培养基灵敏度试验

培养基的灵敏度测试培养基的灵敏度测试是其质量控制的一个重要检测部分。

方法如下：1.用于菌数计数的半固体琼脂培养基促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查（促菌生长检查）。

取预先制备好的琼脂培养基平皿3~5个，用表面涂布法每块平板表面接种30~100个试验菌，同时用已知质量保证的同型号培养基平皿3~5个（如较著名的如MERCK，DIFICOL产品）做对照试验，待培养基表面的菌液被琼脂培养基吸干或风干后，将培养皿倒置于培养箱的使用温度下培养48~72小时，（也可采用浇碟法进行）取出培养后的平皿点计菌落数。

样品培养基上的微生物数量应不得低于对照培养基上微生物生长数量的70%。

否则，需重新检查，或该培养基被视为不符合促生长要求。

2.用于控制菌检查的富集培养基的促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查。

每100ml培养基内分别接入试验菌小于100cfu，每个菌种接种两瓶培养基，将接过种的培养基置于指定条件下培养。

应在16~18小时后可明显观察到培养基内有微生物生长，则证明此培养基合格。

原则上无论是采用脱水培养基还是按相关处方配制的培养基，一旦制成成品培养基，则应对每个配制批号培养基进行促菌生长（灵敏度检查）试验，以考察培养基的质量。

按脱水培养基的生产批号做灵敏度检查是基于培养基的灭菌程序已经经过验证。

如果实验室使用的是商购的成品培养基，供应商应随培养基提供相应批次的培养基质量检测报告，报告包括培养基的PH值、无菌检查结果和促菌生长（灵敏度）试验结果等项目。

建议在使用某一新的成品培养基（新供应商或新培养基品种）时，应至少考察三个不同批次的培养基质量，只有三批质量均合格方可使用该培养基。

微生物限度检查用成品培养基一旦初试确认合格后，可审查供应商的质检报告，而不必每批再作无菌检查和灵敏度检查，但半年应至少检查一次，以复核其质量。

用于无菌检查试验的每批培养基，均必须按规定进行灵敏度检查试验，此规定同样适用于实验室自行配制的培养基。

[作者简介]郭永文(1938-),男,副主任技师,主要从事卫生微生物检验和实验室管理工作。

=经验交流>液体培养基灵敏度试验两种判读方法结果比较郭永文1,吴会桃1,蔡芷荷1,吴清平2(11广东环凯微生物科技有限公司,广州510663;21广东省微生物研究所,广州510070)[关键词]培养基;灵敏度试验;C M ID50[中图分类号]R780[文献标识码]C[文章编号]1004-8685(2010)01-0211-03在我国,微生物培养基灵敏度试验(下称灵敏度试验)方法,可追溯至上世纪六十年代,四十多年来一直沿用这一方法,从我国的药典到生物制品制检规程,都有记载。

作为一种检测手段来说,对评价培养基的质量方面,确有其重要价值,但就方法学方面去探讨,仍有某些不尽如人意之处,本文就其结果的判读方面,作了两种方法的比较,现报道如下。

1材料与方法111实验菌株实验菌株11株分别是:伤寒沙门菌C M CC50098,鼠伤寒沙门菌C M CC50115,大肠埃希菌ATCC25922,金黄色葡萄球菌ATCC25923,粪链球菌ATCC29212,乙型溶血性链球菌C M-CC32210,单核细胞增生李斯特菌C M CC54004,产气荚膜梭菌ATCC13124,生孢梭菌AT CC19404,白色念珠菌ATCC10231,黑曲霉AT CC16404,以上菌株为本公司菌种库提供。

112实验用培养基亚硒酸盐胱氨酸培养基(下简称SC培养基),溴甲酚紫葡萄糖肉汤,葡萄糖肉浸液,硫乙醇酸盐液体培养基,营养肉汤培养基,脑心浸萃液态培养基,麦芽汁培养基,疱肉培养基, T SB-ye培养基。

113标准细菌比浊管购自中国药品生物制品检定所。

2灵敏度试验方法简介菌液工作浓度的制备:将试验菌新鲜培养物用019%氯化钠制成10@108菌悬液,用019%氯化钠溶液逐管稀释至10-9,一般细菌接种10-5~10-9,其中乙型溶血性链球菌和短小芽孢杆菌接种10-1~10-6,每稀释度接种3管,每管接种1m,l35e培养24h开始观察结果。

培养基的灵敏度检查名词解释培养基的灵敏度检查是微生物学中一项重要的实验技术，用于评估和确定某种微生物对特定药物或化合物的敏感程度。

该检查通常用来确定微生物对抗生素、抗菌剂或其他抑菌物质的敏感性，从而帮助医生选择最适合的治疗方案。

本文将对培养基的灵敏度检查进行详细解释，包括其原理、方法和应用范围。

1. 培养基培养基是一种提供营养物质供微生物生长繁殖的物质，它们通常由水、气体、有机和无机化合物组成。

培养基可以分为固体和液体培养基，具体根据实验需求选择。

2. 灵敏度检查灵敏度检查是通过培养微生物在含有不同浓度药物或化合物的培养基上的生长情况来评估微生物对其的敏感程度。

这一方法是通过比较不同浓度的药物或化合物在培养基上对微生物的抑制效果来判断微生物对药物的敏感性。

3. 原理灵敏度检查的原理是基于微生物的生长特性。

在含有抗菌物质的培养基中，微生物的生长受到抑制，这是因为抗菌物质影响了微生物的代谢、细胞壁合成、蛋白质合成等生物学过程。

通过在不同浓度的药物或化合物培养基上培养微生物，可以观察到不同浓度下微生物的生长情况，根据其生长状况判断微生物对药物的敏感性。

4. 方法培养基的灵敏度检查通常采用标准化的方法进行。

首先，将从患者体内或环境中分离的微生物菌株接种于含有不同浓度药物的培养基上。

然后，将培养皿放入恒温培养箱中，在适宜的温度和湿度下培养一段时间。

观察培养皿中微生物的生长情况，通常通过裸眼观察，也可辅助使用显微镜。

根据微生物在不同药物浓度下的生长情况，可以确定微生物对药物的敏感程度。

5. 应用范围培养基的灵敏度检查在医学领域中具有广泛应用。

首先，在临床诊断中，该检查可以帮助医生选择最适合的抗菌药物，从而提高治疗效果。

其次，在药物研发中，通过灵敏度检查可以评估新药物对微生物的抑制作用，为药物的临床应用提供依据。

此外，在环境监测中，对环境中的微生物进行灵敏度检查可以评估环境中的微生物群落对抗菌物质的变化情况，为环境卫生和生物安全提供参考。

培养基灵敏度检查规程编号：版本：编制：日期：审定：日期：批准：日期：生效日期：管理部门：发放部门：生产部 质管部 工程部 研发部 PMC 采购部 仓库 营销中心 人事行政中心 财务部一、目的：确证使用所用的培养基是否符合无菌性检查及灵敏度检查的要求。

二、检查时间：供试品的无菌检查前或者无菌检查同时进行。

三、范围：适应于培养基灵敏度检查四、依据：《中国药典》2020版第四部五、职责：质管部1.实验设备及用具：2.高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、注射器、针头、注射器盒、试管、试管架、搪瓷托盘、时钟、75%酒精棉球、无菌服。

2.培养基：无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基3. 测试用菌种3.1金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]3.2 铜绿假单胞菌[CMCC (B) 10104]3.3枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]3.4 生孢梭菌[CMCC（B）64941]3.5白色念珠菌[CMCC (F) 98001]3.6黑曲霉[CMCC(F)98 003]4. 菌液制备：4.1 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30～35℃培养18～24 小时。

4.2 接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中30～35℃培养18～24 小时4.3 接种白色念珠菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨琼脂或液体培养基20～25℃培养24～48 小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液逐管稀释成每1ml 含菌量小于100cfu菌悬液4.4 接种黑曲霉的新鲜培养物至至胰酪大豆胨琼脂斜面上20～25℃培养5～7天用适量0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液逐管稀释成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。

5. 无菌性检查在进行灵敏度检查前应先进行培养基的无菌性检查5.1 方法：每批培养基随机抽取不少于5支，至相应温度下培养14天，应无菌生长。

培育基的灵敏度测试培育基的灵敏度测试是其质量掌握的一个重要检测部分。

方法如下：1.用于菌数计数的半固体琼脂培育基促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培育基均应进行灵敏度检查（促菌生长检查）。

取预先制备好的琼脂培育基平皿3~5个，用表面涂布法每块平板表面接种30~100个试验菌，同时用已知质量保证的同型号培育基平皿3~5个（如较闻名的如MERCK,DIFICoL产品）做对比试验，待培育基表面的菌液被琼脂培育基吸干或风干后，将培育皿倒置于培育箱的使用温度下培育48~72小时，（也可采纳浇碟法进行）取出培育后的平皿点计菌落数。

样品培育基上的微生物数量应不得低于对比培育基上微生物生长数量的70%。

否则，需重新检查，或该培育基被视为不符合促生长要求。

2.用于掌握菌检查的富集培育基的促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培育基均应进行灵敏度检查。

每100ml培育基内分别接入试验菌小于100cfu,每个菌种接种两瓶培育基，将接过种的培育基置于指定条件下培育。

应在16~18小时后可明显观看到培育基内有微生物生长，则证明此培育基合格。

原则上无论是采纳脱水培育基还是按相关处方配制的培育基，一旦制成成品培育基，则应对每个配制批号培育基进行促菌生长（灵敏度检查）试验，以考察培育基的质量。

按脱水培育基的生产批号做灵敏度检查是基于培育基的灭菌程序已经经过验证。

假如试验室使用的是商购的成品培育基,供应商应随培育基供应相应批次的培育基质量检测报告，报告包括培育基的PH值、无菌检查结果和促菌生长（灵敏度）试验结果等项目。

建议在使用某一新的成品培育基（新供应商或新培育基品种）时，应至少考察三个不同批次的培育基质量，只有三批质量均合格方可使用该培育基。

微生物限度检查用成品培育基一旦初试确认合格后，可审查供应商的质检报告，而不必每批再作无菌检查和灵敏度检查，但半年应至少检查一次，以亚核其质量。

用于无菌检查试验的每批培育基，均必需按规定进行灵敏度检查试验，此规定同样适用于试验室自行配制的培育基。

方案名称:胰酪胨大豆肉汤培养基适用性检查验证方案目录1. 验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证职责5. 合格标准6. 试验材料7. 菌液制备8. 菌液计数9. 验证方法10. 结论1. 验证目的：为证明胰酪胨大豆肉汤培养基适合于真菌、需氧菌的无菌检查及无菌灌装模拟试验，特制定本验证方案。

2. 参照标准：2005版中国药典二部附录XI H无菌检查法。

3. 验证项目：3.1. 胰酪胨大豆肉汤培养基灵敏度检查。

3.2. 胰酪胨大豆肉汤培养基无菌性检查。

4.职责：4.1验证委员会：负责验证方案及报告的批准并组织协调验证工作并签发验证证书。

4.2.验证组长4.2.1.负责验证方案的起草4.2.2.负责验证的协调工作，以保证本验证方案的顺利实施。

4.2.3.负责验证报告的审批。

4.2.4.负责发放验证证书。

4.2.5.负责再验证周期的确认。

4．3. 质保部4．3.1.负责验证方案审核4．3.2.负责取样及对样品的检验4．3.3.负责收集验证记录，并加以分析后，起草验证报告。

4．3.4.负责验证数据及结果的审核5. 合格标准：5.1.接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌、生孢梭菌（接种量<100CFU）的培养基管各两支和1支空白对照管在30℃～35℃培养3天；接种白色念珠菌、黑曲霉（接种量<100CFU）和1支空白对照管在23℃～28℃培养5天；逐日观察结果，加菌的培养基管均生长良好，空白对照管应无菌生长。

判该批的培养基灵敏度检查符合规定。

5.2.胰酪胨大豆肉汤培养基经121℃，15分钟高压蒸汽灭菌后培养应无菌生长。

6. 试验材料：6.1. 被验证物品：品名规格批号生产厂家6.2. 仪器设备：6.2.1. LMQ、R立式压力蒸汽灭菌器6.2.2. Y OKO-ZX紫外分析暗箱6.2.3. SW-EJ-2FB双人净化工作台6.2.4. 101-2A电热鼓风干燥箱6.2.5.SPX-250B型生化培养箱(23～28℃)6.2.6.PHW-200S恒温培养箱(35～37℃)6.3. 稀释剂灭菌注射用水、0.9%无菌氯化钠溶液6.4. 培养基备注：培养基按培养基管理制度SMP QC 0009.01配制6.5 验证用菌株：7. 菌液制备7.1.取经培养18~24小时的枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-6约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。

培养基灵敏度检查规程目的：建立培养基灵敏度检查的操作规程，保证无菌检查结果的准确性可靠性。

2.范围：本标准适用于培养基灵敏度检查。

3. 职责：QC无菌检验员对本标准的实施负责。

4.程序：4.1. 实验设备及用具：高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、注射器、针头、注射器盒、试管、试管架、搪瓷托盘、时钟、75%酒精棉球、无菌服。

4.2.培养基：需气菌、厌气菌培养基（流体硫乙醇酸盐培养基）、真菌培养基。

4.3.测试用菌种4.3.1. 藤黄微球菌[CMCC（B）28 001]4.3.2. 生孢梭菌[CMCC（B）64 941]4.3.3. 白色念珠菌[CMCC（F）98 001]4.4. 操作：4.4.1. 取藤黄微球菌、生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基的新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液作10倍系列稀释，制成1ml中含10-100个菌并计数。

4.4.2. 将藤黄微球菌、生孢梭菌的上述稀释液各1ml分别接种至每管装量为9ml的需气菌、厌气菌培养基3管，白色念珠菌的上述稀释菌液1ml，接种至每管装量为9ml的真菌培养基3管。

以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天并逐日记录结果。

4.5. 结果判定：以每株菌接种后的培养基不得少于2管呈现生长，即该培养基的灵敏度检查符合要求。

5. 附：培养基灵敏度检查记录ZL0081 00。

压力蒸汽灭菌化学指示卡使用规程目的：建立压力蒸汽灭菌化学指示卡使用规程，保证正确使用，对灭菌效果进行有效监测。

2. 依据：《压力蒸汽灭菌化学指示卡使用说明书》。

3. 范围：本标准适用于压力蒸汽灭菌化学指示卡对压力蒸汽灭菌（121℃，30分钟）的灭菌效果进行的监测。

4.职责：压力蒸汽灭菌操作人员对本标准的实施负责。

5.程序：5.1. 本指示卡用于下排气式压力蒸汽灭菌器灭菌效果的监测，指示卡上的指示色块在灭菌加热时由淡黄色变为黑色，随颜色变化的深浅可判断灭菌处理是否达到要求。

培养基灵敏度及适⽤性检查操作规程1. ⽬的：通过培养基适⽤性检查，确保购买的培养基符合实验要求。

2. 范围：本规程适⽤于技术质量部实验员对培养基适⽤性的检查。

3. 职责：质量部实验员负责执⾏此规程。

4. 内容：4.1 检验依据：《中华⼈民共和国药典》2015版4.2 试验⽤具：烧杯、三⾓瓶、酒精灯、接种环、平⽫、试管、吸管、移液枪、滴管、电⼦天平、电热恒温培养箱、⽣化培养箱或恒温恒湿培养箱、单⼈净化⼯作台、⾼压蒸汽灭菌器、微⽣物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查⽤培养基等。

4.3 ⽆菌培养基适⽤性检查：本检查可在供试品的⽆菌检查前或与供试品的⽆菌检查同时进⾏。

4.3.1 培养基：硫⼄醇酸盐流体培养基、胰酪⼤⾖胨液体培养基或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。

4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备⽅法稀释液、冲洗液配制后应采⽤验证合格的灭菌程序灭菌。

a) 0.1%⽆菌蛋⽩胨⽔溶液取蛋⽩胨1.0g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值⾄7.1±0.2，分装，灭菌。

b) pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液取磷酸⼆氢钾3.56g，⽆⽔磷酸氢⼆钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋⽩胨1.00g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

c) 根据供试品的特性，可选⽤其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%⽆菌氯化钠溶液）。

如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加⼊表⾯活性剂或中和剂等。

4.3.3 ⽆菌性检查：每批培养基随机取不少于5⽀（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应⽆菌⽣长。

4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所⽤的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中⼼获得的⼲燥菌种为第0 代），并采⽤适宜的菌种保藏技术进⾏保存，以保证试验菌株的⽣物学特性。

⾦黄⾊葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕⽣孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕⽩⾊念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕⿊曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种⾦黄⾊葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄胰酪⼤⾖胨液体培养基中或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基上，接种⽣孢梭菌的新鲜培养物⾄硫⼄醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24⼩时；b) 接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄沙⽒葡萄糖液体培养基中或沙⽒葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48⼩时，上述培养物⽤pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液或0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

药品无菌检查法培养基灵敏度检查法1•菌种(1)藤黄微球菌(Micrococcus Luteus)[CMCC(B)28001](2)生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B)64941](3)白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001]2•操作(1)取藤黄微球菌的营养琼脂斜面和白色念珠菌的真菌培养基琼脂斜面的新鲜培养物,分别用0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液；将生孢梭菌不含琼脂的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，吸入无菌离心管，离心，弃去上清液, 菌体用0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液。

分别取上述菌悬液，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至与细菌浊度标准管相同的浓度，然后作10倍系列稀释，制成1ml中含10~ 100个菌并计数。

(2)将藤黄微球菌、生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基的新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液作10倍系列稀释,制成1ml中含10~100个菌并计数。

将藤黄微球菌的上述(1)或(2)的稀释菌液各1ml,分别接种至每管装量为9ml的需气菌、厌气菌培养基3管，生孢梭菌的上述(1)或(2)的稀释菌液各1ml,分别接种至每管装量为12ml的需气菌、厌气菌培养基3管，白色念珠菌的上述(1)或(2)的稀释菌液各1ml,接种至每管装量为9ml的真菌培养基3管,以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天并逐日记录结果。

3.结果判定以每株菌接种后的培养基不得少于2管呈现生长，即该培养基的灵敏度检查符合要求。

对照用菌液1.金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)菌液取金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］的营养琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内, 在30〜35C培养16〜18小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10〜100个菌。

2.生孢梭菌(Clostridium sporogeneS菌液取生孢梭菌［CMCC(B)64941］的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物1白金耳，接种至相同培养基内，在30~35C培养18〜24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10〜100个菌。

培养基灵敏度检查计划方案一、引言培养基灵敏度检查是一种常见的微生物实验室技术，用于评估微生物对不同抗生素的敏感性。

该检查对于指导临床使用抗生素和防控细菌耐药性具有重要意义。

本文旨在介绍培养基灵敏度检查的计划方案，以确保检查的准确性和可靠性。

二、目标和背景培养基灵敏度检查计划的主要目标是评估微生物对抗生素的抵抗能力，以确定临床治疗中最佳的抗生素选择。

通过此计划，可以培养出对不同抗生素具有不同耐药性的细菌菌株，为耐药性研究和抗生素合理使用提供依据。

三、实验步骤和方法1. 样品采集和处理从临床病例中采集所需的微生物样品，并进行初步处理。

确保采样和处理符合卫生与实验室安全规范，避免污染和误差。

2. 培养基准备准备适当的培养基，根据不同抗生素的需求进行调整。

确保培养基无污染，并能提供细菌正常生长所需的养分。

3. 培养微生物将样品接种到培养基中，通过孵育箱或恒温培养箱，为微生物提供适宜的温度和湿度条件，以促进细菌的生长。

4. 抗生素试纸片制备和测定按照厂家说明书的指导，制备不同抗生素的试纸片。

将试纸片分别放置在含有培养细菌的琼脂培养基平板上，并在指定时间内孵育。

5. 结果评价观察试纸片周围的抑菌圈直径，使用规定的标准参考表来解读结果。

根据抑菌圈直径的大小，判断细菌对抗生素的敏感性。

6. 数据分析和报告将结果数据记录下来，并根据标准参考表评估每个抗生素的灵敏度。

最后，通过报告的形式将灵敏度结果提供给临床医生或研究人员。

四、质量控制和安全措施1. 质量控制- 确保培养基质量良好，符合规定的配方和自凝性能要求。

- 重视实验室清洁和消毒，避免污染。

- 使用符合标准的试纸片，并按照说明书操作。

- 严格按照标准参考表评估结果。

2. 安全措施- 操作人员需佩戴个人防护装备，如手套和口罩，避免直接接触微生物和抗生素。

- 遵循实验室安全规范和卫生要求。

- 正确处置实验废物，避免环境和人员污染。

五、预期结果和讨论通过培养基灵敏度检查，可以获得各个抗生素对不同菌株的抑菌效果。