单线态氧气比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS10016.8 v.A GENMED真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧初级荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙酰乙酸盐，在细胞氧化条件下，产生荧光，来定量检测细胞内活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种实验用真菌/酵母菌株细胞内氧化应激活性氧的分析。

可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老和代谢等的研究。

产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定，荧光清晰。

技术背景真菌/酵母细胞是一种低等单细胞真核生物，具有细胞生长快，易于培养，遗传操作简单明了等原核生物的特点。

作为模式生物，它具有比较完备的基因表达调控机制和表达产物的加工修饰能力，在分子遗传学方面认识最早，最先作为外源基因表达的细胞宿主。

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基（hydroxyl radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。

2',7'-二氯荧光乙酰乙酸盐（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA）一种完全自由通过细胞膜的染色剂。

一旦被过氧化氢氧化，便产生荧光。

据此测定细胞内活性氧族的浓度。

产品内容GENMED清理液（Reagent A）毫升GENMED染色液（Reagent B）微升GENMED稀释液（Reagent C）毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于真菌/酵母染色的容器载玻片：用于染色观察微型台式离心机：用于沉淀真菌/酵母细胞培养箱或恒温水槽：用于染色孵育比色皿：用于荧光定量分析（共聚焦）荧光显微镜：用于细胞荧光分析细胞流式仪：用于细胞荧光分析荧光分光光度仪：用于细胞荧光定量分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（Reagent B）置入冰槽里融化。

细胞PTEN活性定磷比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途细胞PTEN活性定磷比色法定量检测试剂是一种旨在使用特异性合成底物磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），在PTEN去磷酸化后，释放出游离磷酸根，与孔雀绿染料发生显色反应后，采用比色法测定其峰值的变化，以此进行测算单位酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适合于各种细胞裂解悬液样品的PTEN活性及其抑制剂的检测。

广泛应用于细胞凋亡、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。

产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。

技术背景细胞张力蛋白同源在10号染色体缺失性磷酸酶（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten；PTEN；EC3.1.3.67），又称为多发性晚期肿瘤突变基因1（mutated in multiple advanced cancers1；MMAC1），是一个肿瘤抑制基因，位于染色体10q23.3，转录产物515kb，蛋白产物175氨基酸。

PTEN蛋白含有一酪蛋白磷酸酶的功能区和约175个氨基酸左右的与骨架蛋白张力蛋白（tenasin）、辅助蛋白（auxilin）同源的区域，是一种双重特异性磷酸酶，能使酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸、磷酯酰肌醇（phosphoinositide）等去磷酸化。

PTEN具有调节细胞周期、防止细胞过度生长和分裂、参与细胞凋亡、粘附、迁移、浸润，控制细胞内磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate；PIP3）水平，调控Akt/PKB信号通路等功能。

PTEN基因突变和缺失将导致肿瘤发生、发展和转移，以及多发性错构瘤综合征（Cowden syndrome）等。

基于底物磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸，在PTEN的催化下，水解产生磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2），同时释放出游离磷酸根，进而与孔雀绿染料发生显色反应产生其峰值的变化（660nm波长），以此测算PTEN的活性。

植物氧化应激活性氧单线态氧气比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物氧化应激活性氧单线态氧气比色法定量检测试剂是一种旨在通过二甲基-4-亚硝基苯胺，受到单线态氧气-的作用，出现去色现象，由分光光度仪比色分析，定量检测植物组织细胞内单线态氧气活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），以及叶绿体等细胞器的单线态氧气检测。

可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。

技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HClO）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。

其中单线态氧气（singlet oxygen；1 O2）是分子氧（O2）的抗磁形式或电激发形式。

通过染料分子，例如孟加拉红（Rose Bengal）、亚甲基兰（Methylene Blue）、卟啉类化合物（Porphyrins）染料的光敏过程中能量转移产生，或过氧化氢和次氯酸的化学反应产生。

单线态氧气可以调节紫外线A辐射的生物学作用、激活各种细胞信号通路等。

单线态氧气会导致植物的光动力损伤（photodynamic damage）和动物心血管问题。

纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system）测定新鲜活体线粒体在ADP存在（III态呼吸）与否（IV态呼吸）的情况下溶解氧（dissolved oxygen）的消耗差异，即呼吸控制率（RCR），以评价线粒体结构和功能完整性以及氧化磷酸化效率的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。

产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。

技术背景线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。

电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。

线粒体结构完整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其耗氧率大，为III态呼吸。

ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。

呼吸控制率（respiratory control ratio或respiratory control index；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP）的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。

正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤，呼吸障碍；RCR增高意味着细胞活动旺盛，代谢加快。

产品内容介质液（Reagent A）毫升态底物液（Reagent B）微升态底物液（Reagent C）微升产品说明书 1份保存方式保存在－20℃冰箱里，有效保证6月用户自备CLARK氧电极仪：用于测定溶解氧浓度实验步骤实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到25℃。

然后进行下列操作。

1．加入xx毫升介质液（Reagent A）到反应玻璃槽2．使用微型磁力子搅拌，充分混匀3．密封反应槽4．开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为0.240微摩尔分子氧/毫升（25℃）5．持续记录1分钟后，注射加入xx微升待测的线粒体（总量2毫克）（注意：氧浓度可能瞬时增加5％）6．持续记录1分钟后，注射加入xx微升态底物液（Reagent B）――开始IV态呼吸（注意：参见注意事项9）7．持续记录2分钟：出现氧浓度缓慢下降）（8．继续注射加入xx微升态底物液（Reagent C注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑）――开始III态呼吸（注意：参见注意事项9）9．持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点10．分别测算III态呼吸速率和IV态呼吸速率：氧浓度降低值÷实际时间（分钟）11．计算呼吸控制率：III态呼吸速率÷IV态呼吸速率注意事项1．本产品为20次操作2．操作时，须戴手套3．确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入4．线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用GENMED线粒体分离试剂盒－GMS10006.15．注射加入反应槽时，避免气泡和空气注入6．避免乙醇污染；乙醇增加氧浓度；如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解，则加注10微升7．保持反应槽温度恒定，温度降低，氧浓度升高8．反应液充分混匀，和环境氧保持平衡9．加注态底物液（Reagent B）和态底物液（Reagent C）前，须充分冻融和混匀10．严格按照规定加注试剂，切莫增加加注试剂容量11．本公司提供系列线粒体检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。

血清单胺氧化酶试剂盒的使用说明书一、产品名称血清单胺氧化酶试剂盒二、预期用途本试剂盒用于体外定量测定人血清中单胺氧化酶（MAO）的活性。

三、检验原理本试剂盒采用连续监测法测定血清中单胺氧化酶的活性。

单胺氧化酶能催化苄胺生成苄醛，同时产生过氧化氢。

在过氧化物酶的作用下，过氧化氢与 4-氨基安替比林和酚反应生成红色醌类化合物，在 505nm波长处有最大吸收峰。

通过测定单位时间内吸光度的变化率，计算出单胺氧化酶的活性。

四、试剂盒组成1、试剂 1：R1成分：缓冲液、4-氨基安替比林、酚、稳定剂等。

规格：＿____ml/瓶。

2、试剂 2：R2成分：苄胺、过氧化物酶、稳定剂等。

规格：＿____ml/瓶。

五、适用仪器适用于具有 505nm 波长、能进行比色分析的全自动生化分析仪。

六、储存条件及有效期1、储存条件未开封试剂盒：2 8℃避光保存。

已开封试剂盒：使用后立即盖紧瓶盖，2 8℃可稳定保存 1 个月。

2、有效期：自生产之日起 12 个月。

七、样本要求1、样本类型：血清。

2、采集方法：常规静脉采血，分离血清。

3、样本保存：血清样本在2 8℃可稳定保存3 天；如需长期保存，应置于－20℃以下，避免反复冻融。

八、检验方法1、试剂准备从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温（约 30 分钟）。

分别将试剂 1（R1）和试剂 2（R2）摇匀。

2、设定参数在全自动生化分析仪上设定相关参数，包括波长（505nm）、反应温度（37℃）、样本量、试剂 1 和试剂 2 的加样量、反应时间等。

3、加样将待测血清样本和标准品分别加入相应的反应杯中。

按照设定的参数，依次加入试剂 1 和试剂 2。

4、测定启动仪器，进行测定。

仪器会自动监测反应过程中吸光度的变化，并计算出单胺氧化酶的活性。

九、计算方法以标准品浓度和对应的吸光度变化率绘制标准曲线，根据待测样本的吸光度变化率，在标准曲线上查出对应的单胺氧化酶活性值。

十、参考范围健康成年人血清单胺氧化酶活性：＿____ ＿____ U/L。

NADH氧化酶（NOX可见分光光度法货号：BC0630规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体25 mL×1瓶4℃保存试剂二液体5 mL×1瓶4℃保存试剂三液体0.5 mL×1支-20℃保存试剂四液体70 mL×1瓶4℃保存试剂五液体10 mL×1瓶4℃保存试剂六粉剂×2瓶-20℃保存溶液的配制：试剂六：临用前加入9 mL双蒸水，用不完的试剂-20℃分装保存。

产品说明：NOX（EC 1.6.99.3）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD+。

该酶不仅参与NAD+的再生，而且与免疫反应密切相关。

NOX能够将NADH氧化为NAD+，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1.准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10µL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2.将匀浆600g，4℃离心5min。

将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。

3.将上清液转移至另一EP管中，即胞浆提取物，用于线粒体中泄露NOX活性测定。

4.沉淀即为线粒体，加入200µL试剂二和2µL试剂三，反复吹打充分混匀，用于NOX活性测定，并用于蛋白浓度测定。

细胞半胱氨酸蛋白酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞半胱氨酸蛋白酶活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过四肽化合物底物，受到半胱氨酸蛋白酶的水解，释放黄色对硝基苯胺，产生吸光峰值的变化，即采用比色法来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体、昆虫等）半胱氨酸蛋白酶（）的活性检测。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景半胱氨酸蛋白酶（；），或称半胱天冬蛋白酶，是调节细胞凋亡的一类蛋白酶家属。

半胱氨酸蛋白酶（；）是半胱氨酸蛋白酶家属中（；秀丽隐杆线虫细胞死亡基因数）分支的一种，又称（；半胱氨酸蛋白酶蛋白）、（凋亡素）、（印度传说中的死亡之神）等。

半胱氨酸蛋白酶前体为，被切离为和而激活细胞凋亡。

其底物是多聚核糖多聚酶（（）；）、半胱氨酸蛋白酶激活酶抑制剂（）等。

半胱氨酸蛋白酶的活性检测用来评价细胞或组织的凋亡状况。

基于人工合成的四肽化合物底物（；乙酰天冬氨酰谷氨酰颉氨酰天冬氨酰对硝基苯胺）受到半胱氨酸蛋白酶的水解，释放有色对硝基苯胺，在分光光度仪（波长）下，测定吸光峰值的变化，来定量测定半胱氨酸蛋白酶的活性。

半胱氨酸蛋白酶反应系统为：→（黄色）产品内容清理液（）毫升裂解液（）毫升缓冲液（）毫升阴性液（）毫升底物液（）微升产品说明书份保存方式保存清理液（）在℃冰箱里；其余的保存在℃冰箱里；底物液（）避免光照和反复冻融；有效保证月用户自备毫升锥形离心管：用于样品制备的容器毫升离心管：用于样品制备和储存的容器细胞刮脱棒：用于细胞脱离微型台式离心机：用于样品沉淀培养箱：用于反应物孵育孔板或比色皿：用于样品比色测定的容器酶标仪或分光光度仪：用于样品比色分析实验步骤实验开始前，将－℃冰箱里的试剂盒中的底物液（）置入冰槽里融化，避免光照。

然后进行下列操作。

一、样品制备1．准备好细胞培养瓶或细胞培养皿的待测培养细胞（至细胞）2．小心加入毫升清理液（），覆盖生长表面3．小心抽去清理液4．使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：可以使用胰酶消化）5．加入毫升清理液（），混匀细胞6．移入到预冷的毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）7．放进℃台式离心机离心分钟，速度为8．小心抽去上清液9．加入微升裂解液（），充分混匀10．转移到预冷的毫升离心管11．强力涡旋震荡秒12．置于冰槽里孵育分钟13．放进℃微型台式离心机离心分钟，速度为（或，例如）14．小心移取微升上清液到新的预冷的毫升离心管15．移取微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用蛋白质浓度定量试剂盒－）16．即刻放进－℃保存或置于冰槽里继续后续操作二、测定准备1．准备好上述制备的（药物处理的）待测样品2．设定好酶标仪（温度为℃）：波长，并置零三、活性测定1．在孔板上做好相应标记：背景对照和样品2．分别移取微升缓冲液（）到相应孔里3．分别加入微升阴性液（）或上述制备的待测样品（微克总蛋白）到相应孔里（注意：样品须清澈）4．分别加入微升底物液（）5．轻轻摇动孔板（注意：避免气泡）6．在℃温度下孵育分钟（注意：可见反应孔里呈现肉眼可见的黄色）7．即刻放进酶标仪检测或转移到微升比色皿，在分光光度仪里检测8．活性计算：（1）酶标仪检测[（样品读数－背景读数）样品稀释倍数（体系容量；毫升）]÷[（样品容量；毫升）（毫摩尔吸光系数）（反应时间；分钟）（光径距离；厘米）]＝单位毫升÷（样品蛋白浓度）毫克毫升＝单位毫克单位＝微摩尔对硝基苯酚分钟（2）比色皿检测[（样品读数－背景读数）样品稀释倍数（体系容量；毫升）]÷[（样品容量；毫升）（毫摩尔吸光系数）（反应时间；分钟）]＝单位毫升÷（样品蛋白浓度）毫克毫升＝单位毫克单位＝微摩尔对硝基苯酚分钟注意事项1．本产品为次操作，包括背景对照2．操作时，须戴手套3．系统操作过程中，背景测定只需次4．样品须澄清，且避免反复冻融5．反应分钟后比色测定值通常升高达以上6．测定值由低到高变化；反应可持续分钟7．比色测定后，比色皿须清洗彻底8．样本测定分钟读数高于分钟读数表明具有酶活性9．建议待测样本蛋白浓度为微克微升；如果样本酶活性过低，则可以延长反应孵育时间至小时；其次增加样本量（本公司提供蛋白质浓度定量试剂盒）10．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度11．半胱氨酸蛋白酶单位活性定义为：在℃，条件下，每分钟内能够切离微摩尔四肽化合物底物所需的酶量作为一个活性单位12．本公司提供系列半胱氨酸蛋白酶酶学检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。

单胺氧化酶测定试剂盒（谷氨酸脱氢酶法）适用范围：用于体外定量测定人血清中单胺氧化酶的活性。

1.1 产品型号/规格1×32 ml；2×25 ml；1×45 ml；2×45 ml；4×45 ml ；1×50 ml ；2×50 ml；4×50 ml；8×50 ml；1×60 ml；2×60 ml；2×70 ml；6×70 ml；2×100 ml；4×100 ml；2×16 ml；4×24 ml；8×24 ml；1×25 ml；4×60 ml；8×60 ml。

1.2 主要组成成分Tris缓冲液 150 mmol/Lα-酮戊二酸10 mmol/L 乙二胺四乙酸（ETDA） 2 mmol/L谷氨酸脱氢酶 1 KU/L苄胺20 mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）0.25 mmol/LProclin-300 0.1%2.1 外观和性状2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；中文包装标签应清晰、准确、牢固。

2.1.2 试剂应为无色至浅黄色澄清液体。

2.2 净含量不少于标示值。

2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度在光径1 cm、主波长340 nm下，以纯化水为检测样本时，吸光度应不小于0.800。

2.3.2 试剂空白吸光度变化率在光径1 cm、主波长340 nm下，以纯化水为检测样本时，吸光度变化率(△A/min)应小于0.01。

2.4 分析灵敏度MAO含量为6 U/L时，测定吸光度变化率（△A/min）应不小于0.001。

2.5 线性范围MAO试剂在线性范围[0.5，100] U/L内：（a）相关系数r应不小于0.990；（b）在[0.5，10]U/L范围内，线性绝对偏差应不超过±1 U/L；（c）在（10，100]U/L范围内，线性相对偏差应不超过±10 %。