以计算出待测样品中的活性氧浓度。

ros检测试剂盒的使用方法如下：
1. 将待测样品与试剂盒中的缓冲液、酶抑制剂等成分混合均匀。

2. 向混合液中加入荧光探针，使其充分结合活性氧。

3. 使用荧光光谱仪或其他相关设备对混合液进行荧光强度测量。

根据标准曲线，计算出待测样品中的活性氧浓度。

需要注意的是，不同品牌的ros检测试剂盒可能采用不同的荧光探针和检测方法，因此在选择和使用试剂盒时应仔细阅读说明书并遵循操作规程。

产品号 BB-4101 BB-4102 BB-4201 BB-4202 BB-4203 BB-4204 BB-4131 BB-4133 BB-4122
产品 细胞周期检测试剂盒 JC-1 线粒体膜电位试剂盒 Caspase 3 活性检测试剂盒 Caspase 8 活性检测试剂盒 Caspase 9 活性检测试剂盒 Caspase 10 活性检测试剂盒 细胞凋亡形态学检测试剂盒 Rhodamine 123 染色试剂盒 AO/EB 双染试剂盒
产品简介： 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧
化物和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 贝博活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针 DCFH-DA 进行活性氧检测的试剂盒。
DCFH-DA 本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解 生成 DCFH。而 DCFH 不能通透细胞膜，从而使探针很容易被标记到细胞内。在活性氧存 在的条件下，DCFH 被氧化生成荧光物质 DCF，绿色荧光强度与细胞内活性氧水平成正比， 检测 DCF 的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。


-2-
咨询邮箱：bestbio@
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
检测： 对于原位标记探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光 光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光 度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接观察也可以。 使用 488nm 激发波长，525nm 发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。DCF 的荧光光谱和 FITC 非常相似，可以用 FITC 的参数设置检测 DCF。

（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®活性氧(ROS)荧光法测试盒Reactive Oxygen Species (ROS)Fluorometric Assay Kit产品货号：E-BC-K138-F产品规格：96T检测仪器：荧光酶标仪(激发波长485-515 nm，发射波长510-550 nm) 使用前请仔细阅读说明书。

如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。

请在保质期内使用试剂盒。

联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。

用途本试剂盒适用于检测组织细胞，培养细胞中的活性氧。

检测原理DCFH-DA（2,7-dichlorofuorescin diacetate）是一种可以自由穿过细胞膜的荧光探针，自身没有荧光，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH（dichlorofluorescin）。

在活性氧存在时DCFH被氧化为不能透过细胞膜的强绿色荧光物质DCF（dichlorofluorescein），其荧光在激发波长502 nm，发射波长530 nm附近有最大波峰，强度与细胞内活性氧水平成正比。

提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。

对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。

所需自备物品仪器：荧光酶标仪（Ex/Em=500 nm/525 nm）、流式细胞仪或荧光显微镜试剂：双蒸水、PBS（0.01 M，pH 7.4）、无血清细胞培养液试剂准备①试剂一工作液的配制：将试剂一用无血清细胞培养液稀释，现配现用。

推荐初始工作浓度为10 μM，对于不同的样本和处理，试剂一工作液浓度可为0.1-20 μM，需进行预实验确定合适的浓度。

总体稀释倍数应在1:500-1:1000以上以避免DMSO对细胞的影响②试剂一工作液的使用：加入试剂一工作液的时机或孵育时间，以最终能顺利检测细胞内活性氧为目的。

产品号 BB-4101 BB-4102 BB-4201 BB-4202 BB-4203 BB-4204 BB-4131 BB-4133 BB-4122
产品 细胞周期检测试剂盒 JC-1 线粒体膜电位试剂盒 Caspase 3 活性检测试剂盒 Caspase 8 活性检测试剂盒 Caspase 9 活性检测试剂盒 Caspase 10 活性检测试剂盒 细胞凋亡形态学检测试剂盒 Rhodamine 123 染色试剂盒 AO/EB 双染试剂盒
荧光显微镜检测： 1、 对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取 25-50 μl 细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。 2、 荧光显微镜下，用蓝光或绿光激发，观察和拍摄细胞红色发射图像，ROS 阳性细

-2-
咨询邮箱：bestbio@
-1-
咨询邮箱：bestbio@
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
产品特点： ● 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式
细胞仪检测； ● 背景低，灵敏度高； ● 线性范围宽，使用方便。
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
胞在整个核区被染成红色；用紫外光激发时，胞浆中未氧化的二氢乙啶可发出 蓝色荧光。
流式细胞仪分析： 1、 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。 用 0.5~1 ml 冰冷 PBS 重悬细胞（5~10 万）。 2、 采用 480~535 nm 波长激发，测定 590 nm~610 nm 以上的发射，细胞应可分成两个 亚群：ROS 阴性细胞仅有很低的荧光强度，ROS 阳性细胞有较强的红色荧光。

冰冻切片氧化应激活性氧超氧阴离子MitoSOX红色荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途冰冻切片氧化应激活性氧超氧阴离子MitoSOX红色荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂MitoSOX，在线粒体氧化损伤条件下，产生红色荧光，来检测冰冻组织细胞线粒体内超氧阴离子活性氧族的存在状况的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

适宜于冰冻动物组织细胞线粒体内的超氧阴离子分析。

可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。

产品严格无菌，即到即用，操作简易，定性检测，性能稳定。

技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。

其中线粒体氧化磷酸化副产物之一是超氧阴离子，为线粒体内最主要的活性氧族，与心血管疾病，包括高血压、冠状动脉硬化、糖尿病相关的血管疾病、神经退行性疾病（巴金森氏症、阿茨罕默症、肌萎缩硬化症）相关。

MitoSOX 是一种完全自由通过细胞膜，并选择性在活体细胞线粒体内长期滞留而不外漏的染色剂。

一旦被超氧自由基阴离子氧化，便产生荧光。

据此证明细胞线粒体内超氧阴离子活性氧族的存在。

产品内容清理液（Reagent A）20毫升染色液（Reagent B）40微升稀释液（Reagent C）20毫升产品说明书1份保存方式保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器培养箱或恒温水槽：用于染色孵育（共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光组织细胞实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，稀释液（Reagent C）置于室温预热。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断小鼠（Mouse）活性氧簇（ROS）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被活性氧簇（ROS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的活性氧簇（ROS）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释上海笃玛生物科技有限公司底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、30、60、120、240、480U/ml试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

南京森贝伽生物科技有限公司鱼活性氧(ROS)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鱼血清，血浆及相关液体样本中活性氧的含量。

ELISA实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼活性氧水平。

用纯化的鱼活性氧抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入活性氧，再与HRP标记的活性氧抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的活性氧呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鱼活性氧浓度。

样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/南京森贝伽生物科技有限公司分）。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。

加入一定量的PBS，PH7.4。

用液氮迅速冷冻保存备用。

标本融化后仍然保持2-8℃的温度。

加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。

活性氧的检测方法活性氧（reactive oxygen species，ROS）是指一类具有高度活性的氧气衍生物，包括超氧阴离子（superoxide anion，O2·-）、过氧化氢（hydrogen peroxide，H2O2）、羟基自由基（hydroxyl radical，·OH）等。

它们在正常生物体内起到重要的信号传导和正常生理功能的调节作用，但当其产生过量或生物体的抗氧化防御系统受损时，可引发氧化应激反应，导致蛋白质、脂质、DNA等生物分子的氧化损伤，从而参与多种疾病的发生和发展过程。

由于活性氧的生成和清除速度都非常快，直接测量活性氧的浓度和活性是非常困难的，因此科学家们开发了多种间接检测方法。

以下是几种常见的活性氧检测方法。

1. 过氧化物酶法（oxidative enzyme assay）该方法通过利用特定的过氧化物酶（例如超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶等）将活性氧转化为可测量的反应物质。

测量该反应物质的生成速率或浓度变化，可以间接反映出活性氧的产生量或含量。

2. 化学荧光探针法（chemical fluorescence probe）该方法使用特定的化学荧光探针，探针分子结构中含有特异性的活性氧敏感团或特异的活性氧响应元件。

当探针与活性氧反应时，荧光强度变化或荧光发射峰位移动，可以通过荧光光谱或荧光显微镜等技术手段来测定活性氧的产生量或含量。

3. 化学显色法（chemical colorimetric assay）该方法基于活性氧与一些特定的化学物质（如戊二醛、硫代巴比妥酸钠等）反应生成产物，这些产物具有特定的吸收光谱，可以通过比色法来测定活性氧的产生量或含量。

该方法简便易行，仪器设备要求低，适用于较低灵敏度的活性氧检测。

4. 高效液相色谱法（high-performance liquid chromatography该方法通过高效液相色谱技术将待测样品中的活性氧产生物（如羟基自由基产生物3,4-二羟基苯乙酮酸）分离和检测，根据活性氧产生物的峰面积或峰高变化来测定活性氧的产生量。

reactive oxygen species
Reactive oxygen species一般指活性氧。

活性氧（ROS）是含氧的化学反应性化学物质。

实例包括过氧化物，超氧化物，羟基自由基，单线态氧，和α-氧。

在生物学背景下，ROS形成为氧的正常代谢的天然副产物，并且在细胞信号传导和体内平衡中具有重要作用。

然而，在环境压力（例如，紫外线或热暴露）期间，ROS水平会急剧增加。

这可能会对细胞结构造成严重损害，这被称为氧化应激。

ROS的产生受植物中应激因子反应的强烈影响，这些增加ROS产生的因素包括干旱，盐度，寒冷，营养缺乏，金属毒性和UV-B辐射。

ROS也由外源性源如电离辐射产生。

细胞内氧化应激活性氧单线态氧气比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途细胞内氧化应激活性氧单线态氧气比色法定量检测试剂是一种旨在通过二甲基4亚硝基苯胺，受到单线态氧气一的作用，出现去色现象，由分光光度仪比色分析，定量检测细胞内单线态氧气活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。

其适用于各种活体细胞(动物、人体等)内单线态氧气的检测。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。

技术背景超氧自由基阴离子(6UPerOXideradiCaI；O2过氧化氢(hydrogenperoxide；H2O2)、羟自由基或氢氧基(hydroxylradical；0H)、过氧化基(ρeroxylradical；R00'氢过氧自由基(hydroperoxyl；HOO烷氧自由基(alcoxy!radical).氮氧基(niiricOxide；NO)、过氧亚硝基阴离子(PerOXyniIrileanion；ONOO)次氯酸(hypochlorousacid；HCl0)、半酸自由基(SemiqUinoneradiCaI)、单线态氧气(Singletoxygen)等细胞内活性氧族(ReaciiveOxygenSpecies;ROS)的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。

其中单线态氧气(SinglelOXygen；I02)是分子轨(O2)的抗磁形式或电激发形式。

通过染料分子，例如孟加拉红(RoSeBengal),亚甲基兰(MelhyIeneBIue)、吓咻类化合物(PorPhyrinS)染料的光敏过程中能量转移产生，或过氧化氢和次氯酸的化学反应产生。

单线态氧气可以调节紫外线A辐射的生物学作用、激活各种细胞信号通路等。

单线态氧气会导致植物的光动力损伤(photodynamicdamage)和动物心血管问题。

基于二甲基・4.亚硝基苯胺(NH-DimeihyLp-Iiiirosoaniline;PNDA或RNO)作为单线态氯气的选择性受体，在单线态氧气的存在下，产生去色作用，在分光光度仪下(44Onm波长)，呈现吸光峰值的降低。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断大鼠（Rat）活性氧簇（ROS）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被活性氧簇（ROS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的活性氧簇（ROS）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

上海笃玛生物科技有限公司试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、30、60、120、240、480U/ml试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。