实验用培养基适用性检查标准操作规程

052⽆菌检查⽤培养基的适⽤性检查标准操作规程⽬的：建⽴⼀个⽆菌检查⽤培养基适⽤性检查的标准操作规程。

范围：化验室菌检岗位操作者。

责任：化验室检验员。

程序：1. 概述：培养基质量是影响微⽣物检验结果的重要环节，⽆菌检查⽤培养基的⽆菌性检查和灵敏度检查⽆菌检查结果判断的重要影响因素。

2. 培养基适⽤性检查的范围：2010年版《中国药典》规定微⽣物检查中成品培养基、由脱⽔培养基或按处⽅配制的培养基均应进⾏培养基适⽤性检查。

3. 试验⽤菌株⾦黄⾊葡萄球菌［CMCC(B)26003］铜绿假单胞菌［CMCC(B)10104］枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501］⽣孢梭菌［CMCC（B）64941］⽩⾊念珠菌［CMCC(F)98001］⿊曲霉［CMCC(F)98003］4. 试验⽤培养基4.1 菌液制备⽤培养基营养⾁汤培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基4.2 适⽤性检查培养基硫⼄醇酸盐流体培养基改良马丁培养基胰酪胨⼤⾖⾁汤培养基（TSB）5. 试验⽤稀释剂0.9%⽆菌氯化钠溶液含0.05%（ml/ml)聚⼭梨酯80的0.9%氯化钠溶液6. 试验⽤仪器设备6.1 恒温培养箱（30～35℃）、霉菌培养箱（23～28℃）、脉动真空蒸汽灭菌器、⽣物安全柜、电热恒温⿎风⼲燥箱、微型智能集菌仪。

6.2 锥形瓶、培养⽫（90mm）、量筒、试管及塞、吸管（1ml分度0.01，10ml分度0.1）6.3 接种环、酒精灯、酒精棉球、打⽕机、记号笔。

7 操作步骤：7.1培养基⽆菌性检查：每批培养基随机取不⼩于5瓶(⽀)，培养14天。

7.2培养基灵敏度检查：7.2.1菌液的制备7.2.1.1 接种铜绿假单胞菌、⾦黄⾊葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄营养⾁汤培养基中，于30～35℃培养18～24h，取上述培养物1ml，⽤ 0.9%⽆菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液，备⽤。

7.2.1.2 接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄改良马丁培养基上，于23～28℃培养24～48h，取上述培养物1ml，⽤0.9%⽆菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液备⽤。

目的：制定培养基配制、培养基适用性检查的标准操作程序。

范围：适用于微生物实验室培养基的配制和适用性检查。

责任者：微生物检验员所用器具、仪器、材料、菌种器具、仪器：高压蒸汽灭菌锅、高温灭菌柜、隔水恒温培养箱、生化培养箱、双人净化操作台、单人净化操作台、干燥箱、恒温水浴锅、电子天平、500ml三角瓶、移液管、培养皿、试管、接种环、酒精灯材料：标准干燥培养基（购于生物研究所）、待验证培养基菌种：大肠杆菌CMCC（B）44102、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、枯草芽孢杆菌CMCC （B）63501、白色念球菌CMCC （F）10231沙门氏菌CMCC （B）500941. 培养基的配制1.1 准备工作1.1.1 选择适宜容量的容器配制试剂，配制培养基的容器应为玻璃容器，以避免接触金属离子，如吸管、试管、三角瓶和平皿等，应按《玻璃容器清洗规程》洗涤、干燥、灭菌。

1.1.2 配制用水培养基配制用水应为纯化水，纯化水应临用新配。

1.2 配制1.2.1 记录所用脱水培养基的品名、批号、生产日期、生产厂家及配制处方。

1.2.2 用分度值为0.01的电子天平准确按处方量进行称量并装入三角瓶内。

1.2.3 用量筒按照培养基处方配比加入纯化水。

1.2.4 用硅胶橡皮塞塞上瓶口，轻轻振摇使充分混匀。

1.2.5 培养基在配置后必须进行PH值的测定，以确保符合药典要求和生产厂家的规定，一般情况下，PH值不能超过规制值±0.2。

1.2.6 用牛皮纸包扎瓶口，贴上标签，注明品名、批号、配置日期、配置人、有效期。

1.3 灭菌将上述已配制的培养基放入高压蒸汽灭菌锅按培养基灭菌条件进行灭菌（每次配制的培养基应在2小时内进行有效灭菌，否则极易染菌。

若未能在2小时内进行有效灭菌，则倒掉重新配制）。

若没有具体要求，一般灭菌温度（压力）为121℃（0.1MPa），灭菌时间为20分钟。

灭菌完成后，待高压灭菌锅温度、压强自然下降为“0”值，方可取出灭菌好的培养基（不可未降温时拿出，否则培养基内外会形成负压，易染菌）。

培养基适用性检查SOP1．目的规范计数培养基的适用性检查，确保微生物限度检查培养基计数的准确性。

2．范围适用于本公司检定用菌种。

3．定义无4．职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行；4.2.QA、QC组长质量管理部经理负责本规程的审核；4.3.质量总监负责批准本规程；4.4.QA负责本规程执行的监督。

5．引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部6．材料6.1.房屋、设备、试验用具6.1.1.房屋：阳性实验室6.1.2.设备：100级洁净工作台，30～35℃培养箱，20～25℃培养箱，立式灭菌器6.1.3.试验用具：隔离服、洁净工作服、工作鞋、口罩、帽子、10ml刻度吸管、1ml刻度吸管、毛巾、吸耳球、记号笔、中试管架、酒精灯、镊子、酒精棉、三角瓶、托盘、电子天平、药勺、量筒等。

6.2.菌种检查所用菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26003〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63501〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98001〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98003〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B）44102〕：用于微生物限度培养基的适用性检查；6.3.培养基:营养琼脂斜面培养基（中管）、硫乙醇酸盐流体培养基（中管）、改良马丁琼脂斜面培养基（中管）6.4.试剂与配制0.9%无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g，加注射用水1000ml，充分溶解摇匀，加塞、包扎，经121℃30分钟高压灭菌，即得。

无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程目的：建立无菌检查用培养基适用性检查标准操作规程。

范围：适用于无菌检查使用培养基的适用性检查。

依据：中国药典》2015年版《药品生产质量管理规范》2010年修订《中国药品检验标准操作规程》2010年版责任：QC化验员对实施本规程负责。

内容:1、概要：无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌检查及灵敏度检查要求。

本检查可在供试品的检查前或与供试品的检查同时进行。

2、材料及设备2.1 生化培养箱2.2 生物安全柜2.3 中国浊度标准管（由中国药品生物制品检定所提供）2.4 灭菌试管、灭菌注射器2.5 0.9%无菌氯化钠溶液2.6 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液：取聚山梨酯80 0.05ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠至100ml，混匀，灭菌即可。

3、无菌检查培养基的适用性检查3.1无菌性检查取新鲜配制灭菌的培养基各5瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃，胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃，培养14天，应无菌生长。

3.2灵敏度检查3.2.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌[Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003]铜绿假单胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104]枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501]生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC(B) 64941]白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001]黑曲霉[Aspergillus niger CMCC(F) 98003]3.2.2菌液制备3.2.2.1 金黄色葡萄球菌菌悬液制备3.2.2.1.1 取金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时，取新鲜传代菌种一支待用。

培养基灵敏度及适⽤性检查操作规程1. ⽬的：通过培养基适⽤性检查，确保购买的培养基符合实验要求。

2. 范围：本规程适⽤于技术质量部实验员对培养基适⽤性的检查。

3. 职责：质量部实验员负责执⾏此规程。

4. 内容：4.1 检验依据：《中华⼈民共和国药典》2015版4.2 试验⽤具：烧杯、三⾓瓶、酒精灯、接种环、平⽫、试管、吸管、移液枪、滴管、电⼦天平、电热恒温培养箱、⽣化培养箱或恒温恒湿培养箱、单⼈净化⼯作台、⾼压蒸汽灭菌器、微⽣物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查⽤培养基等。

4.3 ⽆菌培养基适⽤性检查：本检查可在供试品的⽆菌检查前或与供试品的⽆菌检查同时进⾏。

4.3.1 培养基：硫⼄醇酸盐流体培养基、胰酪⼤⾖胨液体培养基或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。

4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备⽅法稀释液、冲洗液配制后应采⽤验证合格的灭菌程序灭菌。

a) 0.1%⽆菌蛋⽩胨⽔溶液取蛋⽩胨1.0g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值⾄7.1±0.2，分装，灭菌。

b) pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液取磷酸⼆氢钾3.56g，⽆⽔磷酸氢⼆钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋⽩胨1.00g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

c) 根据供试品的特性，可选⽤其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%⽆菌氯化钠溶液）。

如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加⼊表⾯活性剂或中和剂等。

4.3.3 ⽆菌性检查：每批培养基随机取不少于5⽀（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应⽆菌⽣长。

4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所⽤的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中⼼获得的⼲燥菌种为第0 代），并采⽤适宜的菌种保藏技术进⾏保存，以保证试验菌株的⽣物学特性。

⾦黄⾊葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕⽣孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕⽩⾊念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕⿊曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种⾦黄⾊葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄胰酪⼤⾖胨液体培养基中或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基上，接种⽣孢梭菌的新鲜培养物⾄硫⼄醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24⼩时；b) 接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄沙⽒葡萄糖液体培养基中或沙⽒葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48⼩时，上述培养物⽤pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液或0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

1. 目的：通过培养基适用性检查，确保购买的培养基符合实验要求。

2. 范围：本规程适用于技术质量部实验员对培养基适用性的检查。

3. 职责：质量部实验员负责执行此规程。

4. 内容：4.1 检验依据：《中华人民共和国药典》2015版4.2 试验用具：烧杯、三角瓶、酒精灯、接种环、平皿、试管、吸管、移液枪、滴管、电子天平、电热恒温培养箱、生化培养箱或恒温恒湿培养箱、单人净化工作台、高压蒸汽灭菌器、微生物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查用培养基等。

4.3 无菌培养基适用性检查：本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。

4.3.1 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。

4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

a) 0.1%无菌蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。

b) pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，无水磷酸氢二钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

c) 根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%无菌氯化钠溶液）。

如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。

4.3.3 无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。

4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；b) 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48小时，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

培养基适用性检查操作规程编制人：日期：部门：微生物室审核人：日期：替代：批准人：日期：执行日期：1、目的建立一个培养基适用性检查操作规程。

2、适用范围微生物限度及无菌检查的成品培养基，由脱水培养基或按处方配置的培养基均应进行培养基适用性检查。

3、检验依据按2010年版《中国药典（一、二部）》附录无菌方法进行测试检查。

4、试验所需菌种大肠埃希菌；金黄色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；生孢梭菌；白色念珠菌；黑曲霉。

5、标准规定5.1 无菌培养基使用性检查5.1.1 无菌性：每批培养基随机取不少于5支（瓶），经培养14天应无菌生长。

5.1.2 灵敏度：经培养对照管应无菌生长，试验管接菌小于100cfu均应生长良好。

5.2 微生物限度使用性检查5.2.1 细菌、霉菌和酵母菌计数检查取标准菌株大肠、金葡、枯草、白念、黑曲霉菌50～100cfu,分别接入于测试与对照培养基，经规定温度、时间培养，测试结果测试与对照培养基平均菌落数比不应小于70%。

5.2.2 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌检查取新鲜标准菌株大肠、金葡、铜绿假单胞菌制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试，结果被测培养试验菌的生长反应情况与对照培养基一致。

（液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长；固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征）。

5.2.3 大肠埃希菌、大肠菌群检查取新鲜标准菌株大肠、金葡球菌制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力即指示能力测试，结果被测培养基试验菌的的生长反应情况应与对照培养基一致。

（液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长；固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征）。

5.2.4白色念珠菌、梭菌检查取新鲜标准菌株大肠、白念、生孢梭制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试，结果被测培养基试验菌的生长反应情况应与对照培养基一致。

起草人Prepared by:起草日期Date:_____________________ QC审核人Reviewed by:审核日期Date:_____________________ QC审核人Reviewed by:审核日期Date: QA批准人Approved by:批准日期Date:质量部QD目的Purpose为保障微生物检验的准确性及相关工作特制定本规定。

范围Scope本程序适用于微生物限度测定培养基的适用性检查及相关工作。

职责Responsibility分析员：严格按照本操作规程执行。

及时完成各类相关记录。

在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。

主管：监督本操作规程的执行。

对检验员进行必要的培训。

指导任何可能的OOS和偏差调查。

内容procedure1检验员应根据培养基配制程序或培养基各自的说明书配制培养基。

2试验用菌种及培养基2.1菌种:2.1.1培养基灵敏度测试所用的菌株传代次数不得超过5代，从国家药检所或菌种保藏中心购买。

2.1.2枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[ATCC 6633]2.1.3大肠埃希菌(Escherichia coli) [ATCC 8739]2.1.4金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [ATCC 6538]2.1.5白色念珠菌(Candida albicans) [ATCC 10231]2.1.6黑曲霉(Aspergillus niger)[ATCC 16404]2.1.7伤寒沙门菌(Salmonella) [ATCC 14028]2.1.8铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [ATCC 9027]2.2培养基2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌。

2.2.2大豆酪蛋白消化肉汤Soybean-Casein Digest Broth2.2.3大豆酪蛋白消化琼脂Soybean-Casein Digest Agar2.2.4沙氏葡萄糖琼脂Sabouraud Dextrose Agar2.2.5肠道菌增菌肉汤Enterobacteria Enrichment Broth Mossel2.2.6紫红色胆汁葡萄糖琼脂Violet Red Bile Glucose Agar2.2.7麦康凯肉汤MacConkey Broth2.2.8麦康凯琼脂MacConkey Agar2.2.9RV沙门氏菌富集肉汤Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth2.2.10木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂Xylose Lysine Deoxycholate Agar2.2.11甘露醇氯化钠琼脂培养基Mannitol Salt Agar2.3微生物计数培养基的适用性检查2.3.1微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

培养基适用性检查操作规程
1．目的：检查培养基对相关菌种的适用性，保证微生物实验结果的有效性。

2. 适用范围：适用于首次使用的培养基种类、购入的新批次培养基的适用性检查。

3. 依据：《中国药典》（2010版）四部：无菌检查法/微生物限度检查法-培养基的适用性检查
4. 职责：微生物检验员实施，QA监督。

5. 内容：
5.1 设备和材料
恒温培养箱、无菌培养皿/试管、接种环、酒精灯/火焰喷枪、超净工作台、＜100CFU/ml 的工作菌液、灭菌后的培养基（无菌检查用、计数用）
5.2 培养基适用性检查-无菌检查用
5.2.1 无菌性：
每种培养基每批随机抽取不少于10支，其中5支置30~35℃、另5支置20~25℃培养14天。

14天后均应无菌生长。

5.2.2 灵敏度
取培养基3支，其中2支接种相应的工作菌液各1ml，另1支不接种，作为空白对照，置30~35℃培养3天（或20~25℃培养5天）。

逐日观察结果。

空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，则判定该培养基的灵敏度检查符合规定。

5.3 培养基适用性检查-计数用
取无菌培养皿，吸取相应的工作菌液各1ml注入无菌培养皿，立即倾注培养基，每株试验菌接种2个培养皿，混匀，凝固。

同时用对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

置30~35℃培养48小时（或23~28℃培养72小时），计数。

若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。

6.相关表格：《培养基适用性检查记录》。

培养基的适用性检查和方法适用性试验操作规程
培养基的适用性检查和方法适用性试验
操作规程
文件编号：
版本号：C/0 分发号：
受控状态：
编制部门：质管部
编制人: 日期：
审核人: 日期：
批准人: 日期：
发布实施
分发部门：□总经理□行政部□采购部□销售部□生产部□质管部□研发部□设备部□存档
管数从表3查被测供试品每1g或每1ml中需氧菌总数的最可能数。

6.3.5 结果判断计数方法适用性试验中，采用平皿法或薄膜过滤法时，试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5～2范围内；采用MPN法时，试验组菌数应在菌液对照组菌数的95%置信限内。

若各试验菌的回收试验均符合要求，照所用的供试液制备方法及计数方法进行该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。

方法适用性确认时，若采用上述方法还存在一株或多株试验菌的回收达不到要求，那么选择回收最接近要求的方法和试验条件进行供试品的检查。

培养基的适用性检查和方法适用性试验操作规程
11/11。

培养基适用性检查记录一、实验目的本实验旨在检查培养基的适用性，包括其成分是否合适、无污染、无毒性，并能够提供对所需生物体的适宜环境。

二、实验材料和仪器1.培养基样品：包括液体培养基和固体培养基。

2.培养基成分：包括蛋白胨、琼脂、糖类、无机盐等。

3.实验生物体：包括细菌、酵母菌等。

4.培养基制备器具：包括培养皿、试管、移液器、烧杯等。

5.实验室基本设备：包括电子天平、离心机、恒温培养箱等。

三、实验步骤1.培养基成分检查首先，检查培养基成分的符合度。

查阅培养基配方，并逐一准备并称量所需成分。

使用电子天平进行称量，确保称量准确。

检查成分是否存在误差，是否符合配方要求。

2.培养基配制检查根据培养基配方，准备液体培养基和固体培养基。

对液体培养基，按照配方将成分溶解在适量的蒸馏水中，并进行调pH处理。

对固体培养基，将成分溶解在蒸馏水中，并加入适量的琼脂糖或琼脂进行制成。

3.培养基无菌检查将配制好的培养基分别装入培养皿或试管中，并在恒温箱中进行高温高压灭菌处理。

灭菌结束后，在无菌操作台上进行无菌条件下的检查。

观察培养基是否有异常物质存在，如颜色变化、气泡、异味等。

4.培养基毒性检查将培养基分别接种相应的生物体，观察生物体的生长情况及有无异常现象。

观察时间可根据生物体的生长周期安排。

5.培养基成分调整及检查根据对培养基适用性的判断，如发现培养基的补充成分不足，或适用生物体的无法正常生长，可以对培养基的配方进行调整。

通过增加或减少特定成分的用量，或替换一些成分，再进行上述实验步骤进行再次检查。

四、实验结果和分析经过以上实验步骤，我们对培养基的适用性进行检查，并对实验结果进行记录和分析。

1.培养基成分符合度：通过称量成分的准确性和配方的符合度，可以判断培养基成分是否合适。

2.培养基配制检查：根据液体培养基和固体培养基的制备步骤，以及配方的准确性，可以判断培养基的配制是否正确。

3.培养基无菌检查：通过观察培养基灭菌后是否有异常现象，如颜色变化、气泡、异味等，可以判断培养基是否无菌。

培养基适用性标准操作规程第 1 页共4页1目的规范培养基适应性检查的标准操作。

2范围本规程适用于《中华人民共和国药典》2010年版二部规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检査。

3责任3.1本规程由质量保证中心主任指定人员起草。

3.2与本文件相关的部门负责人参与审阅，企业质量负责人批准本文件。

3.3质量控制中心负责具体实施本规程。

4内容4.1依据4.1.1《药品生产质量管理规范》（2010年修订）4.1.2《中华人民共和国药典》2010年版二部4.2试验用菌株及培养基4.3试验用仪器设备4.3.1恒温培养箱（30～35℃）、霉菌培养箱（23～28℃）、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱、恒温水浴锅、振荡器、电冰箱、天平4.3.2锥形瓶、培养皿（9cm）、量筒、试管及塞、吸管（1ml分度0.01，10ml分度0.1）4.3.3接种环、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、火柴、记号笔、灭菌镊子、不锈钢药匙、白瓷盘。

4.4操作步骤4.4.1菌液的制备4.5.1.1 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h。

取30～35℃培养18～24h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液，备用。

4.5.1.2 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，于23～28℃培养24～48h。

取于23～28℃培养24～48h的白色念珠菌新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液备用。

4.5.1.3 接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液备用。

培养基适用性检查参考《中国药典》2010年版取大肠埃希菌，金葡菌，铜绿菌，各50-100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪胨大豆琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀。

凝固，置30-35℃培养48h,计数。

取白念、黑曲各50-100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置20-25℃，培养72h，计数。

同时，用对应的对照培养基替代，被检查的培养基，进行上述试验。

结果判断：1.若被检的培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%；2.菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，则判定该培养基的适用性符合规定。

30-35℃培养48h,计数 表一20-25℃，培养72h,计数 表二结论： 该培养基的适用性符合规定。

培养基类型菌落 菌种类型A.大肠埃希菌B.金黄色葡萄球菌C.铜绿假单孢杆菌形态、 大小 菌落数目 形态、大小 菌落数目 形态、 大小菌落数目 各皿菌落数/cfu 平均菌落数/cfu 各皿菌落数/cfu 平均菌落数/cfu 各皿菌落数/cfu 平均菌落数/cfu1胰酪胨大豆琼脂培养基 1皿（ ）1皿（ ）1皿（ ）2皿（ ） 2皿（ ） 2皿（ ） 2 对照培养基1皿（ ）1皿（ ）1皿（ ）2皿（ ）2皿（ ）2皿（ ）计数结果比较2组÷1组 = ？是否>70%/ （ ）/（ ）= / （ ）/（ ）= / （ ）/（ ）=培养基类型菌落 菌种类型D.白念E.黑曲形态、 大小 菌落数目 形态、 大小 菌落数目 各皿菌落数/cfu平均菌落数/cfu 各皿菌落数/cfu 平均菌落数/cfu1沙氏葡萄糖琼脂培养基 1皿（ ）1皿（ ）2皿（ ） 2皿（ ） 2 对照培养基1皿（ ）1皿（ ）2皿（ ）2皿（ ）计数结果比较2组÷1组 = ？是否>70% / （ ）/（ ）= / （ ）/（ ）=玫瑰红钠琼脂对照培养基9.0g/300mlRose Bengal Agar Reference Medium (RBARM)批号：135005-201001用途：本品用于霉菌及酵母菌计数培养基适用性实验或检验。

审核日期颁发部门质保部受控号批准日期分发部门质量控制科质保部1. 目的：建立控制菌检查用培养基的适用性检查的标准操作规程，确保培养基的有效性和试验结果的科学性。

2．适用范围本规程适用于微生物限度检查中所用控制菌培养基的适用性检查。

3．引用相关文件《中华人民共和国药典2010年版一部》附录XIII C 微生物限度检查法4．培养基的适用性检查控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。

4.1.菌种金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]，乙型副伤寒沙门菌[CMCC(B)50094]，大肠埃希菌[CMCC(B)44102]，铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]。

实验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冻干粉菌株为0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证实验菌株的生物学特性。

4.2.菌液制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时，取上述培养物1ml用0.9％无菌氯化钠溶液做10倍递增稀释，一般金黄色葡萄球菌稀释至10-6，铜绿假单胞菌、大肠埃希菌稀释至10-7，枯草芽孢杆菌稀释至10-5，制成每1ml含菌数为10-100cfu的菌悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。

4.3.检测项目及方法控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。

各培养基的检测项目及所用菌种见下表1：表1控制菌检查用培养基的促生长、抑制和指示能力检查审核日期颁发部门质保部受控号批准日期分发部门质量控制科质保部控制菌检查培养基特性试验菌株大肠埃希菌胆盐乳糖培养基4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基促生长能力抑制能力促生长+指示能力促生长+指示能力大肠埃希菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌大肠埃希菌大肠菌群乳糖发酵培养基乳糖发酵培养基曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基促生长能力抑制能力促生长+指示能力促生长+指示能力大肠埃希菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌大肠埃希菌沙门菌营养肉汤培养基四硫磺酸钠亮绿培养基胆盐硫乳琼脂培养基或沙门、志贺氏属琼脂培养基曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂三糖铁琼脂培养基促生长能力促生长能力抑制能力促生长+指示能力促生长+指示能力指示能力乙型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌金黄色葡萄球菌乙型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌铜绿假单胞菌胆盐乳糖培养基溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基绿脓菌素测定用培养基促生长能力抑制能力促生长能力抑制能力促生长+指示能力铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌营养肉汤甘露醇氯化钠琼脂培养基促生长能力抑制能力促生长+指示能力抑制能力金黄色葡萄球菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌4.3.1液体培养基促生长能力检查分别接种不大于100cfu的试验菌（见表1）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。

微生物实验室培养基适用性操作规程建立培养基适用性检查操作规程，保证培养基的质量，确保检验结果的准确性。

本规程规定了培养基适用性检查方法和操作要求，适用于微生物实验室计数用培养基、控制菌检查用培养基的适用性检查。

1、简述1.1 培养基适用性检查试验可用于确定实验室所使用培养基(包括购置的不同批号的成品培养基、不同批号的脱水培养基、按处方自行配制培养基所用不同批次的原材料等)、制备程序（包括水质控制、配制方法、灭菌程序等）、保存条件（温度、湿度、时间及盛装培养基的容器条件等）等是否满足微生物限度检查要求。

1.2 计数用培养基适用性检查包括需氧菌、霉菌及酵母菌总数计数。

1.3 控制菌检查用培养基适用性检查包括促生长能力、抑制能力及指示特性的检查。

2 计数用培养基适用性检查微生物限度检查中计数用培养基有5种，胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、R2A琼脂培养基、平板计数培养基。

2.1 培养基及配制2.1.1 培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂对照培养基；沙氏葡萄糖琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂对照培养基；R2A琼脂培养基、R2A琼脂对照培养基；平板计数培养基。

2.1.2 配制：照《培养基配制标准操作规程》配制。

2.2 试剂及稀释剂配制2.2.1 试剂：pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、聚山梨酯80、氯化钠。

2.2.2 稀释剂配制➢∙pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：称取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液14.63g,加水1000mL溶解，分装，灭菌（121℃、15min）。

➢∙0.05％（mL/mL）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取已经灭菌好的聚山梨酯80（1mL），加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，摇匀，即得。

➢∙0.9％无菌氯化钠溶液：称取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000mL，分装，灭菌（121℃、15min）。

3 试剂及消毒液配制3.1 试剂新洁尔灭溶液、84消毒液、苯酚、75％医用消毒酒精。

培养基使用性检查操作规程一、目的为了保证培养基使用性能的准确性和可靠性，提高实验的可重复性和数据的可比性，制定本操作规程。

二、范围本操作规程适用于所有使用培养基进行实验的实验室。

三、基本要求1.培养基的制备应严格按照相关标准和实验方法进行，确保结果的准确性。

2.培养基的使用前应进行必要的性能检查，包括外观检查、pH值检查、无菌性检查等。

3.培养基的使用应遵循实验室的质量管理体系，在规定的环境下进行操作，保证实验数据的可信度。

四、操作步骤1.外观检查（1）取适量的培养基进入清洁的透明容器中。

（2）观察培养基的颜色、气味、透明度等特征。

（3）如培养基颜色异常、有异味或有悬浮物等异常情况，应停止使用，并报告有关部门。

2.pH值检查（1）取适量的培养基进入清洁的容器中。

（2）使用pH计将电极插入培养基中，稳定数秒。

（3）记录pH值，并与标准值进行对比。

（4）如pH值明显偏离标准值，应停止使用，并调整或重新制备培养基。

3.无菌性检查（1）取适量的培养基进入清洁的容器中。

（2）将容器密封后，通过高压蒸汽灭菌器进行灭菌处理，时间和温度按照实验要求进行设置。

（3）取适量培养基后，进行细菌培养或真菌培养的无菌性检查。

（4）观察培养基是否有细菌或真菌生长，如有生长应停止使用，并进行必要的分析和处理。

4.其他检查（1）根据具体实验需求，进行其他必要的检查，如营养成分检查、凝固性检查、适用菌种检查等。

（2）根据实验室的质量管理要求，记录检查结果，并进行必要的数据分析和报告。

五、质量控制1.操作人员应具备必要的实验技术和操作经验，并参加相关的培训和考核。

2.培养基的制备和使用应符合实验室的相关质量管理体系的要求，包括设备的校准、试剂的验证和记录等。

3.培养基的存储和管理应按照相关规定进行，确保使用时的质量。

4.定期对培养基的性能进行复核，确保实验数据的可靠性。

六、异常处理1.如培养基在外观检查、pH值检查、无菌性检查等环节出现异常，则应停止使用，并进行必要的分析和处理。

培养基适用性检查标准操作规程1. 目的1.目的建立培养基配制适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作。

2. 范围适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。

3. 依据药品生产质量管理规范（2010年版修订）、《中华人民共和国药典》第四部4. 职责4.1 微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验正常进行。

4.2 微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。

5. 程序5.1 培养基的贮藏5.1.1 未开封的胶水培养基贮存于阴谅室，使用培养基处于低温、干燥、和避光条件下。

开封的胶水培养基应盖紧，贮存于阴谅库。

5.1.2 灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存，培养基储存期为7天。

5.2 培养基的配制应填写培养基配制及使用记录。

供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。

5.3 培养基的质量控制5.3.1 计数培养基适用性检查菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代( 从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表1。

菌液制备按表 1规定程序培养各试验菌株。

取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液;取黑曲霉的新鲜培养物加入适量含0.05% ( ml/mI)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05% ( mI/mI )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%( mI/ml )聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05% ( mI/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用;若保存在2～ 8C,可在24小时内使用。