硅胶色谱法

硅胶吸附柱色谱技术实际应用色谱法，又称层析法.是一种以分配平衡为机理的分配方法.色谱体系包含两个相,一个是固定相,一个是流动相.当两相相对运动时,反复多次的利用混合物中所含各组分分配平衡性质的差异,最后达到彼此分离的目的.色谱法从发明到现在已有八十多年的历史.它是纯化和分离有机或无机物的一种方法.色谱法按固定相的状态可分为柱色谱.平板色谱和棒色谱三种而实验室中最常用的是柱层析和薄层层析,以及它们之间的配合应用.[1]柱层析[2]1 吸附色谱地原理在一定条件下,硅胶与被分离物质之间产生作用,这种作用主要是物理和化学作用两种.物理作用来自于硅胶表表面与溶质分子之间的范德华力.化学作用主要是硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键作用.2操作步骤2.1 硅胶准备[3]硅胶一般选用250-400目(即40-63μm直径的硅胶颗粒),根据ΔRf选用硅胶的用量.2.2 实验仪器准备一支玻璃色谱柱,一个铁架台,烧杯,锥形瓶,径口直径较大的玻璃漏斗,一支玻璃棒,2.3 装柱[4]2.3.1 吸附剂的加入①干法：将吸附剂一次加入色谱管，振动管壁使其均匀下沉，然后沿管壁缓缓加入开始层析时使用的流动相，或将色谱管下端出口加活塞，加入适量的流动相，旋开活塞使流动相缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。

操作过程中应保持有充分的流动相留在吸附层的上面。

②湿法：将吸附剂与流动相混合，搅拌以除去空气泡，徐徐倾入色谱管中，然后再加入流动相，将附着于管壁的吸附剂洗下，使色谱柱表面平整。

俟填装吸附剂所用流动相从色谱柱自然流下，液面将柱表面相平时，即加试样溶液.2.3.2试样的加入①将试样溶于层析时使用的流动相中，再沿色谱管壁缓缓加入。

注意勿使吸附剂翻起。

或将试样溶于适当的溶剂中。

与少量吸附剂混匀，再使溶剂挥发去尽后使呈松散状；将混有试样的吸附剂加在已制备好的色谱柱上面。

如试样在常用溶剂中不溶解，可将试样与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。

柱色谱是较经典的有机物分离技术，原理和薄层色谱相同，但装置有所不同，主要由一个均匀玻璃柱和填充填料组成，填料是决定柱效的主要因素，填料必须满足具有不溶于所使用流动相、不使欲分离的样品破坏或分解、惰性大、可逆性强和吸附容量大。

同时，填料颗粒直径要均匀。

最常见的柱色谱是硅胶色谱、氧化铝色谱、离子交换柱色谱、聚酰胺柱色谱和凝胶柱色谱。

分配柱色谱是利用混合物中各组分在两种不相混溶的液体之间的分配系数不同，而得到分离的方法，分为正相和反相分配色谱两种类型：正相分配色谱：以水或亲水性溶剂为固定（液）相，以水不相混溶的有机溶剂作移动相的分配色谱称为正相分配色谱。

一般而言，分离水溶性或极性较大的成分，如生物碱、苷类、糖类、有机酸等化合物，常用正相分配色谱。

反相分配色谱：以亲脂性有机溶剂作固定（液）相，以水或亲水性溶剂作移动相的分配色谱称为反相分配色谱。

当分离脂溶性或极性较小的成分，如高级脂肪酸、油脂、游离甾体等物质时，常用反相分配色谱。

实践中有70%以上的分配色谱都采用反相色谱。

分配柱色谱往往适用于分离水溶性或极性较大的组分，如生物碱、苷类、糖类、有机酸、酚类及氨基酸的衍生物；对某些非极性化合物，如油脂、甾体等物质，可采用反相分配柱色谱法。

应用实例：狄戈辛（异羟基洋地黄毒苷）的分离支持剂：国产层析硅胶80 100目，加2/3量的水（以乙酸乙酯饱和），调匀，再以乙酸乙酯（水饱和）浸泡，调成稀糊状，湿法装柱，柱直径与长度比1:2 以上。

实验方法：取样品与1 2倍量硅胶磨匀，加入柱顶，用水饱和的乙酸乙酯（含0.5%甲醇）洗脱，分部收集，各流分均作纸色谱及薄层色谱检查，比移值相同的流分合并，减压蒸干，以甲醇结晶，得到洋地黄毒苷、羟基洋地黄毒苷、异羟基洋地黄毒苷三种单体。

吸附柱色谱是将待分离混合物样品均匀地加在装有吸附剂的柱子中，再加适当的溶剂（洗脱剂）冲洗，由于吸附剂对各组分吸附能力不同，各组分在柱中向下移动的速度不同，吸附力最弱的组分随溶剂首先流出，通过分段定量收集洗脱液而使各组分得到分离。

硅胶柱色谱分离三七皂苷实验报告硅胶柱色谱分离三七皂苷实验报告一、实验目的1. 学习硅胶柱分离技术的原理和方法。

2. 学习三七皂苷的提取和分离纯化方法。

3. 掌握TLC检测和硅胶柱色谱分离三七皂苷的方法。

二、实验原理1. 硅胶柱分离技术硅胶柱属于柱式色谱中的一种，主要利用硅胶在柱中的作用来实现样品的分离和纯化。

硅胶是一种具有很强吸附能力的固体，在某些条件下，硅胶的吸附能力能与物质间的相互作用力相抵消，从而实现物质的分离。

硅胶柱适用于对极性化合物的分离和纯化。

2. 三七皂苷的提取和分离纯化方法三七皂苷属于三萜类化合物，主要存在于三七的根和根茎之中。

其提取和分离纯化方法主要通过超声波辅助提取和硅胶柱色谱分离纯化方法实现。

三、实验步骤1. 样品的提取将三七根茎切碎，加入95%的乙醇中，隔水加热至70℃，加入超声波处理仪中捣烂3次，每次3min，静置20min。

离心后取上层液。

重复以上步骤2次，将上层液合并。

2. TLC检测将3mg的样品溶解于1ml的甲醇-水混合液中，使用玻璃棒将硬度为H的硬质TLC板打磨，并在板上绘制出标线，加样后按照以下条件进行TLC检测：样品扫描时间为20min；紫外吸收检测波长为210nm；运行溶剂为甲醇和水的混合液。

检测完后，标记出三七皂苷的Rf值。

3. 硅胶柱分离将10g的硅胶加入50ml的甲醇中混合均匀，并通过吸滤将其裹在滤纸中。

取10g样品溶解在5ml的甲醇水混合液中，经旋转蒸发浓缩至干燥，加入50ml的甲醇中混合均匀，并过滤。

将样品溶液加入硅胶柱中，并用甲醇作为洗脱溶剂进行洗脱，收集洗脱出的3ml/管收集。

4. TLC检测纯化后的样品，并重复以上步骤，直至获得纯品。

4. 结果分析经TLC检测，三七皂苷的Rf值为0.37。

经过硅胶柱分离后，收集了10管色谱图谱中相对独立的峰3处的样品。

各样品的TLC 图谱分别检测，第3例样品的TLC检测Rf值为0.37，符合标准物质的TLC检测Rf值，可以确定为三七皂苷。

一、实验目的1. 掌握硅胶色谱的基本原理及其在有机物分离中的应用。

2. 熟悉硅胶色谱实验的操作步骤和注意事项。

3. 通过实验，加深对色谱分离原理的理解。

二、实验原理硅胶色谱是一种常用的液-固吸附色谱方法。

它利用硅胶作为固定相，有机溶剂作为流动相，根据样品中各组分的吸附性能差异实现分离。

在实验过程中，样品溶液被点样在硅胶层析板上，随着流动相的展开，样品中的组分在层析板上形成不同的色带，从而实现分离。

三、实验仪器与药品1. 仪器：硅胶层析板、层析缸、点样器、毛细管、烘箱、电子天平、移液管等。

2. 药品：硅胶、有机溶剂（如石油醚、丙酮、正己烷等）、待分离的混合物样品等。

四、实验步骤1. 薄层板的制备：（1）称取适量硅胶，加入适量水，搅拌均匀，形成糊状物。

（2）将糊状物均匀涂布在5cm×15cm的层析板上，涂布厚度约为0.5mm。

（3）将涂布好的层析板放入烘箱中，于105℃下活化0.5小时，取出后置于干燥器中备用。

2. 点样：（1）用毛细管吸取少量待分离的混合物样品，点样于活化后的硅胶层析板下端2cm处，点样点直径约为2mm。

（2）点样后，用铅笔在点样点处作一标记，作为原点。

3. 展开剂的选择与制备：根据待分离样品的性质，选择合适的有机溶剂作为展开剂。

如石油醚、丙酮、正己烷等。

4. 展开操作：（1）将点好样的层析板放入层析缸中，确保层析板与缸底之间留有适当空间。

（2）向层析缸中加入适量的展开剂，使展开剂液面低于原点。

（3）待展开剂前沿到达层析板顶端时，取出层析板，晾干。

5. 结果观察与记录：（1）观察层析板上的色带，记录各组分的位置。

（2）计算各组分的比移值（Rf值）。

五、实验结果与分析1. 实验结果：（1）在本次实验中，成功分离了待测混合物中的A、B、C三种组分。

（2）各组分在层析板上的位置及Rf值如下：组分A：Rf=0.3组分B：Rf=0.6组分C：Rf=0.82. 结果分析：（1）根据实验结果，可知待测混合物中的A、B、C三种组分在硅胶层析板上的吸附性能存在差异，从而实现了分离。

简述采用硅胶板薄层色谱分离实验时具体的操作步骤和注意事项一、实验操作步骤采用硅胶板薄层色谱分离实验的操作步骤如下：1.硅胶板的制备：选择合适的硅胶板，如硅胶G板或硅胶H板。

将硅胶与适量的黏合剂混合，搅拌均匀后涂在玻璃板上，制成硅胶薄层板。

薄层板制成后需干燥，然后活化处理，以提高分离效果。

2.点样：将待分离的样品溶液点在硅胶板上，用毛细管或自动点样器进行点样操作。

点样时需注意控制点样量，过量的样品可能导致拖尾、边缘效应等。

3.展开：在密闭的容器中进行展开，选择合适的展开剂，确保待分离的组分能够得到较好的分离。

展开剂的选择应根据样品的性质进行优化。

4.显色：展开后的薄层板需进行显色处理，以便观察和检测组分的斑点。

根据待分离组分的性质选择合适的显色剂，如荧光剂、金属盐等。

5.检测与记录：通过合适的方法对薄层板上的组分进行检测，如紫外可见吸收光谱法、荧光法等。

记录各组分的斑点位置、大小及颜色等信息，以便后续的分析和处理。

6.薄层板的回收和处理：实验结束后，需对薄层板进行回收和处理。

对于有价值的组分，可进行进一步分离和纯化。

对于不再需要的薄层板，需按照实验室规定进行处理，避免对环境造成污染。

二、注意事项在进行硅胶板薄层色谱分离实验时，需要注意以下几点：1.硅胶板的选择与制备：根据实验需求选择合适的硅胶板类型（如硅胶G 板或硅胶H板）。

制备时需确保硅胶与黏合剂的比例合适，搅拌均匀，避免出现硅胶颗粒等杂质。

同时，制成的薄层板需干燥并活化处理，以提高分离效果。

2.点样操作：点样时需控制点样量，避免过量的样品导致拖尾、边缘效应等问题。

可以采用毛细管或自动点样器进行点样，提高点样精度和效率。

3.展开剂的选择与优化：展开剂的选择对于薄层色谱分离的效果至关重要。

应根据待分离组分的性质选择合适的展开剂，并进行优化实验，以提高分离效果。

同时，需注意展开剂的配比和组成，以获得最佳的分离效果。

4.显色处理：选择合适的显色剂对展开后的薄层板进行显色处理，以便观察和检测组分的斑点。

药物的色谱分析药物的色谱分析是一种常用的药物分析方法，通过对药物中的成分进行分离、鉴定和定量，为药物的研发、质量控制和药效评价等方面提供重要的信息和数据。

本文将介绍色谱法的基本原理、常用色谱技术和应用案例等内容。

一、色谱法的基本原理色谱分析是基于物质在不同相（固定相和移动相）中的分配行为而建立的。

色谱分析中常用的固定相包括硅胶、脱水石墨、C18等，而移动相通常为溶剂或溶液。

根据不同的分离机理和原理，色谱分析主要分为气相色谱（GC）和液相色谱（LC）两大类。

气相色谱（GC）是利用气体作为载气相，将待测物质通过固定相柱进行分离的方法。

GC主要适用于描写挥发性和热稳定性较好的化合物分析，如有机化合物、描写挥发性和热稳定性较好的化合物分析、如有机化合物、环境污染物、药物代谢产物等。

液相色谱（LC）则是通过液体作为移动相，将待测物质在固定相上进行分离的方法。

LC相比GC在分析范围上更广泛，涵盖了无机物、有机物、生物大分子等多种化合物的分离与鉴定。

二、常用色谱技术1. 高效液相色谱（HPLC）高效液相色谱是使用高压将溶解样品推动通过固定相柱进行分离的色谱技术。

HPLC分离效果较好，分离速度快，适用于复杂样品的分离和定量，被广泛应用于药物分析、环境监测、食品检验等领域。

2. 薄层色谱（TLC）薄层色谱是将样品溶液直接涂布在柱状或板状涂层上，通过溶剂的上下移动来分离和检测样品的方法。

TLC技术具有简便、快速、经济的特点，常用于药物质量控制和药效评价。

3. 气相色谱质谱联用（GC-MS）气相色谱质谱联用是将气相色谱和质谱相结合的一种分析技术。

GC-MS技术可以将化合物在气相柱中进行初步分离，然后通过质谱的检测和鉴定，提高对化合物的准确性和灵敏度。

该技术在药物研发和毒物分析中被广泛应用。

三、色谱分析在药物研发中的应用案例1. 药物杂质分析药物中的杂质对药物的质量和疗效具有重要影响。

色谱分析在药物杂质分析中具有高效、准确的特点，能够对药物中的杂质进行快速和准确的定性定量。