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植物细胞培养研究报告1. 引言植物细胞培养是一种重要的生物技术，在植物育种、药物研发以及植物疾病治疗等领域有着广泛的应用。
本文旨在综述植物细胞培养的研究进展和应用现状，介绍其原理、培养条件以及未来发展方向。
2. 原理植物细胞培养是指将植物的组织或细胞分离、培养并在适当的条件下进行生长和繁殖。
该技术主要包括组织培养、悬浮细胞培养以及根瘤菌介导的植物转化等方面。
2.1 组织培养组织培养是将植物的组织分离并在培养基上进行培养。
这一技术常常用于植物育种中的无性繁殖以及植物的快速繁殖。
通过调节培养基的营养成分和激素浓度，可以实现不同组织的分化、增殖和再生。
2.2 悬浮细胞培养悬浮细胞培养是将植物的细胞分离并在液体培养基中进行培养。
这一技术常常用于植物次生代谢产物的生产以及基因工程中的表达载体构建。
通过控制培养基的pH值、温度和搅拌速度等因素，可以提高细胞培养的效率和产量。
2.3 根瘤菌介导的植物转化根瘤菌介导的植物转化是利用根瘤菌作为载体将外源基因转入植物细胞中的一种技术。
这一技术常常用于植物的基因工程以及抗病性的提高。
通过优化转化体系和筛选转化的植株，可以实现对目标基因的引入和稳定表达。
3. 培养条件植物细胞培养的成功与否与培养条件密切相关。
以下是常用的培养条件：•温度：通常在20-25摄氏度之间进行培养。
•光照：对于光合植物，适当的光照条件是保证培养成功的重要因素。
•培养基：培养基的配方和成分对植物细胞的生长和繁殖有重要影响，常用的培养基包括MS基础培养基、B5基础培养基等。
•激素：细胞分化和增殖需要适当的激素刺激，如生长素、激动素和细胞分裂素等。
4. 应用现状植物细胞培养技术在植物育种、药物研发以及植物疾病治疗等领域有着广泛的应用。
4.1 植物育种植物细胞培养可以通过无性繁殖的方式，实现对优异品种的快速繁殖。
同时，通过基因工程技术和基因编辑技术，还可以实现对目标性状的改良和优化。
4.2 药物研发植物细胞培养可以用于植物次生代谢产物的生产。
植物组织培养实验报告植物组织培养是一种重要的生物技术手段，通过对植物细胞和组织进行离体培养，可以实现植物再生、遗传改良、病毒检测等多种目的。
本实验旨在探究植物组织培养的基本原理和操作方法，以及培养条件对植物再生的影响。
首先，我们选择了小麦离体子叶和茎段作为实验材料，进行了消毒处理和植物组织培养基的配制。
消毒处理是植物组织培养的关键步骤之一，它能有效杀灭外源微生物，保证培养组织的纯净性。
接着，我们将消毒后的植物材料转移到含有植物生长调节剂的培养基上，进行培养。
在培养的过程中，我们注意观察培养组织的生长情况，记录下不同处理条件下植物再生的效果。
实验结果表明，植物组织培养的成功与否受到多种因素的影响，包括植物材料的选择、培养基的成分、光照和温度等环境条件。
在本次实验中，我们发现小麦离体子叶的再生能力较强，而茎段的再生效果较差。
此外，培养基中生长调节剂的种类和浓度也对植物再生有显著影响，适当的生长调节剂可以促进再生过程，而过高或过低的浓度则会抑制再生。
综合实验结果，我们得出了一些结论和建议，首先，选择适宜的植物材料对于植物组织培养至关重要，不同植物材料的再生能力存在差异，需要根据具体情况进行选择；其次，培养基的配制需要根据具体植物材料和培养目的进行调整，合适的生长调节剂浓度可以提高再生效率；最后，培养条件的控制也是影响植物组织培养效果的重要因素，包括光照、温度、湿度等，都需要进行合理的调节。
总之，植物组织培养是一项复杂而有趣的实验技术，通过不断的实践和探索，我们可以更好地理解其中的原理和规律，为植物育种和生物工程领域的研究提供重要的技术支持。
希望本次实验结果能对相关领域的研究工作有所启发，也希望能为植物组织培养技术的进一步完善贡献一份力量。
植物实习报告
实习时间，2022年7月1日至2022年8月15日。
实习地点，XX植物园。
实习内容：
在植物园的实习期间，我参与了多项植物养护工作。
首先是植物的浇水和修剪，我学会了根据不同植物的需水量和生长习性来合理浇水，并且掌握了修剪植物的技巧，使植物能够保持健康的生长状态。
其次是植物的病虫害防治工作。
在实习期间，我学习了如何识别植物的常见病虫害，并且掌握了一些病虫害的防治方法，包括喷洒农药和采用生物防治等方法。
另外，我还参与了植物的繁殖工作。
通过扦插、分株和播种等方式，我学会了如何进行植物的繁殖工作，并且在实践中积累了丰富的经验。
实习收获：
通过这段时间的实习，我对植物的养护和管理有了更深入的了解，提高了自己的实际操作能力。
同时，我还学到了很多关于植物的知识，对植物的生长习性和繁殖方式有了更清晰的认识。
在实习期间，我还与植物园的工作人员进行了交流和学习，他们分享了很多宝贵的经验和技巧，使我受益匪浅。
总结：
这段实习经历让我对植物园的工作有了更深入的了解，也让我更加热爱植物。
我将会继续努力，不断学习，为保护和繁衍植物做出自己的贡献。
感谢植物园给予我这次宝贵的实习机会，让我收获满满，收获了知识，也收获了成长。
植物生物技术专业毕业实习报姓名：杜宗飞学号：2011090118专业：植物生物技术班级：植物生物技术01班指导教师：赵建明实习时间：XXXX-X-X—XXXX-X-X 20XX年1月9日目录目录 (2)前言 (3)一、实习目的及任务 (3)1.1实习目的 (3)1.2实习任务要求 (4)二、实习单位及岗位简介 (4)2.1实习单位简介 (4)2.2实习岗位简介（概况） (5)三、实习内容（过程） (5)3.1举行计算科学与技术专业岗位上岗培训。
(5)3.2适应植物生物技术专业岗位工作。
(5)3.3学习岗位所需的知识。
(6)四、实习心得体会 (6)4.1人生角色的转变 (6)4.2虚心请教，不断学习。
(7)4.3摆着心态，快乐工作 (7)五、实习总结 (8)5.1打好基础是关键 (8)5.2实习中积累经验 (8)5.3专业知识掌握的不够全面。
(8)5.4专业实践阅历远不够丰富。
(8)本文共计5000字，是一篇各专业通用的毕业实习报告范文，属于作者原创，绝非简单复制粘贴。
欢迎同学们下载，助你毕业一臂之力。
前言随着社会的快速发展，用人单位对大学生的要求越来越高，对于即将毕业的植物生物技术专业在校生而言，为了能更好的适应严峻的就业形势，毕业后能够尽快的融入到社会，同时能够为自己步入社会打下坚实的基础，毕业实习是必不可少的阶段。
毕业实习能够使我们在实践中了解社会，让我们学到了很多在植物生物技术专业课堂上根本就学不到的知识，受益匪浅，也打开了视野，增长了见识，使我认识到将所学的知识具体应用到工作中去，为以后进一步走向社会打下坚实的基础，只有在实习期间尽快调整好自己的学习方式，适应社会，才能被这个社会所接纳，进而生存发展。
刚进入实习单位的时候我有些担心，在大学学习植物生物技术专业知识与实习岗位所需的知识有些脱节，但在经历了几天的适应过程之后，我慢慢调整观念，正确认识了实习单位和个人的岗位以及发展方向。
生物学中的植物生物技术植物是我们生活中不可或缺的一部分，它们不仅为我们提供氧气和食物，还可以用于医疗和环境保护。
随着科技的不断发展，生物学中的植物生物技术也愈加成熟，为我们解决了许多问题。
一、基因编辑技术近年来，基因编辑技术已经成为植物生物技术领域的热点。
基因编辑是指用一种特殊的蛋白质，可对基因进行精准编辑，来修改植物性状。
以前，人们使用不同的方法从其他生物中插入基因，例如把小麦中的抗病基因安装在玉米中。
但是这种方法的效果往往不稳定，而基因编辑技术，则更加准确和快速。
经过基因编辑的植物，可以更好地抗击病菌，耐旱能力也更强。
例如，科学家将爆米花中的基因提取出来，并将其插入玉米中，使该植物的耐旱性能得到了显着提升。
该技术将成为未来农业生产中的一个重要方向。
二、组织培养技术组织培养技术则是一种用于植物的人工培育方法。
该技术可以在实验室中培育出完全相同的植物。
这对于繁殖高品质的种子和植物，以及研究植物的死亡机制、生长因子和分子遗传学来说都具有重要意义。
该技术的应用非常广泛。
例如，这种技术可以用于在保护区的退化植物中，将它们繁殖出大量的植物，以恢复环境。
在一些农业领域中，组织培养技术可以用来提高种子的存活率。
如今，这种技术可以提供更快更便捷的植物繁殖方法。
三、转基因技术转基因技术是指将从其他生物中提取的基因，插入到植物中，使其获得新的性状或者抵御某些病原体的入侵。
这项技术可以使某些农作物更耐旱、抗虫或更丰产。
但是，这种技术也引发了许多争议。
一些人担心这些植物对环境及人体安全的影响，因此，在实际生产中要注意科学合理使用。
四、药用植物繁殖技术植物生物技术不仅用于食品和农业生产领域，还在药用植物的繁殖等方面发挥了作用。
例如，通过特定的培养技术，可以快速繁殖获得药用植物中的有效药物成分。
在药物开发过程中，这项技术间接地帮助了越来越多的人。
总而言之，生物学中的植物生物技术在不少方面都取得了重大突破。
虽然这些技术还存在许多限制和争议，但是，如果得到合理利用，能够发挥出更多的潜能，也为我们的生活带来更多便利。
植物生物学实验技术掌握研究植物的实验方法和技术植物生物学是研究植物的生理、生态和遗传等方面的科学。
要深入了解植物的生命活动，就需要掌握一定的实验方法和技术。
本文将介绍几种常用的植物生物学实验技术，帮助读者更好地开展植物科研工作。
一、组织培养技术组织培养是植物生物学研究中常用的实验技术之一，其主要目的是通过体外培养植物组织、细胞或器官，以探究植物的生长发育规律以及植物的分子与细胞机制等。
组织培养技术主要包括无菌技术、组织切分和培养基的制备等。
二、基因转化技术基因转化是将外源基因导入植物体内，使其在植物体内表达的技术。
通过基因转化技术，可以引入外源基因，改善植物的品质、抗逆性等性状，同时也有利于研究植物的基因功能。
常用的基因转化技术包括农杆菌介导的遗传转化和基因枪法等。
三、蛋白质组学技术蛋白质组学是研究植物蛋白质组成、结构和功能等方面的科学。
通过蛋白质组学技术，可以全面了解植物中各种蛋白质的表达情况、相互作用以及功能等信息。
常用的蛋白质组学技术包括二维凝胶电泳、质谱分析和蛋白质互作网络分析等。
四、分子标记技术分子标记技术是利用植物基因组中的特定序列进行物种鉴定、遗传连锁图谱构建和基因定位等的技术。
通过分子标记技术，可以对植物的遗传背景进行研究，推进植物育种和种质资源保护等工作。
常用的分子标记技术包括PCR、RAPD和SSR等。
五、光合作用测定技术光合作用是植物进行能量和有机物质合成的重要过程。
通过测定光合作用速率和光合色素的含量等指标，可以评估植物的光合能力和生长发育状态。
光合作用测定技术主要包括光合速率测定、气体交换测量和光合色素提取等。
六、荧光探针技术荧光探针技术是利用荧光信号来研究植物生理和生化过程的技术。
通过荧光探针技术，可以实时监测植物的氧化还原状态、酸碱平衡、离子浓度等生理生化过程。
常用的荧光探针技术包括叶绿素荧光测定、荧光染料标记和荧光显微镜观察等。
在进行植物生物学实验时，务必注意实验操作的准确性和可重复性。
植物组培实训报告实训时间：2022年9月1日至2022年9月10日实训地点：XX大学植物生物技术实验室一、实训目的本次实训旨在通过植物组培技术，培养学生对植物生长发育和组织培养技术的理解和掌握能力。
通过实际操作，加深学生对植物细胞培养、愈伤组织诱导、植物器官再生等方面的实践经验，提高学生的动手能力和科学思维能力。
二、实训内容1.细胞培养基的配制在实验开始前，我们首先准备了培养基的配制工作。
根据实验要求，我们按照一定比例调配了含有蔗糖、植物激素和微量元素的培养基。
这是植物组培实验的基础，也是植物细胞生长和分化所需要的养分来源。
2.植物种子的消毒和萌发在组培实验中，种子的消毒是非常重要的一步。
我们采用了酒精和漂白粉的消毒方法，确保种子表面没有细菌和真菌的污染。
随后，我们将消毒后的种子均匀地播放在培养基上，利用培养基中的植物激素刺激种子的萌发和生长。
3.愈伤组织的诱导和分化在种子萌发后，我们将其转移到含有植物激素的培养基上，利用植物激素的作用，诱导种子发生愈伤组织的产生。
通过调节植物激素的浓度和比例，我们成功地诱导了愈伤组织的形成。
随后，我们将愈伤组织转移到新的培养基上，促进其分化为植物器官，如根系、茎和叶片等。
4.植物器官的再生通过将愈伤组织转移到含有适当激素的培养基上，我们成功地促使愈伤组织分化为植物器官。
根据实验要求，我们调整了培养基中植物激素的浓度和组合，以达到不同器官的再生目的。
经过一段时间的培养，我们观察到了根系、茎和叶片的再生情况，并进行了相关的测量和记录。
三、实训收获通过本次植物组培实训，我们获得了丰富的实践经验和知识。
首先，我们对植物细胞培养的基本原理和技术有了更深入的了解。
其次，我们掌握了植物组织培养的基本操作技巧，包括培养基的配制、种子的消毒和萌发、愈伤组织的诱导和植物器官的再生等。
最重要的是，我们培养了扎实的动手能力和科学思维能力，提高了解决实际问题的能力。
四、实训总结通过本次植物组培实训，我们深刻认识到植物组培技术在植物生物学研究和植物育种中的重要性。
一、实习背景随着科技的发展，植物生物技术作为一门新兴的交叉学科，在我国农业、医药、环保等领域发挥着越来越重要的作用。
为了更好地将所学理论知识与实际操作相结合，提高自身的实践能力，我于2021年7月至9月在中国科学院XX植物研究所进行了为期两个月的植物生物技术实习。
二、实习目的1. 巩固和深化植物生物技术理论知识，将所学知识运用到实际工作中。
2. 掌握植物组织培养、基因工程、分子标记等植物生物技术基本操作。
3. 了解植物生物技术领域的研究动态和发展趋势。
4. 培养严谨的科学态度和团队协作精神。
三、实习内容1. 植物组织培养技术在实习期间，我主要参与了植物组织培养技术的学习和实践。
首先，学习了植物组织培养的基本原理、培养基的配制、外植体选择、愈伤组织诱导、再生体系建立等理论知识。
然后，在导师的指导下，进行了实际操作，包括外植体消毒、接种、培养基更换、诱导分化等。
通过实践，我掌握了植物组织培养的基本技能，并成功诱导出愈伤组织和再生植株。
2. 基因工程在基因工程方面，我学习了基因克隆、重组、转化等基本操作。
实习期间，我参与了植物基因工程实验，包括目的基因的克隆、表达载体构建、转化等。
通过实验，我了解了基因工程在植物育种、抗病性提高等方面的应用。
3. 分子标记技术分子标记技术在植物遗传育种、基因定位等方面具有重要意义。
在实习期间，我学习了分子标记技术的原理、方法及其应用。
通过实验，我掌握了PCR、DNA测序等分子标记技术的基本操作，并成功应用于植物遗传多样性分析。
4. 学术交流与讲座实习期间，我参加了植物生物技术领域的学术讲座和研讨会，了解了国内外植物生物技术的研究动态和发展趋势。
通过与专家学者的交流，拓宽了视野，提高了自己的学术素养。
四、实习收获1. 理论与实践相结合：通过实习，我深刻体会到理论知识与实际操作的重要性，提高了自己的实践能力。
2. 技能提升：掌握了植物组织培养、基因工程、分子标记等植物生物技术基本操作，为今后的研究工作奠定了基础。
一、前言随着生物技术的飞速发展，植物生物技术在农业生产、医药保健、环境保护等领域发挥着越来越重要的作用。
为了更好地将理论知识与实践相结合，提升自身技能，我于2021年7月至8月参加了为期一个月的植物生物技术实习。
此次实习在我国某知名植物研究所进行，实习期间，我参与了植物组织培养、基因工程、分子标记等多个方面的实验操作，对植物生物技术有了更深入的了解。
二、实习目的1. 巩固和深化植物生物技术相关理论知识，提高动手实践能力。
2. 学习掌握植物组织培养、基因工程、分子标记等实验技术。
3. 了解植物生物技术在农业生产、医药保健、环境保护等领域的应用。
4. 培养团队协作精神和严谨的科研态度。
三、实习内容1. 植物组织培养在实习初期，我主要参与了植物组织培养实验。
在指导老师的带领下，我学习了植物组织培养的基本原理和操作技术。
具体内容包括：（1）外植体选择：根据实验目的，选择适宜的外植体，如叶片、茎段、愈伤组织等。
（2）消毒处理：对外植体进行消毒处理，以防止微生物污染。
（3）接种培养：将消毒后的外植体接种到培养基中，进行培养。
（4）观察记录：定期观察培养瓶中的植物生长状况，记录数据。
通过植物组织培养实验，我掌握了植物组织培养的基本操作，并学会了如何根据实验目的调整培养基配方。
2. 基因工程在实习中期，我参与了基因工程实验。
具体内容包括：（1）目的基因的克隆：通过PCR、酶切、连接等操作，将目的基因克隆到载体上。
（2）转化受体细胞：将含有目的基因的载体转化到受体细胞中。
（3）筛选阳性克隆：通过分子生物学方法，筛选出含有目的基因的阳性克隆。
通过基因工程实验，我学习了目的基因的克隆、转化和筛选等操作，为后续研究奠定了基础。
3. 分子标记在实习后期，我参与了分子标记实验。
具体内容包括：（1）DNA提取：提取植物基因组DNA。
（2）PCR扩增：利用PCR技术扩增特定基因片段。
（3）电泳分析：通过电泳分析，检测PCR产物。
绿色荧光蛋白转入拟南芥愈伤组织引言：拟南芥与油菜、萝卜、卷心菜等同为十字花科植物，作为一种草本植物广泛分布于欧亚大陆和非洲西北部。
在我国的内蒙、新疆、陕西、甘肃、西藏、山东、江苏、安徽、湖北、四川、云南等省区均有生长。
近一百年来，随着生物学和经典遗传学的蓬勃发展，科学家们逐渐注意到它的研究价值。
长期以来，科学家一直希望在植物中找到像动物中的黑腹果蝇那样繁殖快、易于在实验室培养、适于遗传操作的实验材料，进而从根本上改变植物遗传学研究的长期落后状况。
拟南芥植株较小（一个8cm见方的培养钵可种植4-10株）、生长周期短（从发芽到开花约4-6周）、结实多（每株植物可产生数千粒种子）。
拟南芥的形态特征分明，莲座叶着生在植株基部，呈倒卵形或匙形；茎生叶无柄，呈批针形或线形。
侧枝着生在叶腋基部，主茎及侧枝顶部生有总状花序，四片白色匙形花瓣，四强雄蕊。
长角果线形，长约1-1.5cm，每个果荚可着生50-60粒种子。
这些特点使得拟南芥的突变表型易于观察，为突变体筛选提供了便利。
拟南芥是典型的自交繁殖植物，易于保持遗传稳定性。
同时，可以方便的进行人工杂交，利于遗传研究。
拟南芥的另一个优点是易于转化。
经过不断的实践，浸花法（floral tip）已成为拟南芥转化最常用的方法。
对生长5-6周已抽苔的拟南芥打顶来促进侧枝生长，待花序大量产生时将其在含有转化辅助剂silwet和蔗糖的农杆菌溶液中浸泡几分钟，3-4周后对转化植株收种子。
在含有合适抗生素的平板上对种子进行筛选，能够健康生长的幼苗为转基因植株。
这种转化方法不需要组织培养和再生植株的过程，操作简便、转化效率较高，为研究人员建立突变体库、改变目的基因的表达特征以及开展互补验证等实验提供了便利。
绿色荧光蛋白(GreenFluorescent Protein，简称GFP）是一种在美国西北海岸所盛产的水母中所发现的一种蛋白质。
这类学名为Aequorea victoria的水母有着美丽的外表，生存历史超过1.6亿年，正是在这种水母的发光器官内发现天然绿色荧光蛋白。
它之所以能够发光，是因在其包含238个氨基酸的序列中，第65至67个氨基酸(丝氨酸—酪氨酸—甘氨酸）残基，可自发地形成一种荧光发色团。
GFP作为一种报告基因还具有无种属特异性、分子量小、容易与其他蛋白形成融合蛋白、不损害细胞、易检测、可用于活体观察等特点[1]。
一、实验原理1.培养拟南芥愈伤组织愈伤组织原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。
它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。
在植物器官、组织、细胞离体培养时，条件适宜也可以长出愈伤组织。
其发生过程是：外植体中的活细胞经诱导，恢复其潜在的全能性，转变为分生细胞，继而其衍生的细胞分化为薄壁组织而形成愈伤组织。
愈伤组织形成的过程分为3个时期：诱导期、分裂期、分化期（形成期）。
愈伤组织诱导的成败关键主要不是外植体的来源和种类，而是培养条件，其中激素的种类和浓度最为重要。
诱导愈伤组织常用的生长素是2，4-D，IAA和NAA，常用的细胞分裂素是KT和6-BA。
愈伤组织的生长是发生在不与琼脂培养基接触的表面。
配制培养基：选用1/2MS培养基对种子进行培养。
MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。
糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染[2]。
配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
调节培养基的酸碱性至PH5.8。
由于培养基的PH值直接影响到培养物对离子的吸收，因而过酸或过碱都对植物材料的生长有很大的影响。
此外，PH还影响到琼脂培养基的凝固情况。
所以，当培养基配制好后应立即进行PH值的调整。
2.实验室中常用仪器设备及其灭菌方法如下：①培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法。
具体方法如下：压力9.8×104—10.8×104Pa，温度在121℃，灭菌20—30min。
②玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌、干热消毒灭菌③塑料器皿灭菌：多采用高压蒸汽消毒灭菌④金属用具灭菌：灼烧灭菌。
具体方法是：浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用。
⑤接种室灭菌：紫外灯照射、空气消毒灭菌。
超净工作台：紫外灯照射，70%—75%的酒精擦洗。
⑥外植体灭菌：水冲洗10—20min或更长时间70%—75%酒精中浸泡30s0.1%—0.2%氯化汞液中浸泡10min左右蒸馏水冲洗4—5次备用。
3.农杆菌转化农杆菌对双子叶植物的创伤部位侵染广泛在某些条件下对单子叶植物也有一定的感染性。
根癌农杆菌含有Ti (tumor-inducing plasmid)质粒Ti 质粒上的 T-DNAtransferred DNA在 Vir区virulence region基因产物的介导下可以插入到植物基因组中诱导在宿主植物中瘤状物的形成。
因此 将外源目的基因插入到 T-DNA 中借助 Ti质粒的功能使目的基因转移进宿主植物中并进一步整合、表达。
根癌农杆菌的Ti质粒上有一段转移DNA(T-DNA)，具有向植物细胞传递外源基因的能力，而细菌本身并不进入受体细胞。
农杆菌转化植物细胞涉及一系列复杂的反应，主要包括:①受伤的植物细胞为修复创伤部位，释放一些糖类、酚类等信号分子。
②在信号分子的诱导下，农杆菌向受伤组织集中，并吸附在细胞表面。
③转移DNA上的毒粒基因被激活并表达，同时形成转移DNA的中间体。
④转移DNA进入植物细胞，并整合到植物细胞基因组中。
因为单子叶植物不是农杆菌的天然寄主，况且其不能合成起诱导作用的信号分子，所以限制了农杆菌介导法在单子叶植物中的应用。
不过近年来大量成功转化的实例表明，植物、真菌、哺乳动物甚至人类细胞都可以作为农杆菌的受体双元表达载体系统主要包括两个部分：一部分为卸甲Ti质粒，这类Ti质粒由于缺失了T-DNA 区域完全丧失了致瘤作用，主要是提供Vir基因功激活处于反式位置上的T-DNA的转移。
另一部分是微型Ti质粒(Mini-Ti plasmid)，它在T-DNA左右边界序列之间提供植株选择标记，如Hyg基因或Lac Z基因等。
双元载体系统的转化原理是Ti质粒上的Vir基因可以反式激活T-DNA 的转移。
根据受体材料不同分为浸花法、原生质体共培养法、叶盘法和创伤植物感染法。
其中浸花法、叶盘法在许多植物上得到广泛应用。
二、实验目的1. 学习并掌握拟南芥愈伤组织的置备方法。
2. 学习并掌握制备感受态农杆菌的方法。
3. 学习并掌握重组质粒转入农杆菌的方法。
4. 学习并掌握农杆菌转入拟南芥愈伤组织的方法。
5.复习荧光显微镜的使用方法。
三、实验过程1.培养拟南芥愈伤组织1.1所需材料准备拟南芥种子若干，70-80%酒精，无菌水，2,4-D（2mg/L），6-BA（1mg/L），MS固体培养基（琼脂糖7.2g/L），三角瓶；黑暗培养箱；培养皿；无菌滤纸；无菌镊子；保险膜等1.2培养拟南芥愈伤组织[3]选取饱满、无霉变、成熟拟南芥种子。
将拟南芥种子置于1 .5 ml离心管中，加入1 ml 蒸馏水，4C纯化水3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。
拟南芥种子消毒后，用移液枪吸取拟南芥种子和水的混合物，均匀地在MS 生长培养基的培养皿平板上滴落，并使之形成两条平行的直线。
接种后置于光照培养箱(型号：GXZ．500C；培养光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度为22℃中竖直培养。
3天后即可取材用于器官离体再生实验。
萌发5天后，在超净工作台中，用镊子将苗移栽到装有1／2 MS培养基的50ml 三角瓶中（每瓶4--6棵，视情况而定），于短日照条件下培养30天左右获得无菌苗。
（短日照光照条件8小时光照，16小时黑暗，长日照光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度均为22℃。
）此处获得无菌苗的时间有异议，应该为2--3周。
2.将重组质粒转入农杆菌选用pCAMBIA1304质粒所需材料准备(注：因为农杆菌的培养周期较长，一定要保证有28度摇床可用。
) 菌种：农杆菌EHA105利福平抗性,LB液体培养基3ml 50ml,LB固体培养基利福平和卡那抗性,抗生素：利福平50mg/ml和卡那抗性50mg/ml,CaCl220mmol/L,液氮,液体YEP培养基,涂布棒，枪头，滤菌膜，平板，锥形瓶，3ml液体培养及用管，1.5ml离心管，水浴锅，离心机，培养箱，摇床等制备感受态农杆菌挑取1个新鲜的单菌落到含3ml LB培养基中利福平浓度50 mg/L；28℃，200 r/min 振荡培养过夜取0.5ml菌液加入50ml培养基中利福平浓度50mg/L ；28℃，200r/min振荡培养至培养液OD600=0.50取1.5ml菌液转移至预冷的1.5ml离心管中，冰浴30 min；4℃，5000 r/min 离心10 min，弃上清，重复取菌液3-4次，完成后将离心管倒置于灭菌滤纸上使其残液流尽；缓慢向离心管中加入20mmol/L冰预冷的CaCl2转化溶液1ml，重悬菌液沉淀，冰浴中放置10 min，4℃，5000 r/min离心10min；弃上清，加入100ul 20 mmol/L的冰预冷的CaCl2转化溶液，重悬菌液沉淀。
重组质粒导入农杆菌在感受态细胞中加入重组质粒，轻轻混匀，冰浴30min；液氮速冻1min；迅速移至37℃融化，加入900ul液体培养基，28℃轻摇培养4h；6000r/min离心2min，弃上清；用100ul培养基重悬菌体，重悬液体后涂布于含利福平50mg/L和50mg/L 卡那霉素的固体培养基上，28℃倒置培养2d；挑取单菌落，接种到液体YEP培养基上，28℃，230r/min培养48h，菌液用于保存或转化。
3.将农杆菌转入拟南芥愈伤组织所需材料准备(注：诱导培养基：MS+2,4-D 2 mg·L-1+6-BA 1mg·L-1；PH =5.8-6.0共培养培养基：MS+2,4-D 2 mg·L-1 +AS 100 uM·L-1+6-BA 1mg·L-1；PH =5.8选择培养基：MS+2,4-D 2 mg·L-1 +羧卞青霉素250 mg·L-1+潮霉素50mg·L-1+6-BA 1mg·L-1；PH =5.8-6.0)LB固体培养基（利福平和卡那抗性）,含100µM/L乙酰丁香酮的AAM培养基,无菌培养瓶,羧卞青霉素(100 mg/mL),潮霉素,无菌滤纸,无菌水,AAM培养基,共培养基：MS培养基;选择培养基将农杆菌转入拟南芥愈伤组织处理农杆菌：从低温(－20℃) 冻存管中取少量菌液于附加Kan 50 mg/L和Rif 50 mg/L LB固体培养基，然后在26-28℃暗培养两天。
