SMN1基因实时荧光定量分析在脊髓性肌萎缩携带者检测中的应用

SMN 蛋白水平及其下游靶点的调控在脊髓性肌萎缩症治疗中的研究田　梅　刘亚玲　赵文艳　任博文　周　豪中图分类号：R745.4 文献标识码：A 文章编号：1006-351X（2020）12-0789-04脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy，SMA)是一种神经退行性疾病，是由脊髓前角运动神经元变性所致，以进行性、对称性肢体近端和躯干肌肉萎缩、无力为临床表现。

运动神经元存活（survival motor neuron,SMN）蛋白水平的降低是导致SMA 发病的最根本原因，而受SMN 蛋白水平影响的下游靶点的一系列改变也参与了SMA 的病理生理过程。

本文即围绕二者在SMA 治疗中的研究进展做一综述。

一、SMN 蛋白水平调控的治疗研究SMA 的致病基因定位于5q13区域，称之为SMN 基因，在该区域内有两个几乎相同的拷贝，分别为SMN1和SMN2，约98.6%的SMA 患者的SMN1基因发生了缺失或截断[1]。

SMN1和SMN2有5个核苷酸的不同，但只有其中1个核苷酸决定了两者在功能上的差异，那就是外显子7第6位上C →T 的转变，这种转变影响了外显子剪接增强子（exonic splicing enhancer，ESE）的活性，使得SMN2 前体mRNA 在剪接的过程中发生了外显子7的跳过[2]，产生了截短的mRNA 并被翻译为一种极不稳定的蛋白质（SMN △7），与SMN1基因的翻译产物（全长SMN 蛋白）相比，这种蛋白易被迅速降解，不能发挥相应的作用。

虽然仍有大约20%的SMN2基因可以表达为全长SMN 蛋白[3]，但这仍不足以弥补SMN 蛋白减少所带来的一系列严重后果。

由于SMA 的各种病理过程最终归结于SMN 蛋白的产生不足，因此，如何提高SMN 蛋白的水平成为其治疗中最为重要的一部分。

显然，使用基因疗法外源性补充SMN1基因是一直接途径；由于SMA 患者至少存在1个SMN2基因拷贝，因此，调节SMN2前体mRNA 的剪接过程，使其能够翻译为全长SMN 蛋白，理论上适用于所有SMA 患者，上述这两种方法都围绕着如何让SMN 蛋白的合成增加；此外，SMN 蛋白还在降基金项目：河北省卫生厅医学适用跟踪项目（G201715）作者单位：050000 石家庄，河北医科大学第二医院神经内科通信作者：刘亚玲，Email：*****************·综　述·解方面受到调控，这也将会是一个可行的治疗思路。

脊肌萎缩症家系SMN1基因异常产前诊断一例发布时间：2022-06-05T12:09:28.889Z 来源：《医师在线》2022年1月1期作者：麻玲玲付小雁李玮徐秀华何桂元[导读]麻玲玲付小雁李玮徐秀华何桂元通讯作者（大连市妇女儿童医疗中心（集团）体育新城院区产前诊断中心；辽宁大连116037）摘要：脊肌萎缩症(Spinal Muscular Atrophy或SMA)，又称为脊髓性肌萎缩症，是一种遗传性神经肌肉疾病，其病因是位于染色体5号的SMN1基因出现致病变异而导致运动神经元生存蛋白1的数量和/或功能缺失。

在这些患者中，脑干和脊髓的下运动神经细胞出现进行性和不可逆的退化，病情随着年龄而越发严重。

该疾病的主要临床表型为左右对称的肌肉无力和萎缩，而且会首先影响近端肌肉群（例如颈、肩、上臂和大腿），进而影响远程肌肉群（例如下臂、手指，小腿和脚指）[1]。

其他的并发症包括体重增加缓慢、生长迟缓、限制性肺病、脊柱侧弯、关节挛缩和睡眠困难。

脊肌萎缩症在亚洲的发病率估计为1:8000[2]。

而在中国人群中，大约百分之二是有相关致病变异的携带者[3]。

关键词：脊肌萎缩症；基因；诊断1 病例介绍咨询者，王某，女性，32岁，2021年4月以“停经12周余，次女脊肌萎缩症，要求遗传咨询”为主诉就诊。

末次月经：2021年1月18日，预产期：2021年10月25日，自然受孕，NT：0.9mm。

既往体健。

孕产史：孕3产2，2010年山东省日照市足月分娩长女，体重3100g，现健，2015年山东省日照市足月分娩次女，体重3100g，即先证者蓉蓉（化名）。

蓉蓉出生时未见异常，1岁左右发现其四肢无力、坐立翻身困难，当时诊断疑似脊肌萎缩症患者，16月龄进行脊肌萎缩症基因检测，提示蓉蓉携带SMN1基因7-8号外显子的纯合缺失突变（2个SMN1的等位基因都出现了缺失突变）。

王某夫妇行SMN1基因检测，分别携带SMN1基因7-8号外显子的杂合缺失突变（只有1个SMN1的等位基因都出现了缺失突变）。

基因检测在神经性疾病研究中的作用一、引言神经性疾病是指影响中枢神经系统（脑和脊髓）和周围神经系统（神经节和神经纤维）的一类疾病，包括阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症、多发性硬化症等。

这些疾病具有高度的复杂性和异质性，给患者及其家庭带来了巨大的痛苦。

近年来，随着分子生物学技术的飞速发展，基因检测技术在神经性疾病的研究中发挥着越来越重要的作用。

本文将重点探讨基因检测在神经性疾病研究中的应用及其意义。

二、基因检测在神经性疾病诊断中的应用1. 遗传性神经性疾病的诊断遗传性神经性疾病是由基因突变引起的一类疾病，如亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化症等。

基因检测技术可以直接检测患者基因突变，为遗传性神经性疾病的确诊提供可靠的依据。

通过对患者及其家族成员进行基因检测，可以建立遗传连锁分析，进一步明确疾病的遗传模式，为遗传咨询和产前诊断提供重要信息。

2. 获得性神经性疾病的诊断获得性神经性疾病是由外部因素引起的，如感染、中毒、自身免疫等。

基因检测技术可以分析患者基因表达谱的变化，为疾病的早期诊断、病情评估和预后预测提供重要信息。

例如，通过基因表达谱分析，可以发现多发性硬化症患者免疫相关基因的表达异常，为疾病的诊断和治疗提供新的思路。

三、基因检测在神经性疾病发病机制研究中的应用1. 疾病相关基因的筛选与鉴定基因检测技术可以在全基因组水平上筛选疾病相关基因，为揭示神经性疾病的发病机制提供重要线索。

通过对患者基因进行全外显子测序或全基因组测序，可以发现与疾病相关的基因突变，进一步研究这些基因的功能及其在疾病发生发展中的作用。

2. 疾病相关生物标志物的发现基因检测技术可以在全基因组水平上分析基因表达谱、甲基化谱等，为发现神经性疾病相关生物标志物提供重要手段。

这些生物标志物有助于疾病的早期诊断、病情评估和预后预测，为临床决策提供有力支持。

3. 疾病相关信号通路的探索基因检测技术可以分析患者基因表达谱的变化，为揭示神经性疾病相关信号通路提供重要信息。

荧光短片段多重PCR在脊髓性肌萎缩症SMN1基因突变检测中的应用杨慧;李桂河;谢颖璇;陈海珠;李世举;何瑾【期刊名称】《中国神经精神疾病杂志》【年(卷),期】2022(48)9【摘要】目的设计特异性扩增引物,建立荧光短片段多重PCR技术检测SMN1基因拷贝数变异的方法,验证方法的检测性能并初步应用于基因拷贝数检测。

方法选取107例来自神经系统疾病生物样本库的人外周血DNA样品(包括SMN1基因0拷贝30例、1拷贝47例、2拷贝30例),设计5’端带有FAM荧光基团的SMN1基因7号外显子引物以及三对内参基因引物,利用荧光短片段多重PCR技术,使用基因分析仪片段分析多重PCR的产物,并与相应的MLPA检测结果进行比较。

结果特异性扩增SMN1基因7号外显子及内参基因的引物可实现目的片段的扩增,通过计算可得到0拷贝、1拷贝、2拷贝的样本结果。

对107例DNA样本的SMN1基因拷贝数荧光短片段多重PCR的检测结果进行分析,实验结果均与MLPA 检测结果相一致。

结论使用荧光标记多重PCR反应检测SMN1拷贝数可重复性好,精确度高,与MLPA得到的结果高度一致,具有便捷、准确、成本低的优势,可满足临床高准确性的检测要求,可用于SMA新生儿携带者的大规模筛查。

【总页数】6页(P519-524)【作者】杨慧;李桂河;谢颖璇;陈海珠;李世举;何瑾【作者单位】福建中医药大学附属第二人民医院检验科;福建医科大学附属第一医院神经内科;福建中医药大学附属第二人民医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R741【相关文献】1.基于三引物荧光PCR-毛细管电泳法的FMR1基因突变检测技术建立及其在自闭症辅助诊断中的应用2.应用多重Taqman-LNA荧光PCR同时检测肉制品中猪鸡鸭源性成分3.SMN_1基因实时荧光定量分析在脊髓性肌萎缩携带者检测中的应用4.荧光定量PCR法应用于脊髓性肌萎缩症携带者筛查的研究5.应用多重竞争性PCR联合毛细管电泳技术进行脊髓性肌萎缩症携带者筛查因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

作者单位1复旦大学附属儿科医院神经科上海，201102；2复旦大学生物医学研究院出生缺陷研究中心上海，200032；3共同第一作者通讯作者周水珍，E-mail ：szzhou@shmu．edu．cn ·论著·DOI ：10．3969/j．issn．1673-5501．2013．03．012脊髓性肌萎缩症SMN1和SMN2基因拷贝数变异分析王佶1，3安宇2，3周水珍1王艺1刘仁超2摘要目的探讨运动神经元存活（SMN ）1和SMN2基因拷贝数变异与脊髓性肌萎缩症（SMA ）患儿临床表型的关系。

方法以2011年10月至2012年12月在复旦大学附属儿科医院临床诊断SMA 患儿为研究对象，采用基因组DNA 多重连接探针扩增（MLPA ）技术进行SMN1基因缺失和SMN2基因拷贝数变异检测，探讨拷贝数变异与SMA 临床分型的关系。

结果41例临床诊断SMA 患儿行基因检测，其中SMN1基因第7和（或）8外显子缺失37例（90．2%）进入分析，男女之比为1ʒ0．8，发病年龄为（7．5ʃ7．0）个月。

Ⅰ型20例（54．1%），Ⅱ型15例（40．5%），Ⅲ型2例（5．4%），发病年龄分别为（2．9ʃ1．8）、（10．7ʃ1．9）和（30．0ʃ8．5）个月。

37例SMN1基因第7和（或）8外显子缺失患儿中，18例SMN2基因第7和8外显子拷贝数为2个，其中13例（72．2%）为Ⅰ型，5例（27．8%）为Ⅱ型；19例SMN2基因第7和8外显子拷贝数增加（拷贝数3或4），其中7例（36．8%）为Ⅰ型，10例（52．6%）为Ⅱ型，2例（10．5%）为Ⅲ型，两组差异有统计学意义。

5例患儿父母行SMN1基因检测，共检出杂合缺失9例，其中4例患儿父母均为SMN1基因第7和8外显子杂合缺失，1例患儿父亲为SMN1基因第7和8外显子杂合缺失，母亲未检测到纯合或杂合缺失。

结论SMN1基因第7和（或）8外显子纯合缺失是SMA 致病主要原因，SMN2基因拷贝数增加与SMA 表型严重程度呈负相关。

Hereditas (Beijing) 2021年2月, 43(2): 160―168 收稿日期: 2020-10-17; 修回日期: 2020-12-11基金项目:国家重点研发计划项目(编号：2016YFC0901505)，中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目(编号：2016-I2M-1-008)，中国博士后科学基金项目(编号：2018M630108)，国家自然科学基金项目(编号：81500979)和北京市自然科学基金项目(编号：5163028)资助[Supported by the National Key Research and Development Program of China (No.2016YFC0901505), and CAMS Initiative for Innovative Medicine (No. 2016-I2M- 1-008), the China Postdoctoral Science Foundation (No.2018M630108), National Natural ScienceFoundation of China (No. 81500979), and Beijing Natural Science Foundation (No. 5163028)]作者简介: 曹延延，博士，副研究员，研究方向：儿童罕见病的遗传基础。

E-mail:******************.cn 通讯作者:宋昉，硕士，研究员，研究方向：儿童罕见病机制研究。

E-mail:*****************DOI: 10.16288/j.yczz.20-319 网络出版时间: 2020/12/28 16:51:11URI: https:///kcms/detail/11.1913.R.20201225.1802.004.html研究报告脊髓性肌萎缩症SMN1基因2+0基因型携带者的家系研究曹延延，程苗苗，宋昉，瞿宇晋，白晋丽，金煜炜，王红首都儿科研究所遗传室，北京 100020摘要: 脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy, SMA)是一种儿童时期较为常见的神经肌肉病，属于常染色体隐性遗传。

贵阳地区孕妇人群脊髓性肌萎缩症携带者筛查及产前诊断作者：李媛媛罗振元胡莉黄盛文来源：《医学食疗与健康》2021年第12期【摘要】目的：调查贵阳地区孕妇人群脊髓性肌萎缩症（SMA）携带率，并对高风险的孕妇行产前基因诊断，防止SMA患儿的出生。

方法：应用多重荧光定量PCR技术对524例孕妇的SMN1基因外显子7和8的拷贝数进行检测，筛查出SMA携带者，并计算携带者的频率。

对携带者的配偶进行筛查，并为双方均为携带者的夫妇提供产前诊断。

结果：在524例孕妇中，共检出SMA携带者12例，携带比例为1/44，检出率2.29%.，其中SMN1基因外顯子7单一缺失的携带者2例（占16.7%），外显子7合并外显子8缺失携带者10例（占83.3%），未检测出同为SMA携带者的夫妇。

曾经生育过SMA患儿的1对夫妇均为SMN1基因外显子7合并外显子8杂合缺失携带者。

对高风险胎儿进行产前基因诊断，确诊为SMN1纯合缺失胎儿。

结论：初步获得了贵阳地区孕妇人群SMA的携带率为1/44。

SMA携带者筛查可为遗传咨询和产前诊断提供依据，对于优生优育、有效预防SMA胎儿的出生具有重要的临床意义。

【关键词】脊髓性肌萎缩症；携带者筛查；运动神经元存活基因；产前诊断【中图分类号】R714.55 【文献标识码】A 【文章编号】2096-5249（2021）12-0191-02脊髓性肌萎缩症（spinal muscular atrophy， SMA）是一种儿童致死性神经系统疾病，为常染色体隐性遗传[1]。

SMA的人群发病率约为1/6000～1/10000，携带率为1/40～1/60[2]。

SMA 致病基因是位于5号染色体长臂l区3带（5q13）的运动神经元存活基因（survival motor neuron，SMN）。

端粒侧的SMN1和中心粒侧的SMN2，是两个相邻的高度同源的SMN基因，两个基因序列之间仅有5个碱基的差异。

主要功能基因为SMN1，修饰基因SMN2一定程度上可以缓解SMA的严重程度。

海南医学2023年10月第34卷第19期Hainan Med J,Oct .2023,Vol.34,No.19脊肌萎缩症SMN1基因疑似“2＋0”型一例倪静逸1，钟秀1，周晟泽1，张怡君1，彭雪娟1，胡雪1，2，邓春雷1，21.湖北医药学院，湖北十堰442000；2.十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院)生殖与产前诊断中心，湖北十堰442000【摘要】脊肌萎缩症(spinal muscular atrophy ，SMA)是一种常染色体隐性遗传病，以脊髓前角细胞和脑干运动性脑神经核的进行性变性为主要特征。

临床主要表现为进行性、对称性肌无力和萎缩。

本研究采用MLPA 和qPCR 检测一例SMA 运动神经元存活基因1(survival motor neuron 1，SMN1)可疑“2+0”的汉族孕妇，及其南非黑人丈夫和其胎儿的样本，发现孕妇、丈夫及胎儿的SMN1基因型均为“2”型。

【关键词】脊肌萎缩症；运动神经元存活基因1；产前诊断【中图分类号】R744【文献标识码】D【文章编号】1003—6350（2023）19—2860—03Case study of suspected "2+0"type of SMN1gene of spinal muscular atrophy.NI Jing-yi 1,ZHONG Xiu 1,ZHOU Sheng-ze 1,ZHANG Yi-jun 1,PENG Xue-juan 1,HU Xue 1,2,DENG Chun-lei 1,2.1.Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,Hubei,CHINA;2.Department of Reproduction and Genetic Medicine,Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,Hubei,CHINA【Abstract 】Spinal muscular atrophy (SMA)is an autosomal recessive disorder,which is characterized by pro-gressive degeneration of the anterior horn cells of the spinal cord and the motor nucleus of the brain stem.The main clini-cal manifestations are progressive and symmetrical myasthenia and atrophy.In this study,MLPA and qPCR were used to detect a pregnant woman of Han nationalities who was suspicious of survival motor neuron 1(SMN1)gene type 2+0,her South African black husband,and their fetus.The results revealed that the pregnant woman,her husband,and their fe-tus were all SMN1type 2.【Key words 】Spinal muscular atrophy;Survival motor neuron 1;Prenatal diagnosis ·个案报道·doi:10.3969/j.issn.1003-6350.2023.19.025基金项目：胚胎干细胞湖北省重点实验室开放课题(编号：2022ESOF021)；湖北省十堰市太和医院博士启动基金(编号：2021-GXL-001)；湖北省教育厅重点项目(编号：D2*******)。