高效液相色谱法定量测定1，3?二甲基?5?吡唑酮的方法建立
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羟基吡唑液相分析方法
羟基吡唑液相分析方法羟基吡唑（Hydroxypyrazole）是一类含有羟基和吡唑结构的化合物，具有多种生物活性。
因此，对羟基吡唑进行准确、快速的分析具有重要的意义。
在这篇文章中，我们将介绍几种常用的羟基吡唑的液相分析方法。
一、HPLC分析方法：高效液相色谱(HPLC)是一种常用的羟基吡唑分析方法。
以下是一个典型的HPLC分析方法的步骤：1.准备试样：将待测样品溶解于合适的有机溶剂中，使其浓度在检测范围内。
2.使用反相色谱柱：选择合适的C18柱进行分析。
3.优化流动相：选择适宜的流动相来实现对羟基吡唑的分离和检测。
常用的流动相是甲醇和水的混合物，可以添加少量草酸或磷酸等缓冲剂来调节pH值。
4.确定检测波长：根据羟基吡唑的吸收特征，在合适的检测波长进行检测。
5.设置检测方法：确定合适的进样量和流速，设置色谱运行时间等参数。
6.分析样品：将试样注入HPLC系统，进行分析。
7.数据处理：对检测结果进行数据处理和分析。
二、毛细管电泳(CE)分析方法：毛细管电泳是一种基于电动力与色谱将溶液组分分离的技术。
以下是一个典型的毛细管电泳分析方法的步骤：1.准备试样：将待测样品溶解于适用的溶剂中，使其浓度在检测范围内。
2.准备电泳缓冲液：选择适宜的缓冲液来实现对羟基吡唑的分离和检测。
3.设置分析条件：确定合适的电压、温度、荧光检测器和进样方式等条件。
4.条件优化：通过调节分析条件，达到羟基吡唑的分离和检测的最佳效果。
5.分析样品：将试样注入毛细管电泳系统，进行分析。
6.数据处理：对检测结果进行数据处理和分析。
三、气相色谱-质谱（GC-MS）分析方法：气相色谱-质谱联用技术是一种常用的定性和定量分析方法。
以下是一个典型的GC-MS分析方法的步骤：1.准备样品：将待测样品溶解于适用的溶剂中，使其浓度在检测范围内。
2.样品预处理：需要对样品进行适当的预处理，例如提取、衍生化等。
3.GC分析：样品通过气相色谱进行分离，选择合适的柱和流动相。
高效液相色谱串联质谱法测定塑料中的1甲基2吡咯烷酮
化学分析计量CHEMICAL ANALYSIS AND METERAGE第28卷，第1期2019年1月V ol. 28，No. 1Jan. 201919doi ：10.3969／j.issn.1008–6145.2019.01.005高效液相色谱–串联质谱法测定塑料中的1-甲基-2-吡咯烷酮尚岩岩，张岩岩，曾慧［国家再生有色金属橡塑材料质量监督检验中心(安徽)，阜阳市产品质量监督检验所，安徽阜阳 236000］摘要 建立了测定塑料中1-甲基-2-吡咯烷酮含量的高效液相色谱–串联质谱法。
以丙酮为提取剂，于室温下用超声波提取样品中的1-甲基-2-吡咯烷酮，提取液于35℃旋蒸至干，经甲醇溶解后，过0.22 μm 有机系滤膜。
采用Innovation TM C 18色谱柱(15 cm ×2.1 mm ，3.0 μm)进行分离，用电喷雾电离(ESI)源、正离子模式进行扫描，以多反应监测模式检测。
在优化的实验条件下，1-甲基-2-吡咯烷酮的质量浓度在1～50 ng ／mL 范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，线性相关系数为0.999 8，方法检出限为0.18 μg ／kg ，样品加标回收率为75.0%～93.7%，测定结果的相对标准偏差为1.2%～2.8%(n =6)。
该方法样品处理简单、快速，适用于塑料中1-甲基-2-吡咯烷酮的日常检测。
关键词 液相色谱–串联质谱法；1-甲基-2吡咯烷酮；塑料制品中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：1008–6145(2019)01–0019–04Determination of 1-methyl-2-pyrroli-dinone in plastic by high performanceliquid chromatography–tandem mass spectrometrySHANG Yanyan, ZHANG Yanyan, ZENG Hui［National Recycle Nonferrous Metals Rubber & Plastic Materials Quality Supervision and Inspection Center (Anhui)， Fuyang Institute ofProduct Quality Supervision and Inspection ， Fuyang 236000，China ］Abstract A method was developed for the determination of 1-methyl-2-pyrroli-dinone in plastic products by high performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry. Samples were extracted by ultrasonic with acetone as the extractant at room temperature, and the extracts were dried at 35℃. The final extracts were redissolved in methanol and filtered with 0.22 μm syringe filter. The prepared samples were separated on an Innovation TM C 18 column (15 cm ×2.1 mm ，3.0 μm ) and characterized by using an electrospray ionization (ESI) source in the positive ion multiple reaction monitoring mode. Under optimum experimental conditions, good linearity was obtained in the range of 1–50 ng ／mL for 1-methyl-2-pyrroli-dinone with the correlation coefficient of 0.999 8. The detection limit was 0.18 μg ／kg. The spiked recoveries were 75.0%–93.7% and the relative standard deviations were 1.2%–2.8%(n =6). The method is simple and rapid to prepare the sample, and it can be used for the routine analysis of 1-methyl-2-pyrrolidinone in plastic products.Keywords high performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry; 1-methyl-2-pyrroli-dinone; plastic products1-甲基2-吡咯烷酮(1-Methyl-2-pyrrolidinone ，NMP)又名N -甲基吡咯烷酮或N -甲基-2-吡咯烷酮，是2-吡咯烷酮的N -甲基的衍生物，属于氮杂环化合物，化学式为C 5H 9NO ［1］。
高效液相色谱法测定洗涤剂中1,2-苯并异噻唑-3-酮含量
高效液相色谱法测定洗涤剂中1,2-苯并异噻唑-3-酮含量王娟;雷敏;查青青;于文
【期刊名称】《中国洗涤用品工业》
【年(卷),期】2022()5
【摘要】本研究通过对1,2-苯并异噻唑-3-酮的紫外吸收光谱进行分析,采取合适检测波长,选择适当的流动相,对待测洗涤剂进行分离,测定洗涤剂中的1,2-苯并异噻唑-3-酮含量。
通过进行重复性、精密度、回收率实验,最终建立并验证了高效液相色谱法测定洗涤剂中1,2-苯并异噻唑-3-酮含量的方法。
实验结果表明,标准溶液为0.4~100.2μg/ml时线性相关,回收率为101%~102%。
【总页数】5页(P76-80)
【作者】王娟;雷敏;查青青;于文
【作者单位】西安开米股份有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】TQ649.6
【相关文献】
1.1,2-二(3-羰基苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)乙烷-1,2-二酮合成及其抑菌活性的测定
2.1,2-苯并异噻唑啉-3-酮-2-甲酸苯酯类化合物的合成及防污性能研究
3.新型Caspase-3抑制剂1，2-苯并异噻唑-3-酮-1，4-二取代-1，2，3-三唑类衍生物的合成
4.新型杀菌剂1,2- 苯并异噻唑啉-3- 酮的杀菌效力的测定和杀菌机理的研究
5.高效液相色谱法测定化妆品中甲基异噻唑啉酮和甲基氯异噻唑啉酮的含量及不确定度评价
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高效液相色谱法测定血清葡萄糖
高效液相色谱法测定血清葡萄糖陈忠余;张天娇;张传宝;张江涛;周伟燕;闫颖;陈文祥【摘要】目的建立一种测定血清葡萄糖(glucose,Glu)的高效液相色谱法(HPLC),探讨其能否作为血清Glu测定的参考方法.方法以D-半乳糖(D-galactose)为内标物,用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白质,在pH9.1条件下与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)反应,用HPLC测定血清Glu衍生产物、D-半乳糖衍生产物,用标准曲线法定量；对建立的方法进行方法学评价.结果本法测定血清Glu的批内变异系数(CV)为0.33％～ 0.67％,平均0.51％；批间CV为0.02％～ 0.85％,平均0.38％；总CV为0.47％～ 1.03％,平均0.68％.回收率为98.22％～ 101.96％.分析Glu 的参考物质SRM 965a,测定结果与认定值的偏差为-0.928％～0.347％,平均偏差为- 0.072％.结论初步建立了测定血清Glu的HPLC法；该法准确、精密,有望作为血清Glu测定的候选参考方法.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2011(029)009【总页数】3页(P660-662)【关键词】葡萄糖;高效液相色谱;1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮【作者】陈忠余;张天娇;张传宝;张江涛;周伟燕;闫颖;陈文祥【作者单位】重庆市第一人民医院检验科,重庆400011;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730【正文语种】中文目前国际上测定血清Glu的参考方法有德国临床化学会(German Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine，DGKL)[1]、美国国家标准和技术研究院(National Institute of Standards and Technology，NIST)[2]和比利时根特大学[3]的同位素稀释气相色谱质谱(isotope dilution gas chromatography-mass spectrometry，ID-GC/MS)法、美国疾病控制中心[4](Centers for Disease Control，CDC)和日本临床化学会(Japanese Society of Clinical Chemistry，JSCC)的己糖激酶法。
柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成
图 3 当归 多糖 经 TFA 水 解的 时 间对 各组成单糖的测定影响
F ig. 3 The e ffects of com ponent m onosacchar ides o f A ngelica polysaccha rides fo r different trifluoacetic ac id ( T FA ) hydro lysis tim e 1. 葡萄糖醛酸 ( glu cu ron ic acid) ; 2. 甘露糖 ( m annose) ; 3. 鼠李糖 ( rhamn ose); 4. 半乳糖 醛酸 ( ga laduron ic acid ) ; 5. 半 乳 糖 ( galactose); 6. 葡 萄 糖 ( g lucose) ; 7. 阿 拉 伯 糖 ( arabonose) 。
3 结果与讨论
3. 1 单糖对照品 PM P衍生物的 HPLC 分离 为实现当归多糖各组成单糖的高效分离, 本实验对当归多糖可能包含的 G lc、A ra、M an、G al、Rha、
Xyl、G lcUA、GalUA 及内标 Fuc等 9种标准单糖 PMP 衍生物的高效液相色谱分离条件进行了优化。结 果表明, 磷 酸缓 冲液 ( KH2 PO4-N aOH ) 的 pH 6. 9, 时 间梯 度 为 0→ 10→ 30 m in 和 相 应浓 度 梯度 为 0→ 8% → 20% 溶剂 B的梯度洗脱模式是分离此 9种单糖衍生物的较理想色谱分离条件。
1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 ( PM P) 柱前衍生化 H PLC 测定单糖含量的方法经过了不断地发展和完 善 [ 3~ 7] , 并成功地用于毛细管电泳分析。 PMP 是还原性糖的最好衍生化试剂之一, 如 PM P 衍生物不易 裂解, 分析时不产生异构峰, 且在 250 nm 处有强烈的紫外吸收。本研究采用 PMP 衍生化方法, 用常规 的紫外检测器和 C18烷基键合柱, 建立适于当归多糖单糖组成测定的 HPLC 新方法, 达到灵敏、快速、准 确、方便和可在线大批量分析的目标。
高效液相色谱法操作规程
高效液相色谱法操作规程目的：建立高效液相色谱法的标准操作规程，保证正确操作。
范围：本标准适用于高效液相色谱法的操作。
责任者：QC主任，设备使用人员。
规程：依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。
1 ?定义及概述：1.1高效液相色谱法是一种现代液体色谱法,其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱留或进行数据处理，得到测定结果。
由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。
1.2高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。
有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。
常用的色谱柱填充剂有：硅胶用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料，用于离子交换色谱，是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。
1.3高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理机组成。
检测器最常用的为可变波长紫外检测器或紫外一可见检测器。
色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。
梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。
2. 高效液相色谱仪的使用要求：2.1按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705-90）”的规定作定期检定，应符合规定。
2.2,仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。
2.3具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。
3. 操作前的准备：3.1流动相的制备：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水。
高效液相色谱法标准操作规程
高效液相色谱法标准操作规程第 1 页共 5 页1. 目的：建立高效液相色谱法标准操作规程2. 范围：适用于原辅、成品的高效液相色谱法检测。
3. 责任人：QC负责实施，QC主管负责监督。
4. 程序：4.1 检验依据《中华人民共和国药典》2005年版二部附录P284.2 检验规程4.2.2对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，仪器应定期检定并符合有关规定4.2.2.1 色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。
反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等）也有使用。
正相色谱系统使用极性填充常用的填充剂有硅胶等。
离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或高分子多孔微球等填充剂用于分子排阻色谱等；手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。
填充柱的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响待测物的保留行为和分离效果。
孔径在15nm以下的填料适合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。
以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用PH2～8的流动相。
当PH大于8时，可使载体硅胶溶解；当PH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。
当色谱系统中需使用PH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包覆聚合物填充剂、有机—无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等，当需使用PH 小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷、键合硅胶、有机—无机杂化填充剂等。
4.2.2.2检测器最常用的检测器为紫外检测器，其他常见的检测器有二极管阵列检测器（DAD）、荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成
柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成马定远 陈 君 李 萍3胡卓逸(中国药科大学生药药用植物教研室,南京210038)(中国药科大学生化研究室,南京210009)摘 要 报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。
采用反向高效液相色谱250nm 紫外检测和使用梯度洗脱,6种还原单糖的12苯基232甲基252吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。
对单糖组成的定量测定进行了方法学考察,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。
关键词 单糖,多糖,衍生化,高效液相色谱 2001207204收稿;2002201209接受1 引 言单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。
已有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色谱法为主。
由于单糖分子的多样性,关于糖的分析方法仍在不断发展。
12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP )衍生化方法自运用以来,得到不断完善1～3。
Strydom 运用此法对中性、酸性和碱性醛糖进行了分析,可以使15种单糖得到很好的分离2。
本文首先建立了6种常见单糖(包括一种酸性糖)的分离模式,通过内标法对3种中性单糖的定量进行了方法学考察,并应用所建立的方法对多糖中的单糖进行了组成分析,为此法的更好运用提供了依据。
2 实验部分2.1 仪器与试剂HP1100型高效液相色谱系统,包括G 1312A 二元泵,G 1315A DAD 检测器,HP ChemStation 色谱工作站(Hewlett 2Packard )。
衍生化试剂12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP ,上海化学试剂采购供应站试剂厂),甲醇重结晶两次。
色谱用乙睛(T edia )、三氟乙酸(CP 级,上海化学试剂公司)。
单糖对照品:葡萄糖(G lc ,上海化学试剂公司)、甘露糖(Man ,Sigma 公司)、半乳糖(G al ,Sigma 公司)、鼠李糖(Rham 公司)、葡萄糖醛酸(G lcUA )和木糖(Xyl )(上海化学试剂二厂产品)。
高效液相色谱法含量测定操作规程全文编辑修改
精选全文完整版可编辑修改高效液相色谱法含量测定1检验方法高效液相色谱法2检验原理高效液相色谱法系采用高压输液泵，将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对样品进行测定的色谱方法。
注入样品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依此进入检测器，由数据处理系统记录和处理色谱信号。
3检验试剂甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、纯水（高纯水）、磷酸等。
4供试品溶液制备取要测试的供试品适量，参照《药典》及《制剂规范》，用规定的溶剂适宜的提取精制方法，配制成一定浓度的供试品溶液。
供试品溶液注入色谱柱前要经适宜的0.45nm的滤膜滤过。
5对照品溶液制备根据供试品所要测定的成分取相应的对照品，用适宜的溶剂配制成相应浓度的对照品溶液。
6流动相配制用高纯度的试剂配制流动相，水应为新鲜配制的高纯水。
配制好的流动相通过适宜的0.45nm 的滤膜滤过，用前脱气。
7操作7.1打开自动进样器、检测器、泵、柱温箱，进入工作站。
7.2自动进样器排气自动进样器排气用50%甲醇（用前脱气），点击自动进样器界面上的purge键，自动排气25分钟。
7.3泵排气分析界面中，设置方法参数，下载方法参数。
用流动相冲洗吸滤头，再把吸滤头浸入流动相中，逆时针旋转排气阀90-180度，点击purge键，排气3-4分钟，顺时针旋转排气阀90-180度，激活仪器。
7.4进样操作7.4.1.将对照品溶液和供试品溶液分别置于样品瓶中，盖上带有垫片的瓶盖，顺时针旋紧，7.4.2将样品瓶按顺序放置于样品瓶架上。
7.4.3设置方法参数，选择波长、柱温、流速、结束时间等，下载并保存方法文件，待色谱系统充分稳定，基线平直。
7.4.4设置批处理分析表。
分析界面主项目中，点击批处理分析，依次设置样品瓶号、样品瓶架号、样品名、方法文件、数据文件、进样体积，保存批处理分析表，点击批处理分析开始，开始数据采集。
7.4.5不同浓度的对照品溶液和同一浓度的供试品溶液应分别进样不少于5针。
高效液相色谱测定发酵液中13二羟基丙酮（）方法的建立
中国生物工程杂志 ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（１）：６１～６４高效液相色谱测定发酵液中１，３二羟基丙酮（ＤＨＡ）方法的建立饶志明 徐美娟 沈 微 方慧英 诸葛健（江南大学工业生物技术教育部重点实验室江南大学工业微生物研究中心 无锡 ２１４１２２）摘要 建立了简单且准确的测定１，３二羟基丙酮（ＤＨＡ）的高效液相色谱（ＨＰＬＣ）方法。
以ＡｌｌｔｉｍａＣ１８（５μｍ，２５０×４．６ｍｍ）为分离柱，５％甲醇水溶液（０．０５％Ｈ３ＰＯ４调ｐＨ至３．０），流速为１ｍｌ／ｍｉｎ，用紫外检测器在２００ｎｍ处检测ＤＨＡ。
结果测得ＤＨＡ标准样品的保留时间为６．２ｍｉｎ，并测得ＤＨＡ的线性范围为０．１～１０．０ｇ／Ｌ，用ＨＰＬＣ法测得以甘油为底物发酵产ＤＨＡ发酵液中ＤＨＡ含量为６．２ｇ／Ｌ，并证明高效液相色谱法可有效应用于产ＤＨＡ发酵过程中产物的检测。
关键词 １，３二羟基丙酮 高效液相色谱 检测中图分类号 Ｑ８１９收稿日期：２００７ ０９ １７ 修回日期：２００７ １２ ０７国家“８６３”计划（２００６ＡＡ０２０１０３），国家自然科学基金（２０６７６０５３），江苏省青年科技创新人才（学术带头人）基金（ＢＫ２００６５０４），长江学者和创新团队发展计划（ＩＲＴ０５３２），资助项目 通讯作者，电子信箱：ｒａｏｚｍ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ １，３二羟基丙酮，又称二羟丙酮，英文名为ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｎｅ，简写为ＤＨＡ，是最简单的多羟基酮糖，是唯一一个没有手性碳原子的糖，带有甜味的白色或类白色粉末状结晶，易溶于水及乙醇、丙酮和乙醚等有机溶剂。
ＤＨＡ用途广泛，且使用量大，是一种重要的医药中间体、化工原料和食品添加剂、化妆品防晒剂的成分［１，２］。
也可作为一种抗病毒试剂，如在鸡蛋胚胎培养中，能杀死５１％～１００％的鸡瘟病毒；还可用于果蔬、水产品、肉制品的防腐保鲜［２，３］；仍有许多其它用途在积极的研究和开发之中。
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高效液相色谱法定量测定1，3 二甲基5 吡唑酮的方法建立作者：张立洁等来源：《安徽农业科学》2015年第14期摘要[目的]建立用于鉴别及测定1，3二甲基5吡唑酮（DP）的高效液相色谱（HPLC）方法。
[方法]采用高效液相色谱仪定量测定DP，对其色谱条件进行优化。
[结果]测定DP的最佳色谱条件如下：色谱柱DiamonsilC18 （2）（250.0 mm×4.6 mm×5 μm），甲醇和水为流动相，DAD检测器，检测波长为242 nm，流速为0.4 ml/min，柱温35 ℃。
在上述条件下，DP得到很好的分离，在给定的浓度范围内呈现良好的线性相关（r2>0.999），精密度良好，回收率为98.74%，相对标准偏差为1.6%。
[结论]该方法具有良好的灵敏度、回收率和重复性，可用于DP的鉴别及测定。
关键词1，3二甲基5吡唑酮；高效液相色谱；条件优化中图分类号O652.63文献标识码A文章编号0517-6611（2015）14-093-03Abstract [Objective] The aim was to establish a method of quantitative determination of 1，3dimethyl5pyrazolone by high performance liquid chromatography.[Method] The reversed phase high performance liquid chromatography （HPLC） was applied to identification and determination of DP.[Result] SHIMADZU SPD20A system equipped with on line degasser was used，Diamonsil reversed phaseC18（2）（250.0 mm×4.6 mm×5 μm） column as stationary phase，methyl alcohol and water as mobile phase.The flow rate was 0.4 ml/min； the column temperature was 35 ℃； and the detection wavelength was 242 nm.DP had a good resolution within 10 min.In the given concentration range，DP presented good linear correlation （r2>0.999）； the recovery rate was 98.74%，and the RSD of repeatability was 1.6%.[Conclusion] The sensitivity，recovery and repeatability of this method are good.This method can be used for the identification and determination of DP.Key words 1，3dimethyl5pyrazolone； High performance liquid chromatography （HPLC）；Condition optimization1，3二甲基5吡唑酮，即DP，其结构式见图1，它是合成医药、农药霸螨灵、除草剂吡唑特和染料等的重要中间体，用途广泛[1]。
生产过程中实时检测DP的含量，对跟踪反应进程、控制产品质量意义重大，但目前对DP的测定方法少见报道。
HPLC法以其高速、高效、高灵敏度等特点，在水质分析[2]、药物分析[3]、药品检验[4]、食品检测[5]以及蛋白质分离[6]、代谢组学研究[7]中发挥了巨大作用。
笔者利用HPLC方法测定了DP含量，旨在为DP的鉴别及测定提供参考。
1.1材料岛津高效液相色谱仪（SPD20A），配备二极管阵列检测器；1号柱DiamonsilC18（2）（250.0 mm×4.6 mm×5 μm），2号柱phemsorb ODS1 5u ID4.6 94030506，3号柱SymmetryC18（150.0 mm×4.6 mm×5 μm）。
甲醇、乙腈均为色谱纯；磷酸、聚乙二醇、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、乙酸铵、三乙胺均为分析纯。
试验用水为纯净水。
DP由江苏剑牌农药有限公司提供。
1.2方法1.2.1标准溶液的配制。
DP样品储备液：称取0.04 g DP标样于50 ml容量瓶中，甲醇定容。
1.2.2色谱条件。
采用DiamonsilC18（2）色谱柱（250.0 mm×4.6 mm×5 μm）；检测波长242 nm；流速0.4 ml/min；进样量20 μl；柱温35 ℃、溶剂甲醇；流动相为甲醇-水（3∶1，V/V）。
2结果与分析2.1色谱条件的选择为了使被测物质与杂质很好地分离测定，选择合适的色谱条件是必要的。
其中影响高效液相色谱技术的因素包括流动相、检测波长、流速、柱温、固定相等[8-11]。
2.1.1流动相的选择。
在DiamonsilC18（2）色谱柱（250.0 mm×4.6 mm×5 μm）、检测波长为250 nm、流速为0.5 ml/min、进样量为20 μl、柱温为35 ℃、溶剂为甲醇的条件下，对DP标样进行流动相甲醇+水的不同比例测试，结果见图2。
综合考虑拖尾因子与分离度的影响，选取甲醇-水（3∶1，V/V）为最适流动相配比，该条件下拖尾因子在0.8左右，分离度在1.4左右，色谱见图3。
2.1.2检测波长的选择。
采用DAD二极管阵列检测器对DP标样进行紫外扫描发现，DP的紫外吸收波段为220～250 nm，且在227 nm波长处有最大吸收。
因此，在该波段内选取不同检测波长对DP标样进行分离测试，结果见图4。
在检测波长为242 nm条件下，分离度虽比其他波长略小，但其响应值最大，样品峰形要比其他波长下好。
因此选取检测波长为242 nm。
2.1.3流速的选择。
流动相流速的变化对以相对法定量的归一化法、内标法和标准加入法的定量分析结果无影响，而对标准曲线法的定量分析结果会产生影响。
流速降到1.0 ml/min以下时，通常可以提高柱效。
2.1.5色谱柱的选择。
不同色谱柱的分离情况有显著差别。
在波长为242 nm、进样量为20 μl、柱温为35 ℃、溶剂甲醇、流速为0.4 ml/min、流动相为甲醇-水（3∶1，V/V）的条件下，对DP标样进行不同的色谱柱条件测试。
由表3可知，2号、3号柱条件下，虽然DP出峰时间短且分离度较1号柱大，但其拖尾因子较大，峰形较大，选取1号柱即DiamonsilC18（2）（250.0 mm×4.6 mm×5 μm）作为定量检测DP的最佳色谱柱。
2.1.6流动相的优化。
为进一步改善峰形、提高分离度，尝试在流动相的水中加酸、碱或者盐。
在DiamonsilC18（2）色谱柱（250.0 mm×4.6 mm×5 μm）、波长为242 nm、进样量为20 μl、柱温为35 ℃、溶剂为甲醇、流速为0.4 ml/min、流动相为甲醇-水（3∶1，V/V）的条件下，在水相中添加不同物质对DP标样进行测试。
由表4可知，在水中添加0.100%磷酸二氢钾、0.100%磷酸氢二钠、0.100%乙酸铵以及不同浓度的磷酸时，出峰时间并无显著变化，但其拖尾因子几乎都增大，分离度皆减小。
添加三乙胺虽然显著提高了分离度，但会对色谱柱产生损坏。
综合各方面考虑，流动相仍然为甲醇-水（3∶1，V/V），不添加其他物质。
综合以上试验测定，最终确定了测定DP的最佳色谱条件如下：色谱柱为DiamonsilC18 （2）（250.0 mm×4.6 mm×5 μm），甲醇-水（3∶1，V/V）为流动相，DAD检测器，检测波长为242 nm，流速为0.4 ml/min，柱温为35 ℃，在该条件下DP色谱见图5。
2.2分析方法试验2.2.1线性关系验证。
用甲醇做溶剂，分别配制浓度为0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.2 mg/ml标准品工作溶液，进样量20 μl，以质量浓度（mg/ml）为横坐标，以峰面积为纵坐标进行线性回归分析（图6），得到相关系数r2=0.993 1，表明DP在0.2～2.2 mg/ml浓度范围内线性关系良好，在该条件下可以很好地测定DP含量。
2.2.2精密度。
对同一样品连续进样6次，测得DP含量分别为89.82%、89.24%、89.97%、89.30%、89.51%和89.00%，平均含量为89.47%，标准偏差为0.367 9，相对标准偏差为0.41%，小于2.00%，表明该方法精密度良好。
2.2.3回收率。
由表5可知，DP的平均回收率为98.74%，相对标准偏差为1.60%，表明采用该方法测定DP含量的准确度较高。
3结论试验建立了用于鉴别及测定DP的高效液相色谱方法。
该方法简单易操作，DP得到很好的分离，在给定的浓度范围内呈现良好的线性相关（r2大于0.999），精密度良好（RSD小于2.00%），回收率为98.74%，相对标准偏差为1.60%，表明该方法具有良好的灵敏度、回收率和重复性，可用于DP的鉴别及测定。
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