反相硅胶柱色谱

反相液相色谱柱类型1.引言1.1 概述反相液相色谱（reversed-phase liquid chromatography, RP-LC）是指在液相色谱中使用极性流动相和非极性固定相的一种分离技术。

相比于传统的正相液相色谱，反相液相色谱更为常用，其应用领域涵盖了许多不同的样品类型和化学物质。

在反相液相色谱中，固定相通常由选择性的疏水性填料组成，而流动相则是一种较为极性的有机溶剂和水的混合物。

当样品在流动相中被注入柱子时，根据样品分子与固定相之间的相互作用力，不同成分将以不同的速率被分离。

这种分离的基本原理是根据分析物分子的极性差异来实现的。

反相液相色谱柱的选择也是非常重要的，不同类型的柱子具有不同的特点和分离效果。

例如，C18柱是最常用的反相液相色谱柱之一，其固定相表面上有十八个碳原子，对中等极性物质具有良好的分离效果。

另外，还有C8柱、C4柱等，它们根据碳原子数的不同而具有不同的分离能力。

总体而言，反相液相色谱柱是一种非常重要和广泛应用的色谱技术。

它在药物分析、环境监测、食品安全检测等领域发挥着重要的作用。

本文将详细介绍反相液相色谱柱的类型以及它们的特点和应用，希望能够为读者对该领域的了解提供一定的帮助。

1.2 文章结构本文将按照以下结构来展开讨论反相液相色谱柱类型。

在引言部分，我们将首先进行概述，介绍反相液相色谱柱的基本概念和重要性。

接着，我们会详细说明全文的结构和组织方式，以便读者能够清楚地了解文章的整体框架。

最后，我们会明确阐述本文的目的，即为读者提供关于反相液相色谱柱类型的全面指南。

在正文部分，我们将分为两个主要要点进行讨论。

首先，我们将介绍反相液相色谱柱类型的基本原理和特点。

这个要点的主要目的是使读者了解反相液相色谱柱的工作原理和它们在分析化学中的应用。

接着，我们将详细介绍不同类型的反相液相色谱柱，例如C18、C8、Phenyl等。

我们将对每种类型的反相液相色谱柱进行描述和比较，以便读者能够理解它们之间的差异和选择适合自己的柱子。

十八烷基硅烷键合硅胶和苯基硅烷键合硅胶色谱柱
十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱和苯基硅烷键合硅胶色谱柱都是常见的色谱分析柱。

十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱是以硅烷键合剂（硅烷连接剂）为基础，在硅烷链上进一步键合上十八烷基团而制得。

这种柱适用于用逆相液相色谱法分离非极性或微极性化合物，如脂肪酸、脂类、杂环化合物、酚类、酮类等。

该柱具有较高的耐酸碱能力和良好的稳定性。

苯基硅烷键合硅胶色谱柱是以硅烷键合剂为基础，在硅烷链上进一步键合上苯基团而制得。

这种柱适用于用反相液相色谱法分离非极性或微极性化合物，如芳香烃、苯酚、酮类、杂环化合物等。

苯基硅烷键合硅胶色谱柱具有较高的分离效果和良好的稳定性。

总的来说，十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱适合分离疏水性化合物，而苯基硅烷键合硅胶色谱柱适合分离芳香性化合物。

选择适合的柱子可以更好地进行分析和检测。

ODS 反相柱层析（开放柱）2011-05-31 23:55：10| 分类：专业知识笔记|字号订阅ODS(octadecyl silane）即十八烷基硅烷,是以硅胶为基质键合的C18填料,属于反相色谱。

ODS柱色谱，简单地说，就是指用ODS装成的色谱柱。

开放”是指未对色谱柱施加任何压力，让其在重力作用下洗脱；相对于开放ODS柱色谱，有中低压柱色谱,高低柱色谱等等。

平时所说的反相HPLC,一定程度上来也可以说是ODS柱色谱，它的分离效果更好，同时连接了UV、DAD、ELSD等检测手段,其实质还是属于反相柱色谱。

适用范围：对于极性，ODS适合用于分离极性中等偏大的化合物。

对于极性较小的化合物,应该考虑用硅胶、凝胶等手段进行分离纯化，绝对不要尝试ODS，唯一的后果只能是:样品全部死吸附，根本不可能洗脱！!（*＊**不确定r）对于化合物类型,ODS对黄酮苷类、环烯醚萜苷类、糖苷类等成分都能有一定的分离效果,也有很多成功的分离纯化实例。

但是，对于苷元类化合物，则需要慎重考虑,其实还是极性大小的问题：苷元类化合物，一般极性较小。

装柱、上样、洗脱装柱：新买来的ODS,用甲醇浸泡过夜后即可装柱.具体的装柱方法，跟硅胶的装柱子法是一样的，记得用甲醇装柱就行.装完以后，置换成起始流动相系统，即可投入使用了。

上样：分为两种，一种是湿法上样，另一种是拌样.湿法上样，不必多说，就是将样品溶解至一定体积（强烈建议用起始流动相溶解，但体积不可过大，太大相当于原点变大，分离度变差），然后上样；至于拌样，很多的观点表示ODS不应该拌样,我在这里指出，依我个人经验来看,拌样是可以的,尤其对于一些溶解性较差的样品，拌样后分离的效果，比湿法上样好很多,大家可以尝试。

（所谓拌样，就是指将你的样品溶解，然后从柱子里面掏出小部分ODS，然后进行拌匀，注意不要过载）（**＊** 待尝试r)洗脱过程：如果你有ODS薄层板，你可以先点板看看样品大概的极性大小。

什么是正相和反相
发布者：李雨珂发布时间：2011-8-19 9:03:50
所谓正相，就是固定相极性大于流动相极性；反相，就是固定相极性小于流动相极性。

对于气相色谱来说，基本都是正相体系。

因为载气都是氮气之类的非极性物质。

对于液相，才有正相反相一说。

如C18柱一般极性小于常用的甲醇水等流动相的极性，故称为为反相体系，反相体系在液相里应用比较多。

如果是硅胶柱，采用正己烷之类的做流动相，固定相极性大于流动相极性，那就是正相体系。

正相和反相的区别主要指是填料(固定相)的不同。

正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。

1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。

正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。

2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。

反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。

样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。

常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。

高效液相色谱柱大致可分为五类:一、高效反相液相色谱柱以C18为代表的高效反相液相色谱柱•直被描述为药物发现、开发、方法验证(ValidatiOn)的心脏!高效反相液相色谱柱也极其广泛应用在药物代谢及动力学、生命科学、医疗健康、生物分析检测、毒品和兴奋剂检测、食品安全分析、环境分析、军事、国土安全等领域！高效反相液相色谱制备柱也是最重要的分离纯化技术之一！无论是过去，现在和可预见的未来，以球形B型硅胶(5Um或3um)为材料骨架的高效反相液相色谱柱在实际应用中永远占有统治地位!常规HPLC方法的开发几乎总是从C18作为出发点，反相色谱占了80%以上的应用。

过去数十年来，无数努力集注于：1)改善硅胶的品质，优化键合化学；2)开发新颖的材料骨架替代硅胶。

十多年前，使用有机硅材料取代无机硅材料作为起始原料生产球形硅胶代表一个划时代的革命！生产的球形硅胶命名为B型球形硅胶。

无机A型硅胶重金属含量很高，硅胶表面若干位置严重酸化及螯合效应等导致许多碱性化合物回收率低。

球形B型硅胶重金属含量很低，在非常大的程度上消除了A型无机硅胶表面若干位置严重酸化及螯合效应等问题。

用B型球形硅胶合成高效液相色谱填料，导致高效液相色谱柱产品质量有质的飞跃！然而，另一方面，基于客户的大量反馈和我们对几乎所有色谱厂商产品的评估，我们相信键合化学问题没有获得很好的解决。

具体体现在：(1)“纯粹”反相机理的键合相例如C18和C8市场上仍然是单功能，三功能和聚合物键合相”鱼目混杂(2)键合相封端问题没有获得很好的解决，•直是困扰色谱领域最大的问题！迄今为止全部的尝试只获得有限的成功。

(3)极性嵌入式(PolarCmbCddCd)键合相极性嵌入式(PoIarCmbCdded)键合相是C18高效反相液相色谱"卫星群”中最重要的产品，是C18和C8键合相最重要的补充。

极性嵌入式(POIarembedded)键合相起源于SupelcoABZ o SupelcoABZ的键合方法是用aminopropyl键合相和长链按酸缩合反应形成一个C16酰胺。

反相系列色谱柱(RPC)使用说明书1. 适用范围以硅胶为基质，表面键合C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C1(SAS)、C6H5(Phenyl)官能团的反相色谱（RPC, Reversed Phase Chromatography ）填料的系列色谱柱。

2.性能验收收到色谱柱，开箱检验确认后，请尽快按照色谱柱评价报告中的色谱条件进行测试，以确认色谱柱品质。

样品：① 尿嘧啶(5.0×10-6g/mL) ② 苯乙酮(2.0×10-5g/mL) ③ 甲苯(7.5×10-4g/mL) ④ 乙苯(6.0×10-4g/mL) ⑤ 芴(1.0×10-5g/mL)样品均使用流动相溶解及稀释。

注：如上述条件与色谱柱检测报告不一致，以检测报告为准。

3.色谱柱连接色谱柱入口和出口按色谱柱标签箭头所示方向连接。

色谱柱连接管端口部分必须平整，不能出现毛刺和切口斜面等现象。

在可能的条件下，色谱柱两端的连接管路要尽可能短，连接管内径应尽可能小，以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发生。

4. 使用pH 值范围和耐水性常规色谱柱使用pH 值范围是2.0~8.0，特殊填料色谱柱pH 值使用范围更宽，如Supersil 系列为1.5~10，SinoPak 系列为1~12。

常规色谱柱是使用水相不高于90%，特殊处理的填料色谱柱耐水性更高，如SinoChrom ODS-BP 色谱柱最高使用水相比例可达95%，AQ 系列色谱柱可以使用100%水相。

5.使用温度范围推荐使用温度不高于60℃。

当使用磷酸盐缓冲液，在中等或高pH 值操作时，建议柱温不要超过40℃。

使用中避免温度突然升高。

6.色谱柱储存过夜或短时间储存：使用缓冲溶液或含盐流动相时，需要用10%~20%甲醇/水或乙腈/水将色谱柱和系统内流动相置换，色谱柱储存溶剂中有机溶剂浓度不低于20%。

长时间储存：可以用纯甲醇或纯乙腈储存，并将色谱柱堵头拧紧。

如何活化新色谱柱？液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。

正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。

另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。

色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。

在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。

但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。

所以在实验室最好建立自己的色谱柱台账，对每根色谱柱进行编号入库、并追踪其使用过程，实现全生命周期化管理。

每个时间节点记录其柱压、峰型、进样针数等信息。

一、液相色谱柱活化方法、新液相色谱柱活化多久？新液相色谱柱使用前还要活化么？新买的液相色谱柱需要活化，活化的方法因柱子而异，普通反相C18柱的话我是这样活化的：0.5ml/min流速的甲醇冲洗2小时以上。

液相的新色谱柱都是保存在一定的保存液中的，所谓的活化就是替换掉其中的保存液，冲洗掉柱中可能残留的其他杂质，以免影响后续分析工作。

不同的色谱柱活化的方法不尽相同，要根据柱子的种类来选择活化方法。

另外，要提醒的是，柱子活化时不要接检测器，避免不必要的污染。

二、液相色谱柱活化到底起到一个什么样的作用？（一）排除有机相挥发所产生的起泡。

（二）柱子一般是键合了c18的，用甲醇冲柱子就是使得这些集团达到更好的排列，有利于我们做样。

就像刚买的电池。

柱的维护分为：色谱柱的平衡、色谱柱的再生、最后才是色谱柱的维护。

1、色谱柱的平衡反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。

新柱应先使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。

请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。

每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的“补偿”，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!操作步骤：1) 平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡)2) 如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡；分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。